糖原合成激酶-3β通过上皮间充质转化参与糖尿病肾病发生发展的研究进展

糖尿病肾病(DN)是糖尿病重要的并发症之一,发病机制复杂,目前尚未完全阐明。上皮间充质转化(EMT)在DN的发生发展中发挥重要作用。糖原合成激酶-3β(GSK-3β)通过多个信号转导通路参与EMT过程,影响DN的发生进展。本文就GSK-3β参与DN中EMT的相关机制研究进展进行综述。

AKT-糖原合成激酶-3β信号通路对SOD1G93A突变N2a细胞的保护作用

目的探讨AKT-糖原合成激酶-3β(GSK-3β)信号通路对SOD1G93A突变N2a细胞的作用及机制。方法选取小鼠成神经瘤细胞系N2a,分别转染p EGFP-WT-SOD1和p EGFP-G93A-SOD1质粒,应用Western blotting和免疫荧光染色方法检测AKT、GSK-3β和细胞周期蛋白D1(cyclin D1)在细胞模型中的表达变化。应用RT-PCR和Western blotting技术检测siRNA沉默AKT后GSK-3β和cyclin D1在SOD1突变N2a细胞中的表达变化,通过MTS方法,检测细胞增殖和存活的改变。结果与p EGFP-WT-SOD1转染的N2a细胞比较,p EGFP-G93A-SOD1转染的N2a细胞中AKT及GSK-3β总蛋白在转染后24 h和48 h表达均无明显变化,p-AKT(Ser473)、p-GSK-3β(Ser9)和cyclin D1表达均升高。免疫荧光染色结果显示,转染后24 h和48 h,p-AKT(Ser473)、p-GSK-3β(Ser9)和cyclin D1在p EGFP-G93A-SOD1转染的N2a细胞中表达均升高。应用siRNA沉默AKT后与对照组相比,在转染后48 h和72h,AKT、p-AKT(Ser473)、GSK-3β、p-GSK-3β(Ser9)和cyclin D1蛋白均降低。MTS实验结果显示,在AKT沉默后72h、96 h、120 h,N2a细胞增殖和活力降低。结论 SOD1G93A突变影响N2a细胞中AKT、GSK-3β翻译后磷酸化修饰及cyclin D1的表达,AKT可能通过调控GSK-3β和cyclin D1影响SOD1G93A突变N2a细胞的增殖和存活。

脑利钠肽激活环鸟苷酸/蛋白激酶G信号通路对线粒体通透性转换孔开放和糖原合成激酶-3β磷酸化的影响

目的观察脑利钠肽(BNP)激活环鸟苷酸/蛋白激酶G(cGMP/PKG)信号通路对线粒体通透性转换孔(mPTP)开放和糖原合成激酶-3β(GSK-3β)磷酸化的影响。方法将48只新西兰兔随机分为4组(12只):假手术组;对照组;BNP组;BNP+KT5823组(KT5823为蛋白激酶G抑制剂)。除了假手术组,其余3组均于结扎左回旋支45 min后恢复左回旋支血流,进行再灌注180 min。全程观察血流动力学及心电变化;实验终末,各组随机抽取6只兔子,采用伊文思蓝和氯化三苯基四氮唑双染色法测定左心室心肌梗死面积;每组另外6只兔子心脏取梗死边缘区组织,用TUNEL法检测缺血再灌注心肌细胞的凋亡,Western blotting方法测定P-GSK-3β/GSK-3β、细胞质细胞色素C/线粒体细胞色素C的表达。结果各组之间HR、MABP差异无统计学意义(均为P>0.05);与对照组相比,BNP组心律失常发生率明显减少(8.3%比83.3%,P<0.0125)。与BNP组比较,BNP+KT5823组心律失常明显增加(75.0%比8.3%,P<0.0125);假手术组无心肌梗死。与对照组比较,BNP组心肌梗死范围明显减少(26.02%±2.17%比40.99%±1.23%,P<0.05)。与BNP组比较,BNP+KT5823组梗死面积明显增加(38.94%±2.04%比26.02%±2.17%,P<0.05);与对照组比较,BNP组GSK-3β的磷酸化水平显著增加(0.7800±0.0506比0.3610±0.0570,P<0.05),细胞质细胞色素C/线粒体细胞色素C明显减少(0.3420±0.0921比0.9530±0.2054,P<0.05)。与BNP组相比,BNP+KT5823组GSK-3β的磷酸化水平明显降低(0.4037±0.0437比0.7800±0.0506,P<0.05),细胞质细胞色素C/线粒体细胞色素C显著增加(0.8037±0.1001比0.3420±0.0921,P<0.05)。与对照组比较,BNP组心肌细胞凋亡数明显减少(4.6%±2.0%比13.1%±2.7%,P<0.05),与BNP组相比,BNP+KT5823组心肌细胞凋亡数显著增加(12.8%±2.3%比4.6%±2.0%,P<0.05)。结论 BNP激活cGMP/PKG信号通路所产生的心肌保护作用与抑制mPTP的开放有关,cGMP/PKG信号通路的激活可以促进GSK-3β磷酸化。

糖原合成激酶-3β减轻心肌缺血/再灌注损伤的研究进展

糖原合成激酶-3β(GSK-3β)是一种多功能丝氨酸/苏氨酸激酶,参与调节多种细胞过程。心肌缺血再灌注时,线粒体通透性转换孔(m PTP)开放导致细胞坏死。磷酸化的GSK3-β可通过多种机制抑制m PTP开放,包括储存m PTP复合体中的己糖激酶Ⅱ,阻断亲环素-D与腺苷酸转移酶间的联系,抑制P53的激活和减少ATP的降解等,起着保护心脏的作用。

糖尿病大鼠海马组织内Tau蛋白磷酸化水平和糖原合成激酶-3β活性增高

目的研究1型及2型糖尿病对海马组织内Tau蛋白部分位点磷酸化水平的影响,并探讨其作用机制。方法同月龄Wistar大鼠,分为对照组(CTL)、1型(T1DM)及2型(T2DM)糖尿病模型组。葡萄糖氧化酶法检测血糖,放免法检测血浆胰岛素,Western blot分析海马内总Tau以及Tau蛋白上部分位点(pSer199、pThr212、pSer214、pSer396及pSer422)的磷酸化水平。γ32P标记的ATP和特异性底物肽检测海马内胰岛素信号传导系统中的关键酶糖原合成激酶-3β(GSK-3β)活性。结果T1DM及T2DM组血糖水平显著高于CTL组(P<0.001);T2DM组血浆胰岛素水平显著高于CTL组(P<0.001),而T1DM组显著低于CTL组(P<0.01);T2DM组胰岛素抵抗指数显著高于T1DM及CTL组(P<0.001)。T1DM及T2DM组大鼠海马组织内总Tau蛋白水平与CTL比较无显著差异,但阿尔茨海默病相关的Tau蛋白磷酸化位点pS199、pT212及pS396在T1DM及T2DM组都呈现过度磷酸化状态。同时,GSK-3β活性在这两种糖尿病大鼠模型的海马组织内明显增高(P<0.01,P<0.001)。结论糖尿病大鼠海马组织内Tau蛋白部分位点磷酸化水平增高。胰岛素信号系统功能低下而导致传导途径中GSK-3β活性上调,这可能是引起大鼠海马内Tau蛋白磷酸化的一个主要原因。

糖原合成激酶-3在氧化应激与阿尔茨海默病中的作用

目的通过对糖原合成激酶-3β(GSK-3β)的调控,综述氧化应激对阿尔茨海默病(AD)的发生与发展的影响,总结GSK-3β抑制剂和中草药中作用于该靶点的有效成分。方法查阅国内外关于氧化应激对GSK-3β与AD的影响等文献并加以总结。结果AD的众多致病因素中氧化应激通过调控磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/糖原合成激酶3(GSK-3)(PI3K/Akt/GSK-3)信号通路影响GSK-3β的活性,从而促进AD的发生与发展。结论深入研究氧化应激与GSK-3β调控机制,对AD的靶向药物研发具有重要意义。

糖原合成激酶-3β在糖尿病肾病中的研究进展

糖尿病肾病发病机制复杂,糖原合成激酶-3β在其中发挥着重要作用。糖原合成激酶是体内诸多信号通路的参与者,在糖尿病所致慢性肾损伤过程中,参与了肾小球足细胞、系膜细胞、肾小管上皮细胞等的损伤过程,本文就糖原合成激酶-3β在糖尿病肾病中的表达和作用机制进行综述。

糖原合成激酶-3与疾病的关系

糖原合成酶激酶-3(Glycogen synthese kinase-3,GSK-3)在大约20年前首次被发现,起初它被认为是一种蛋白激酶,能够磷酸化糖原合成酶并使之失活。随着对GSK-3的不断深入研究,最终证实它是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,在所有真核生物中普遍分布,并且该激酶可以参与多种细胞过程,包括细胞骨架的形成、细胞殖、细胞分化、细胞运动及存活、基因转录、翻译以及蛋白合成等。同时,

糖原合成激酶-3对肝硬化失代偿患者脂多糖介导的过度炎症反应的影响

目的探讨糖原合成激酶-3(GSK-3)在脂多糖(LPS)诱导肝硬化患者外周血单核细胞(PBMCs)炎症反应中的作用。方法将不同分期的肝硬化患者PBMCs分为对照组、LPS组、SB216763组、SB216763+LPS组,收集细胞培养上清液,采用ELISA法检测上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)与白细胞介素10(IL-10)的表达水平。结果所有研究对象中,LPS组TNF-α和IL-10含量明显高于对照组(P<0.01),SB216763+LPS组TNF-α和IL-10的含量较LPS组明显降低(P<0.01)。肝硬化失代偿期并腹膜炎患者、LPS组的TNF-α含量显著高于肝硬化代偿期患者(P<0.05),而IL-10的表达水平与代偿期患者比较无明显改变。在SB216763+LPS组、肝硬化失代偿期并腹膜炎患者TNF-α和IL-10的含量与肝硬化代偿期患者无明显差异。另外,TNF-α的表达水平随Child-Pugh分级和MELD评分增加逐渐升高,而IL-10的表达水平却无明显变化。结论抑制GSK-3的活性可以减少TNF-α和IL-10的分泌,为肝硬化失代偿期合并腹膜炎患者的治疗提供了一个新思路。

雷公藤甲素通过丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶/糖原合成酶激酶-3β通路对MGC803细胞增殖、侵袭与迁移的影响

目的 探讨雷公藤甲素通过丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶/糖原合成酶激酶-3β(AKT/GSK-3β)通路对MGC803细胞增殖、侵袭与迁移的影响。方法 体外培养MGC803细胞,确定雷公藤甲素的干预剂量和干预时间。将细胞分为阴性对照组(A组,不进行处理),阳性对照组(B组,10μmol/L顺铂),雷公藤甲素高、中、低剂量组(C组、D组、E组)。干预48 h,采用Transwell法检测细胞侵袭能力,采用划痕试验法检测迁移能力,采用免疫印迹(Western blot)法检测检测相关蛋白的表达。结果 随着雷公藤甲素浓度的增加,MGC803细胞增殖率降低(P <0.05);48 h时半数抑制浓度(IC50)最小,选择干预时间为48 h,C组、D组、E组的干预剂量分别为80,40,20 nmol/L。与B组比较,C组、D组、E组侵袭细胞数、细胞迁移距离及波形蛋白(vimentin),snail,p-AKT/AKT,p-GSK-3β/GSK-3β表达水平均显著升高(P <0.05),上皮钙黏素(E-cadherin)、β-联蛋白(β-catenin)表达水平均显著降低(P <0.05),且呈剂量依赖关系。结论 雷公藤甲素可通过抑制AKT/GSK-3β信号通路而抑制MGC803细胞增殖、侵袭与迁移。

靶向脑内糖原合成激酶-3β的环丙酰胺吡啶类化合物的设计和合成及活性评估

目的:合成靶向脑内糖原合成激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)的环丙酰胺吡啶类衍生物,为开发用于阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)治疗的GSK-3β小分子抑制剂及AD脑正电子发射计算机断层成像(positron emission tomography,PET)的显像剂提供优秀先导化合物。方法:通过Pd催化的Suzuki偶联反应形成环丙酰胺吡啶偶联芳环的靶向GSK-3β目标化合物;通过酶抑制实验测试了化合物对GSK-3β的抑制活性;通过SwissADME预测了化合物穿透血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)的能力。结果:目标产物结构经1H-NMR,13C-NMR和HRMS确证;化合物表现出对GSK-3β蛋白中等及较高水平的抑制活性;氟代酰胺类化合物(17,18,19和20)可能会穿过BBB。结论:环丙酰胺吡啶类化合物具有开发成用于AD治疗的GSK-3β抑制剂或转化成PET显像剂的潜力。

基于糖原合成酶激酶-3β及内质网应激探讨Renalase抗肾脏纤维化的作用机制

目的 探讨糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)在Renalase抗肾脏纤维化过程中的作用及其可能的机制。方法 选用C57BL/6小鼠,予以下分组:(1)Sham+Ad-β-gal组;(2)Sham+Ad-Renalase组;(3)UUO+Ad-β-gal组;(4)UUO+Ad-Renalas组。观察GSK-3β表达的变化,其中UUO组为单侧输尿管结扎致肾脏纤维化模型组,Sham组为假手术对照组,Ad-Renalase为过表达Renalase腺病毒,Ad-β-gal为对照腺病毒。然后应用病毒转染技术上调(UUO+Ad-Renalase+AAV-GSK-3β组)及下调(UUO+Ad-Renalase+Ad-GSK-3β-RNAi组)GSK-3β后观察Renalase抗纤维化作用的变化。结果 与假手术(Sham)组相比,UUO组GSK-3β表达增加;与UUO+Ad-β-gal组相比,UUO+Ad-Renalase组纤维组织沉积减少、纤维化标志蛋白Col-Ⅰ和FN表达下降的同时GSK-3β表达下调;当上调GSK-3β后,Renalase抗纤维化作用被抵消,而当下调GSK-3β后,与UUO+Ad-Renalase组相比,UUO+Ad-Renalase+Ad-GSK-3β-RNAi组纤维化没有进一步改善。同时观察到与Sham组相比,UUO组内质网应激激活明显,过表达Renalase后,内质网应激被抑制。当加入内质网应激激动剂TM后,与UUO+Ad-Renalase组相比,UUO+Ad-Renalase+TM组纤维化加重,GSK-3β表达升高;但无论GSK-3β升高或者降低,内质网应激均无明显变化。结论 本研究证实在单侧输尿管结扎致肾脏纤维化过程中,Renalase通过抑制内质网应激下调GSK-3β表达从而延缓肾脏纤维化。

超声检查联合血清糖原合成酶激酶-3β和热休克蛋白27对慢性肺源性心脏病的诊断价值

目的 探讨超声检查联合血清糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)和热休克蛋白27(HSP27对慢性肺源性心脏病(CPHD)的诊断价值。方法 将100例CPHD患者设为观察组,100名健康体检者设为对照组。比较两组受试者一般资料、实验室检查结果、超声检查结果、GSK-3β及HSP27水平。采用Pearson相关性分析法探讨超声检查指标与血清HSP27、GSK-3βmRNA水平的相关性,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析超声检查和各项血清指标对CPHD的诊断效能。结果 观察组受试者肺动脉压高于对照组,主肺动脉内径、右室内径及右房内径均长于对照组(P<0.01)。观察组受试者血清HSP27水平高于对照组,血清GSK-3β mRNA水平低于对照组(P<0.01)。血清HSP27水平与肺动脉压、主肺动脉内径、右房内径和右室内径均呈正相关(P<0.05或0.01)。血清GSK-3β mRNA水平与肺动脉压、主肺动脉内径、右房内径和右室内径均呈负相关(P<0.05或0.01)。超声参数、血清GSK-3β、HSP27诊断CPHD的曲线下面积(AUC)分别为0.880、0.834和0.868,联合诊断的AUC为0.923,高于单独诊断。结论 超声参数、血清GSK-3β和HSP27对CPHD均具有较高的诊断价值,联合检测的诊断效果更高。

RNA干扰糖原合成激酶-3β对人胰腺癌裸鼠移植瘤生长及血管生成的影响

目的 观察RNA干扰糖原合成激酶-3β（GSK-3β）对人胰腺癌裸鼠移植瘤生长及血管生成的影响.方法 将未转染和转染control短发卡RNA（shRNA）或GSK-3β shRNA的Panc-1细胞接种于裸鼠皮下,建立移植瘤模型,分为阴性对照组、载体对照组和实验组,每组各8只.接种8周后处死裸鼠,测量各组移植瘤的重量和体积,并计算抑瘤率；免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶（SP）法检测增殖细胞核抗原（PCNA）和CD31蛋白的表达,并计算增殖指数（SPF）和微血管密度（MVD）；实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）和Western blot检测血管内皮生长因子（VEGF）基因和蛋白的表达.结果 实验组移植瘤的重量和体积显著低于对照组（P＜0.05）,抑瘤率为35.27％.实验组SPF值为（69.55±2.64）％,较阴性对照组的（83.26±2.83）％和载体对照组的（83.65±2.65）％显著降低（P＜0.05）.实验组MVD值为17.2 ±2.9,与阴性对照组（27.2±3.1）和载体对照组（26.6±2.8）比较显著降低（P＜0.05）.实验组移植瘤的VEGF mRNA的相对表达量为0.089 38±0.008 84,与阴性对照组（0.139 06±0.003 35）和载体对照组（0.138 89±0.001 75）比较显著降低（P＜0.05）.实验组移植瘤的VEGF蛋白的相对值为（0.450 6±0.014 6）,与阴性对照组（0.675 8±0.026 2）和载体对照组（0.6645±0.0105）比较显著降低（P＜0.05）.而上述对照组组间差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 在体内基因干扰GSK-3β表达可显著抑制Panc-1细胞接种的裸鼠皮下移植瘤的生长和新生血管形成,该效应可能与其下调VEGF表达有关.

胰腺癌组织中糖原合成激酶-3β的表达及其与上皮-间充质转化的相关性

目的 探讨糖原合成激酶-3β（GSK-3β）在胰腺癌组织中的表达及其与上皮-间充质转化的相关性.方法 选取胰腺癌病例标本60例,35例有配对的癌旁正常组织,行GSK-3β、丝氨酸-9、酪氨酸-216、Snail和E-钙黏蛋白（E-cadherin）免疫组织化学及Western blot检测,分析GSK-3β与胰腺癌临床病理特征和上皮-间充质转化相关分子之间的相关性.结果 GSK-3β在胰腺癌中阳性率为65.0％,显著高于癌旁组织（22.8％）,GSK-3β表达与胰腺癌临床分期、分级、分化程度以及淋巴结转移呈正相关,而与患者年龄、性别和肿瘤大小无相关.丝氨酸-9在癌旁组织表达水平高于胰腺癌组织,而酪氨酸-216和Snail表达与之相反,E-cadherin在胰腺癌及癌旁组织表达水平均较低.Pearson相关分析发现,GSK-3β与上述指标均显著相关.结论 GSK-3β在胰腺癌组织中表达显著高于癌旁组织,与胰腺癌临床分期、肿瘤分期、分化程度及淋巴结转移之间呈正相关,而与患者年龄、性别及肿瘤大小无相关.此外,GSK-3β还与胰腺癌上皮-间充质转化具有密切关系.

RNA干扰糖原合成激酶-3β对胰腺癌细胞生长的抑制作用

目的观察沉默糖原合成激酶-3p（GSK-3p）对人胰腺癌细胞株PANC-1增殖和存活的影响，探讨其分子机制。方法实验分组如下：阴性对照组为未转染的PANC一1细胞；载体对照组为稳定转染control shRNA的PANC-1细胞；实验组为稳定转染GSK-3β shRNA的PANC．1细胞。噻唑蓝（MTF）比色法连续7d检测各组细胞的吸光度（A）值，并绘制出细胞的生长曲线；流式细胞仪（FCM）检测各组细胞的凋亡和周期；电泳迁移率实验（EMSA）检测各组细胞中核因子（NF）．KB的DNA结合活性。结果转染GSK-3B短发卡RNA（shRNA）的实验组PANC．1细胞生长速度明显减慢；实验组细胞的早期凋亡比例为（5．38±0．33）％，较阴性对照组（1．71±0．08）％和载体对照组（1．68±0．11）％显著升高（P〈0．05）；实验组中G0／G1期细胞比例为（60．02±1．99）％，较阴性对照组（46．56±3．13）％和载体对照组（46．04±2．92）％显著升高（P〈0．05），发生明显的G，期阻滞；实验组细胞中代表NF-KB复合体数量的条带A值为2186．37±225．51，与阴性对照组（4005．39±203．64）和载体对照组（3793．32±310．34）比较显著减少（P〈0．05）；而上述对照组组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论靶向抑制GSK-3β可抑制胰腺癌细胞增殖，诱导其凋亡，其机制可能与下调NF-κB的转录活性有关。

脑和肌肉ARNT样蛋白1、周期昼夜节律调节因子2、Notch1、糖原合成酶激酶-3β在结直肠腺癌组织中的表达及意义

目的探讨脑和肌肉ARNT样蛋白1(BMAL1)、周期昼夜节律调节因子2(PER2)、Notch1、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)在结直肠腺癌组织中的表达及意义。方法实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测11例结直肠癌患者手术切除的新鲜结直肠癌组织及相应癌旁组织中BMAL1、PER2、Notch1、GSK-3βmRNA的相对表达量;免疫组化法检测50例手术切除的结直肠腺癌及癌旁组织、30例经内镜切除的结直肠腺瘤组织中BMAL1、PER2、Notch1、GSK-3β蛋白的表达情况。结果结直肠癌组织中,BMAL1、PER2 mRNA的相对表达量均低于癌旁组织,差异均有统计学意义(P﹤0.05);结直肠癌组织和癌旁组织中Notch1、GSK-3βmRNA的相对表达量比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05)。免疫组化结果显示,结直肠腺癌组织、结直肠腺瘤组织及结直肠腺癌癌旁组织中,BMAL1、PER2的表达呈递增趋势,而Notch1、GSK-3β的表达呈递减趋势。淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期结直肠腺癌患者结直肠腺癌组织中BMAL1、Notch1蛋白表达均高于无淋巴结转移、TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期患者(P﹤0.05);病理类型为黏液腺癌的结直肠腺癌组织中PER2蛋白的表达高于管状腺癌(P﹤0.05),GSK-3β的表达低于管状腺癌(P﹤0.05)。Spearman相关分析结果显示,结直肠癌组织中BMAL1的表达与PER2的表达呈正相关(r=0.332,P=0.018),PER2的表达与GSK-3β的表达呈负相关(r=-0.291,P=0.040),Notch1的表达与GSK-3β的表达呈正相关(r=0.285,P=0.045),其余指标间的表达无相关性。结论BMAL1、Notch信号通路、GSK-3β均可能参与调控结直肠癌的发生、发展过程,且GSK-3β可能与BMAL1和Notch信号通路之间存在相互调控作用。

二氮嗪后处理对缺氧／复氧成年大鼠心肌细胞存活率及磷酸化糖原合成激酶-3β、Bcl-2和Bax表达的影响

目的研究线粒体ATP-敏感性钾通道（mitochondrial ATP-sensitive potassium channel，mitoKATP通道）开放剂二氮嗪（diazoxide，DZ）后处理对成年大鼠心肌细胞缺氧／复氧（hypoxia／reoxygenation，H／R）后细胞存活及对磷酸化糖原合成激酶-3β（phospho glycogen synthase kinase-3β，pGSK-3β），Bcl-2，Bax表达的影响。方法体外培养原代成年大鼠（30只）心肌细胞建立H／R损伤模型，按随机数字表法随机分为5组（每组6只）：①Normal组：在二氧化碳（CO2）培养箱中持续培养6h组；②H／R组：缺氧3h复氧3h组；③DZ组：缺氧3h复氧3h，复氧5min时给予100μmol／LDZ组；④DZ±5-HD组：缺氧3h复氧3h，缺氧末给予100μmol／L5-羟葵酸盐（5-hydroxydecanoate，5-HD），复氧5min时给予100μmol／L DZ组；⑤5-HD组：缺氧3h复氧3h，缺氧末给予100μmol／L 5-HD组。复氧3h末通过计数细胞长杆率测定存活率，免疫印迹法测定心肌细胞内pGSK-313，Bcl-2和Bax的表达。结果复氧3h末，Normal组单个心肌细胞收缩幅度为（13．12±0．19）％，与Normal组比较，其他各组单个心肌细胞收缩幅度明显降低[H／R组为（7．97±0．22）％，DZ组为（10．48±0．20）％，DZ±5-HD组为（7．97±0．19）％，5-HD组为（8．22±0．22）％]（P〉0．05），心肌细胞内Bcl-2表达水平降低，Bax表达水平升高（P〈0．05）。DZ后处理组心肌细胞存活率为（64±5）％，与H／R组比较明显增高（P〈0.05），心肌细胞内Bcl-2、pGSK-3β表达水平升高，Bax表达水平降低，而缺氧末即刻给予5-HD可以逆转DZ后处理的这些作用（P〈0．05）；5-HD组与H／R组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论DZ后处理可能通过激活mitoKATP通道、上调pGSK-3β及Bcl-2，下调Bax的表达增加H／R后成年大鼠心肌细胞的存活。

雌激素对糖原合成激酶-3β的影响及其机制

目的观察雌二醇（E2）对糖原合成激酶-3β（GSK-3β）活性的影响并其机制。方法E2作用于大鼠原代皮层神经元，噻唑蓝（MTT）法检测其对细胞活力的影响；放射免疫法测定其对GSK-3活性的影响，Western blot检测其对GSK-3β表达的影响；检测雌激素受体抑制剂ICI-182780和各种信号转导激酶抑制剂对E2诱导的GSK-3β磷酸化和对GSK-3活性的影响。结果在1、10、100、200、500 nmol/L浓度范围内，相对于对照组，E2对大鼠皮层神经元的细胞活力分别为98.4%、107.5%、105.8%、95.6%和82.3%；1、10、100 nmol/L的E2能够剂量依赖性的降低GSK-3的活性，分别为对照组的85.6%、78.5%和65.4%；Western blot显示E2剂量依赖性的增加了GSK-3β磷酸化（9Ser），而对非磷酸化的GSK-3β无显著影响；雌激素受体抑制剂ICI-182780拮抗了E2对GSK-3β的磷酸化作用；E2诱导的GSK-3β的磷酸化作用能被丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）的抑制剂PD98059、蛋白激酶C（PKC）抑制剂GF109203X所部分抑制，而Akt的抑制剂Akt-I对其无显著影响；E2降低GSK-3活性至对照组的65.4%（P＝0.000），加入ICI、PD98059、GF109203X和Akt-I后，E2诱导的GSK-3的活性分别为对照组的98.7%、89.6%、94.9%和67.3%，这与GSK磷酸化表达检测相一致。结论E2能够降低GSK-3活性，表现为使GSK-3β磷酸化（9Ser）增加；E2对GSK-3β作用是雌激素受体依赖性的，其对GSK-3β的磷酸化作用可能是通过MAPK和PKC信号通路所介导的。

nm23-H1基因对肺癌细胞株L9981中Wnt信号传导通路中糖原合成激酶-3β的表达和活性的影响

目的观察转移抑制基因nm23-H1对肺癌细胞株L9981中Wnt信号传导通路中糖原合成激酶-3β（GSK-3β）的表达量和活性的影响。方法将稳定转染nm23-H1基因的肺癌细胞株、原代细胞株L9981和空载体转染细胞株培养传代，分别设为nm23-H1转染组、对照组和空白转染组。应用Western blot分别检测应用20 mmol/L LiCl处理前后3组肺癌细胞株胞质、胞核中GSK-3β的表达水平，测定上述肺癌细胞株胞质和胞核中的GSK-3β活性。结果（1） nm23-H1转染组胞质和胞核中GSK-3β蛋白表达量分别为（6 639±503）和（4 481±446） A，空白转染组分别为（645±352）和（726±68） A，对照组分别为（763±267）和（683±49） A。3组细胞株间胞质和胞核中GSK-3β表达量差异有统计学意义（P=0.025）。两两比较：nm23-H1转染组胞质和胞核GSK-3β表达水平均显著高于空白转染组和对照组（P=0.017），而后两者之间比较均差异无统计学意义（P=0.094）。（2）nm23-H1转染组胞质和胞核GSK-3β激酶活性分别为（29 371±2 492）和（9 647±859）每分钟脉冲数，空白转染组分别为（11 241±1 495）和（1 492±176）每分钟脉冲数，对照组分别为（14 271±1 137）和（1 853±113）每分钟脉冲数。3组细胞株间胞质和胞核中GSK-3β酶活性差异有统计学意义（P=0.032），两两比较：nm23-H1转染组，胞质和胞核GSK-3β酶活性均显著高于空白转染组和对照组（P=0.027），而后两者之间比较均差异无统计学意义（P=0.131）。（3）经20 mmol/L LiCl处理后，nm23-H1转染组胞质和胞核中GK-3β表达量分别为（5 037±427）和（823±350） A，与处理前比较均差异无统计学意义（P=0.168），空白转染组细胞株经LiCl处理后胞质和胞核中GSK-3β表达量分别为（2 174±126）和（248±12） A，对照组则分别为（2 273±128）和（253±14） A，两个细胞株胞质和胞核中GSK-3β表达量均显著低于处理前（P=0.012、0.015）。（4）经LiCl处理后，nm23-H1转染组胞质和胞核GSK-3β激酶活性分别为（12 837±1 042）和（748±215）每分钟脉冲数，空白转染组分别为（4 739±401）和（947±126）每分钟脉冲数，对照组分别为（4 638±401）和（1 162±127）每分钟脉冲数，3组细胞株胞质和胞核GSK-3β激酶活性均显著低于处理前（P=0.006、0.029、0.010）。结论nm23-H1基因转染能显著上调人肺癌细胞L9981中GSK-3β的蛋白表达和活性。其可能通过上调人肺癌细胞中GSK-3β的蛋白表达和活性抑制Wnt信号传导而发挥作用。