基于8-氨基1,3,6-萘三磺酸二钠盐的糖基化蛋白质标记方法

发展了基于荧光试剂8-氨基1,3,6-萘三磺酸二钠盐(ANTS)的糖基化蛋白质选择性标记和荧光检测的新方法.实验中以标准蛋白质细胞色素c和核糖核酸酶b为样品,优化了pH和反应时间.在优化的条件下,核糖核酸酶b的检测灵敏度可提高22倍,而非特异性的标记仅为1%,显示了这种衍生方法极好的选择性.进一步将该方法应用于卵清蛋白的衍生,通过结合二氧化钛(TiO2)亲和富集,共鉴定到14个蛋白质,其中超过85%的蛋白质具有一致的N-X-T/S(X为除脯氨酸以外的其他氨基酸)序列,为潜在的糖基化蛋白,进一步验证了该方法的高选择性.

基于肼化学富集法分析人血浆外泌体中的N-糖基化蛋白质

目的对人血浆外泌体中N-糖基化蛋白质的组成和功能进行分析。方法通过超速离心法分离获得健康人血浆外泌体,超声处理获得外泌体蛋白,胰蛋白酶将蛋白酶解为肽段。肼化学法分离富集血浆外泌体中的N-糖基化肽段,液相色谱及高分辨质谱对其进行鉴定,基因本体法对鉴定的N-糖基化蛋白质的生物学功能进行分析。结果获得的外泌体具有外泌体典型的茶托样双层膜结构,形态完整,大小均匀,直径分布在100 nm左右。在1 mL健康人血浆外泌体中共鉴定到252个N-糖基化修饰位点,归属于131个N-糖基化蛋白质。可能在丝氨酸型内肽酶活性、丝氨酸型内肽酶活性抑制及钙离子结合等生命过程中发挥重要作用。其中,67个N-糖基化蛋白质与疾病的发生发展密切相关。结论本研究在人血浆外泌体中共鉴定到131个N-糖基化蛋白质。它们可能参与关键的生命活动及疾病的发生发展。

蛋白质糖基化位点的因子分析及KNN预测

为了分析糖基化蛋白质序列的结构特点并提高蛋白质O-糖基化位点的预测准确率,首先用因子分析的方法得到了训练样本的公因子,进一步得到了训练样本的因子得分以及变换矩阵;对测试样本首先用变换矩阵进行变换得到测试样本的因子得分,用K-最近邻(KNN)方法对因子得分进行分类。实验样本用稀疏编码方式编码,窗口长度为21。实验结果表明,与直接用KNN对原始观测数据进行预测的方法相比,通过因子分析变换对因子得分进行预测的结果更好。

蛋白质糖基化修饰研究进展

蛋白质翻译后修饰是蛋白质组学的一个组成部分,而蛋白质糖基化是生命体中最重要的一种蛋白质翻译后修饰之一。糖基化在细胞免疫、信号传导、蛋白翻译调控、蛋白降解等诸多生物过程中起着重要作用。随着蛋白质组学技术的不断发展,糖基化研究也越来越受到广泛的关注。本文综述了糖基化的分类、在生命体中的作用、最新的研究技术及进展。

芦蒿秸秆黄酮类化合物对晚期蛋白质糖基化终末产物形成的抑制作用

通过建立牛血清白蛋白-丙酮醛(bovine serum albumin-methylglyoxal,BSA-MGO)的蛋白质糖基化反应模型,用荧光法测定体外晚期蛋白质糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)的含量,探讨芦蒿秸秆黄酮类化合物对AGEs形成的抑制效果,并对木犀草素的作用途径进行探索。结果表明:芦蒿秸秆总黄酮浸膏经AB-8树脂分离后共收集到4组含有黄酮的洗脱组分(F-10、F-30、F-50、F-70)对AGEs的形成均具有抑制作用,抑制效果由强到弱为依次为F-50>F-30>F-10>F-70,此结果与F-30和F-50分离纯化得到的黄酮成分芦丁和木犀草素具有较好的AGEs抑制效果相一致。同时发现,芦蒿秸秆对AGEs形成的抑制效果与总黄酮含量存在显著的线性关系。另外,将木犀草素与MGO的反应产物进行分离纯化,高效液相色谱-质谱联用分析显示:木犀草素作用途径为通过捕获MGO,形成木犀草素-MGO加和物来抑制AGEs的形成。芦蒿秸秆黄酮类化合物可抑制体外蛋白质糖基化反应的活性预示其可以作为AGEs的天然抑制剂来预防和减轻糖尿病及其并发症。

南瓜多糖特征官能团检测及其与抗蛋白质非酶糖基化关系的研究

目的检测南瓜多糖中特征官能团含量,考查特征官能团与其抗蛋白质非酶糖基化的关系。方法水提醇沉法提取南瓜粗多糖并分别以20%、40%和60%的乙醇分级醇沉为3种不同分子量的南瓜多糖,依次命名为PPⅠ、PPⅡ、PPⅢ。以苯酚硫酸法检测3种多糖中的糖含量;乙酰丙酮分光光度法检测氨基糖含量;硫酸咔唑法检测糖醛酸含量;硫酸钡比浊法检测硫酸基含量。根据线性相关分析法研究这些特征基团的含量与它们抗蛋白质非酶糖基化活性之间的关系。结果 PPⅠ、PPⅡ、PPⅢ的糖含量分别为92.62%、85.66%和79.60%;氨基糖含量分别为1.21%、1.95%和6.99%;糖醛酸含量分别为6.35%、4.64%和3.89%;3种多糖中均未检测到硫酸基的存在。南瓜多糖的抗糖基化活性与南瓜多糖的氨基糖含量呈正相关;与南瓜多糖的分子量及糖醛酸含量呈负相关。结论南瓜多糖中含有氨基糖和糖醛酸特征结构;南瓜多糖抗蛋白质非酶糖基化活性与其分子量、氨基糖及糖醛酸含量有关。

熊果酸对蛋白质体外非酶糖基化反应的影响

目的研究熊果酸(ursolic acid,UA)对体外蛋白质非酶糖基化反应的影响。方法采用L16(45)正交设计,以牛血清白蛋白(BSA)浓度,d-葡萄糖浓度和孵育时间3因素4水平正交试验,筛选出体外蛋白质非酶糖基化的最佳反应条件。并以此条件用荧光分光光度法观察UA对晚期糖基化终产物(advanced glycation endproducts,AGEs)形成的影响。同时,采用NBT法测定UA在体外对AGEs中间产物果糖胺(Amadori产物之一)形成的影响。结果正交试验结果显示,5g/LBSA,50mM d-葡萄糖及40d的孵育时间是蛋白质非酶糖基化反应的最佳条件,荧光分光光度法结果表明,UA(10、20、40μM)对AGEs的形成有明显的抑制作用(P<0.05or 0.01 vs模型组),且呈剂量依赖性。但UA在体外不能抑制果糖胺的形成。结论 UA可通过干扰早期糖基化产物-Amadori产物的深度糖基化来抑制AGEs形成,这可能是UA减轻糖尿病血管损伤的重要机制之一。

十两茶提取物对葡萄糖苷酶、蛋白质非酶糖基化及醛糖还原酶的体外抑制作用研究

目的研究湖南安化黑茶的主要品种十两茶水提物的体外降糖作用,初步探讨其作用机制。方法通过体外蛋白质非酶糖基化试验、葡萄糖苷酶试验、醛糖还原酶试验比较十两茶与其他茶类(茯砖茶-9、茯砖茶-11、红茶、绿茶)的体外降糖作用。结果 5种茶叶水提物在体外均能不同程度地抑制蛋白质非酶糖基化产物形成、葡萄糖苷酶以及醛糖还原酶活性,其中以十两茶作用为优。结论十两茶水提物对糖尿病相关酶具有抑制作用,具有一定的降糖和防止糖尿病并发症作用。

麦麸阿魏酸糖酯对体外蛋白质非酶糖基化反应的影响

研究从小麦麸皮中提取的阿魏酸糖酯(FGs)对体外蛋白质非酶糖基化反应(NEG)的影响。将牛血清白蛋白和葡萄糖在体外共同孵育,建立蛋白质NEG体外体系;不同浓度的FGs分别与反应体系共孵育,以荧光分光光度法测定FGs对蛋白质非酶糖基化反应产物(AGEs)生成的影响;此外,采用铁氰化钾法检测FGs的总还原能力。结果显示,FGs呈剂量依赖方式抑制AGEs的形成,对蛋白质NEG抑制的IC50为0.0382 mmol/L;铁氰化钾法检测FGs的总还原能力,还原铁离子的IC50为0.0310 mmol/L,低于对照VC的0.042 0 mmol/L。FGs抑制蛋白质的非酶糖基化,可能与其强还原能力有关。

蛋白质糖基化在肺癌诊疗中的研究进展

早发现、早诊断对肺癌患者的治疗和预后均具有重要意义。但低剂量CT、血清肿瘤标志物等传统检测方法对肺癌早期诊断的特异度和灵敏度均较低。而在肺癌的发生、发展、转移过程中均存在糖基化修饰异常,检测异常变化的糖链结构对于肺癌的早期诊断、指导治疗、预后评估等均具有一定价值,可作为肺癌潜在的生物学标志物。同时,基于糖基化修饰的肺靶向药物传递系统可增强药物在肺组织中的浓度,具有提高疗效、减少药物不良反应发生的作用。可见,糖组学技术在肺癌临床治疗及管理中的应用前景广阔,但仍需进一步研究。

蛋白质非酶糖基化导致理化性状改变

目的 观察蛋白质糖基化后理化特性的改变。方法 牛血清白蛋白 (BSA)与葡萄糖在体外共同孵育后 ,经聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)及荧光分光光度计测定荧光值和扫描荧光光谱。结果 糖基化BSA荧光光谱改变 ,糖基化终产物 (AGEs)荧光值增加 ;单体BSA在PAGE上向正极泳动加速 ,SDS PAGE近负极段出现新的弥散带。结论 蛋白质非酶糖基化可导致棕色变、阴电荷增加、分子量增大、荧光光谱改变。

中医药治疗HIV/AIDS过程中对相关蛋白质糖基化的影响可能性初探

1艾滋病概述 艾滋病是人类免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus，HIV）感染人体所引起的、以CD4＋T淋巴细胞的减少和多种免疫功能紊乱为基本病理特征的获得性免疫缺陷综合征（acquired immunodeficiency syndrome，AIDs）。医学界至今仍未成功研究出彻底治疗艾滋病的方法，目前艾滋病的防治以控制艾滋病疫情、降低发病率和死亡率为主，临床治疗目的主要是延缓病程进展、降低病死率、提高患者生存质量。

人尿液外泌体N-糖基化蛋白质的鉴定、生物学功能分析及临床应用

目的分析人尿液外泌体中N-糖基化蛋白质的组成及生物学功能,并探讨与之关联的临床应用。方法取6例健康志愿者的尿液并提取外泌体。基于亲水相互作用色谱法富集上述尿液外泌体中的N-糖基化蛋白质并对其进行质谱鉴定。基因本体法对本研究中鉴定的N-糖基化蛋白质进行生物学功能分析。在此基础上,探讨其临床意义及应用前景。结果健康志愿者尿液外泌体中共鉴定到398个N-糖基化位点,归属于230个N-糖基化蛋白质。这些N-糖基化蛋白质参与多个重要的生物学过程。其中,94个N-糖基化蛋白质与疾病关联。结论人尿液外泌体表达的N-糖基化蛋白质具有重要的生物学功能,并且与临床疾病的发生发展具有相关性,有望为疾病诊断、监测、治疗及新药研发等奠定分子基础。

体外培养细胞系与体内血清蛋白质N糖基化的差异研究

目的 探讨同一物种的细胞(同样的糖基酶体)在体外和体内表达的蛋白质糖基化表达谱的差异,为体内和体外细胞培养蛋白质糖基化提供实验依据。方法 选取人结肠癌细胞系HCT116、RKO、DLD和10例结肠癌患者的血清为实验对象,分别代表体外培养与体内合成,进行蛋白质糖基化表达水平分析,比较分析同一物种的细胞在体外和体内表达的蛋白质糖基化表达谱的差异。结果 结肠癌患者血清蛋白质N-糖基化表达中高甘露糖型较少,多为双天线复合型糖,不含平分型,与结肠癌细胞HCT116存在一定相似性,而与结肠癌细胞RKO、DLD差异较大。结论 体外培养细胞的蛋白质糖基化,与体内细胞的蛋白质糖基化表达并不完全一致。因此在蛋白质糖基化相关的研究中,体内验证是必不可少的一个环节,需要引起生物标志物、药物或疫苗研究领域的重视。

黄连多糖抗蛋白质非酶糖基化活性初步研究

初步研究了黄连多糖对体外蛋白质非酶糖基化过程的抑制作用。应用化学方法建立蛋白质非酶糖基化反应模型,以氨基胍为阳性对照,考察黄连多糖对蛋白质非酶糖基化过程中Amadori产物、二羰基化合物及蛋白质非酶糖基化终产物(AGEs)的生成这三个阶段的影响。实验结果表明,黄连多糖可以从糖基化反应的三个阶段来抑制AGEs的生成,在不同浓度下均具有很强的抑制作用,且对Amadori产物生成的抑制作用强于阳性对照氨基胍(p<0.05,n=3)。这提示黄连多糖可能为中药黄连中抑制糖尿病的活性物质。根据糖尿病并发症的产生机制,黄连多糖有可能成为价廉、无毒的糖尿病并发症抑制或治疗药物。

芝麻叶多酚的纯化及对蛋白质非酶糖基化的抑制作用

从D101、AB-8、NKA-9、S-8、ADS-5大孔吸附树脂中通过静态实验筛选出AB-8树脂,研究其对芝麻叶粗提物中多酚的静态吸附和解吸性能,并通过单因素实验确定AB-8树脂柱的最佳纯化工艺条件;然后,考察了芝麻叶多酚对体外蛋白质非酶糖基化终末产物(AGEs)生成的抑制作用。结果表明:AB-8大孔吸附树脂对芝麻叶多酚粗提物具有较好的分离纯化效果;AB-8树脂柱对芝麻叶多酚粗提物的最佳纯化条件为:上柱液体积12mL,上柱液浓度3.5mg/mL,pH5.0,洗脱体积为3BV(柱体积),依次以30%(v/v)和50%(v/v)乙醇溶液进行梯度洗脱,多酚纯度从16.88%分别提高到28.43%和45.71%,纯化产物分别命名为SPP1和SPP2。芝麻叶多酚粗提物、SPP1、SPP2对蛋白质非酶糖基化终产物的生成具有明显的抑制作用,抑制效果均优于阳性对照品氨基胍。

蛋白质糖基化产物抑制剂的研究

本文主要对近十年来国内外关于蛋白质糖基化产物抑制剂及其在糖尿病慢性并发症预防中的重要作用的研究进行了总结，论述了蛋白质糖基化产物抑制剂的分类和不同作用机制。

亲和分离技术在蛋白质糖基化修饰研究中的应用进展

蛋白质糖基化是蛋白质最重要的翻译后修饰之一,糖基化过程的失调或紊乱与癌症、炎症性疾病、神经系统疾病等密切相关。分析和研究蛋白质糖基化的结构与功能,有望为探索疾病发生的分子机制、开发新的诊断依据和控制治疗用生物药物的质量提供重要信息。然而生物样品中糖基化蛋白质相对丰度低,样品基质复杂,故而适宜的分离技术必不可少。亲和技术具有良好的专一性和灵敏度,可有效实现蛋白质的分离富集,成为糖基化蛋白质结构与功能研究的有力工具,并在近期得到发展。本文介绍亲和分离技术在蛋白质糖基化修饰分析中的应用进展。

鸡血藤体外对肝匀浆MDA生成及蛋白质糖基化作用

目的：观察鸡血藤水提取液对肝匀浆MDA生成及蛋白质糖基化的影响。方法：鸡血藤水提取液与肝匀浆，H2O2混合，培养2h后，测定MDA的含量。不同浓度的鸡血藤水提取液加入到体外蛋白糖化终末产物生成系统，培养6天，测定糖化蛋白的浓度及抑制率。结果：鸡血藤水提取液使肝匀浆MDA的生成量减少，使糖化蛋白生成较对照组少。结论：鸡血藤水提取液能够抑制肝匀浆MDA的生成，抑制蛋白质的糖基化作用。