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腾冲嗜热厌氧杆菌6-磷酸-β-葡萄糖苷酶的表达与结晶及其功能鉴定
被引量:
6
1
作者
尹捷
刘一苇
+4 位作者
李洁
马延和
向华
严景华
高福
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第10期916-924,共9页
6-磷酸-β-葡萄糖苷酶(PbgL,EC3.2.1.86)催化由磷酸烯醇式丙酮酸-糖磷酸转移酶系统(PEP-PTS)转运入胞内的某些磷酸化二糖水解.一段来自腾冲嗜热厌氧杆菌(Thermoanaerobacter tengcongensis)编码PbgL(436个氨基酸残基)的开放阅读框(ORF T...
6-磷酸-β-葡萄糖苷酶(PbgL,EC3.2.1.86)催化由磷酸烯醇式丙酮酸-糖磷酸转移酶系统(PEP-PTS)转运入胞内的某些磷酸化二糖水解.一段来自腾冲嗜热厌氧杆菌(Thermoanaerobacter tengcongensis)编码PbgL(436个氨基酸残基)的开放阅读框(ORF TTE0337)被成功克隆,并在大肠杆菌BL21(Escherichia coli BL21)中有活性地表达.序列分析显示,该6-磷酸-β-葡萄糖苷酶属于糖基水解酶家族4(GH4),与枯草杆菌(Bacillus subtilis)的LicH,海栖热袍菌(Thermotoga Maritima)的BglT的一致性分别为62%和40%.纯化后的重组PbgL(rPbgL)经SDS-PAGE分析,为1条分子量约50kD的蛋白条带,与推测的分子量大小一致.该酶需要Mn2+、NAD+和还原剂为辅因子,能专一性地水解pNPβG6P,并在85℃达到最高酶活性.Western免疫印迹实验,利用针对rPbgL的多克隆抗体血清,能从腾冲嗜热厌氧杆菌胞内检测到PbgL的表达.此外,rPbgL的蛋白晶体已被筛选获得,并收集到2.4分辨率的衍射数据.采用分子置换法的结构解析目前仍在进行中.
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关键词
6-磷酸-β-葡萄
糖
苷酶(PbgL)
糖
基
水解酶
家族
4(
gh
4)
蛋白结晶
耐热性
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职称材料
真核生物α-甘露糖苷酶生物信息学分析
被引量:
1
2
作者
王铎
孙春玉
+1 位作者
陈静
王义
《生命科学研究》
CAS
CSCD
2018年第3期173-183,共11页
α-甘露糖苷酶(α-mannosidase,α-Man)是真核生物蛋白质N-聚糖修饰的关键酶,其对甘露糖残基的修剪过程是糖蛋白N-糖链复杂化的必要步骤,对蛋白质的合成及正确构象的折叠起决定性作用。根据α-Man的功能特异性,其一般被分为糖基水解酶3...
α-甘露糖苷酶(α-mannosidase,α-Man)是真核生物蛋白质N-聚糖修饰的关键酶,其对甘露糖残基的修剪过程是糖蛋白N-糖链复杂化的必要步骤,对蛋白质的合成及正确构象的折叠起决定性作用。根据α-Man的功能特异性,其一般被分为糖基水解酶38家族(glycosyl hydrolase 38 family,GH38)、糖基水解酶47家族(glycosyl hydrolase 47 family,GH47)两个家族。利用生物信息学分析GH38家族与GH47家族在进化上的关系和氨基酸序列保守性以及不同物种内质网Ⅰ型甘露糖苷酶(endoplasmic reticulum ManⅠ,ERManⅠ)的理化性质、结构特点、功能特征后发现,GH47家族比GH38家族在进化上更早且保守性更好;α-Man基因在不同物种中长度存在明显差异,物种越高等基因平均长度越长;真核生物ERManⅠ均为亲水性不稳定蛋白质,其氨基酸序列存在跨膜螺旋并含有信号肽,且蛋白质空间构像为桶状,包含Ca^(2+)结合位点。文中对α-Man的生物信息学分析可以为研究α-Man在生命过程中的作用提供重要的信息。
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关键词
α-甘露
糖
苷酶(α-Man)
糖
基
水解酶
38
家族
(
gh
38)
糖
基
水解酶
47
家族
(
gh
47
)
内质网Ⅰ型α-甘露
糖
苷酶(ERManⅠ)
生物信息学
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职称材料
题名
腾冲嗜热厌氧杆菌6-磷酸-β-葡萄糖苷酶的表达与结晶及其功能鉴定
被引量:
6
1
作者
尹捷
刘一苇
李洁
马延和
向华
严景华
高福
机构
中国科学院微生物研究所
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第10期916-924,共9页
基金
中国科学院知识创新工程创新性项目资助(No.KSCX-SW-33)~~
文摘
6-磷酸-β-葡萄糖苷酶(PbgL,EC3.2.1.86)催化由磷酸烯醇式丙酮酸-糖磷酸转移酶系统(PEP-PTS)转运入胞内的某些磷酸化二糖水解.一段来自腾冲嗜热厌氧杆菌(Thermoanaerobacter tengcongensis)编码PbgL(436个氨基酸残基)的开放阅读框(ORF TTE0337)被成功克隆,并在大肠杆菌BL21(Escherichia coli BL21)中有活性地表达.序列分析显示,该6-磷酸-β-葡萄糖苷酶属于糖基水解酶家族4(GH4),与枯草杆菌(Bacillus subtilis)的LicH,海栖热袍菌(Thermotoga Maritima)的BglT的一致性分别为62%和40%.纯化后的重组PbgL(rPbgL)经SDS-PAGE分析,为1条分子量约50kD的蛋白条带,与推测的分子量大小一致.该酶需要Mn2+、NAD+和还原剂为辅因子,能专一性地水解pNPβG6P,并在85℃达到最高酶活性.Western免疫印迹实验,利用针对rPbgL的多克隆抗体血清,能从腾冲嗜热厌氧杆菌胞内检测到PbgL的表达.此外,rPbgL的蛋白晶体已被筛选获得,并收集到2.4分辨率的衍射数据.采用分子置换法的结构解析目前仍在进行中.
关键词
6-磷酸-β-葡萄
糖
苷酶(PbgL)
糖
基
水解酶
家族
4(
gh
4)
蛋白结晶
耐热性
Keywords
6-phospho-β-glucosidase(PbgL)
glycoside hydrolase family 4
crystallization
thermostable
分类号
Q71 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
真核生物α-甘露糖苷酶生物信息学分析
被引量:
1
2
作者
王铎
孙春玉
陈静
王义
机构
吉林农业大学生命科学学院
出处
《生命科学研究》
CAS
CSCD
2018年第3期173-183,共11页
基金
国家高技术研究发展计划(863计划)项目(2013AA102604-3)
吉林省发改委-吉林省省级产业创新专项(2016C04)
文摘
α-甘露糖苷酶(α-mannosidase,α-Man)是真核生物蛋白质N-聚糖修饰的关键酶,其对甘露糖残基的修剪过程是糖蛋白N-糖链复杂化的必要步骤,对蛋白质的合成及正确构象的折叠起决定性作用。根据α-Man的功能特异性,其一般被分为糖基水解酶38家族(glycosyl hydrolase 38 family,GH38)、糖基水解酶47家族(glycosyl hydrolase 47 family,GH47)两个家族。利用生物信息学分析GH38家族与GH47家族在进化上的关系和氨基酸序列保守性以及不同物种内质网Ⅰ型甘露糖苷酶(endoplasmic reticulum ManⅠ,ERManⅠ)的理化性质、结构特点、功能特征后发现,GH47家族比GH38家族在进化上更早且保守性更好;α-Man基因在不同物种中长度存在明显差异,物种越高等基因平均长度越长;真核生物ERManⅠ均为亲水性不稳定蛋白质,其氨基酸序列存在跨膜螺旋并含有信号肽,且蛋白质空间构像为桶状,包含Ca^(2+)结合位点。文中对α-Man的生物信息学分析可以为研究α-Man在生命过程中的作用提供重要的信息。
关键词
α-甘露
糖
苷酶(α-Man)
糖
基
水解酶
38
家族
(
gh
38)
糖
基
水解酶
47
家族
(
gh
47
)
内质网Ⅰ型α-甘露
糖
苷酶(ERManⅠ)
生物信息学
Keywords
α-mannosidase (α-Man)
glycosyl hydrolase 38 family (
gh
38)
glycosyl hydrolase
47
family(
gh
47
)
endoplasmic reticulum mannosidase Ⅰ (ERMan Ⅰ)
bioinformatics
分类号
Q26 [生物学—细胞生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
腾冲嗜热厌氧杆菌6-磷酸-β-葡萄糖苷酶的表达与结晶及其功能鉴定
尹捷
刘一苇
李洁
马延和
向华
严景华
高福
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008
6
下载PDF
职称材料
2
真核生物α-甘露糖苷酶生物信息学分析
王铎
孙春玉
陈静
王义
《生命科学研究》
CAS
CSCD
2018
1
下载PDF
职称材料
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