糖基化蛋白受体与糖尿病血管病变

糖基化蛋白受体与糖尿病血管病变郑世荣，田牛近年来，蛋白质非酶糖化在糖尿病血管病变发病中的作用受到广泛重视，国外有关糖基化蛋白受体的研究进展较快，现简要综述如下。一、蛋白质非酶糖化蛋白质非酶糖化是指机体在无酶催化的条件下，蛋白质与糖之间自动发生的缓慢而...

糖基化终产物促进U937巨噬细胞高密度脂蛋白受体的表达

目的 研究糖基化终产物对U937巨噬细胞高密度脂蛋白受体表达的影响。方法 将糖基化终产物与诱导分化4 8h后的U937细胞共同孵育,用免疫细胞化学法和半定量逆转录聚合酶链反应检测细胞清道夫受体BI蛋白及mRNA的表达。结果 免疫细胞化学法检测10 0、2 0 0和4 0 0mg/L糖基化终产物刺激后U937巨噬细胞清道夫受体BI蛋白表达的平均积分光密度值分别为18.94±3.5 6、2 7.86±4 .39及35 .0 8±2 .37,较牛血清白蛋白组明显升高(13.76±3.74 ,P <0 .0 5 ) ;4 0 0mg/L糖基化终产物作用6、12、2 4及4 8h后,细胞清道夫受体BI表达的平均积分光密度值分别为16 .87±5 .6 5、2 5 .6 8±6 .97、35 .0 8±8.37及39.6 8±9.37,较0h组明显升高(12 .0 2±3.4 7,P <0 .0 5 )。半定量逆转录聚合酶链反应结果显示,4 0 0mg/L牛血清白蛋白及10 0、2 0 0和4 0 0mg/L糖基化终产物刺激后细胞清道夫受体BImRNA相对表达量分别是0 .32±0 .0 3、0 .5 3±0 .0 5、0 .6 4±0 .0 4和0 .89±0 .0 5 ;4 0 0mg/L糖基化终产物作用0、6、12、2 4及4 8h后,U937巨噬细胞清道夫受体BImRNA相对表达量分别为0 .4 1±0 .0 1、0 .6 2±0 .0 5、0 .80±0 .0 8、0 .87±0 .0 5、1.2 4±0 .13。

钱桐荪教授经验方对糖尿病肾病大鼠晚期糖基化终末产物受体蛋白的影响

目的:观察钱桐荪教授中药经验方(下称钱氏经验方)对糖尿病肾病模型的早期防治效果及对晚期糖基化终末产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)表达的影响。方法:采用腹腔注射链脲佐菌素(strepto-zotoc in,STZ)诱导糖尿病模型,造模成功随机将成模动物分为糖尿病模型组、钱氏经验方大剂量组、钱氏经验方小剂量组,各组灌胃8周,于8周末检测24 h尿蛋白,免疫组化及Western Blot检测肾小球RAGE表达情况。结果:糖尿病观察组的24 h尿蛋白定量、RAGE表达明显高于正常组,钱氏经验方大剂量组和钱氏经验方小剂量组24 h尿蛋白定量、RAGE表达明显低于糖尿病观察组。结论:钱氏经验方可能通过降低RAGE的表达对糖尿病肾病起防治作用。

糖尿病大鼠心肌糖基化终产物受体mRNA表达及仙贞片对其影响的实验研究

目的 :观察仙贞片对糖尿病大鼠心肌内皮细胞蛋白非酶糖基化终产物受休mRNA(RAGE mRNA)高表达的影响。方法 :采用链脲佐菌素左下腹腔内单次注射造成糖尿病大鼠模型 ,随机分模型组、仙贞片组及氨基胍组各 10只 ,另设正常对照组 10只。应用原位杂交的方法检测RAGE mRNA表达。结果 :模型组大鼠心肌内皮细胞RAGE mRNA表达灰度值明显增高 ,出现过度表达。仙贞片治疗后心肌内皮细胞RAGE mRNA表达灰度值降低 ,与氨基胍组相近似 (P >0 0 5 ) ,与模型组比较差异显著 (P <0 0 5 )。显示仙贞片与氨基胍一样 ,可显著下调RAGE mRNA的过度表达 ,对糖尿病大鼠心肌RAGE mRNA高表达有明显调节作用。结论 :仙贞片对高血糖造成的心肌损害具有保护作用。

柠檬苦素对溃疡性结肠炎大鼠肠道损伤和肠道菌群紊乱的改善作用及机制

目的探究柠檬苦素对溃疡性结肠炎(UC)大鼠肠道损伤和肠道菌群紊乱的改善作用及机制。方法构建UC大鼠模型,将建模成功的70只大鼠随机分为模型组和柠檬苦素低、中、高剂量组(12.5、25、50 mg/kg)以及柳氮磺胺吡啶组(阳性对照组,500 mg/kg),每组14只;另取14只大鼠作为对照组。各组大鼠灌胃相应药液或等量生理盐水,每天1次,连续2周。末次给药结束24 h后,观察大鼠一般情况并称重,取结肠组织进行结肠黏膜损伤指数(CMDI)评分;检测大鼠结肠组织中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;观察大鼠结肠组织病理学变化;检测大鼠结肠组织中紧密连接蛋白1(Claudin-1)、闭合蛋白(Occludin)、闭锁小带蛋白1(ZO-1)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、晚期糖基化终末产物受体(RAGE)蛋白的表达水平;基于16S rRNA检测大鼠肠道菌群的相对丰度。结果与对照组相比,模型组大鼠精神状态不佳、皮毛较暗、情绪烦躁易发怒,结肠组织腺体排列杂乱,出现炎症细胞浸润和细胞坏死、水肿现象;CMDI评分和结肠组织中IL-1β、IL-6、TNF-α水平,HMGB1、RAGE蛋白表达水平以及肠道变形菌门、拟杆菌门菌群的相对丰度均显著升高(P<0.05);体重和结肠组织中Claudin-1、Occludin、ZO-1蛋白表达水平以及肠道厚壁菌门菌群的相对丰度均显著降低(P<0.05)。与模型组相比,柠檬苦素各剂量组大鼠一般情况和结肠组织病理损伤均改善,上述指标水平均显著逆转(P<0.05),且具有剂量依赖性(P<0.05);柳氮磺胺吡啶组与柠檬苦素高剂量组大鼠各项指标比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论柠檬苦素可改善UC模型大鼠肠道损伤及肠道菌群紊乱,其作用机制可能与下调HMGB1/RAGE信号通路活性有关。

茯苓酸改善多囊卵巢综合征大鼠胰岛素抵抗的作用及机制研究

目的研究茯苓酸对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠胰岛素抵抗的改善作用及机制。方法将126只雌性大鼠按随机数字表法分为空白组、PCOS组、茯苓酸低剂量组(8.33 mg/kg)、茯苓酸高剂量组(33.32 mg/kg)、炔雌醇环丙孕酮组(阳性对照组,0.34 mg/kg)、重组大鼠高迁移率族蛋白B1蛋白(rHMGB1)组(8μg/kg)和茯苓酸高剂量+rHMGB1组(33.32 mg/kg茯苓酸+8μg/kg rHMGB1),每组18只。除空白组外,其余各组大鼠均通过灌胃来曲唑混悬液的方式构建PCOS模型。建模成功后,每天给药1次,持续4周。给药结束后,检测大鼠空腹血糖、空腹胰岛素水平及胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),检测大鼠血清中促卵泡素(FSH)、促黄体生成素(LH)、睾酮(T)水平及卵巢组织中白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,计算大鼠卵巢系数,观察大鼠卵巢组织病理变化,检测大鼠卵巢组织中HMGB1、晚期糖基化终产物受体(RAGE)、磷酸化核因子κB p65(p-NF-κB p65)蛋白表达情况。结果与空白组比较,PCOS组大鼠卵巢组织病理损伤严重,空腹血糖、空腹胰岛素水平、HOMA-IR、卵巢系数升高,血清中LH和T水平升高、FSH水平降低,卵巢组织中IL-1β、TNF-α水平及HMGB1、RAGE、p-NF-κB p65蛋白表达量升高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。与PCOS组比较,茯苓酸低、高剂量组和炔雌醇环丙孕酮组大鼠卵巢组织病理损伤减轻,空腹血糖、空腹胰岛素水平、HOMA-IR、卵巢系数降低,血清中LH和T水平降低、FSH水平升高,卵巢组织中IL-1β、TNF-α水平及HMGB1、RAGE、p-NF-κB p65蛋白表达量降低,差异均具有统计学意义(P<0.05);rHMGB1组大鼠对应指标的变化趋势与上述给药组相反(P<0.05)。与茯苓酸高剂量组比较,茯苓酸高剂量+rHMGB1组大鼠的上述指标变化均被显著逆转(P<0.05)。结论茯苓酸可能通过抑制HMGB1/RAGE信号通路改善PCOS大鼠胰岛素抵抗并抑制其炎症反应。

芒柄花素对脓毒症大鼠急性肺损伤和免疫功能的影响及其机制

目的探讨芒柄花素(Formo)调节高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/晚期糖基化终产物受体(RAGE)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路对脓毒症大鼠急性肺损伤和免疫功能的影响。方法通过盲肠结扎和穿刺方法建立脓毒症大鼠,将造模后的大鼠随机分为脓毒症组、低剂量Formo(Formo-L)组(15 mg/kg Formo)、Formo中剂量(Formo-M)组(30 mg/kg Formo)、Formo高剂量(Formo-H)组(60 mg/kg Formo)、Formo-H^(+)重组HMGB1蛋白(rHMGB1)组(60 mg/kg Formo^(+)8μg/kg rHMGB1),并以仅做切口,不进行盲肠结扎或穿刺的大鼠为假手术组。干预结束后,检测大鼠肺组织湿干比(W/D);腹部取血,流式细胞术及ELISA分别检测大鼠免疫功能及白细胞介素-6(IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;苏木精-伊红(HE)染色检测右肺上叶病理学变化;Western blot检测肺组织中HMGB1/RAGE/NF-κB信号通路相关的蛋白表达。结果与对照组相比,脓毒症组肺组织病理损伤严重,CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)显著降低,TNF-α,IL-1β,IL-6水平、病理损伤评分、W/D、CD8^(+)、HMGB1、RAGE、p-NF-κB p65/NF-κB p65表达比较显著增加(P<0.05);与脓毒症组相比,Formo-L组、Formo-M组、Formo-H组病理损伤得到改善,CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)显著增加,TNF-α,IL-1β,IL-6水平、病理损伤评分、W/D、CD8^(+)、HMGB1、RAGE、p-NF-κB p65/NF-κB p65表达显著降低,组间有差异(P<0.05);与Formo-H组相比,Formo-H^(+)rHMGB1组病理损伤加重,CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)显著降低,TNF-α,IL-1β,IL-6水平、病理损伤评分、W/D、CD8^(+)、HMGB1、RAGE、p-NF-κB p65/NF-κB p65表达显著增加(P<0.05)。结论Formo可能通过抑制HMGB1/RAGE/NF-κB信号通路减轻脓毒症大鼠急性肺损伤,提高免疫功能。

栀子苷调节HMGB1-RAGE信号通路对子痫前期大鼠血管内皮细胞损伤的影响

目的 探究栀子苷调节高迁移率族蛋白B1(HMGB1)-晚期糖基化终末产物受体(RAGE)信号通路对子痫前期大鼠胎盘损伤的保护作用。方法 将妊娠大鼠分为对照组、模型组、栀子苷低剂量[25 mg/(kg·d)]组、栀子苷高剂量[100 mg/(kg·d)]组、丙酮酸乙酯[EP,HMGB1抑制剂,40 mg/(kg·d)]组,皮下注射一氧化氮合酶抑制剂L-NAME建立子痫前期大鼠模型。在第14、17、19天测定各组大鼠收缩压和24 h尿蛋白水平,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平变化,采用试剂盒测定胎盘组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)水平,采用HE染色观察胎盘组织形态变化,采用Western blot检测胎盘组织HMGB1、RAGE、核转录因子-κB(NF-κB)、p-NF-κB、淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关x蛋白(Bax)蛋白水平。结果 与对照组相比,模型组大鼠在第14、17、19天收缩压和24 h尿蛋白水平,血清IL-1β、IL-6和TNF-α水平、胎盘组织MDA水平、HMGB1、RAGE、p-NF-κB/NF-κB、Bax蛋白水平显著升高,胎盘组织中SOD、GSH、Bcl-2蛋白水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,栀子苷低、高剂量组大鼠在第17、19天收缩压和24 h尿蛋白水平、血清IL-1β、IL-6和TNF-α水平、胎盘组织中MDA水平、HMGB1、RAGE、p-NF-κB/NF-κB、Bax蛋白水平显著降低,胎盘组织SOD、GSH水平、Bcl-2蛋白水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 栀子苷可缓解子痫前期大鼠胎盘组织损伤,可能是通过抑制HMGB1-RAGE信号通路实现的。

晚期糖基化终末产物与其受体相互作用对足细胞凋亡的影响

目的探讨可溶性与复合型晚期糖基化终末产物（AGE）与晚期糖基化终末产物受体（RAGE）的相互作用对足细胞凋亡的影响。方法以可溶性（CML—BSA、AGE—BSA）和复合型（AGE修正胶原1V）AGE刺激小鼠足细胞，并用浓度分别为10、50、100mg／L的AGE刺激细胞，应用TUNEL染色和荧光激活细胞分类（FACS）法来计数凋亡和坏死的足细胞。用RAGEiRNA转染足细胞后，以同样剂量的可溶性和复合型AGE刺激足细胞，观察凋亡情况的改变。结果可溶性和复合型AGE均可诱导小鼠足细胞凋亡，复合型AGE引起的足细胞凋亡是可溶性AGE的2～3倍（均P〈0．01）。AGE呈剂量依赖性引起足细胞凋亡。用RAGEiRNA转染足细胞，降低60％～70％RAGE基因活性后，可溶性AGE引起的凋亡率明显下降，复合型AGE诱导的凋亡有下降趋势，但不明显。只有在AGE100mg／L刺激后才发生细胞坏死。结论可溶性AGE主要通过与RAGE相互作用引起足细胞凋亡，复合型AGE部分通过与RAGE相互作用诱导足细胞凋亡。减少AGE生成和RAGE表达可能是预防肾脏病进展的重要途径。

三七总皂苷通过抑制RAGE/MAPK信号通路减轻糖尿病性骨质疏松大鼠的炎症损伤

目的探究三七总皂苷(PNS)调控晚期糖基化终产物受体(RAGE)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路对糖尿病性骨质疏松症(DOP)大鼠炎症损伤的影响。方法将SD大鼠分成对照组、模型组、二甲双胍(MET)组(100 mg/kg)、PNS低剂量组(PNS-L组,10 mg/kg PNS)、PNS高剂量组(PNS-H组,20 mg/kg PNS)、PNS-H+空载体质粒组(20 mg/kg PNS+15μL空载体质粒)、PNS-H+RAGE过表达组(20 mg/kg PNS+15μL RAGE过表达质粒);除对照组外,其余各组大鼠通过高糖高脂饲料喂养及腹腔注射链脲佐菌素进行DOP模型构建;造模成功后各组进行相应给药处理。采用双能X线骨密度检测仪检测大鼠股骨骨密度(BMD);血糖测试仪及酶联免疫吸附法检测空腹血糖(FBG)、血清空腹胰岛素(FINS)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)、碱性磷酸酶(ALP)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;三点弯曲实验和苏木精-伊红染色分别检测股骨生物力学及病理形态变化;蛋白印迹法检测RAGE/MAPK通路蛋白表达。结果与模型组比较,MET组、PNS-L组、PNS-H组大鼠股骨骨小梁增多且间距减小,断裂减轻,股骨BMD、FINS、ALP、股骨最大载荷及刚度显著升高,FBG、TRACP、IL-6、TNF-α、股骨组织RAGE、p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白表达水平显著降低(P<0.05);RAGE过表达可逆转PNS-H对DOP大鼠的改善效果(P<0.05)。结论PNS通过抑制RAGE/MAPK信号通路减轻DOP大鼠炎症损伤。

HMGB1-RAGE/TLRs-NF-κB信号通路与脓毒症关系的研究进展

高迁移率族蛋白B1(HMGB1)作为晚期炎症因子可促进早期炎症因子释放,不断触发并维持下游炎症反应,其受体主要有晚期糖基化终产物受体和Toll样受体,受体活化后可激活各种信号通路,并激活NF-κB信号转导通路枢纽,进而上调各种炎症因子,促进炎症级联反应,进一步促进脓毒血症发展。本文对HMGB1介导的信号通路HMGB1-RAGE/TLRs-NF-κB与脓毒症关系的研究进展作一综述。

基于HMGB1-RAGE信号通路研究奥拉米特预防抗结核药物性肝损伤的作用机制

目的:初步探讨奥拉米特预防抗结核药物性肝损伤(ATB-DILI)的可能机制。方法:将60只昆明小鼠随机分为空白组、模型组、阳性对照组[甘草酸二铵60 mg/(kg·d)]和奥拉米特低、中、高剂量组[80、160、320 mg/(kg·d)],每组10只。除空白组外,其余各组小鼠均灌胃异烟肼[75 mg/(kg·d)]+利福平[75 mg/(kg·d)]14 d以复制ATB-DILI模型。与此同时,各给药组小鼠灌胃相应药液,空白组和模型组小鼠灌胃生理盐水,给药体积均为20 mL/(kg·d),每天给药1次,连续给药14 d。每天观察并记录小鼠生长发育、精神状态、饮食等一般情况。末次给药后,计算其肝指数,以苏木精-伊红(HE)染色法观察小鼠肝组织病理学改变,采用链霉抗生物素蛋白-生物素-过氧化物酶复合物(SABC)免疫组化法检测其肝组织中高速泳动族蛋白B1(HMGB1)、核因子κB(NF-κB)的阳性表达情况,采用酶联免疫吸附法检测其血清中肝功能指标水平和肝组织中晚期糖基化终末产物受体(RAGE)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达情况。结果:与空白组比较,模型组小鼠生长发育迟缓,食欲、精神等差,肝指数和血清中总胆红素、直接胆红素、丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶、碱性磷酸酶(ALP)、总胆汁酸(TBA)、γ-谷氨酰转肽酶水平均显著升高(P<0.05);肝小叶结构紊乱,肝细胞变性、坏死,并伴炎症细胞浸润;肝组织中HMGB1、NF-κB、RAGE、TNF-α的表达均显著增强(P<0.05)。与模型组比较,奥拉米特低、中、高剂量组和阳性对照组小鼠的一般情况均有不同程度好转,肝指数和上述血清指标均显著降低(P<0.05),肝组织病理学变化均有不同程度改善,肝组织中HMGB1、NF-κB、RAGE、TNF-α的表达均显著降低(P<0.05),且奥拉米特高剂量组上述指标改善效果均显著优于奥拉米特低、中剂量组(P<0.05),ALP、TBA水平显著低于阳性对照组(P<0.05)。结论:奥拉米特能够预防异烟肼联合利福平所致的小鼠ATB-DILI,其机制可能与下调肝组织HMGB1和RAGE蛋白表达、抑制炎症因子分泌有关。

脉络丛上皮细胞β-淀粉样蛋白转运体表达的年龄变化:氧化应激损伤的作用(英文)

老龄化可引起β-淀粉样蛋白(amyloid β-peptide,Aβ)在脑内的蓄积。Aβ的清除是通过中枢神经系统与外周血液循环的屏障的主动转运过程来实现。本文旨在研究血-脑脊液屏障脉络丛上皮细胞中与Aβ清除转运相关蛋白随年龄增长的表达变化。取不同月龄大鼠,用透射电镜观察脉络丛上皮细胞的形态改变,用实时定量RT-PCR方法检测脉络丛上皮细胞Aβ42、Aβ转运相关蛋白[低密度脂蛋白受体相关蛋白(LRP)-1、LRP-2、P-糖蛋白(P-gp)和糖基化终产物受体蛋白(RAGE)]和氧化应激损伤相关蛋白[血红蛋白氧化酶-1(HO-1)和caspase-3]的mRNA表达水平。结果显示:(1)随着年龄的增加,脉络丛上皮细胞形态出现了明显的退化和萎缩;(2)Aβ42的mRNA表达随着年龄的增加而增加,差异具有显著性;(3)Aβ转运相关蛋白LRP-1和P-gp的mRNA表达随着年龄的增加而下降,差异具有显著性;LRP-2的mRNA表达随着年龄的增加而增加,差异具有显著性;RAGE的mRNA表达没有明显变化;(4)氧化应激损伤相关蛋白HO-1和caspase-3的mRNA表达随着年龄的增加而增加,差异具有显著性。以上结果表明,随着年龄的增加,脉络丛上皮组织中的Aβ清除相关蛋白表达下降,清除能力下降,引起Aβ蓄积,继而导致氧化应激损伤,引起脉络丛上皮退化和萎缩,加重Aβ在脑内的毒性,加快炎症反应和神经退行性变化的进程。

槐定碱对脂多糖诱导的肺泡上皮细胞损伤的影响

目的探讨槐定碱通过调节高迁移率族蛋白l(HMGB1)-晚期糖基化终产物受体(RAGE)信号通路对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞损伤的影响。方法将体外培养的A549和HAECⅡ细胞随机分为5组:对照组、LPS组、LPS+槐定碱组、LPS+空载组、LPS+槐定碱+HMGB1过表达组,除对照组外其余各组细胞以LPS诱导建立损伤模型,同时以槐定碱和质粒分组处理。以细胞计数试剂盒-8法、原位末端标记法检测各组细胞活力与凋亡率;以蛋白质印迹法检测各组细胞HMGB1和RAGE蛋白表达。结果对照组、LPS组、LPS+槐定碱组、LPS+空载组和LPS+槐定碱+HMGB1过表达组的A549细胞活力分别为(100.00±0.00)%、(56.73±8.31)%、(90.02±11.24)%、(53.26±9.15)%和(60.84±8.13)%,HAECⅡ细胞活力分别为(100.00±0.00)%、(50.86±7.56)%、(93.05±12.38)%、(54.10±8.42)%和(54.43±6.14)%,A549细胞凋亡率分别为(2.11±0.65)%、(42.46±5.20)%、(4.01±1.31)%、(44.74±4.93)%和(39.75±4.86)%,HAECⅡ细胞凋亡率分别为(2.30±0.72)%、(48.14±4.87)%、(3.83±1.23)%、(45.72±5.14)%和(44.81±5.25)%,A549细胞中HMGB1蛋白水平分别为0.16±0.02、0.87±0.13、0.19±0.04、0.89±0.11和0.84±0.12,RAGE蛋白水平分别为0.19±0.03、0.94±0.16、0.21±0.04、0.96±0.15和0.90±0.17,HAECⅡ细胞中HMGB1蛋白水平分别为0.13±0.04、0.79±0.10、0.15±0.04、0.80±0.14和0.75±0.12,RAGE蛋白水平分别为0.28±0.07、1.08±0.19、0.31±0.06、1.10±0.21和1.04±0.15。上述指标:LPS组与对照组比较,LPS+槐定碱组与LPS组比较,LPS+槐定碱+HMGB1过表达组与LPS+槐定碱组比较,在统计上差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论槐定碱可通过降低HMGB1-RAGE信号活性而清除活性氧,减少炎症因子产生,增强抗氧化酶活性,进而抑制LPS诱导的肺泡上皮细胞炎症与氧化应激,最终减轻其细胞损伤。

RAGE在结肠癌和正常结肠组织的表达差异

目的研究晚期糖基化终末产物受体蛋白(RAGE)在结肠癌和正常结肠组织中的表达差异。方法采用实时荧光定量PCR法、Western blot法分别从mRNA水平、蛋白水平检测12例结肠癌患者新鲜手术切除标本中RAGE表达。另取60例结肠癌组织标本和10例正常结肠组织标本,采用免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法检测RAGE表达。分析表达差异及其与临床病理因素的关系。结果 RAGE定位于正常组织及癌组织的细胞质,在癌组织中的表达明显增多(P<0.05)。RAGE的表达与结肠癌的组织分化程度呈负相关,与TNM分期呈正相关。RAGE在低分化、Ⅲ和Ⅳ期结肠癌组织中阳性表达率增高。结论 RAGE在结肠癌中的表达与其侵袭能力存在相关性。

地黄饮子对Aβ诱导的SH-SY5Y细胞RACE／p3aMAPK／NF—κB信号通路的影响

目的探讨地黄饮子对β-淀粉样蛋白1-42（Aβ1-42）诱导的人神经母细胞瘤细胞株（SH-SY5Y）晚期糖基化终产物受体（RAGE）/p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）/核转录因子kappa-B（NF-κB）信号通路的影响。方法将雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常组及给药组（每组20只），分别配制正常血清培养液及地黄饮子含药血清培养液。（1）将SH-SY5Y细胞分为3组，其中对照组采用正常血清培养液培养，模型组采用正常血清培养液＋Aβ1-42寡聚体培养，地黄饮子组采用地黄饮子含药血清培养液＋Aβ1-42寡聚体培养。采用Western blotting检测各组SH-SY5Y细胞NF-κB p65、p38、磷酸化（p）-p38蛋白表达。（2）将SH-SY5Y细胞单独设为转染RAGE地黄饮子组，于Aβ1-42寡聚体作用不同时间（15 min、30 min、60 min、12 h、24 h、48 h、72 h）时，采用Western blotting检测各时间点SH-SY5Y细胞p-p38、p38蛋白表达。（3）将SH-SY5Y细胞分为6组，其中模拟转染RAGE对照组采用正常血清培养液＋空载体质粒转染培养，转染RAGE对照组采用正常血清培养液＋RAGE质粒转染培养，模拟转染RAGE模型组采用正常血清培养液＋Aβ1-42寡聚体＋空载体质粒转染培养，转染RAGE模型组采用正常血清培养液＋Aβ1-42寡聚体＋RAGE质粒转染培养，模拟转染RAGE地黄饮子组采用地黄饮子含药血清培养液＋Aβ1-42寡聚体＋空载体质粒转染培养，转染RAGE地黄饮子组培养方法同前。采用ELISA法和流式微球分析（CBA）法检测各组SH-SY5Y细胞炎症因子白介素（IL）-1β、IL-6、肿瘤坏死因子（TNF）-α含量。结果（1）与模型组比较，地黄饮子组SH-SY5Y细胞NF-κB p65蛋白、p-p38/p38表达水平明显降低，差异均有统计学意义（P〈0.05）。（2）p-p38蛋白表达水平在Aβ1-42作用30 min时开始明显升高，持续至24 h时表达最高，48 h时开始出现下调趋势。（3）模拟转染RAGE模型组和转染RAGE模型组比较，模拟转染RAGE地黄饮子组和转染RAGE地黄饮子组比较，后者IL-1β、IL-6、TNF-α含量明显升高，差异均有统计学意义（P〈 0.05）。与模拟转染RAGE模型组比较，模拟转染RAGE地黄饮子组IL-1β、IL-6、TNF-α含量明显降低，差异均有统计学意义（P〈0.05）。与转染RAGE模型组比较，转染RAGE地黄饮子组IL-1β、IL-6、TNF-α含量明显降低，差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论地黄饮子通过抑制Aβ1-42诱导的SH-SY5Y细胞RAGE/p38 MAPK/NF-κB信号通路，改善炎症反应，起到细胞保护作用。

HMGB1/RAGE信号通路参与尼古丁调控支气管上皮细胞TGF-β1和FGF-2的分泌

目的本研究旨在探讨尼古丁是否通过高迁移率族蛋白1(HMGB1)/晚期糖基化终产物受体(RAGE)信号通路调控支气管上皮细胞转化生长因子β1(TGF-β1)和成纤维细胞生长因子2(FGF-2)的分泌。方法尼古丁(6×10^-6 mol/L)刺激支气管上皮细胞株16HBE,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测刺激24 h后细胞中HMGB1、TGF-β1和FGF-2分泌,Western blotting方法检测RAGE表达。预先加入HMGB1 siRNA孵育48 h或RAGE中和抗体孵育1 h,再加入尼古丁刺激16HBE 24 h,ELISA法检测HMGB1、TGF-β1和FGF-2的分泌,Western blotting方法检测RAGE的表达。结果尼古丁刺激24 h后HMGB1的分泌和RAGE的表达量较未予尼古丁刺激的正常对照组明显增加,TGF-β1和FGF-2的分泌量也显著增加。加入HMGB1 siRNA后尼古丁刺激24 h组,HMGB1的分泌量较单纯尼古丁刺激组明显减少,RAGE的表达量显著减少,同时TGF-β1和FGF-2的分泌量较单纯尼古丁刺激组显著减少。加入RAGE中和抗体后尼古丁刺激24 h组,TGF-β1和FGF-2的分泌量较单纯尼古丁刺激组显著减少。结论HMGB1/RAGE信号通路参与了尼古丁调控支气管上皮细胞TGF-β1和FGF-2的分泌。

葛根知母药对调控HMGB1/RAGE/NF-κB通路改善糖尿病大鼠认知障碍

目的:观察葛根知母水提物对糖尿病认知障碍大鼠认知功能的影响,评价其神经保护作用并探讨其机制。方法:取雄性SD大鼠,除空白对照组外均给予高脂高糖饲料喂养,50 d后腹腔注射链脲佐菌素(STZ) 35 mg/kg建立II型糖尿病认知障碍大鼠模型。造模成功后,随机分为模型对照组、多奈哌齐0. 03g/kg组、二甲双胍0. 15g/kg组、玉液汤7. 84g/kg组、葛根知母药对4. 62 g/kg、9. 24 g/kg组。给药30 d后,Morris水迷宫法进行行为学测试,结束后大鼠取血,检测血糖;部分动物处死取血检测糖化血红蛋白,取脑用Western Blot法检测脑组织高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/晚期糖基化终产物受体(RAGE)/核转录因子(NF-κB)信号通路的蛋白表达,其余动物灌注取脑,进行RAGE和NF-κB免疫组化染色。结果:与空白对照组相比,模型组大鼠的逃避潜伏期、探索距离显著延长,且目标象限游泳时间显著缩短、站台穿越次数显著减少、NF-κB、RAGE平均灰度值显著降低、HMGB1、RAGE、pNF-кBp65、p-IкBα的表达显著上调(P <0. 05或P <0. 01);与模型对照组相比,葛根知母药对9. 24 g/kg组和玉液汤7. 84 g/kg组都可显著缩短模型大鼠的逃避潜伏期、探索距离,明显延长目标象限游泳时间、增多站台穿越次数,显著降低空腹血糖,明显增加大鼠体重、降低糖化血红蛋白水平,NF-κB、RAGE平均灰度值也明显升高,且HMGB1、RAGE、p-NF-кBp65、p-IкBα蛋白表达显著下调(P<0. 05或P <0. 01);葛根知母药对4. 62 g/kg组大鼠血糖明显降低,能够显著降低HMGB1、RAGE、p-NF-кBp65、p-IкBα的表达(P <0. 05或P <0. 01)。结论:葛根知母药对可明显改善糖尿病大鼠模型的认知功能障碍,其机制可能是通过降低血糖及糖化血红蛋白水平、调控脑内HMGB1/RAGE/NF-κB通路实现的。

硫辛酸对脑缺血再灌注损伤大鼠RAGE/LRP1通路及神经血管单元重塑的影响

目的探究硫辛酸对脑缺血再灌注损伤大鼠神经血管单元重塑的作用及对晚期糖基化终产物受体(RAGE)/低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP1)的影响。方法108只雄性Wistar大鼠,除18只作为假手术组外,其余大鼠采用线栓法制备大脑中动脉短暂缺血再灌注(tMCAO)模型。模型成功大鼠根据神经评分分为模型组、FPS-ZM1(RAGE抑制剂,1 mg·kg^(-1))组和硫辛酸高、中、低剂量组(40、20、10 mg·kg^(-1)),再灌注2 h后ip给药,假手术组和模型组注射等量生理盐水,每天1次,连续给药14 d。术后1、7、14 d对大鼠进行神经功能缺损程度评分(mNSS)和激光散斑成像仪监测脑血流量(CBF)。术后14 d,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法检测大鼠脑梗死面积;伊文思蓝(EB)检测血脑屏障通透性;免疫荧光染色检测脑微血管密度并采用免疫组化法检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、神经元核抗原(NeuN)表达;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测血管内皮生长因子(VEGF)、促血管生成素1(Ang-1)、促血管生成素2(Ang-2)的mRNA表达;Western blotting检测基质金属蛋白酶9(MMP9)、紧密连接相关蛋白5(claudin5)、RAGE、LRP1蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠mNSS评分、脑梗死百分比、EB含量、GFAP阳性细胞数、脑组织Ang-2 mRNA水平、MMP9和RAGE蛋白表达显著升高(P<0.05),CBF、NeuN阳性细胞数、VEGF和Ang-1 mRNA水平、claudin5和LRP1蛋白表达显著降低(P<0.05);与模型组比较,硫辛酸高、中剂量组大鼠mNSS评分、脑梗死百分比、EB含量、GFAP阳性细胞数、脑组织Ang-2 mRNA、MMP9和RAGE蛋白表达显著降低(P<0.05),CBF、脑微血管密度、NeuN阳性细胞数、VEGF和Ang-1mRNA、claudin5和LRP1蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论硫辛酸可降低BBB的通透性,促进血管新生,对神经血管单元起着修复和保护作用;其作用机制可能与下调RAGE的表达,上调LRP1的表达有关。

HMGB1/RAGE信号通路在ALI/ARDS肺泡巨噬细胞焦亡中作用的研究进展

干预高迁移率族蛋白1(HMGB1)/晚期糖基化终产物受体(RAGE)信号通路可影响急性肺损伤(ALI)/急性呼吸窘迫综合征(ARDS)进展,但确切机制尚不清楚。肺泡巨噬细胞(AMs)焦亡作为一种新的胱天蛋白酶依赖促炎性细胞程序性死亡,其死亡过程伴随着炎性介质释放并加重ALI/ARDS炎性反应进程。而HMGB1/RAGE信号通路可能通过调节AMs焦亡在ALI/ARDS进展中具有重要作用。本文就AMs焦亡在ALI/ARDS炎性反应中的作用及HMGB1/RAGE信号通路影响ALI/ARDS中AMs焦亡的可能机制进行综述,为干预HMGB1/RAGE信号通路减轻ALI/ARDS炎性反应提供新的理论依据。