中药复方益糖康颗粒通过AGE-RAGE轴介导SIRT1调控PI3K/Akt/FoxO1信号通路促进足细胞自噬的机制

目的:通过观察中药复方益糖康(YTK)颗粒对晚期糖基化终末产物(AGE)-晚期糖基化终产物受体(RAGE)轴介导沉默信息调节因子1(SIRT1)调控磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/叉头框蛋白O1(FoxO1)信号通路改善糖尿病肾脏疾病(DKD)大鼠足细胞自噬的影响,探讨YTK治疗DKD的可能作用机制。方法:选取8周龄SPF级健康雄性Wistar大鼠96只,使用随机数字表法分为空白组、模型组、YTK高、中、低剂量组(40、20、10 g·kg^(-1))、西药组(氯沙坦片,20 mg·kg^(-1)),采用高脂饲料喂养联合腹腔注射链脲佐菌素建立DKD大鼠模型。造模成功后,各组按照相应比例剂量连续给药8周后取材。严格按照试剂盒所示方法检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)的水平;苏木素-伊红(HE)染色观察肾脏组织病理形态学变化;免疫组化法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)、肌间质蛋白(Desmin)、裂孔膜蛋白(Nephrin)的平均积分吸光度值;蛋白免疫印迹法(Western blot)分析DKD大鼠肾组织中滑膜PI3K、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、Akt、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、RAGE、SIRT1、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、FoxO1的蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组SOD、GSH-Px、CAT表达水平明显降低,MDA显著升高(P<0.01);大鼠呈现严重肾损现象;足细胞标志蛋白α-SMA、FN、Desmin阳性表达显著增多,Nephrin、足突蛋白质(Podocin)显著下降(P<0.01);肾组织中PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、RAGE、Caspase-3蛋白表达水平显著升高,SIRT1、FoxO1蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。与模型组比较,YTK各剂量组大鼠血清中SOD、GSH-Px、CAT水平显著升高,MDA显著下降(P<0.01);肾损程度均发生了不同程度减轻;足细胞标志蛋白α-SMA、FN、Desmin平均积分吸光度值均明显降低,Nephrin、Podocin显著升高(P<0.01);肾组织中PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、RAGE、Caspase-3表达水平显著降低,SIRT1、FoxO1表达水平显著提升(P<0.01)。中药组表现出明显的量效趋势。结论:YTK可能通过AGE-RAGE轴介导SIRT1调控PI3K/Akt/FoxO1信号通路,改善足细胞自噬,从而减轻肾脏病理损害,减少蛋白尿,保护肾功能,达到延缓DKD进展的目的。且中药组具有量效趋势。

中药调控AGE-RAGE信号通路治疗多囊卵巢综合征的研究现状

多囊卵巢综合征(PCOS)是妇科常见的内分泌代谢性疾病,临床主要表现为不孕、多毛、肥胖、月经紊乱等,严重影响女性健康。中药治疗PCOS的作用机制涉及多种信号通路,其中晚期糖基化终产物-晚期糖基化终末产物受体(AGE-RAGE)信号通路是一条调控炎症和氧化应激的重要通路,越来越多的中药复方、单味中药及其提取物可以通过调控AGE-RAGE信号通路降低患者体内炎症反应、氧化应激、胰岛素抵抗和高雄激素血症等,为治疗PCOS提供了新的策略与方向。但目前缺乏中药干预AGE-RAGE信号通路治疗PCOS全面的总结,故本文对近年来中药调控该信号通路治疗PCOS的研究现状进行综述,以期为进一步研究PCOS提供新的方向和思考。

固本健脑方调节健忘大鼠海马组织中AGEs/RAGE信号通路的探讨

目的:基于晚期糖基化终末产物(AGEs)/高级糖基化终产物受体(RAGE)信号通路,探讨固本健脑方对老年健忘大鼠海马脑区神经炎性反应的调控作用。方法:腹腔注射D-半乳糖(120 mg·kg-1)及Na NO2(90 mg·kg-1)建立老年健忘大鼠模型,分别ig固本健脑方(16.7 g·kg-1),归脾丸(16.3 g·kg-1),六味地黄丸(12.5 g·kg-1)和石杉碱甲(100μg·kg-1),并设正常组和模型组,ig等体积生理盐水。给药共20 d后,取海马组织,采用免疫组化法检测AGEs蛋白的表达,蛋白质免疫印迹(Western blot)检测RAGE及核转录因子-κB p65(NF-κB p65)蛋白的表达,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测白细胞介素-1β(IL^(-1)β),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量。结果:与正常组比较,模型组大鼠海马组织AGEs蛋白,RAGE及NF-κB p65蛋白的表达,IL^(-1)β及TNF-α含量均明显上调(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,各给药组明显下调大鼠海马组织AGEs蛋白,RAGE及NF-κB p65蛋白的表达,IL^(-1)β及TNF-α含量(P<0.01);与固本健脑方组比较,其余给药组上述指标的表达上调(P<0.05);归脾丸组、六味地黄丸组、石衫碱甲组组间比较,差异无统计学意义。结论:上述方药均能在一定程度上改善老年健忘大鼠的记忆功能,但固本健脑方作用最佳,其分子机制与AGEs/RAGE信号通路密切相关。

基于网络药理学和体内实验探究七福饮治疗2型糖尿病认知障碍的分子机制

目的:通过网络药理学探讨七福饮改善2型糖尿病(Type 2 Diabetes,T2DM)认知障碍的作用机制,并通过动物体内实验验证分析。方法:通过TCMSP平台和文献研究的方法筛选七福饮活性成分,在Swisstarget平台和TCMSP平台预测出药物活性成分对应靶点,在GeneCard、OMIM等数据库检索T2DM认知障碍靶点。利用韦恩图得到药物-疾病交集靶点,用Cytoscape3.7.2软件分别构建“中药-活性成分-靶点”作用网络及PPI网络。用R语言对交集靶点进行GO和KEGG分析。结合网络药理学分析结果,采用链脲佐菌素STZ 30 mg/kg联合高脂高糖诱导建立T2DM认知障碍大鼠模型,验证七福饮改善T2DM认知障碍可能的分子机制。结果:确定七福饮治疗T2DM认知障碍的活性成分221个,治疗靶点561个。PPI网络拓扑分析筛选得到30个核心靶点,其中包括蛋白激酶(AKT1)、肿瘤坏死因子(TNF)、白介素6(IL-6)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase3)等。GO分析表明靶点主要涉及营养水平反应、细胞钙离子稳态等多种生物过程;KEGG分析提示AGE-RAGE糖尿病并发症信号通路在七福饮治疗T2DM认知障碍过程中起着关键作用。动物实验表明,与正常对照组相比,模型对照组血糖含量、逃避潜伏期和海马DG区细胞凋亡数明显升高、p-P38、p-JNK、BAX、Caspase3蛋白表达明显上调,穿越平台次数及Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.05或P<0.01);与模型对照组相比,七福饮4.3、8.6 g/kg组能明显降低血糖含量、降低逃避潜伏期和海马DG区细胞凋亡数、明显下调p-P38、p-JNK、BAX、Caspase3蛋白表达,明显上调穿越平台次数及Bcl-2蛋白表达(P<0.05或P<0.01)。结论:提示七福饮可能通过调节AGE-RAGE信号通路上相关蛋白表达改善T2DM认知障碍,这些结果可为七福饮的临床应用提供理论基础和依据。