结肠癌病人血清S100钙结合蛋白A12、可溶性晚期糖基化终产物受体水平与肠道菌群失调及化疗效果的关系

目的探讨结肠癌病人血清S100钙结合蛋白A12(S100A12)、可溶性晚期糖基化终产物受体(sRAGE)水平与肠道菌群失调及化疗效果的相关性。方法选择2020年12月至2021年12月黄河水利委员会黄河中心医院收治的116例中、晚期结肠癌病人作为结肠癌组,另选取在该院同期健康体检人员120例作为对照组。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清S100A12、sRAGE水平,检测病人肠道菌群,并对病人化疗后进行随访,Pearson法分析结肠癌病人血清S100A12、sRAGE水平与菌群失调相关性,受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析化疗前血清S100A12、sRAGE水平对结肠癌化疗效果的诊断价值。结果与对照组比较,结肠癌组病人化疗前血清S100A12、sRAGE水平显著升高(P<0.05)。与化疗前菌群正常组[(265.34±45.78)μg/L、(381.54±36.75)ng/L]比较,菌群失调Ⅰ度组[(301.52±56.95)μg/L、(440.63±48.71)ng/L]、菌群失调Ⅱ度组[(339.29±52.35)μg/L、(432.75±49.20)ng/L]病人血清S100A12、sRAGE水平显著升高(P<0.05);与菌群失调Ⅰ度组比较,菌群失调Ⅱ度组病人血清S100A12、sRAGE水平显著升高(P<0.05)。相关性分析显示,结肠癌病人血清S100A12、sRAGE水平与大肠杆菌、粪肠球菌数量呈正相关(P<0.05),与双歧杆菌、乳酸杆菌数量呈负相关(P<0.05)。与化疗前比较,结肠癌病人化疗后血清S100A12、sRAGE水平显著降低(P<0.05);与化疗缓解组[(272.33±55.36)μg/L、(403.24±40.54)ng/L]比较,化疗无效组[(330.09±42.64)μg/L、(482.85±43.61)ng/L]病人化疗前血清S100A12、sRAGE水平显著较高(P<0.05)。血清S100A12、sRAGE联合诊断结肠癌化疗无效的曲线下面积(AUC)为0.91[95%CI:(0.84,0.96),P<0.001],灵敏度为86.05%,特异度为80.82%。结论结肠癌病人血清S100A12、sRAGE升高,与肠道菌群失调及化疗效果有关,对化疗疗效评估与预后评价有一定指导意义。

血清高迁移率族蛋白B1、可溶性晚期糖基化终产物受体水平对急性失代偿性心力衰竭预后有评估价值

目的:探讨血清高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、可溶性晚期糖基化终产物受体(sRAGE)水平对急性失代偿性心力衰竭(ADHF)患者预后的评估价值。方法:选取190例ADHF患者为研究组,另选取191例健康者为对照组,根据1年随访期是否死亡,将ADHF患者分为预后不良组(58例)和预后良好组(132例);采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清HMGB1、sRAGE水平;采用Pearson法分析血清HMGB1、sRAGE水平与心功能指标及实验室指标的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析HMGB1、sRAGE及血浆N端脑钠肽前体(NT-proBNP)对ADHF患者预后的评估价值;采用多因素Logistic回归分析影响ADHF患者预后的因素。结果:与对照组比较,研究组患者血清HMGB1、sRAGE水平更高(P均<0.05);预后良好组与不良组血清HMGB1、sRAGE水平、纽约心脏病协会(NYHA)分级、左室收缩末期内径(LVESD)、左室舒张末期内径(LVEDD)、左室射血分数(LVEF)、NT-proBNP、血清肌钙蛋白I(cTnI)、住院时间比较,差异有统计学意义(P均<0.05)。经Pearson法分析,ADHF患者血清HMGB1、sRAGE分别与LVEDD、LVESD、NT-proBNP、cTnl呈正相关,与LVEF呈负相关(P均<0.05),血清HMGB1与sRAGE呈正相关(P<0.05)。ROC曲线分析显示,HMGB1、sRAGE、NT-proBNP对ADHF患者预后不良评估价值均较高,AUC分别为0.869、0.852、0.844,最佳截断值分别为32.91 g/L、296.46 ng/L、3809.77 ng/L时,灵敏度分别为79.3%、82.8%、82.8%,特异性分别为83.3%、74.2%、79.5%。多因素logistic回归分析表明,NYHA分级、LVEF、NT-proBNP、HMGB1及sRAGE是ADHF患者预后的独立危险因素(P均<0.05)。结论:血清HMGB1、sRAGE表达与ADHF的发生及预后有关,可作为ADHF患者预后的评估指标。

血清S100钙结合蛋白A12、可溶性晚期糖基化终末产物受体水平与维持性血液透析患者骨质疏松的相关性分析

目的探讨维持性血液透析(MHD)患者血清S100钙结合蛋白A12(S100A12)、可溶性晚期糖基化终末产物受体(sRAGE)的水平变化及与骨质疏松的关系。方法选取2020年1月~2022年6月在本院血透室治疗的MHD患者110例,根据T值将其分为骨质疏松组(42例,T值≤-2.5 g/cm2)及非骨质疏松组(68例,T值>-2.5 g/cm2),同期选取在本院健康体检者50例为对照组。收集所有受试者的一般资料(性别、年龄、BMI、透析龄)及临床资料并进行组间比较。相关性分析采用Pearson相关分析。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清sRAGE和S100A12水平对MHD患者骨质疏松的预测价值。采用多重线性回归分析探讨MHD患者发生骨质疏松的影响因素。结果与对照组相比,非骨质疏松组与骨质疏松组患者血钙、血磷、骨密度、sRAGE水平均降低,全段甲状旁腺激素(iPTH)、尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)、白蛋白(Alb)、S100A12水平均升高(P<0.05)。与非骨质疏松组相比,骨质疏松组患者血清iPTH、S100A12水平均升高,血磷、骨密度、sRAGE水平均降低(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,MHD患者血清sRAGE与S100A12表达呈负相关;血清sRAGE与血磷、骨密度均呈正相关,与iPTH呈负相关;血清S100A12与血磷、骨密度均呈负相关,与iPTH呈正相关(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清S100A12、sRAGE联合预测MHD患者骨质疏松的ROC曲线下面积(AUC)、特异度均高于二者单独预测。多重线性回归分析结果显示,MHD患者S100A12、sRAGE、iPTH均与骨质疏松发生有关(P<0.05)。结论MHD患者骨质疏松发生与sRAGE、S100A12密切相关,联合检测二者可作为诊断MHD患者骨质疏松发生的指标。

可溶性晚期糖基化终产物受体、白细胞介素-36γ在桥本甲状腺炎患者血清中的表达及意义

目的探讨可溶性晚期糖基化终产物受体(sRAGE)、白细胞介素-36γ(IL-36γ)在桥本甲状腺炎(HT)患者血清中的表达及其临床意义。方法选取180例疑似HT人员作为研究对象,根据最终诊断结果分为HT组137例和非HT组43例。依据血清免疫球蛋白G4(IgG4)水平,将HT组患者进一步分为IgG4相关性HT组(IgG4≥135 mg/dL)和非IgG4相关性HT组(IgG4<135 mg/dL)。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测所有研究对象的血清sRAGE、IL-36γ水平;绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析血清sRAGE、IL-36γ水平对HT及其IgG4表型的诊断价值。结果HT组患者血清sRAGE水平低于非HT组,血清IL-36γ水平高于非HT组,差异有统计学意义(P<0.001);IgG4相关性HT组患者血清sRAGE水平低于非IgG4相关性HT组,血清IL-36γ水平高于非IgG4相关性HT组,差异有统计学意义(P<0.001)。ROC曲线分析结果显示,血清sRAGE、IL-36γ联合诊断HT的曲线下面积(AUC)为0.900(95%CI:0.846~0.939),诊断效能显著高于两者单独诊断(P<0.05);血清sRAGE、IL-36γ联合诊断HT患者IgG4表型的AUC为0.897(95%CI:0.934~0.943),诊断效能显著高于两者单独诊断(P<0.05)。结论HT患者血清sRAGE水平显著降低,血清IL-36γ水平显著升高,联合检测血清sRAGE、IL-36γ水平可有效诊断HT并评估IgG4表型。

组蛋白激活晚期糖基化终末产物受体并引发炎症反应

晚期糖基化终末产物受体(receptor for advanced glycation end product,RAGE)是免疫球蛋白受体,能够与多种配体结合,研究发现RAGE参与了非专职吞噬细胞对组蛋白修饰的微米颗粒的吞噬过程,但目前没有研究证明组蛋白是RAGE的配体。该研究对组蛋白分子能否直接激活RAGE及其下游信号通路进行探究。使用共聚焦显微镜和流式细胞仪检测哺乳动物细胞对可溶性组蛋白分子的内化;采用钙黄绿素乙酰氧基甲酯/碘化丙啶染色法检测细胞活性;通过荧光探针2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯检测胞内活性氧水平;利用酶联免疫吸附剂测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定炎症因子的释放。结果表明,组蛋白分子能够被野生型HEK293T细胞内化并于胞内溶酶体中聚集,RAGE-敲除细胞则无法内化组蛋白;培养基组蛋白质量浓度在100μg/mL时对细胞无明显毒性,细胞活性正常;组蛋白能够通过RAGE刺激细胞活性氧水平升高,并释放炎症因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6);组蛋白与DNA结合能够增强对RAGE的刺激。以上结果表明,组蛋白能够激活RAGE及其下游炎症通路。

C反应蛋白与白蛋白比值、血管生成素-2、晚期糖基化终末产物受体与碳青霉烯耐药肠杆菌科细菌感染患者病情转归的相关性及意义

目的探讨C反应蛋白(CRP)与白蛋白(ALB)比值(CRP/ALB)、血管生成素-2(Ang-2)、晚期糖基化终末产物受体(RAGE)与碳青霉烯耐药肠杆菌科细菌(CRE)感染患者病情转归的相关性及意义。方法选择2020年1月至2023年5月陕西省森林工业职工医院收治的103例重症及长时间反复住院CRE感染患者为研究对象,根据患者28 d内转归不同分为转归不良组(n=23)和转归良好组(n=80)。通过查阅电子医疗记录系统收集患者的临床资料,包括:年龄、性别、体质量指数、病史、感染菌种、体温、是否行有创机械通气、是否合并感染性休克等。应用全自动电化学发光免疫分析仪检测患者血清CRP水平,应用全自动生化分析仪检测ALB水平,计算CRP/ALB;应用多功能酶标仪检测血清Ang-2、RAGE水平。比较2组患者临床资料及治疗前、治疗3 d和治疗7 d后CRP/ALB、Ang-2、RAGE水平,应用Cox回归分析CRE感染患者病情转归的相关影响因素,受试者操作特征曲线分析治疗前CRP/ALB、Ang-2、RAGE预测CRE感染患者病情转归价值,卡普兰-迈耶曲线(K-M)分析不同CRP/ALB、Ang-2、RAGE水平患者28 d的预后情况。结果转归不良组行有创机械通气、合并感染性休克患者占比显著高于转归良好组(P<0.05)。转归良好组患者治疗3 d和7 d后CRP/ALB、Ang-2、RAGE显著低于治疗前,且治疗7 d后较治疗3 d后显著降低(P<0.05);转归不良组患者各时间点CRP/ALB、Ang-2、RAGE比较差异均无统计学意义(P>0.05);治疗3、7 d后,转归不良组患者CRP/ALB、Ang-2、RAGE显著高于转归良好组(P<0.05)。行有创机械通气、合并感染性休克、CRP/ALB升高、Ang-2升高、RAGE升高是影响CRE病情转归的独立危险因素(P<0.05)。治疗7 d后CRP/ALB+Ang-2+RAGE预测病情转归的曲线下曲积最大(0.931),敏感度为86.96%,特异度为88.75%。CRP/ALB、Ang-2、RAGE高表达组患者生存率显著低于低表达组(P<0.05)。结论CRP/ALB、Ang-2、RAGE与CRE感染患者病情转归有关,联合检测可作为患者病情转归的一个早期预测方案,为临床分层管理提供精准量化的指导信息。

目标温度管理抑制猪心肺复苏后高迁移率族蛋白B1、晚期糖基化终产物受体表达

目的探讨目标温度管理(TTM)对猪心肺复苏后高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、晚期糖基化终产物受体(RAGE)表达的影响。方法将24头猪按照随机数字表法分为假手术组(n=4)、常温组(n=10)和TTM组(n=10)。通过程控刺激法制作心脏骤停模型,室颤8 min后开始心肺复苏。TTM组动物在自主循环恢复(ROSC)后给予血管内降温,将核心体温以最快速度降至33℃,维持12 h,然后被动复温(0.5℃/h)至37℃。复苏后24 h采用神经功能缺损评分(NDS)评价神经功能,动物实施安乐死后,留取脑皮质,采用脑皮质含水量评价脑水肿。采用酶联免疫吸附方法检测基线、ROSC 0.5、6、12、24 h血清HMGB1、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-6(IL-6)的含量;采用RT-PCR法检测ROSC后24 h脑皮质HMGB1、RAGE及MCP-1 mRNA表达水平。结果TTM组ROSC后24 h时的NDS评分显著优于常温组[150.0(70.0,177.5)分vs.237.5(190.0,371.3)分],脑皮质水含量显著低于常温组[(81.2±1.1)%vs.(83.3±1.3)%],差异均有统计学意义(P<0.05)。与假手术组自同时间点比较,常温组ROSC后6、12、24 h的血清HMGB1、MCP-1及IL-6蛋白含量显著升高,ROSC后0.5、6、12、24 h的TNF-α蛋白含量显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与常温组各自同时间点相比较,TTM组ROSC后6、12、24 h的血清HMGB1、MCP-1及IL-6蛋白含量明显降低,ROSC后0.5、6、12、24 h血清TNF-α蛋白含量显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与假手术组比较,常温组ROSC后24 h的脑皮质HMGB1、RAGE及MCP-1 mRNA均明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05);与常温组相比较,TTM组ROSC后24 h的脑皮质HMGB1、RAGE及MCP-1 mRNA均显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论TTM可减轻复苏后脑水肿,改善神经功能,其保护机制可能部分与早期抑制HMGB1、RAGE表达有关。

晚期糖基化终产物在口腔鳞状细胞癌发展及治疗的研究进展

了解口腔鳞状细胞癌(OSCC)发生、发展的分子机制仍然是认识OSCC恶性生物学特点及探索针对性治疗方法的研究热点。晚期糖基化终末产物(AGE)及其受体RAGE与其他受体在体内相互作用,从而激活多个信号通路,诱导白细胞介素、生长因子和细胞因子的合成。近期的研究表明,AGE/RAGE相关信号传导通路的激活影响OSCC的增殖、侵袭、血管生成、局部复发,与晚期OSCC症患者的预后不良有关。本文对AGE/RAGE与OSCC恶性演进进行综述,以期为OSCC治疗提供潜在靶点。

慢性阻塞性肺疾病合并冠心病患者可溶性晚期糖基化终产物受体的初步研究

目的 探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并冠心病患者可溶性晚期糖基化终产物受体(sRAGE)的变化情况及临床意义。方法 选取2018年1月—2020年1月北京市垂杨柳医院呼吸科病房收治的COPD合并冠心病患者40例(合并冠心病组),同时选取呼吸科病房收治的COPD患者40例(单纯COPD组),体检健康者30例(对照组)。收集所有研究对象基线资料,比较三组患者的肺功能及sRAGE指标的差异。结果 合并冠心病组和单纯COPD组血浆sRAGE水平、FEV_(1)%显著低于对照组(P均<0.05)。合并冠心病组血浆sRAGE水平、FEV_(1)%与单纯COPD组相比明显下降(P均<0.05)。合并冠心病组sRAGE水平与FEV_(1)%呈正相关(r值为0.637,P<0.05)。结论 sRAGE在COPD合并冠心病患者血浆中呈低表达,其有可能反映COPD合并冠心病的患者的肺功能损害程度,对疾病的严重程度判别有一定的帮助。

昆仑雪菊醇提物对不同模拟体系晚期糖基化终产物生成活性的影响

为了探讨昆仑雪菊醇提物对美拉德反应晚期糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)生成的抑制作用,建立乳糖-酪蛋白和葡萄糖-赖氨酸-亚油酸两种模拟体系,以不同浓度昆仑雪菊醇提物作为抑制剂,研究其对AGEs生成的抑制作用。通过分析昆仑雪菊醇提物中总黄酮含量以及反应体系在热处理条件下荧光性AGEs的生成、酪蛋白羰基化程度、赖氨酸相对含量与葡萄糖余量,阐明昆仑雪菊醇提物对AGEs生成的抑制作用程度。结果表明:昆仑雪菊醇提物对AGEs具有显著的抑制作用,0.5 mg/mL醇提物在140℃条件下对AGEs的抑制率可达70.44%;昆仑雪菊醇提物处理后,反应体系中赖氨酸和葡萄糖余量显著高于对照组(P<0.05)。该研究证明,昆仑雪菊醇提物在食品加工过程中能够有效减少AGEs的生成,可为开发食品级的AGEs抑制剂提供数据参考和理论依据,使慢性病患者受益。

晚期糖基化终产物受体与β-淀粉样蛋白的相互作用促进阿尔采末病的发展

晚期糖基化终产物受体(the receptor for advanced gly-cation end products,RAGE)属于免疫球蛋白家族。在中枢神经系统,RAGE主要在神经元、小胶质细胞及血管内皮细胞上表达。阿尔采末病(Alzheimers disease,AD)人脑中RAGE的表达可被β淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ)上调,上调的RAGE进一步促进了AD的发展。神经元、小胶质细胞和血管内皮细胞膜上RAGE和Aβ结合,引起神经元毒性、持久性的炎症反应、血管功能紊乱。对RAGE-Aβ作用机制的深入理解,可为AD的临床治疗提供理论基础。

人晚期糖基化终产物受体胞质内段融合蛋白表达载体的构建与表达

目的构建人晚期糖基化终产物受体胞质内段(hRAGE-C)GST融合蛋白的重组原核基因表达载体并进行表达与纯化,研究其功能并鉴定与其相互作用的蛋白。方法采用PCR方法扩增hRAGE基因编码区的胞质内段,并将其重组于pGEX-KG载体中。重组质粒经PCR、酶切、序列鉴定分析后,转化大肠杆菌BL21,以异丙基β-D硫代半乳糖(IPTG)诱导产生hRAGE胞质内段的GST融合蛋白。结果PCR、酶切和测序结果表明所克隆的GST/hRAGE-C原核表达载体完全正确,继而表达、纯化获得了相对分子质量约35 000的融合蛋白(符合预期大小)。结论将hRAGE胞质内段构建于含有GST标记的载体上并获得融合蛋白的高效表达。

糖基化终产物促进U937巨噬细胞高密度脂蛋白受体的表达

目的 研究糖基化终产物对U937巨噬细胞高密度脂蛋白受体表达的影响。方法 将糖基化终产物与诱导分化4 8h后的U937细胞共同孵育,用免疫细胞化学法和半定量逆转录聚合酶链反应检测细胞清道夫受体BI蛋白及mRNA的表达。结果 免疫细胞化学法检测10 0、2 0 0和4 0 0mg/L糖基化终产物刺激后U937巨噬细胞清道夫受体BI蛋白表达的平均积分光密度值分别为18.94±3.5 6、2 7.86±4 .39及35 .0 8±2 .37,较牛血清白蛋白组明显升高(13.76±3.74 ,P <0 .0 5 ) ;4 0 0mg/L糖基化终产物作用6、12、2 4及4 8h后,细胞清道夫受体BI表达的平均积分光密度值分别为16 .87±5 .6 5、2 5 .6 8±6 .97、35 .0 8±8.37及39.6 8±9.37,较0h组明显升高(12 .0 2±3.4 7,P <0 .0 5 )。半定量逆转录聚合酶链反应结果显示,4 0 0mg/L牛血清白蛋白及10 0、2 0 0和4 0 0mg/L糖基化终产物刺激后细胞清道夫受体BImRNA相对表达量分别是0 .32±0 .0 3、0 .5 3±0 .0 5、0 .6 4±0 .0 4和0 .89±0 .0 5 ;4 0 0mg/L糖基化终产物作用0、6、12、2 4及4 8h后,U937巨噬细胞清道夫受体BImRNA相对表达量分别为0 .4 1±0 .0 1、0 .6 2±0 .0 5、0 .80±0 .0 8、0 .87±0 .0 5、1.2 4±0 .13。

血清高迁移率族蛋白B1和可溶性晚期糖基化终产物受体与心力衰竭严重程度相关性研究

目的探讨心力衰竭(HF)时血清高迁移率族蛋白B1(HMGB1)和可溶性晚期糖基化终产物受体(sRAGE)的变化及二者与心脏功能和N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)的关联。方法选取2014年8月至2015年1月期间就诊于哈尔滨医科大学附属第一医院心血管内科73例左室射血分数(LVEF)小于45%的HF患者为实验组,体检人群中选择年龄、性别匹配的22例作为对照组。根据纽约心功能分级(NYHA)将HF患者分组:Ⅱ级患者为A组(18例),Ⅲ级患者为B组(22例),Ⅳ级患者为C组(33例)。测定各组血清HMGB1及sRAGE浓度。HF患者行心脏彩超检查并测定NT-proBNP浓度。结果与对照组相比,HF患者各组的血清HMGB1和sRAGE浓度显著升高(P<0.05)。且随着心功能恶化血清HMGB1和sRAGE浓度均显著升高(P<0.05)。相关性分析结果显示,血清HMGB1和sRAGE与LVEF均呈负相关(HMGB1 r=-0.4783,P<0.05;sRAGE r=-0.4071,P<0.05),与NT-proBNP浓度均呈正相关(HMGB1 r=0.4850,P<0.05;sRAGE r=0.4947,P<0.05)。结论HF患者血清HMGB1和sRAGE浓度显著升高,二者与心功能的严重程度及NT-proBNP水平呈正相关。

高迁移率族蛋白B1及其糖基化终产物受体在系统性红斑狼疮患者中的变化及其临床意义

目的探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)及其糖基化终产物受体(RAGE)在系统性红斑狼疮(SLE)发病中可能的作用。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测52例SLE女性患者(SLE组)及40例体检健康女性(HC组)血浆HMGB1水平;同时采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测外周血单核细胞(PBMCs)HMGB1及RAGE mRNA表达水平;并分析SLE患者血浆HMGB1及PBMCs HMGB1、RAGE mRNA水平与临床指标的相关性。结果SLE组患者血浆HMGB1及PBMCs HMGB1mRNA水平高于HC组,差异均有统计学意义(P<0.01);而PBMCs RAGE mRNA水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);Spearman相关性分析显示,SLE患者血浆HMGB1水平与抗核抗体滴度、SLE活动性指数(SLEDAI)评分均呈正相关(P<0.05),与其他临床和实验室指标无明显相关性(P>0.05);HMGB1mRNA表达水平与RAGE mRNA表达水平、SLEDAI评分均呈正相关(P<0.01,P<0.05),与其他临床和实验室指标无明显相关性(P>0.05)。结论血浆HMGB1及PBMCs HMGB1mRNA在SLE患者的异常表达提示其可能在SLE的发生、发展中发挥作用,可能参与了SLE的免疫炎症调节。

晚期糖基化终产物受体胞外段的原核表达及其相互作用蛋白的筛选

目的构建晚期糖基化终产物受体(receptor for ad-vanced glycation end-product,RAGE)胞外段基因的原核表达载体并诱导表达,应用噬菌体展示技术筛选其相互作用蛋白。方法用RT-PCR方法扩增人RAGE胞外段cDNA,构建于原核表达载体pET14b,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导RAGE胞外段融合蛋白表达,用Ni2+-NTA亲和层析柱进行纯化并行Western blot鉴定。以重组RAGE胞外段蛋白为靶分子,进行3轮噬菌体展示环七肽库的筛选,从第3轮洗脱物中随机挑选分隔良好的噬菌体克隆扩增后进行ELISA鉴定。对获得的阳性噬菌体克隆分别进行扩增、纯化,提取DNA测序后翻译为氨基酸序列,用BLAST软件搜索Gen-Bank中的同源序列。结果成功构建并表达、纯化了RAGE胞外段融合蛋白。经过3轮筛选后,随机挑取的24个噬菌体克隆中11个可与RAGE胞外段结合。对11个噬菌体测序后用BLAST软件搜索同源序列,得到14个编码蛋白。结论应用噬菌体展示技术筛选到与RAGE胞外段相互作用的蛋白,为进一步研究其功能和作用机制提供新线索。

表面等离子体共振技术研究肝素对高迁移率族蛋白1与晚期糖基化终产物受体亲合力的影响

测定肝素与高迁移率族蛋1(HMGB1),及其与晚期糖基化终产物受体(RAGE)的亲和力,探讨肝素对HMGB1/RAGE亲和力的影响。用表面等离子体共振技术,实时分析肝素与HMGB1,HMGB1与RAGE的亲和常数,利用其binding analysis分析肝素对HMGB1/RAGE配受体结合的影响。肝素与HMGB1的动力学速率常数ka=1.78×105L.(mol.s)-1,kd=8.02×10-4.s-1,亲和常数KA=2.22×108L·mol-1,KD=4.5×10-9mol·L-1;HMGB1与RAGE的动力学常数ka=1.85×103L.(mol.s)-1,kd=1.81×10-4.s-1,亲和常数KA=1.02×107L·mol-1,KD=9.77×10-8mol·L-1。肝素与RAGE的亲和力极低。当浓度分别为50,100,1000,10000U.L-1的肝素与HMGB1混合后,后者与RAGE的亲和力下降。上述不同浓度的肝素对HMGB1/RAGE亲和力的影响没有显著差异。结果表明,肝素可与HMGB1结合并影响后者与RAGE的亲和力,该作用并不与肝素浓度呈正相关。

晚期糖基化终产物受体和低密度脂蛋白受体相关蛋白在慢性脑血流低灌注大鼠皮层和海马的改变

目的研究慢性脑血流低灌注对脑内受体介导的β-淀粉样肽（Aβ）转运蛋白晚期糖基化终产物受体（RAGE）和低密度脂蛋白受体相关蛋白1（LRP-1））含量及分布的影响。方法采用双侧颈总动脉永久性结扎大鼠模型,应用免疫组织化学和免疫印迹方法对脑内RAGE和LRP-1进行定位和定量检测。结果免疫组织化学结果显示,与对照组相比,RAGE在皮层及海马组织中血管内皮细胞上的表达从低灌注10d起增多,而神经元上表达从低灌注30d起减少,且这种变化一直持续到低灌注180d;LRP-1的分布变化则与之相反。免疫印迹结果显示,皮层和海马中RAGE含量在低灌注术后10d即开始明显增加,且在缺血的不同时间点与相应的对照组比较都明显增多（P〈0.05）;LRP-1变化较晚,在缺血180d时明显增多（P〈0.05）。结论慢性脑血流低灌注可使RAGE、LRP-1在脑组织中的表达增高,同时在神经元、血管中的分布发生改变,这种变化可导致Aβ在脑内的聚集,可能在阿尔茨海默病（AD）早期发病过程中起重要作用。

C反应蛋白增加人内皮细胞糖基化终产物受体表达

目的探讨C反应蛋白(CRP)及其单体(mCRP)对人脐静脉内皮细胞晚期糖基化终产物受体(RAGE)蛋白表达及mRNA的影响。方法将人脐静脉内皮细胞用不同浓度(5、25、50、100μg/mL)的CRP孵育24h及同一浓度(50μg/mL)CRP不同时间孵育0、6、12、24、48h,采用流式细胞仪及RT-PCR方法检测RAGE蛋白及mRNA的表达水平。分析50μg/mLCRP和mCRP孵育0、6、24h后对RAGE蛋白表达的影响。结果(1)与对照组比较,5μg/mL的CRP培养内皮细胞24h显著增高RAGE蛋白的表达(175.2%±8.1%,P<0.05),50μg/mL时达到顶峰(527.3%±5.8%,P<0.01);50μg/mLCRP孵育不同时间,RAGE蛋白的表达从6h明显增高(179.8%±29.1%,P<0.05)。(2)与对照组比较,5μg/mLCRP即可升高RAGE的mRNA表达(135.4%±11.1%,P<0.05),并在50μg/mL时达到峰值(186.6%±29.0%,P<0.05);6h时可以检测到RAGE mRNA的升高(134.3%±22.8%,P<0.05),在12h为最高(214.2%±33.1%,P<0.05)。(3)mCRP也会升高RAGE蛋白表达,与CRP组没有差别(P>0.05)。结论C反应蛋白以时间及剂量依赖的方式促进内皮细胞RAGE蛋白及mRNA的表达。CRP与其单体(mCRP)作用相似。

糖基化终产物对凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1表达的影响

目的研究长期高血糖所致糖基化终产物对巨噬细胞凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1表达的影响。方法 U937细胞经佛波酯诱导分化,并将不同浓度或同一浓度糖基化终产物与诱导分化48 h后的U937细胞共同孵育,用Western Blotting法检测凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1蛋白的表达。同时应用ELISA法测定24例2型糖尿病患者及22例正常对照者血清可溶性氧化型低密度脂蛋白受体1的含量。结果 100、200和400 mg/L糖基化终产物刺激后细胞表面凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1蛋白表达量分别是对照组的1.85、3.22和4.65倍(P<0.05);400 mg/L的糖基化终产物作用12、24、48 h后,U937巨噬细胞该受体蛋白表达量分别为0 h的2.85、3.89和4.3倍(P<0.05)。糖尿病患者血清氧化型低密度脂蛋白受体1及糖基化终产物含量较正常对照者显著升高(P<0.01),两者呈正相关(P<0.001)。结论糖基化终产物可增加U937巨噬细胞凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1蛋白表达且呈浓度和时间依赖性。这可能与糖尿病患者加速泡沫细胞形成而易致动脉粥样硬化有关。