^(13)C标记和未标记果糖化赖氨酸“一釜法”合成工艺的研究

为了能够快速、高效合成果糖化赖氨酸及其^(13)C同位素标记物,分别以^(13)C同位素标记、非标记的葡萄糖和Fmoc保护赖氨酸为原料,通过对阿马德里反应与Fmoc脱除反应的工艺条件进行系统优化,建立了串联"一釜法"合成工艺。该方法大幅提升了果糖化赖氨酸的合成效率,为实现果糖化赖氨酸的工业化生产奠定了基础。

腹腔途径时脂质体和糖化多聚赖氨酸对外源基因肝脏靶向导入性能的比较

目的 比较脂质体和糖化多聚赖氨酸经腹腔途径时对目的基因肝脏靶向定位效果的影响。方法 将真核细胞表达质粒分别与脂质体和糖化多聚赖氨酸偶联 ,经腹腔注射导入大鼠体内 ,通过原位杂交和免疫组化的方法观察目的基因在肝脏和其他脏器的分布表达。结果 经脂质体或糖化多聚赖氨酸包埋的质粒DNA导入体内2 4h后均见明显表达 ,1周后逐渐下降 ,3周时仍有表达 ;均以肝脏为主要分布器官 ,但用糖化多聚赖氨酸包埋的质粒在肝脏中的分布表达高于使用脂质体的包埋 ,在其他脏器中的分布表达低于使用脂质体的包埋。结论 腹腔途径时糖化多聚赖氨酸对DNA的肝脏靶向定位效果优于脂质体。

基于模糊支持向量机的赖氨酸糖化位点预测

能否准确识别糖化位点对理解糖化的分子机制有着重要意义。传统的实验方法工作量大、耗时长,因此迫切需要开发计算辅助方法来预测糖化位点。设计了一种新的模糊支持向量机算法,该算法放大了重要特征与弱相关特征间的权重之差,同时考虑了样本内部的分布情况,能够有效地处理糖化修饰位点预测中含有噪声数据的问题。基于所提出的模糊支持向量机算法结合双剖面贝叶斯(Bi-Profile Bayes,BPB)特征提取方法构建了一个新的赖氨酸糖化位点的模型——FSVM_GlySite。十折交叉验证结果表明,FSVM_GlySite的预测效果优于现有的几种糖基化位点预测器。

反相高效液相层析在糖化白蛋白肽段分离纯化中的应用

采用一种简单的“甲醇水三氟醋酸”作为洗脱体系的反相高效液相层析（简称ＲＰＨＰＬＣ）对通过固相合成方法合成的糖化白蛋白肽段进行了分析鉴定和分离纯化．使用酸敏性ＰＥＧ载体，Ｆｍｏｃ保护化学法合成了白蛋白八肽ＮＨ２ＬｙｓＧｌｎＴｈｒＡｌａＬｅｕＴｙｒＴｙｒＣｙｓＣＯＯＨ．对其Ｎ端Ｌｙｓ进行糖化反应后，经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ１０柱色谱纯化后，通过ＲＰＨＰＬＣ分析，证明得到了糖化八肽的单一峰．使用Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ树脂，Ｂｏｃ保护化学法合成了白蛋白七肽ＮＨ２ＧｌｎＴｈｒＡｌａＬｅｕＴｙｒＴｙｒＣｙｓＣＯＯＨ．通过ＲＰＨＰＬＣ半制备分离提纯后，得到了所需的肽段．对ＮαＢｏｃＬｙｓ的ε氨基进行糖化反应后，经ＲＰＨＰＬＣ分析，证明得到了比较纯的糖化赖氨酸，与纯化后的白蛋白七肽偶联后，通过ＲＰＨＰＬＣ分析，得到了偶联产物———糖化八肽的单一峰．

Advances in Toxicology of Nε-(carboxymethyl)-lysine(CML)

Advanced glycation end-products （AGEs） are products of non-enzymatic glycation of proteins, lipids or nucleic acids and other macromolecules. To be spe- cific, Nε-（carboxymethyl）-Iysine （CML） is one of the most important components of AGEs, which is wildly distributed in the body and can be formed in vivo or in food processing and heating processes. Previous studies have shown that CML is a ma- jor immunological epitope in AGEs and plays an important role in diabetes and its complications, as well as in the development and progression of aging. This review summarized recent advances in major source, toxicological hazard and control mea- sures of CML.

重组质粒导入真核细胞的两种方法比较

目的 :比较糖化多聚赖氨酸介导和电穿孔两种方法将重组质粒导入真核细胞的优缺点。方法 :用最佳电压、电容、温度、DNA浓度进行电穿孔转染 ,或者先使重组质粒与糖化多聚赖氨酸电性结合后 ,再与 2 .2 .15细胞共同温育的方法 ,分别将pcEP4-aC重组质粒导入 2 .2 .15细胞 ,经潮霉素筛选 ,比较两种方法的优劣。结果 :两种方法都能成功地将重组质粒导入 2 .2 .15细胞 ,但糖化多聚赖氨酸介导者 ,细胞生存时间较长。结论 :糖化多聚赖氨酸导向配体具有良好的导入重组质粒进入肝细胞的功能 。

同位素稀释液相色谱串联质谱测定血清糖化白蛋白

目的建立一种基于同位素稀释液相色谱串联质谱法(ID-LC/MS/MS)检测血清糖化白蛋白(GA)的准确定量方法。方法本研究在日本临床化学学会(JSCC)推荐的ID-LC/MS方法上进行优化,采用阴离子交换色谱柱提纯白蛋白(Alb),使用重量法准确称量提纯标本、赖氨酸(Lys)和糖化赖氨酸(DOF-Lys)的标准溶液及两种的混合内标,将Alb酸水解为氨基酸,检测Lys和DOF-Lys从而定值GA。根据C62-A文件对建立的方法进行方法学评价并与常规方法进行比对研究。结果蛋白电泳鉴定标本Alb纯度结果为100%。Lys和DOF-Lys线性标准曲线R2范围分别为0.9978~0.9999、0.9994~1.0000。血清GA测定的批内、批间和总的变异系数(CV)分别为0.69%~1.97%、1.13%~2.33%、1.37%~2.54%。正确度评价中三个浓度参考物质测定结果与认定值偏差分别为-2.56%、-1.87%、-2.94%。Lys和DOF-Lys的基质效应分别为89.92%、109.98%,携带污染率分别为-1.13%、-3.27%。Lys的检测限和定量限分别为0.075、0.248 nmol/g,DOF-Lys的检测限和定量限分别为0.007、0.024 nmol/g。方法的相对扩展不确定度为1.60%~2.03%。与常规方法的拟合回归曲线R2为0.9707。结论建立了一种基于ID-LC/MS/MS法检测血清GA的方法,方法学评价准确可靠,有望作为血清GA检测的候选参考方法。

反义转化生长因子βⅡ型受体表达质粒对实验性肝纤维化的影响

目的 观察反义转化生长因子βⅡ型受作(TGF βRⅡ)表达质粒对实验性肝纤维化的影响。方法 运用重组DNA技术中构建反义TGF βRⅡ真核细胞表达质粒,采用猪血清腹腔注射制备免疫性大鼠肝纤维化模型,实验动物分为肝纤维化模型组、反义TGF βRⅡ治疗组、pCDNA3对照组及正常对照组。反义TGF βRⅡ质粒和pCDNA3空质粒与糖化多聚赖氨酸偶联后经尾静脉分别导入大鼠体内,通过northern blot、RT-PCR、Western blot检测外源导入质粒在肝组织中的表达,检测血清转化生长因子β1(TGFβ1)、肝组织羟脯氨酸测定,Ⅰ、Ⅲ型胶原免疫组织化学与Van Gieson染色观察反义TGF βRⅡ质粒对大鼠肝纤维化的影响。 结果 反义TGF βRⅡ表达质粒可在肝组织中获得确切表达,其表达可使反义治疗组血清TGF β1含量下降,反义TGF βRⅡ治疗组为(23.16 ± 3.13)ng/ml,模型组为(32.96±3.79)ng/ml,F=36.73,P<0.01。肝组织羟脯氦酸含量下降,治疗组为(0.17±0.01)mg/g,模型组为(0.30±0.03)mg/g,F=15.48,P<0.01。减少了肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原的沉积,治疗组Ⅰ型胶原为650.26±51.51,Ⅲ型胶原为661.5 8±55.28,模型组Ⅰ型胶原为1209.44±16.60,Ⅲ型胶原为1175.14±121.44,F值分圳为69.87、70.46,P<0.01。并促进反义治疗组肝脏病理形态一定程度的改善。