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糖基工程酵母表面呈现抗体库的构建及抗真菌β甘露糖型抗体的筛选
被引量:
1
1
作者
房泽轩
刘波
+2 位作者
巩新
唱韶红
吴军
《生物技术通讯》
CAS
2016年第3期326-330,370,共6页
目的:通过构建糖基工程酵母表面呈现免疫抗体库,筛选与毕赤酵母表达的禽流感血凝素HA7结合的特异性抗体。方法:利用糖基工程毕赤酵母细胞膜锚定蛋白Sed将人Ig G的Fc段锚定在酵母表面,然后用毕赤酵母表达的HA7免疫小鼠,从小鼠脾脏细胞中...
目的:通过构建糖基工程酵母表面呈现免疫抗体库,筛选与毕赤酵母表达的禽流感血凝素HA7结合的特异性抗体。方法:利用糖基工程毕赤酵母细胞膜锚定蛋白Sed将人Ig G的Fc段锚定在酵母表面,然后用毕赤酵母表达的HA7免疫小鼠,从小鼠脾脏细胞中扩增抗体轻重链可变区基因构建抗体转化锚定了Fc的糖基工程酵母,构建表面展示免疫抗体库,通过免疫磁珠法筛选与毕赤酵母表达的HA7特异性结合的抗体表达酵母,分析筛选该抗体的特异性结合靶点。结果:构建了多态性良好的抗体表达质粒库,转化糖基工程酵母后筛选得到特异性结合HA7的抗体呈现酵母,Western印迹分析发现该抗体只与糖基化的HA7结合而不与切除糖链后的HA7结合,说明抗体结合区域在HA7的糖链上,进一步实验发现该抗体不与α甘露糖型和哺乳动物复杂型糖型结合,通过β甘露糖苷酶切研究发现抗体结合靶点为酵母表达HA7糖链上的β甘露糖。结论:利用糖基工程酵母构建抗体库,筛选得获得了抗真菌β甘露糖的抗体,动物实验发现抗体具有中和活性。
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关键词
糖基工程酵母抗体库
免疫磁珠筛选
β甘露
糖
抗体
中和活性
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职称材料
题名
糖基工程酵母表面呈现抗体库的构建及抗真菌β甘露糖型抗体的筛选
被引量:
1
1
作者
房泽轩
刘波
巩新
唱韶红
吴军
机构
军事医学科学院生物工程研究所
出处
《生物技术通讯》
CAS
2016年第3期326-330,370,共6页
基金
国家自然科学基金(31200082)
北京市自然科学基金(7152112)
文摘
目的:通过构建糖基工程酵母表面呈现免疫抗体库,筛选与毕赤酵母表达的禽流感血凝素HA7结合的特异性抗体。方法:利用糖基工程毕赤酵母细胞膜锚定蛋白Sed将人Ig G的Fc段锚定在酵母表面,然后用毕赤酵母表达的HA7免疫小鼠,从小鼠脾脏细胞中扩增抗体轻重链可变区基因构建抗体转化锚定了Fc的糖基工程酵母,构建表面展示免疫抗体库,通过免疫磁珠法筛选与毕赤酵母表达的HA7特异性结合的抗体表达酵母,分析筛选该抗体的特异性结合靶点。结果:构建了多态性良好的抗体表达质粒库,转化糖基工程酵母后筛选得到特异性结合HA7的抗体呈现酵母,Western印迹分析发现该抗体只与糖基化的HA7结合而不与切除糖链后的HA7结合,说明抗体结合区域在HA7的糖链上,进一步实验发现该抗体不与α甘露糖型和哺乳动物复杂型糖型结合,通过β甘露糖苷酶切研究发现抗体结合靶点为酵母表达HA7糖链上的β甘露糖。结论:利用糖基工程酵母构建抗体库,筛选得获得了抗真菌β甘露糖的抗体,动物实验发现抗体具有中和活性。
关键词
糖基工程酵母抗体库
免疫磁珠筛选
β甘露
糖
抗体
中和活性
Keywords
glyco-engineered Pichia pastoris antibody library
immunomagnetic beads
β-mannose antibody
neutralization activity
分类号
R392.1 [医药卫生—免疫学]
Q78 [生物学—分子生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
糖基工程酵母表面呈现抗体库的构建及抗真菌β甘露糖型抗体的筛选
房泽轩
刘波
巩新
唱韶红
吴军
《生物技术通讯》
CAS
2016
1
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