野黄芩苷对卒中后抑郁模型大鼠糖原合成酶激酶3β/β-连环蛋白信号通路的影响

目的探讨野黄芩苷对卒中后抑郁(PSD)模型大鼠糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的影响。方法用线栓法制备大鼠脑卒中模型,待脑卒中模型制备成功后,用孤养结合慢性温和不可预知应激(CUMS)建立抑郁模型。将模型大鼠按体重随机分为模型组,低、中、高剂量实验组和阳性对照组,每组10只;另取10只正常大鼠作为阴性对照组。在PSD造模第3周后开始进行干预,阴性对照组和模型组均按1.5μL·g^(-1)的剂量灌胃给予0.9%Na Cl;低、中、高剂量实验组按10 mg·kg^(-1)的剂量分别灌胃给予10,20和40 mg·mL^(-1)野黄芩苷;阳性对照组灌胃给予10 mg·kg^(-1)盐酸氟西汀胶囊。6组大鼠每天给药1次,均连续给药21 d。用Morris水迷宫实验检测大鼠空间学习记忆能力,用Western blot法检测大鼠海马组织中Wnt、GSK-3β和β-catenin水平,用酶联免疫吸附实验法检测海马组织中5-羟色胺(5-HT)和去甲肾上腺素(NE)水平。结果低、高剂量实验组和阳性对照组、模型组、阴性对照组的目标象限游泳时间分别为(19.73±1.27),(24.68±2.37),(24.79±3.42),(13.08±31.62)和(29.53±3.41) s,Wnt蛋白相对表达量分别为0.45±0.07,1.04±0.10,1.01±0.08,1.15±0.13和1.02±0.13,GSK-3β蛋白相对表达量分别为0.49±0.05,0.82±0.07,0.85±0.07,0.41±0.03和0.94±0.10,β-catenin蛋白相对表达量分别为0.43±0.07,0.64±0.06,0.66±0.10,0.38±0.05和0.77±0.07,5-HT分别为(134.90±10.38),(168.26±15.51),(167.84±24.68),(118.62±15.71)和(190.26±19.52)ng·mL^(-1),NE分别为(253.57±29.42),(355.70±61.82),(360.13±49.70),(207.62±31.54)和(438.41±51.67) ng·mL^(-1),低、高剂量实验组和阳性对照组的上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(均P <0.05)。结论野黄芩苷通过激活GSK-3β/β-catenin信号通路,抑制海马神经细胞凋亡,从而发挥治疗PSD的作用。

艾司氯胺酮通过糖原合成酶激酶-3β/NOD样受体热蛋白结构域蛋白3通路改善新生鼠缺氧缺血性心肌损伤的研究

目的基于糖原合成酶激酶-3β/NOD样受体热蛋白结构域蛋白3(GSK-3β/NLRP3)通路探讨艾司氯胺酮对新生鼠缺氧缺血性心肌损伤的作用。方法将30只新生大鼠随机分为假手术组、模型组及艾司氯胺酮组,每组10只。假手术组新生鼠行颈部正中切口,暴露双侧颈总动脉;模型组和艾司氯胺酮组新生鼠采用结扎颈总动脉联合低氧环境建立缺血缺氧模型;艾司氯胺酮组新生鼠给予艾司氯胺酮干预(50 mg/kg)。检测各组新生鼠左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(LVFS)、左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末期内径(LVESD)、血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白I(cTnI)、乳酸脱氢酶(LDH)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β水平,心肌损伤、心肌细胞凋亡及凋亡蛋白半胱氨酸蛋白酶1/3/9(caspase 1/3/9)水平,心肌组织中性粒细胞浸润情况,以及心肌组织中GSK-3β、NLRP3蛋白水平变化。结果相比于假手术组,模型组新生鼠LVEF、LVFS降低,LVEDD、LVESD增高,且艾司氯胺酮组新生鼠LVEF、LVFS高于模型组,LVEDD、LVESD低于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组血清CK-MB、cTnI、LDH、TNF-α、IL-6、IL-1β水平,心肌损伤及凋亡,心肌组织切割的caspase 1/3/9蛋白水平、中性粒细胞数量、GSK-3β、NLRP3蛋白水平增加,且艾司氯胺酮组上述指标低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论艾司氯胺酮通过抑制炎症反应改善新生鼠缺氧缺血性心肌损伤,其作用机制与GSK-3β/NLRP3通路有关。

雷公藤甲素通过丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶/糖原合成酶激酶-3β通路对MGC803细胞增殖、侵袭与迁移的影响

目的 探讨雷公藤甲素通过丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶/糖原合成酶激酶-3β(AKT/GSK-3β)通路对MGC803细胞增殖、侵袭与迁移的影响。方法 体外培养MGC803细胞,确定雷公藤甲素的干预剂量和干预时间。将细胞分为阴性对照组(A组,不进行处理),阳性对照组(B组,10μmol/L顺铂),雷公藤甲素高、中、低剂量组(C组、D组、E组)。干预48 h,采用Transwell法检测细胞侵袭能力,采用划痕试验法检测迁移能力,采用免疫印迹(Western blot)法检测检测相关蛋白的表达。结果 随着雷公藤甲素浓度的增加,MGC803细胞增殖率降低(P <0.05);48 h时半数抑制浓度(IC50)最小,选择干预时间为48 h,C组、D组、E组的干预剂量分别为80,40,20 nmol/L。与B组比较,C组、D组、E组侵袭细胞数、细胞迁移距离及波形蛋白(vimentin),snail,p-AKT/AKT,p-GSK-3β/GSK-3β表达水平均显著升高(P <0.05),上皮钙黏素(E-cadherin)、β-联蛋白(β-catenin)表达水平均显著降低(P <0.05),且呈剂量依赖关系。结论 雷公藤甲素可通过抑制AKT/GSK-3β信号通路而抑制MGC803细胞增殖、侵袭与迁移。

葛根总黄酮干预长时耐力运动后再力竭运动大鼠脑组织β-连环蛋白及糖原合成酶激酶3β的表达

背景:长时间的力竭运动易引起大鼠缺血缺氧,致使脑组织损伤,葛根总黄酮具有保护大鼠心脑血管、改善脑损伤神经和抗氧化等作用,但运动前补充葛根总黄酮是否达到保护脑组织作用目前尚不明确。目的:观察葛根总黄酮对运动大鼠脑组织病理改变和β-连环蛋白及糖原合成酶激酶3β表达的影响。方法:将50只SD雄性大鼠随机分为安静对照组、运动对照组、葛根总黄酮低、中、高剂量组。除安静对照组外,其余各组大鼠进行为期6周的运动训练,于6周末即最后一次训练达到力竭。葛根总黄酮低、中、高剂量组大鼠均在运动前20 min灌胃50,100,200 mg/kg的葛根总黄酮,1次/d,直到实验结束。苏木精-伊红染色观察脑组织病理学变化,免疫组织化学法、RT-PCR法及Western blot法测定β-连环蛋白和糖原合成酶激酶3β表达。结果与结论:(1)光镜观察运动对照组大鼠脑皮质和海马区有部分神经细胞胞体肿胀、胞体收缩、脑膜或室管膜显现水肿、充血和出血等现象,葛根总黄酮低剂量组有水肿、充血和出血等轻微症状,而中、高剂量组大鼠脑组织病理变化与安静对照组比较无明显差异;(2)免疫组织化学染色显示,运动对照组大鼠脑组织β-连环蛋白和糖原合成酶激酶3β表达均高于安静对照组(P <0.01),葛根总黄酮中、高剂量组大鼠脑组织β-连环蛋白和糖原合成酶激酶3β表达均低于运动对照组(P <0.01);(3)运动对照组大鼠脑组织β-连环蛋白、糖原合成酶激酶3βmRNA及蛋白表达均高于安静对照组(P <0.05或P <0.01);葛根总黄酮中、高剂量组大鼠脑组织β-连环蛋白、糖原合成酶激酶3βmRNA及蛋白表达均低于运动对照组(P <0.05或P <0.01);(4)结果表明,力竭运动引起大鼠脑组织损伤和β-连环蛋白、糖原合成酶激酶3β表达上调,葛根总黄酮可能是通过下调β-连环蛋白和糖原合成酶激酶3β的表达进而有效改善大鼠脑组织损伤,从而达到保护脑组织的作用。

辛伐他汀对慢性心力衰竭兔心肌细胞糖原合成激酶3β活性、蛋白表达及β-连环蛋白表达的影响

目的:观察辛伐他汀对慢性心力衰竭(心衰)兔心肌重构及心功能的影响,对心肌细胞中糖原合成激酶3β(GSK3β)活性、蛋白表达及β-连环蛋白(β-catenin)表达的影响。方法:24只新西兰白兔分为4组,每组6只。假手术组:为健康对照。其余兔行主动脉瓣反流及腹主动脉缩窄术,建立慢性心衰模型后,分为心衰对照组:术后不给药;早干预组:术后第2天给予辛伐他汀5 mg/(d.kg),连续8周;晚干预组:术后第4周给予辛伐他汀5 mg/(d.kg),连续4周。术后8周观察结束时行左心导管检查,记录左心室舒张末压,处死后称体重、心脏重量、左心室重量,计算心脏质量指数(心脏重量/体重)、左心室质量指数(左心室重量/体重)。West-ern-blotting分析心肌细胞浆GSK3β、细胞核β-catenin表达。免疫沉淀分析GSK3β活性。结果:术后8周时,心衰对照组左心室舒张末压、心脏重量、左心室重量、心脏质量指数及左心室质量指数均显著高于假手术组(P均<0.01);术后8周,早干预组心脏重量、左心室重量、心脏质量指数及左心室质量指数均显著低于心衰对照组(P<0.05～0.01);晚干预组心脏重量、左心室重量、心脏质量指数均显著低于心衰对照组(P<0.05～0.01)。术后8周,早干预组及晚干预组左心室舒张末压均显著低于心衰对照组(P均<0.05)。心衰对照组心肌胞浆中GSK3β活性较假手术组显著降低(P<0.01),而心肌细胞核β-catenin表达显著增加(P<0.01),差异均有统计学意义。早干预组及晚干预组GSK3β活性与心衰对照组比较均显著增加(P均<0.01),而心肌细胞核β-catenin表达均显著降低(P均<0.01)。结论:辛伐他汀治疗有效抑制心力衰竭兔心肌重构、改善心功能;其作用与增加GSK3β活性、抑制心肌细胞核β-catenin表达有关。

超声检查联合血清糖原合成酶激酶-3β和热休克蛋白27对慢性肺源性心脏病的诊断价值

目的 探讨超声检查联合血清糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)和热休克蛋白27(HSP27对慢性肺源性心脏病(CPHD)的诊断价值。方法 将100例CPHD患者设为观察组,100名健康体检者设为对照组。比较两组受试者一般资料、实验室检查结果、超声检查结果、GSK-3β及HSP27水平。采用Pearson相关性分析法探讨超声检查指标与血清HSP27、GSK-3βmRNA水平的相关性,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析超声检查和各项血清指标对CPHD的诊断效能。结果 观察组受试者肺动脉压高于对照组,主肺动脉内径、右室内径及右房内径均长于对照组(P<0.01)。观察组受试者血清HSP27水平高于对照组,血清GSK-3β mRNA水平低于对照组(P<0.01)。血清HSP27水平与肺动脉压、主肺动脉内径、右房内径和右室内径均呈正相关(P<0.05或0.01)。血清GSK-3β mRNA水平与肺动脉压、主肺动脉内径、右房内径和右室内径均呈负相关(P<0.05或0.01)。超声参数、血清GSK-3β、HSP27诊断CPHD的曲线下面积(AUC)分别为0.880、0.834和0.868,联合诊断的AUC为0.923,高于单独诊断。结论 超声参数、血清GSK-3β和HSP27对CPHD均具有较高的诊断价值,联合检测的诊断效果更高。

基于糖原合成酶激酶-3β及内质网应激探讨Renalase抗肾脏纤维化的作用机制

目的 探讨糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)在Renalase抗肾脏纤维化过程中的作用及其可能的机制。方法 选用C57BL/6小鼠,予以下分组:(1)Sham+Ad-β-gal组;(2)Sham+Ad-Renalase组;(3)UUO+Ad-β-gal组;(4)UUO+Ad-Renalas组。观察GSK-3β表达的变化,其中UUO组为单侧输尿管结扎致肾脏纤维化模型组,Sham组为假手术对照组,Ad-Renalase为过表达Renalase腺病毒,Ad-β-gal为对照腺病毒。然后应用病毒转染技术上调(UUO+Ad-Renalase+AAV-GSK-3β组)及下调(UUO+Ad-Renalase+Ad-GSK-3β-RNAi组)GSK-3β后观察Renalase抗纤维化作用的变化。结果 与假手术(Sham)组相比,UUO组GSK-3β表达增加;与UUO+Ad-β-gal组相比,UUO+Ad-Renalase组纤维组织沉积减少、纤维化标志蛋白Col-Ⅰ和FN表达下降的同时GSK-3β表达下调;当上调GSK-3β后,Renalase抗纤维化作用被抵消,而当下调GSK-3β后,与UUO+Ad-Renalase组相比,UUO+Ad-Renalase+Ad-GSK-3β-RNAi组纤维化没有进一步改善。同时观察到与Sham组相比,UUO组内质网应激激活明显,过表达Renalase后,内质网应激被抑制。当加入内质网应激激动剂TM后,与UUO+Ad-Renalase组相比,UUO+Ad-Renalase+TM组纤维化加重,GSK-3β表达升高;但无论GSK-3β升高或者降低,内质网应激均无明显变化。结论 本研究证实在单侧输尿管结扎致肾脏纤维化过程中,Renalase通过抑制内质网应激下调GSK-3β表达从而延缓肾脏纤维化。

糖原合成酶激酶-3和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂paullones的研究进展

对抑制剂paullones的来源、合成,以及与激酶相互作用的分子机理、选择性、细胞效应进行了综述.指出糖原合成酶激酶-3(GSK-3)是参与糖代谢的主要限速酶之一,人类多种疾病均与其活性调节异常有关;细胞周期蛋白依赖性激酶(CDKs)是一类丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,能够促使细胞进行有序的生长、增殖、休眠或进入凋亡.以CDKs为靶点的药物可以阻断细胞周期,控制癌细胞增殖,从而达到抗肿瘤的目的.Paullones对CDKs和GSK-3均具有良好的选择性,是CDKs和GSK-3的有效抑制剂;迄今为止,文献报道的paullones化合物接近120个.

RNAi对波动性葡萄糖诱导的人脐静脉内皮细胞糖原合成酶激酶-3β、β-联蛋白作用的研究

目的构建糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase 3β,GSK-3β)特异的RNAi腺病毒表达载体,感染原代人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC),观察其对波动性浓度葡萄糖溶液诱导的HUVEC Wnt信号通路中GSK-3β、β-联蛋白(β-catenin)的影响。方法设计合成针对GSK-3βmRNA不同位点的短发荚RNA(short hairpin RNA,shRNA)编码序列,重组RNAi腺病毒表达载体。实验分为3组,空白对照组、阴性对照组、实验组。空白对照组使用波动性浓度葡萄糖溶液(5.5 mmol/L和30.5 mmol/L两种浓度的葡萄糖溶液每日交替培养,模拟血液中葡萄糖浓度的波动)培养HUVEC;阴性对照组使用波动性浓度葡萄糖溶液培养HUVEC,并使用无携带GSK-3β基因的腺病毒感染培养的HUVEC;实验组使用波动性浓度葡萄糖溶液培养HUVEC,并GSK-3β特异的RNAi腺病毒感染培养的HUVEC。Western印迹法波动性浓度葡萄糖溶液干预前及干预后72小时3组的GSK-3β、β-联蛋白水平。结果波动性浓度葡萄糖溶液干预72小时后,实验组的GSK-3β表达水平(0.1068±0.0034)较空白对照组、阴性对照组低,差异有统计学意义(F=10886.388,P=0.000);实验组的β-联蛋白水平表达水平(0.6653±0.0167)较空白对照组、阴性对照组低,差异有统计学意义(F=315.96,P=0.000)。结论构建的RNAi腺病毒感染HUVEC后可以抑制高糖诱发的GSK-3β蛋白表达、增加细胞内β-联蛋白的蛋白水平。

电针调节糖原合成酶激酶3β/β-catenin信号通路对脊髓损伤大鼠室管膜区细胞CD133蛋白表达的影响

背景:前期研究表明,电针可改善脊髓损伤后功能障碍,并促进脊髓损伤后大鼠内源性神经干细胞增殖,然而其具体作用机制不明确。目的:观察电针对脊髓损伤大鼠糖原合成酶激酶3β/β-catenin信号通路相关因子表达和室管膜区细胞CD133蛋白表达的影响,探讨电针促进内源性干细胞增殖的作用机制。方法:将45只SD雌性大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组,每组15只,后两组以精密打击器构建脊髓损伤大鼠模型。在造模后24 h,电针组接受电针治疗,选取督脉“百会”“脊中”穴及损伤脊髓上下节段夹脊穴,予疏密波,频率1 Hz/20 Hz,强度1.0-1.2 mA,30 min/次,1次/d,持续14 d。应用BBB运动功能评分评估大鼠运动功能,Nissl染色观察脊髓组织病理形态学改变及神经元数量,免疫荧光检测脊髓组织中室管膜区细胞CD133、脊髓灰质和白质中Nestin荧光强度,实时荧光定量PCR检测脊髓组织中Nestin、糖原合成酶激酶3β、β-catenin mRNA表达,Western blot检测脊髓组织中Nestin、糖原合成酶激酶3β、磷酸化糖原合成酶激酶3β、β-catenin、p-β-catenin蛋白表达。结果与结论:(1)与模型组比较,电针组BBB运动功能评分术后1,3,5 d时无显著差异(P>0.05),术后7,14 d时显著提高(P<0.05、P<0.01);(2)病理形态上,电针组脊髓组织部分神经细胞形态较完整,尼氏小体溶解较轻;与模型组比较,电针组脊髓组织神经元数量增加(P<0.05);(3)与模型组比较,电针组脊髓组织中室管膜区CD133荧光强度升高(P<0.001),灰质中Nestin荧光强度均明显升高(P<0.01),白质中Nestin荧光强度显著升高(P<0.001);(4)与模型组比较,电针组Nestin mRNA表达水平显著升高(P<0.001),糖原合成酶激酶3βmRNA表达水平明显降低(P<0.01),β-catenin mRNA表达水平显著降低(P<0.001);(5)与模型组比较,电针组Nestin、磷酸化糖原合成酶激酶3β蛋白表达水平显著升高(P<0.001),p-β-catenin蛋白表达水平显著降低(P<0.001);(6)结果表明,电针能够促进脊髓损伤后大鼠室管膜区CD133蛋白表达,其机制可能与调节糖原合成酶激酶3β/β-catenin信号通路有关。

非小细胞肺癌组织中性别决定区Y框蛋白2、糖原合成酶激酶-3β表达观察

目的观察非小细胞肺癌(NSCLC)组织中性别决定区Y框蛋白2(SOX2)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)表达变化,并探讨其意义。方法选择西部战区总医院存档的NSCLC及其对应癌旁组织石蜡标本各42例份(分别记为肿瘤组和癌旁组),采用免疫组化SP法检测两组SOX2、GSK-3β,分析两者间及其与NSCLC临床病理参数的相关性。结果肿瘤组和癌旁组SOX2阳性率分别为73.8%、4.8%,GSK-3β阳性率分别为47.6%、100%,两组比较,P均<0.05。SOX2表达与NSCLC分化程度呈负相关,GSK-3β表达与NSCLC是否发生淋巴结转移呈正相关(P均<0.05)。非小细胞肺癌组织中SOX2与GSK-3β表达无相关性(P>0.05)。结论NSCLC组织中SOX2表达升高,GSK-3β表达降低,SOX2和GSK-3β的表达与NSCLC的发生发展可能有关,有望成为NSCLC早期诊断及预测预后的生物学标记物。

糖原合成酶激酶-3与线粒体分裂蛋白在减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤作用中的关系

目的探讨糖原合成酶激酶-3(GSK-3β)与线粒体分裂蛋白(Drp-1)在大鼠心肌保护中的关系。方法选取清洁健康雄性SD大鼠60只,体重250~300 g,随机分为4组(n=15):缺血再灌注组(IR组)、缺血再灌注+Mivi-1处理组(M组)、缺血再灌注+SB216763处理组(B组)、缺血再灌注+Mivi-1处理+SB216763处理组(D组)。采用结扎大鼠左冠状动脉前降支30 min,再灌注120 min的方法制备大鼠心肌缺血再灌注(MRIR)模型。M组再灌注前1 min静注Mivi-1(1.2 mg/kg);B组再灌注前1 min静注SB216763(0.2 mg/kg);D组再灌注前静注Mivi-1及SB216763。腹主动脉取血检测血清肌钙蛋白(cTnI)浓度;取心肌组织,TUNEL法检测细胞凋亡情况,计算凋亡指数(AI);观察心肌病理学结果;Western blot法检测caspase-3表达水平。结果与IR组比较,M、B、D组上述指标下调(P<0.05);与D组比较,M、B组caspase-3浓度、AI、血清cTnI浓度上调,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 GSK-3β与Drp-1在大鼠心肌保护作用中并非单一依赖关系。

老年腹膜透析患者腹膜纤维化与腹膜透析液中糖原合酶激酶-3β、β连环蛋白水平的相关性研究

目的探究老年腹膜透析患者腹膜纤维化与腹膜透析液中糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)、β连环蛋白(β-catenin)水平的相关性。方法前瞻性选择2016年1月—2020年12月上海交通大学医学院附属松江医院收治的腹膜透析腹膜纤维化患者81例(观察组)和同期在上海交通大学医学院附属松江医院腹膜透析未发生腹膜纤维化患者100例(对照组)为研究对象,检测并比较2组腹膜透析液中GSK-3β、β-catenin及腹膜纤维化指标[转化生长因子β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)、I型胶原蛋白(Col-I)]水平,用Spearman检验和Pearson检验进行相关性分析。结果观察组GSK-3β和β-catenin水平高于对照组(P<0.05);观察组TGF-β1、FN、Col-I、α-SMA水平高于对照组(P<0.05);相关性分析提示,腹膜透析液中GSK-3β和β-catenin水平与腹膜透析患者发生腹膜纤维化呈正相关(P<0.05),腹膜透析液中GSK-3β和β-catenin水平均与TGF-β1、FN、Col-I、α-SMA呈正相关(P<0.05)。结论老年腹透患者腹膜纤维化与腹透液中糖原合酶激酶-3β、β连环蛋白水平存在一定相关性(低度),其水平检测对于了解腹膜纤维化发病和病情有一定临床意义。

氧化应激介导糖原合成酶激酶-3β促进肝细胞凋亡

目的探讨糖原合成酶激酶-3β(GSK3β)在氧化应激诱导肝细胞凋亡中的作用。方法以人肝HL-7702细胞为研究对象,H2O2/抗霉素A诱导细胞产生氧化应激,建立肝细胞凋亡模型。SB216763为GSK3β特异性抑制剂,在H2O2/抗霉素A给药前2 h干预。采用钙黄绿素乙酰甲酯/碘化丙啶(PI)双染色观察细胞存活情况,采用annexinⅤ-FITC/PI联合流式细胞术检测细胞凋亡,同时对细胞培养上清进行乳酸脱氢酶(LDH)检测来评价细胞死亡程度;Western blot法检测p-GSK3β、GSK3β、caspase-3、cleaved caspase-3、c-Jun氨基末端激酶(JNK)和细胞色素C(Cyt C)蛋白的表达。结果 H2O2/抗霉素A诱导的氧化应激促进了GSK3β活性增加,抑制GSK3β活性缓解了氧化应激和由氧化应激引起的细胞凋亡。与氧化应激模型组相比,SB216763干预组中PI染色的细胞显著减少,流式细胞术检测细胞凋亡率降低,细胞培养上清中LDH显著降低,Western blot法结果显示干预组中cleaved caspase-3、JNK、Cyt C蛋白表达下降。结论 GSK3β是氧化应激诱导细胞凋亡通路中的一种重要信号分子,抑制其活性可减轻氧化应激而改善肝细胞凋亡。

淫羊藿苷对阿尔茨海默病细胞模型糖原合成酶激酶-3β表达的影响及机制

目的研究淫羊藿苷（ICA）对阿尔茨海默病（AD）细胞模型糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）表达的影响及机制。方法以Aβ25~35孵育PC12细胞制备的AD细胞模型为研究对象,分为对照组、β-淀粉样蛋白（Aβ）组、ICA组、PI3K/Akt信号通路的经典抑制剂（LY）组、ICA＋LY组,Western印迹法检测各组的蛋白激酶B（Akt）、p-Akt、GSK-3β、p-GSK-3β的表达。结果与对照组相比,Aβ组的p-Akt水平、p-GSK-3β水平明显下降（P〈0.01）。与Aβ组相比,ICA组的p-Akt水平、p-GSK-3β水平明显增高（P〈0.01）。与ICA组相比,ICA＋LY组p-Akt水平、p-GSK-3β水平明显下降（P〈0.01）。结论 ICA可能通过PI3K/Akt信号通路,上调p-Akt、p-GSK-3β蛋白表达,发挥其保护作用。

糖尿病治疗新靶点糖原合成酶激酶-3抑制剂的研究进展

糖原合成酶激酶-3(glycogen synthase kinase-3,GSK-3)属丝氨酸/苏氨酸类激酶,最早是作为一种能磷酸化并抑制糖原合成酶活性的蛋白激酶而被发现的。已发现在某些人类疾病中GSK-3的活性异常升高,如糖尿病、阿尔茨海默病及其他一些神经退行性疾病。现已找到了一些小分子GSK-3抑制剂主要是通过使GSK-3的丝氨酸位点磷酸化,从而抑制其活性。GSK-3活性被抑制后,能影响胰岛素信号传导、葡萄糖代谢及糖原的合成。因此开发GSK-3抑制剂已成为研究抗糖尿病药物的一个新思路。本文主要介绍GSK-3与糖尿病的联系及近年来GSK-3抑制剂在抗糖尿病作用方面的研究进展。

分子动力学模拟方法研究结构水在糖原合成酶激酶-3β中的作用

用分子动力学模拟的方法揭示了结构水分子在糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)中的作用.如果没有结构水,ATP嘌呤环的结合位置将发生偏移以填补结构水留下的空间;ATP结合口袋中的氢键网络将被破坏,保守残基Lys85与ATP的磷酸根侧链只能形成一个保守氢键,无法维持磷酸根转移所需的线性关系;由于失去了氢键网络的稳定作用,Glu97和Lys85会向远离ATP的方向移动,并导致Arg96的侧链发生偏转,使Arg96无法保持与Arg180和Lys205之间正常的相对位置,最终影响GSK-3β与底物的结合.

TGFβ_1对人肾小管上皮细胞表达糖原合成酶激酶-3β的影响

目的研究转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGFβ1)对人肾小管上皮细胞株(human kidney proximal tubular epithelial cell line,HKCs)表达糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)的影响。方法将体外培养的的HKCs随机分为4组:正常对照组(C组):无血清培养基(free serum medium,FSM)培养;Ta组、Tb组和Tc组:用含不同浓度TGFβ1(Ta组:5ng/ml,Tb组:10ng/ml,Tc组:20ng/ml)的FSM培养。12h后,分别用RT-PCR、Western blot检测HKCs GSK-3β的mRNA、总蛋白表达量以及蛋白磷酸化水平。结果(1)GSK-3β mRNA和总蛋白在各组间表达量差异无统计学意义(P>0.05),和C组相比各T组GSK-3β蛋白磷酸化水平显著升高(P<0.01);(2)Tb组与Tc组相比,GSK-3β磷酸化水平更高(P<0.01);(3)Tb组与Tc组相比,GSK-3β磷酸化水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论TGFβ1虽不影响HKCs的GSK-3β mR-NA和总蛋白表达量,但能提高GSK-3β蛋白磷酸化水平,后者可能参与TGFβ1诱导的HKCs转分化过程。

孕酮对新生鼠缺氧缺血性脑损伤后脑组织糖原合成酶激酶-3β的影响

目的探讨孕酮对缺氧缺血性脑损伤新生鼠皮层和海马糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)水平的影响。方法40只7日龄新生Wistar大鼠随机分成假手术组、缺氧缺血组、孕酮4 mg组、孕酮8 mg组和孕酮16 mg组。假手术组腹腔注射溶剂芝麻油,缺氧缺血组于缺氧前30 min腹腔注射溶剂芝麻油,孕酮组于缺氧前30 min腹腔注射相应剂量的孕酮溶液,建立缺氧缺血脑损伤动物模型。24 h后动物全部处死,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测脑组织中GSK-3β的含量。结果缺氧缺血组新生鼠皮层和海马组织中GSK-3β水平明显高于假手术组(P<0.01),孕酮4 mg、8 mg、16 mg组皮层和海马组织中GSK-3β水平均明显低于缺氧缺血组(P<0.05)。结论缺氧缺血可升高新生鼠皮层和海马GSK-3β水平,孕酮通过降低新生鼠缺氧缺血时皮层和海马组织中GSK-3β水平发挥对缺氧缺血性脑损伤的保护作用。

电针对APP/PS1小鼠皮质区磷脂酰肌醇-3激酶/糖原合成酶激酶-3α通路相关蛋白表达和老年斑沉积的影响

目的观察电针对APP/PS1双转基因小鼠皮质区磷脂酰肌醇-3激酶/糖原合成酶激酶-3α(PI3K/GSK3α)信号通路上相关蛋白的分布表达,以及老年斑沉积的影响。方法基因鉴定后,3月龄雄性转基因小鼠随机分为模型组和电针组,野生型C57小鼠为对照组,每组6只。电针组电针百会(GV20)和双侧肾俞(BL23)14 d。治疗后,Western blotting和免疫组化法检测各组小鼠皮质区老年斑数量,PI3K亚单位P85α和P110α,以及GSK3α和pS21-GSK3α等蛋白的分布和表达。结果模型组皮质区老年斑数较对照组显著升高(P<0.001);电针组老年斑数较模型组显著降低(P<0.001)。各相关蛋白主要表达于皮质神经元胞质。与对照组相比,模型组pS21-GSK3α、P110α和P85α蛋白表达明显降低(P<0.01),GSK3α蛋白表达升高(P<0.05);与模型组相比,电针组pS21-GSK3α、P110α和P85α的蛋白表达明显升高(P<0.01),GSK3α蛋白表达降低(P<0.05)。结论电针能调节APP/PS1双转基因小鼠皮质区PI3K/GSK3α通路相关蛋白表达,减少老年斑沉积。