利用亲水富集策略分析人血浆中N-糖基化蛋白及N-糖类型

蛋白质的N-糖基化是最重要的翻译后修饰之一,许多已知的血浆肿瘤诊断标志物及治疗靶标都是N-糖基化蛋白。针对血浆的糖蛋白质组研究有利于发现新的蛋白标志物。然而,血浆蛋白质浓度分布的动态范围非常宽,且同一位点上的糖链存在微观不均一性,影响了血浆中糖蛋白的鉴定效率。本文利用亲水材料ZIC-HILIC制备亲水富集柱分别对人血浆中的N-糖链和N-糖肽进行富集,并结合碱性反相色谱进行肽段的预分离和高准确度质谱分析,最终在健康人的血浆中鉴定到了299个糖基化蛋白、637个糖基化位点,并识别出31种不同的糖型。在这些鉴定到的糖基化位点中,新发现有107个N-糖基化位点(占总位点数的16.8%)。本方法操作简单,可以有效富集N-糖肽和N-糖,为在血浆中寻找糖蛋白和糖链生物标志物提供了可靠的手段。

糖肾汤对糖基化蛋白诱导培养下系膜细胞表达金属蛋白酶组织抑制物1、2的影响

目的:研究糖基化蛋白诱导培养下,糖肾汤对大鼠肾小球系膜细胞表达基质金属蛋白酶组织抑制物1、2(TIMP1、TIMP2)mRNA的影响。方法:采用血清药理学及体外大鼠肾小球系膜细胞培养方法,用糖基化牛血清白蛋白(AGE-BSA)刺激肾小球系膜细胞,采用RT-PCR法检测系膜细胞TIMP1、TIMP2 mRNA表达。结果:糖基化蛋白可上调TIMP1、TIMP2 mRNA表达,糖肾汤能降低TIMP1、2mRNA表达。结论:糖肾汤对金属蛋白酶系统紊乱有一定的调节作用。

糖肾汤对糖基化蛋白诱导培养下系膜细胞MMP-2表达的影响

目的:研究糖基化蛋白诱导培养下,糖肾汤对大鼠肾小球系膜细胞表达基质金属蛋白酶2(MMP-2)活性及mRNA的影响。方法:采用血清药理学及体外大鼠肾小球系膜细胞培养方法,用糖基化牛血清白蛋白(AGE-BSA)刺激肾小球系膜细胞,以明胶酶谱法检测培养上清MMP-2的活性,并提取细胞RNA,采用RT-PCR法检测系膜细胞MMP-2mR-NA表达。结果:糖基化蛋白可抑制MMP-2的活性及mRNA表达,糖肾汤能提高MMP-2活性及mRNA表达。结论:糖肾汤对糖尿病肾病金属蛋白酶系统紊乱具有一定的调节作用。

作为纳米粒载体的糖基化蛋白的研究

采用Maillard反应制备糖基化蛋白,考察制备方式、共存湿度、缓冲液体系和反应温度、反应时间、pH值等对蛋白接枝度(DG)、褐变化程度(A420)以及改性蛋白乳化稳定性(ES)的影响;利用荧光光谱法考察糖基化蛋白和白蛋白与叶酸作用特征的区别。结果表明,白蛋白与多糖的摩尔比为1∶3溶解于pH 8.5Tris-HCl缓冲盐体系,冻干后在RH 79%,55℃条件下、加热反应24h条件下制备得到糖基化蛋白载体。荧光光谱研究结果表明,白蛋白经Maillard反应后,与叶酸的作用增强,作用位点数增加。糖基化蛋白作为疏水性药物载体,具有提高载药量及靶向的潜力。

卡介苗培养滤出液中O-甘露糖基化蛋白的确定和解析

卡介苗作为预防结核病的唯一疫苗,不能提供全面的保护力,因此全面认识卡介苗的抗原非常关键。甘露糖复合物抗原是存在于分枝杆菌细胞壁上的一大类重要抗原,在细菌毒力以及宿主细胞相互作用等方面发挥作用,其中O-甘露糖基化蛋白在结核分枝杆菌和耻垢分枝杆菌中陆续有报道,但在卡介苗中研究很少。利用Con-A亲和层析技术提纯了卡介苗培养滤出液中的O-甘露糖基化蛋白,并经过ConA-免疫印迹再次确证,最后利用质谱技术进行了解析,共确定出7个O-甘露糖基化蛋白,并对功能和糖基化位点进行了初步预测。O-甘露糖基化蛋白的确定和解析将有助于对卡介苗免疫机制的认识。

糖基化蛋白受体与糖尿病血管病变

糖基化蛋白受体与糖尿病血管病变郑世荣，田牛近年来，蛋白质非酶糖化在糖尿病血管病变发病中的作用受到广泛重视，国外有关糖基化蛋白受体的研究进展较快，现简要综述如下。一、蛋白质非酶糖化蛋白质非酶糖化是指机体在无酶催化的条件下，蛋白质与糖之间自动发生的缓慢而...

基于8-氨基1,3,6-萘三磺酸二钠盐的糖基化蛋白质标记方法

发展了基于荧光试剂8-氨基1,3,6-萘三磺酸二钠盐(ANTS)的糖基化蛋白质选择性标记和荧光检测的新方法.实验中以标准蛋白质细胞色素c和核糖核酸酶b为样品,优化了pH和反应时间.在优化的条件下,核糖核酸酶b的检测灵敏度可提高22倍,而非特异性的标记仅为1%,显示了这种衍生方法极好的选择性.进一步将该方法应用于卵清蛋白的衍生,通过结合二氧化钛(TiO2)亲和富集,共鉴定到14个蛋白质,其中超过85%的蛋白质具有一致的N-X-T/S(X为除脯氨酸以外的其他氨基酸)序列,为潜在的糖基化蛋白,进一步验证了该方法的高选择性.

2型糖尿病患者非酶糖基化蛋白与性激素含量的研究

目的 :研究老年性糖尿病患者体内性激素的分泌和蛋白非酶糖基化反应的改变及临床意义。方法 :检测老年性糖尿病患者48例 ,年龄60～72岁 (男31 ,女17)和正常对照组15例 ,年龄60～69岁 (男9 ,女6)的血糖、血浆胰岛素、非酶糖基化蛋白 (血浆果糖胺、糖化血红蛋白 )和性激素 (血浆睾酮、雌二醇 )的含量。结果 :1、糖尿病患者血浆胰岛素 (Ins)含量与正常对照无显著差异 ;其血糖 (Glu)、血浆果糖胺FA及糖化血红蛋白 (GHb)含量显著高于正常对照。2、男性糖尿病患者血浆睾酮 (T)含量显著低于正常对照 ,雌二醇 (E2)含量和雌二醇与睾酮的比值 (E2/T)均高于正常对照 ;女性糖尿病患者睾酮含量明显高于正常对照 ,而雌二醇含量和E2/T均低于正常对照。结论 :老年性糖尿病患者体内存在性激素分泌功能紊乱 。

代谢性标记结合二维电泳寻找O-糖基化蛋白的研究

蛋白质的O-糖基化(O-glycosylation)是一种重要的翻译后修饰,参与诸多生理和病理过程。目前,对于蛋白质的O-糖基化的研究进展仍非常缓慢,一个重要的原因就是缺乏高效的对O-糖基化蛋白进行分离和鉴定的技术。创新性地将点击化学反应、二维电泳和质谱技术结合,对寻找细胞内O-糖基化蛋白进行了技术探索性研究。首先利用代谢性标记手段,在人肝癌细胞HCCLM6培养基中加入四乙酰化叠氮半乳糖胺(Ac4GalNAz),对细胞内O-GalNAc糖基化蛋白进行标记;其次通过点击化学将炔基荧光基团连接至标记的O-糖基化蛋白的叠氮基团;应用二维电泳技术对标记蛋白进行分离,并找到13个具有荧光信号的蛋白点;最后对具有荧光信号的蛋白进行质谱鉴定,成功鉴定到7种蛋白,经软件预测后,GRP78蛋白和ANXA1蛋白均具有潜在的O-糖基化位点。这为寻找细胞或生物体中的O-糖基化蛋白奠定了基础,并为高通量筛选O-糖基化蛋白提供技术平台。

糖基化蛋白终产物对血脑屏障中ZO－1表达的影响

糖尿病患者脑微血管疾病的发生与大脑内神经和血管的晚期糖基化蛋白终产物（advanced glycosy lation end products，AGEs）的积聚密切相关，但确切的发病机制尚未明确。前期的实验证明AGEs能介导微血管内皮细胞重要的连接蛋白膜突蛋白（moesin）的磷酸化，并导致内皮形态和屏障功能的变化，从而引起血脑屏障通透性升高，

板蓝根饮片糖基化蛋白纳米颗粒的构建与表征

从板蓝根饮片中分离出糖基化蛋白,体外构建纳米颗粒,并对所形成胶体的理化性质和生物活性进行表征。经SDS-PAGE鉴定板蓝根饮片粗提液中存在3个主要的糖基化蛋白,用这些蛋白构建的纳米颗粒的粒径约为50 nm。MDCK细胞试验表明,蛋白纳米颗粒具有较强的抗病毒能力。

基于肼化学富集法分析人血浆外泌体中的N-糖基化蛋白质

目的对人血浆外泌体中N-糖基化蛋白质的组成和功能进行分析。方法通过超速离心法分离获得健康人血浆外泌体,超声处理获得外泌体蛋白,胰蛋白酶将蛋白酶解为肽段。肼化学法分离富集血浆外泌体中的N-糖基化肽段,液相色谱及高分辨质谱对其进行鉴定,基因本体法对鉴定的N-糖基化蛋白质的生物学功能进行分析。结果获得的外泌体具有外泌体典型的茶托样双层膜结构,形态完整,大小均匀,直径分布在100 nm左右。在1 mL健康人血浆外泌体中共鉴定到252个N-糖基化修饰位点,归属于131个N-糖基化蛋白质。可能在丝氨酸型内肽酶活性、丝氨酸型内肽酶活性抑制及钙离子结合等生命过程中发挥重要作用。其中,67个N-糖基化蛋白质与疾病的发生发展密切相关。结论本研究在人血浆外泌体中共鉴定到131个N-糖基化蛋白质。它们可能参与关键的生命活动及疾病的发生发展。

葡聚糖添加量对糖基化大豆分离蛋白结构及乳化性的影响

利用葡聚糖对大豆分离蛋白(SPI)进行干热法糖基化处理,控制反应温度为60℃、相对湿度为79%、时间为24 h,通过改变蛋白与糖的质量比(1∶0.5、1∶1.0、1∶1.5、1∶2.0、1∶2.5、1∶3.0)形成不同接枝度的糖基化蛋白,并探究蛋白二级、三级结构的变化,考察其对乳化活性指数(EAI)及乳化稳定性指数(ESI)的影响。结果表明,接枝程度随葡聚糖含量的增加而增加,当蛋白与糖的比例达到1∶2.5时,接枝度最高,为42.68%;红外光谱、荧光光谱和表面疏水性揭示SPI与葡聚糖之间发生了相互作用,导致SPI结构改变;与天然SPI相比,当蛋白与糖的质量比为1∶0.5时乳化活性最高,而当蛋白与糖的质量比为1∶2.0时乳化稳定性最好,因此适当地控制蛋白与糖的质量比可调控蛋白质结构展开的程度以及EAI、ESI的变化。

黏蛋白型O⁃糖基化与结直肠癌基础和临床研究进展

O⁃糖基化为黏蛋白常见的翻译后修饰,普遍存在于正常细胞和肿瘤细胞中。结直肠癌(CRC)细胞内O⁃糖基化相关的糖基转移酶、分子伴侣和表面的Tn抗原、sTn抗原、T抗原出现不同程度的失调,且以其特有方式参与CRC的发生、发展,包括侵袭和转移、异常凋亡和增殖、免疫逃逸等,并作为新型肿瘤生物学标志物和潜在治疗靶点被广泛研究。本文就黏蛋白型O⁃糖基化与CRC的发生、发展及其临床应用的研究进展作一综述。

黏蛋白型O-糖基化与炎症性肠病的研究进展

炎症性肠病一直被认为是易感个体对肠道微生物群异常免疫激活的结果,具有发病率高、发病人群年轻化、难完全缓解、癌变风险高等特点。目前大量有关炎症性肠病发病机制的研究就是一个探索各因素之间如何相互作用的过程。O-GalNac糖基化又称为黏蛋白型O-糖基化,其高度参与肠道微生物群和肠上皮细胞之间的相互作用,并受宿主遗传学和环境的调节。因此,它们可以很好地整合宿主、微生物和环境之间的关系。本文将就黏蛋白型O-糖基化在炎症性肠病中的生理功能和意义作一综述。

蛋白质的糖基化改性研究进展

介绍了糖基化蛋白的合成方法，以及糖基化改性对蛋白质的工艺性质及营养和安全性的影响。

糖基化蛋白和氧自由基在糖尿病和糖尿病并发症中的作用

糖尿病是一组病因和发病机制尚未完全阐明的内分泌-代谢疾病,而以高血糖为其共同主要标志。因胰岛素分泌绝对或相对不足以及靶细胞对胰岛素敏感性降低,引起糖、蛋白质、脂肪和继发性的水、电解质代谢紊乱。 糖尿病并发症是常见的,其发病机制及其与糠尿病代谢紊乱之间的关系也尚未确切阐明。近年来在研究人们高血糖的基础上进一步阐明了非酶糖化的发展和醛糖还原酶葡萄糖毒性的理论。本文将主要涉及糖基化蛋白和氧自由基在糖尿病和糖尿病并发症中的作用。

硫酸糖基化蛋白2在去势大鼠前列腺中的表达

目的 探讨硫酸糖基化蛋白 2 (SGP 2 )在去势大鼠腹叶前列腺中表达的规律及其与前列腺凋亡的相关性。方法 将 90只大鼠随机分为 9组 ,每组 10只 ,分别于去势后 0、1、2、3、5、7、10、14、2 1d处死 ,取前列腺包埋切片后行免疫组织化学检测SGP 2和增殖细胞核抗原 (PCNA) ,缺口末端标记术 (TUNEL)和电镜检测前列腺细胞凋亡 ,计算阳性率 ,并作连续切片 ,行计算机图像重叠技术比较SGP 2表达与凋亡的相关性 ,及与PCNA表达的关系。结果 正常大鼠前列腺SGP 2表达较少 ,去势后则显著增加 ,与凋亡的变化及分布规律相似 ,其表达的阳性率与凋亡阳性率呈正相关 (r =0 .80 75 ,P <0 .0 1)。SGP 2的表达和PCNA呈负相关 (r =-0 .80 6 1,P <0 .0 1)。结论 SGP 2在去势大鼠腹叶前列腺表达增高 ,与凋亡呈正相关 ,与PCNA呈负相关 。

钙粘蛋白糖基化修饰的研究进展

钙粘蛋白超家族是一大类依赖Ca^(2+)糖蛋白超家族分子,介导细胞连接、细胞与组织间质连接作用。在组织和器官的形态形成过程中发挥了重要作用。钙粘蛋白除了具有N-糖基化修饰外,还具有O-甘露糖基化修饰。就钙粘蛋白的糖基化修饰研究包括最新的O-甘露糖基化修饰的进展加以综述。