糖基化载脂蛋白A-I和肾损伤因子-1联合检测对冠心病诊断价值的初步研究

目的探讨糖基化载脂蛋白A-I(gly-ApoA-I)和肾损伤因子-1(KIM-1)联合检测对冠状动脉粥样硬化性心脏病(简称冠心病)的诊断价值及临床意义。方法检测136例冠心病患者(病例组)和50例非冠心病患者(对照组)血浆gly-ApoA-I和KIM-1水平,分析2项指标。将病例组分为稳定性心绞痛(SAP)组、不稳定性心绞痛(UAP)组和急性心肌梗死(AMI)组,分析3组与对照组间gly-ApoA-I和KIM-1水平差异。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,评价gly-ApoA-I和KIM-1对冠心病的辅助诊断效能。结果与对照组比较,病例组2型糖尿病及吸烟比例更高,KIM-1、gly-ApoA-I水平升高(P<0.05)。与对照组比较,SAP组、UAP组和AMI组gly-ApoA-I和KIM-1水平明显升高(P<0.05)。与SAP组比较,UAP组和AMI组gly-ApoA-I和KIM-1水平明显升高(P<0.05)。与UAP组比较,AMI组gly-ApoA-I和KIM-1水平明显升高(P<0.05)。相关性分析显示,gly-ApoA-I与KIM-1水平呈正相关(r=0.788,P<0.05)。ROC曲线分析显示,gly-ApoA-I诊断冠心病的曲线下面积为0.802(95%CI:0.769~0.891,P<0.001),灵敏度为82.1%,特异度为86.4%;KIM-1诊断冠心病的曲线下面积为0.795(95%CI:0.717~0.873,P<0.001),灵敏度为83.6%,特异度为80.2%,特异度为92.2%;二者联合检测诊断冠心病的曲线下面积为0.898(95%CI:0.838~0.937,P<0.001),灵敏度为94.6%。结论Gly-ApoA-I和KIM-1水平升高可能与冠心病发生风险增加有关,二者联合检测对诊断冠心病有一定价值。

CTRP3、糖基化ApoA-I水平与冠心病患者PCI术后心血管终点事件的关系研究

目的探究补体C1q肿瘤坏死因子相关蛋白3(CTRP3)、糖基化糖基化载脂蛋白A-I(gly-ApoA-I)水平与冠心病患者经皮冠状动脉介入(PCI)术后心血管终点事件的关系研究。方法选取2020年6月至2023年2月广州医科大学附属中医医院收治的145例T2DM患者,患者均行PCI术,术后随访6个月,根据血管终点事件的发生情况分为发生组(n=91)及未发生组(n=54)。检测并比较两组患者CTRP3、gly-ApoA-I水平及临床资料,采用Logistic回归分析法明确影响PCI术后心血管终点事件的危险因素,并绘制受试者工作特征曲线(ROC)分析CTRP3、gly-ApoA-I对PCI术后心血管终点事件的预测价值。结果145例进行PCI的冠心病患者,随访1年,其中54例发生心血管终点事件,发生率为37.24%;发生组患者血清CTRP3水平低于未发生组、gly-ApoA-I水平高于未发生组(P<0.05);发生组合并糖尿病占比、NYHA分级Ⅱ~Ⅲ级占比、多支病变占比及LDL-C水平均高于未发生组(P<0.05);Logisitc回归分析显示,合并糖尿病、NYHA分级Ⅱ~Ⅲ级、多支病变、CTRP3低水平及gly-ApoA-I高水平均是导致PCI术后心血管终点事件的独立危险因素(P<0.05)。ROC结果显示,血清CTRP3、gly-ApoA-I单独及联合预测PCI术后心血管终点事件的AUC(95%CI)分别为0.764(0.686~0.831)、0.732(0.652~0.802)、0.878(0.814~0.927),二者联合用于PCI术后心血管终点事件的预测效能优于各指标单独检测(Z=2.230、2.732,P<0.05)。结论冠心病PCI术后发生心血管终点事件患者血清CTRP3水平降低,gly-ApoA-I水平升高,且二者为心血管终点事件的独立危险因素,联合使用心血管终点事件发生的预测价值更高。

血浆脂蛋白a载脂蛋白A-I/载脂蛋白B比值在急性冠脉综合征合并2型糖尿病患者多支病变及严重冠状动脉病变中的预测价值

目的分析急性冠脉综合征(ACS)合并2型糖尿病患者血浆脂蛋白a[lipoprotein(a),Lp(a)]及载脂蛋白A-I/载脂蛋白B(apolipoprotein A-I/apolipoprotein B,ApoA-I/ApoB)比值变化与临床特点。方法选取自2022年1月至2023年3月进行治疗的ACS患者213例,观察组(74例)为ACS合并2型糖尿病患者,对照组(139例)为单纯ACS患者,对2组Lp(a)及ApoA-I/ApoB比值进行分析。结果观察组体质指数及有高血压史构成比均高于对照组(P<0.05)。观察组中多支病变组Lp(a)水平高于单支病变组及双支病变组(P<0.05),多支病变组ApoA-I/ApoB比值低于单支病变组及多支病变组,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组多支病变组Lp(a)水平高于单支病变组及双支病变组,ApoA-I/ApoB比值低于单支病变组及多支病变组(P<0.05)。观察组Gensini积分亚组中高分组Lp(a)水平高于低分组,ApoA-I/ApoB比值低于低分组(P<0.05)。对照组Gensini积分亚组中低分组与高分组Lp(a)水平与ApoA-I/ApoB比值差异无统计学意义(P>0.05)。观察组GRACE评分亚组中高危组ApoA-I/ApoB比值低于低危组及中危组,Lp(a)值高于低危组及中危组(P<0.05),观察组及对照组组中的低危险以及中危组ApoA-I/ApoB比值、Lp(a)值差异均无统计学意义(P>0.05)。Logistic回归分析结果表明Lp(a)水平升高为ACS合并2型糖尿病患者多支冠状动脉病变的危险因素,ApoA-I/ApoB比值升高均为ACS合并2型糖尿病患者多支冠状动脉病变及冠状动脉狭窄程度的保护因素(P<0.05)。结论检测Lp(a)水平及ApoA-I/ApoB比值能够为临床预测ACS患者合并2型糖尿病多支与严重冠状动脉病变提供指导。

载脂蛋白A-I对基质金属蛋白酶-2的抑制作用机理

为了分离纯化鲢鱼基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinases-2,MMP-2)的内源性抑制剂,克隆并表达了鲢鱼MMP-2的催化结构域(rHm-MMP-2c),并将其作为筛选内源性抑制剂的靶标酶。通过60℃加热、50%~90%的硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose和Phenyl-Sepharose柱层析等手段,从鲢鱼肌肉中纯化了一种MMP-2内源性抑制剂,该抑制剂相对分子质量为28 ku,能有效抑制rHm-MMP-2c在4℃冷藏过程中对I型胶原的降解。质谱鉴定结果表明,纯化的抑制剂为载脂蛋白A-I(Apo A-I)。抑制动力学显示,Apo A-I对rHm-MMP-2c呈现竞争性抑制,抑制常数K_(i)为1.31μmol/L,半抑制浓度(IC_(50))为3.33μmol/L。分子对接结果显示,酶和抑制剂结合的主要作用力为氢键相互作用,抑制原因可能是Apo A-I与MMP-2纤连蛋白结合区结合形成了空间位阻,阻碍了底物与酶的结合。

草鱼载脂蛋白A-I-1基因3＇非编码区SNPs筛选及其与生长性状的关联分析

采用PCR产物直接测序法和PCR-RFLP法对草鱼EST文库中载脂蛋白A-I-1基因(Apoprotein A-I-1,apoA-I-1)3'非编码区进行SNPs筛选,在珠江水系草鱼Ctenopharyngodon idella养殖群体144个样本中发现2个SNPs位点。C792T位点的CC型占46.53%,CT型占50.69%,TT型占2.78%;G851A位点的GG型占77.08%,GA型占20.83%,AA型占2.08%。采用一般线性模型对2个SNPs位点与草鱼4个生长性状———体质量、体长、体高和头长进行关联分析,结果表明:C792T位点TT型个体的体质量、体长、体高和头长均值高于CT型和CC型个体的生长性状指标值,但未达到显著水平(P>0.05);G851A位点GG型个体的体质量、体长、体高和头长均值高于GA型和AA型个体的生长性状指标值,且GG型个体的体长和头长均值与GA型和AA型个体均存在显著差异(P<0.05)。将2个SNPs位点不同基因型组合成6种双倍型,关联分析结果表明,双倍型D3(TTC792T-GGG851A)个体的体质量均值最高,D6型(CCC792T-AAG851A)个体的体质量均值最低,且二者在体长、体高、头长均值间存在显著差异(P<0.05)。推测C792T位点TT型为有利基因型;G851A位点GG型为有利基因型,AA型为不利基因型。本研究结果为草鱼分子辅助育种提供了候选标记,为加快草鱼育种进程奠定了基础。

载脂蛋白A-I结构及其功能

载脂蛋白A-I(apolipoprotein A-1,ApoA-I)是高密度脂蛋白的重要组成成分,高密度脂蛋白对于冠心病有重要的保护作用。盘状高密度脂蛋白或者ApoA-I是体内胆固醇逆向转运过程的关键因子,而游离的ApoA-I是胆固醇和磷脂的受体,因此,了解其结构对于研究其功能显得尤其重要。本文对ApoA-I单体的结构、未结合脂质,以及结合磷脂后的构象及其相关功能作了综述。

晚期非小细胞肺癌患者血清载脂蛋白A-I水平及其临床意义分析

目的探讨血清载脂蛋白A-I（Apo A-I）与晚期非小细胞肺癌（NSCLC）患者临床病理特征的关系及其对患者预后的影响。方法回顾性分析2009年1月至2014年12月第二军医大学附属长海医院经病理组织学诊断的117例ⅢB~Ⅳ期NSCLC患者的临床资料,以治疗前Apo A-I基线值的中位数为截点分为高、低两组,分析Apo A-I水平与患者临床病理特征的关系,单因素及多因素生存分析评价Apo A-I对预后的影响。结果低于治疗前Apo A-I基线值组（≤1.2 g/L）为50例（42.7%）,高于治疗前Apo A-I基线值组（〉1.2 g/L）为67例（57.3%）;治疗前Apo A-I基线值与肿瘤直径、TNM分期、治疗前C反应蛋白值、血白蛋白及ECOG PS评分均有关（P〈0.05）。低于治疗前Apo A-I基线值组和高于治疗前Apo A-I基线值组患者的中位生存期（OS）分别为10.1个月和15.1个月,差异有统计学意义（P〈0.05）。单因素分析显示,吸烟指数、治疗前C反应蛋白值、血白蛋白、临床分期、淋巴结转移、ECOG PS评分及治疗前Apo A-I基线值均为影响患者预后的因素。Cox回归多因素分析显示,治疗前C反应蛋白值、临床分期、ECOG PS评分及治疗前Apo A-I基线值为影响患者预后的独立危险因素。结论血清Apo A-I水平低提示晚期NSCLC患者预后不良,Apo A-I可能是晚期NSCLC潜在的生物学标志物。

载脂蛋白A-I模拟肽D4F通过抑制caspase-12减轻氧化低密度脂蛋白诱导的巨噬细胞凋亡

目的:探讨载脂蛋白A-I(apolipoprotein A-I,Apo A-I)模拟肽D4F对氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导的巨噬细胞凋亡和内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)凋亡途径关键分子caspase-12的影响,并阐明其可能的分子机制。方法:体外培养RAW264.7巨噬细胞,给予12.5、25和50 mg/L D4F、5 mmol/L ERS抑制剂4-苯丁酸(4-phenylbutyric acid,PBA)或5μmol/L二亚苯基碘鎓(diphenyleneiodonium,DPI)预处理1 h后,再加入100 mg/L ox-LDL或4 mg/L ERS诱导剂衣霉素(tunicamycin,TM)继续培养24 h。MTT法检测细胞活力;TUNEL法检测细胞凋亡情况;试剂盒测定细胞内丙二醛(malondialdehyde,MDA)和活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,以及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)氧化酶活性;Western blot法检测caspase-12的表达变化。结果:与ERS抑制剂PBA相似,D4F可抑制ox-LDL或TM所致的巨噬细胞活力降低和凋亡,且呈浓度依赖性(P<0.05)。与氧化应激抑制剂DPI相似,D4F显著抑制ox-LDL诱导的氧化应激反应,表现为ROS和MDA生成减少(P<0.01)、SOD活性增加以及NADPH氧化酶活性降低(P<0.05);与PBA和DPI相似,D4F可减轻ox-LDL诱导的巨噬细胞caspase-12活化,且呈浓度依赖性(P<0.05);另外,D4F还可抑制TM诱导的caspase-12活化(P<0.05)。结论:D4F能够抑制ox-LDL诱导的巨噬细胞凋亡,其机制至少部分是通过减轻氧化应激继而抑制caspase-12活化实现的。

载脂蛋白A-I模拟肽D-4F对巨噬细胞源性泡沫细胞清道夫受体A1的抑制作用

目的:研究载脂蛋白A-I模拟肽D-4F对氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,oxLDL)所诱导的巨噬细胞源性泡沫细胞清道夫受体A1(scavenger receptor A1,SR-A1)的抑制作用及其机制。方法:体外培养RAW264.7巨噬细胞,给予不同浓度的D-4F(12.5、25和50 mg/L)、紊乱模拟肽sD-4F(50 mmol/L)处理1h或者5 mmol/L内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)抑制剂4-苯丁酸处理30 min后,再加入ox-LDL(100 mg/L)继续培养12 h。另外培养巨噬细胞给予50 mg/L D-4F或sD-4F处理1 h,再加入2 mg/L ERS诱导剂衣霉素(tunicamycin,TM)处理4 h。MTT法检测细胞活力;试剂盒检测细胞内总胆固醇含量;分别采用免疫印迹法和实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)技术检测SR-A1和ERS标志分子葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)蛋白和mRNA表达变化;采用多功能酶标仪检测DiI-ox-LDL摄取情况。结果:D-4F明显减轻ox-LDL所诱导的巨噬细胞损伤和细胞内的胆固醇蓄积。ox-LDL可显著上调SR-A1和GRP78表达,而D-4F对上述变化具有明显抑制作用,且呈浓度依赖性。D-4F显著抑制TM所诱导的SR-A1和GRP78蛋白水平以及巨噬细胞对ox-LDL的摄取。结论:D-4F可通过抑制SR-A1表达减轻ox-LDL所诱导的巨噬细胞内胆固醇蓄积和细胞损伤,其机制可能与抑制GRP78介导的ERS信号途径有关。

非高密度脂蛋白胆固醇与载脂蛋白A-I比值与冠状动脉慢血流相关性分析

目的探讨非高密度脂蛋白胆固醇与载脂蛋白A-I比值对冠状动脉慢血流的影响。方法选取2019年8月至2021年8月我院行冠状动脉造影(coronary angiography,CAG)检查的217例拟诊冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病,coronary atherosclerotic heart disease,CHD)患者作为研究对象,其中冠状动脉慢血流(coronary slow flow,CSF)组65例,非CSF组87例,CHD组69例,采用校正的TIMI帧数计法(corrected TIMI frame count,CTFC)评价冠状动脉血流指标,分析患者一般资料、血生化指标、非高密度脂蛋白胆固醇与载脂蛋白A-I比值(Non-HDL-C/apoA-I)与CSF之间的关系及Non-HDL-C/apoA-I对CSF的影响。结果CSF组,非CSF组以及CHD组之间的年龄、体重指数(BMI)、高血压患病率及血压水平、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、空腹血糖(FPG)、脑钠肽(BNP)、左心室射血分数(LVEF)、左心室舒张末期内径(LVDD)、左室收缩末期内径(LVSD)等方面差异无统计学意义,而在性别、吸烟史以及合并糖尿病病史、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、同型半胱氨酸(Hcy)、高敏C反应蛋白(Hs-CRP)、E/A以及Non-HDL-C/apoA-I比值等指标之间差异有统计学意义(P<0.05)。通过对患者CAG影像学资料统计分析发现,CSF累及血管数中,24例(39.3%)累及1支冠状动脉血管,16例(26.2%)累及2支冠状动脉血管,21例(34.5%)累及3支冠状动脉血管。进一步相关性分析显示,Non-HDL-C/apoA-I与累及的冠状动脉血管数以及平均CTFC呈正相关。Logistic回归分析结果表明,Non-HDL-C/apoA-I是CSF的重要危险因素。结论除了传统的危险因素,Non-HDL-C/apoA-I比值与CSF患者CTFC呈正相关,是CSF的重要危险因素。

载脂蛋白A-I对树突状细胞表型及功能影响

目的:探讨载脂蛋白A-I(ApoA-I)对人外周血树突状细胞(PBDC)及体外培养的单个核诱导的树突状细胞(MD-DC)的影响及其机制。方法:采用免疫磁珠法,直接分离PB-DC或通过GM-CSF,IL-4诱导生成MDDC,DC经ApoA-I,LPS或TNF-α刺激后,用流式细胞技术(FCM)检测树突状细胞表面协同刺激分子表达的变化及细胞的吞噬能力;酶联免疫吸附法(ELISA)检测DC分泌的细胞因子;CFSE法检测经刺激后DC对T细胞增殖的影响。结果:分离高纯度PBDC,并成功诱导生成未成熟MDDC;经FCM检测,ApoA-I刺激后的PBDC和MDDC膜表面CD83分子表达上调,同时MDDC表面的CD40、CD86及MHC-Ⅱ分子的表达均增强;吞噬能力减弱;IL-12和TNF-α的分泌增加;并且可以诱导Th细胞的增殖。结论:在体外ApoA-I可以诱导PBDC和MDDC的成熟、活化,刺激其分泌细胞因子,发挥其免疫应答中抗原呈递,促进Th分化的作用;通过该作用ApoA-I可能参与了动脉粥样硬化的发生,发展中的免疫应答。

载脂蛋白A-I基因启动子区域G→A置换对血浆HDL水平的影响

采用ＰＣＲ扩增法和限制性片段长度多态性分析法，对１１５例正常人和１１８例冠心病患者的载脂蛋白Ａ－Ｉ基因启动子区域－７８ｂｐ位点腺嘌呤与鸟嘌呤置换进行检测，并观察此位点基因变异对血浆ＨＤＬ－ｃｈ和ａｐｏＡ－Ｉ含量的影响。结果显示，血浆 ＨＤＬ－ｃｈ和 ａｐｏＡ－Ｉ含量在三种基因型中无显著性差异（Ｐ＞０．０５），基因型在正常 ＨＤＬ－ｃｈ和低ＨＤＬ－ｃｈ水平中的分布差异亦无显著性（Ｐ＞０．０５）。结论：ａｐｏＡ－Ｉ基因启动子部位－７８ｂｐ位点基因变异不影响血浆ＨＤＬ含量，Ａ等位基因与升高的ＨＤＬ水平无相关性。

人载脂蛋白A-I表达上调剂的发现与活性研究

目的筛选上调人载脂蛋白A-I(ApoA-I)基因表达的新型活性化合物,并在表达和功能水平对其作用进行研究。方法利用人ApoA-I基因表达上调剂筛选模型对化合物库进行筛选;对发现的活性化合物在ApoA-I启动子水平进行量效关系研究;利用实时荧光定量RT-PCR检测ApoA-I mRNA的表达水平;利用Western blot、ELISA和流式细胞技术检测ApoA-I的蛋白表达;利用胆固醇流出试验检测ApoA-I介导的巨噬细胞胆固醇外流的情况。结果从20 000样次化合物筛选中得到活性化合物5238B-69,在一定浓度范围内存在转录调控活性的量-效关系,当化合物浓度为0.30μg/ml时,上调ApoA-I表达活性达到最高值(408%),EC50为0.01μg/ml。5238B-69能显著上调HepG2细胞中ApoA-I mRNA的水平;同时,Western blot结果显示5238B-69能增加HepG2细胞ApoA-I蛋白的表达。ELISA结果显示,与对照相比,5238B-69作用48 h时,胞外ApoA-I水平增加了48%,流式细胞检测表明,5238B-69作用24 h后,胞内ApoA-I蛋白水平增加了21.4%。功能分析试验显示,5238B-69作用HepG2细胞上调生成的ApoA-I,能促进巨噬细胞RAW264.7内[3H]标记的胆固醇的流出。结论得到一个具有上调ApoA-I表达的活性化合物,在提高ApoA-I表达水平和生物学功能方面均有明显的效果。

载脂蛋白A-I基因多态性与胆固醇合成逆转关系的研究进展

载脂蛋白A-I(ApoA-I)是载脂蛋白A家族中最早发现的蛋白,在脂质代谢过程中具有重要作用,主要参与胆固醇的合成及转运。ApoA-I与高脂血症及动脉粥样硬化的发生息息相关,临床上已经将血浆ApoA-I/ApoB作为高脂血症的指标之一。本文就ApoA-I基因多态性及其对胆固醇合成逆转(RCT)关系的研究进展进行综述。

血浆C反应蛋白和载脂蛋白A-I与冠状动脉病变的相关性研究

目的探讨冠心病患者血浆C反应蛋白(CRP)和载脂蛋白A-I(ApoA-I)水平与冠状动脉病变的相关性。方法 91例经冠状动脉造影确诊的冠心病患者(冠心病组)。根据冠状动脉病变支数分为单支病变亚组(35例)、双支病变亚组(36例)和多支病变亚组(20例);另选43例正常健康者作为对照组。分别检测入选人群的血浆CRP和ApoA-I水平。结果①与对照组比较,冠心病组CRP[单支病变组:(8±5)mg/L;双支病变组:(10±5)mg/L;多支病变组:(10±5)mg/L];水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);血浆ApoA-I[单支病变组:(1.33±0.33)g/L;双支病变组:(1.26±0.32)g/L;多支病变组:1.20±0.31g/L];水平明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。②冠心病组各亚组间比较,血浆CRP水平随冠状动脉病变支数的增加而升高,血浆ApoA-I水平在冠状动脉病变支数少的较低。各亚组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论血浆CRP和ApoA-I水平在冠心病患者中明显区别,并与冠状动脉病变程度密切相关,提示上述指标可能共同参与或介导了动脉粥样硬化的形成,并可用于预测动脉粥样硬化的严重程度。

视网膜下液载脂蛋白A-I的测定及临床意义

目的测定视网膜下液（ＳＲＦ）载脂蛋白ＡＩ（ａＰｏＡＩ）的含量，探讨其临床意义。方法采用单扩散法及酶法分别测定孔源性视网膜脱离（ＲＤ）病人视网膜下液及血液中ａＰｏＡＩ，ＣＨ，ＴＧ。结果ＳＲＦ中ａＰｏＡＩ含量与ＲＤ的范围密切相关，也与时间有关。ＳＲＦ中ａＰｏＡＩ、ＣＨ、ＴＧ与血液中ａＰｏＡＩ、ＣＨ、ＴＧ含量不相关。结论ａＰｏＡＩ与孔源性ＲＤ的发生、发展过程有关。