白藜芦醇调控磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B通路对结肠癌细胞增殖凋亡的影响

目的探究白藜芦醇调控磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路对结肠癌细胞增殖、凋亡的影响。方法体外培养人结肠癌SW480细胞,噻唑蓝(MTT)法检测人结肠癌SW480细胞增殖,将细胞分成对照组、低剂量白藜芦醇组(20μmol/L)、中剂量白藜芦醇组(40μmol/L)及高剂量白藜芦醇组(80μmol/L)。细胞划痕实验法测定人结肠癌SW480细胞迁移能力,Transwell小室检测人结肠癌SW480细胞侵袭能力,流式细胞仪检测人结肠癌SW480细胞凋亡,吖啶橙染色法检测人结肠癌SW480细胞自噬,实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组细胞B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA水平,蛋白质免疫印迹法检测各组细胞PI3K-Akt信号通路。结果与对照组比较,20、40和80μmol/L白藜芦醇导致细胞存活率降低(P<0.05),且不同浓度白藜芦醇培养48 h最为适宜。与对照组对比,白藜芦醇不同剂量组中,细胞迁移能力减弱(P<0.05),且细胞的迁移率随着白藜芦醇浓度的提高逐渐减少。在对照组的基础上经白藜芦醇处理的实验组细胞凋亡率增加(P<0.05)。细胞凋亡率随白藜芦醇浓度增加而逐步提高(P<0.05)。在实验组中,与对照组比较,细胞在接受白藜芦醇处理后细胞自噬数量增加,且随着白藜芦醇浓度的提高,细胞自噬数量逐步增加(P<0.05)。相较于对照组,各剂量的白藜芦醇组Bcl-2下降、Bax与Caspase-3增加。相较于对照组,不同剂量白藜芦醇组显示出PI3K和p-Akt蛋白下降;不同剂量白藜芦醇组Akt蛋白差异无统计学意义(P>0.05)。结论白藜芦醇可通过介导PI3K/Akt信号通路促进结肠癌细胞凋亡,降低其增殖能力,减弱细胞迁移和侵袭能力,以控制结肠癌的侵袭和恶化。

磷脂酰肌醇转移蛋白质家族的研究进展

脂类的单体转移是由一类蛋白质来执行的,这组蛋白质把脂类结合到疏水腔,从而使脂类避开了含水环境.其中的这样一组蛋白质是磷脂酰肌醇转移蛋白质家族(PITPs),能结合磷脂酰肌醇和磷脂酰胆碱,把它们从一个膜区转移到另一膜区.PITPs是在单细胞和多细胞组织中发现的,但在细菌中没有发现.在鼠和人类中,人们发现负责脂类转移的PITP结构域有五个蛋白,按照序列分成两类:类型Ⅰ PITPs由两个家族成员α,β构成,它们是小蛋白35 kDa,有一个PITP结构域,可以普遍表达;类型ⅡA PITPs(RdgB αⅠ和Ⅱ)是很大的蛋白质,有另外的结构域,把蛋白质靶向膜,仅能结合脂类,但不能介导转移.类型ⅡB PITP(RdgB β)与类型Ⅰ在大小(38kDa)上相似,也是普遍表达的.类型ⅢPITPs,以Sec14p家族为代表,是在酵母和植物中发现的,但是在序列和结构上与类型Ⅰ和类型ⅡPITPs相似.讨论了PITP蛋白是被动转运蛋白还是调节蛋白,在行使肌醇脂类和膜转换的专门的生物功能时,能否把转运和结舍性质偶连起来.

人糖基磷脂酰肌醇(GPI)-B7-1真核表达载体的构建及表达

目的在仓鼠卵巢细胞CHO细胞中高效表达糖基磷脂酰肌醇GPI-B7-1(B7-1即CD80)融合蛋白,获得大量融合蛋白以研究GPI-B7-1在肿瘤治疗中的应用潜力。方法构建真核表达载体pc31/GPI-B7-1,利用脂质体lipofectamine2000将其转染CHO细胞,G418加压筛选抗性克隆,流式细胞仪检测细胞膜上GPI-B7-1融合蛋白的表达情况,SDS-PAGE、Westernblot分析鉴定其免疫活性。结果真核表达载体转染CHO细胞经G418筛选后,流式细胞分析证实为GPI锚定蛋白,SDS-PAGE在60kD左右蛋白表达量明显高于对照组,在Westernblot在60kD左右有一条强的棕色条带,说明GPI-B7-1在CHO中得到表达。结论在CHO细胞中高效表达GPI-B7-1融合蛋白,可获得大量融合蛋白,对进一步研究GPI-B7-1在肿瘤治疗中的应用打下基础。

癌胚抗原磷脂酰肌醇蛋白聚糖3单克隆抗体的制备及应用

目的制备抗癌胚抗原磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)单克隆抗体,并初步应用。方法利用PCR方法,将GPC3基因重组到原核表达载体pET16b中,在大肠杆菌中表达,纯化后的GPC3融合蛋白对Balb/c小鼠脾内包埋免疫,取小鼠脾细胞与Sp2/0细胞进行细胞融合,应用间接酶联免疫吸附测定(ELISA)和Western blot法筛选及鉴定分泌特异性抗GPC3单克隆抗体的杂交瘤细胞株,间接免疫荧光检测肝癌细胞中GPC3表达。结果成功构建了GPC3原核表达载体,在大肠杆菌中的诱导表达重组GPC3蛋白。应用单克隆抗体杂交瘤技术成功制备1株稳定分泌抗GPC3单克隆抗体的杂交瘤细胞株,通过Western blot鉴定具有高度的特异性,间接免疫荧光实验显示单克隆抗体能与HepG2细胞内GPC3特异性结合。结论成功制备出特异性抗人GPC3单克隆抗体。

人IL-12基因与糖基化磷脂酰肌醇信号肽序列融合基因真核双表达质粒的构建及表达

目的将糖基化磷脂酰肌醇(GPI)信号肽序列与人白细胞介素12(hIL-12)基因拼接成融合基因,构建该融合基因的真核双表达质粒,并检测融合基因在肾癌细胞的表达。方法将人胎盘碱性磷酸酶-1(hPLAP-1)C末端信号肽序列与hIL-12的P40亚基基因进行拼接,亚克隆至真核双表达质粒pBudCE4.1,再将IL-12的P35亚基基因亚克隆至pBudCE4.1的另一个多克隆位点。酶切及测序鉴定质粒。将质粒转染肾癌细胞株RC-2,激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测其表达。结果分别成功扩增出IL-12P40基因987bp和P35基因762bp,合成hPLAP-1C末端信号肽序列117bp,并将GPI信号肽序列与P40基因成功拼接,成功构建了真核表达载体pBudCE4.1/IL-12A/IL-12B-GPI(命名为pBIG),经酶切及测序鉴定正确。激光共聚焦显微镜观察带锚定蛋白的IL-12在肾癌细胞膜上高表达,并能被磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C洗脱。结论真核双表达载体pBIG的构建及表达,为进一步制备肾癌疫苗奠定了基础。

外周血B细胞上糖肌醇磷脂连接蛋白的表达在阵发性睡眠性血红蛋白尿症诊断中的应用

目的评价外周血B细胞上糖肌醇磷脂(glycosylphosphatidylinositol,GPI)连接蛋白之一CD59的表达能否作为诊断阵发性睡眠性血红蛋白尿症(paroxysmalnocturnalhemoglobinuria,PNH)的指标。方法采用流式细胞术双色免疫荧光分析法,结合B细胞特异性抗体CD20,分析92例外周血标本B细胞和中性粒细胞上CD59的表达,并通过临床指标评价方法,分析该指标临床应用的可行性。结果健康人B细胞上CD59均为完全阳性表达,表达率的参考范围为(96.3±1.2)%;PNH患者B细胞上CD59的表达率降低,均出现阴性或部分阳性病态细胞,病态细胞表达率为10.5%～92.3%;92.9%(26/28)非PNH贫血患者B细胞上CD59的表达均在正常参考范围内。该方法精密度的变异系数(coefficientvariation,CV)值小于4.4%,标本染色后无固定剂情况下可稳定保存24h,与常规检测CD59的方法(即中性粒细胞上CD59检测法)比较,PNH阳性和阴性检出符合率均高达100%。结论采用流式细胞术检测B细胞上CD59的表达具有简单、准确、重复性好的特点,可以成为诊断PNH的新指标。

GPI锚定蛋白前体C-端附着信号的疏水性决定其内质网相关蛋白质降解途径

目前,已知超过150种糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白(glycosylphosphatidylinositol anchored protein,GPI-anchored protein)在哺乳动物细胞中表达,并参与免疫识别、细胞通讯与信号转导等多种生理过程。当蛋白质无法被GPI修饰时,前体蛋白质通过内质网相关蛋白质降解(endoplasmic reticulum associated degradation,ERAD)途径降解。然而,GPI锚定蛋白ERAD的降解机制尚不清楚。为了探究GPI锚定蛋白前体的ERAD途径的具体机制,本研究敲除人胚胎肾细胞293细胞株(HEK293)的GPI转酰胺酶复合物亚基PIGS基因,进而敲除E3泛素连接酶HRD1和GP78基因,之后随机在PIGS-KO,PIGS-HRD1-KO和PIGS-GP78-KO过表达16种GPI锚定蛋白质(以亲本PIGS-KO细胞株作为对照组),Western印迹结果证明,GPI锚定蛋白前体在细胞株PIGS-HRD1-KO中的蛋白质积累量(I_(PHK))和PIGS-GP78-KO中的蛋白质积累量(I_(PGK))体现出明显的差异性,例如LYPD2的I_(PHK)是I_(PGK)的28倍,NEGR1的I_(PHK)是I_(PGK)的0.12倍,这说明GPI锚定蛋白前体的降解主要依赖于2种ERAD途径:ERAD-L和ERAD-M。且HRD1与GP78的2种E3泛素连接酶被选择性地用于GPI锚定蛋白前体的降解。朊病毒(prion)和CD59嵌合构建体表明,GPI前体蛋白C-端GPI附着信号决定了降解途径(朊病毒I_(PHK)/I_(PGK)由突变前的0.33改变为突变后的23.42。相反的是,突变前CD59的I_(PHK)/I_(PGK)是11.45,突变后变为2.81)。接着,通过对C-端附着信号疏水性的计算,我们发现,这种选择性差异由前体蛋白质C-端GPI附着信号疏水性的不同造成。本研究初步解释了未被GPI锚修饰的GPI锚定蛋白前体在ERAD中的降解机制。

磷脂酰肌醇3激酶-蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶途径与肿瘤的关系

磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)-蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(Akt)途径是细胞内重要的信号传导途径,在细胞增殖分化中起重要作用。PI3K-Akt途径的失调控对于多种肿瘤的发生是一种刺激信号,途径中任何激酶表达的异常都可能诱导肿瘤的发生。现综述PI3K-Akt途径中PI3K、Akt、磷脂酰肌醇依赖性蛋白激酶(PDK)、与张力蛋白同源的第10号染色体上丢失的磷酸酶基因 (PTEN)在肿瘤发生发展中的作用。

17β-雌二醇对子宫内膜癌细胞磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号传导通路的激活作用

目的 探讨 17β 雌二醇 (E2 )对子宫内膜癌细胞系Ishikawa细胞磷脂酰肌醇 3激酶 /蛋白激酶B(PI 3K/PKB)信号传导通路的激活作用以及PI 3K抑制剂对其的影响。方法 应用免疫印迹杂交技术 ,检测一定浓度 (1× 10 -6mol/L) 17β E2 作用于Ishikawa细胞不同时间 (分别为 0、5、15、30、6 0、12 0min)后和不同浓度 (分别为 0、1× 10 -10 、1× 10 -8、1× 10 -6、1× 10 -4mol/L) 17β E2 作用Ishikawa细胞一定时间 (30min)后PKB的活化情况 [以磷酸化PKB和总PKB比值 (p PKB/PKB)表示 ],以及用同法检测PI 3K抑制剂LY2 94 0 0 2对 17β E2 活化PKB的影响。结果 1× 10 -6mol/L 17β E2 作用于Ishikawa细胞 15min时 ,PKB的活化水平 (0 5 33± 0 0 2 9)已明显高于对照 (0 36 1± 0 0 2 9,P <0 0 5 ) ,30min时最明显 (0 6 6 6± 0 0 2 1,P <0 0 0 1) ,而且持续至少达 12 0min时 ;随着 17β E2 浓度 (分别为 1× 10 -10 、1×10 -8、1× 10 -6、1× 10 -4mol/L)的增加 ,PKB的活化水平逐渐增高 ,与对照比较 ,差异有显著性 (除 1×10 -10 mol/L外 ,P值分别为 >0 0 5、<0 0 5、<0 0 5、<0 0 0 1)。随着LY2 94 0 0 2作用浓度 (分别为 0 1、10、5 0、10 0 μmol/L)的增加 ,17β E2

油酸通过磷脂酰肌醇-3激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶和p38丝裂原活化蛋白激酶途径调节水通道蛋白3和9的表达

目的 研究油酸在非酒精性脂肪变性肝细胞模型中诱导水通道蛋白3 （AQP3）和AQP9表达改变的相关信号转导机制.方法 采用油酸干预人肝癌HepG2细胞构建非酒精性脂肪变性肝细胞模型,油红O染色及吸光度值测定分析其脂肪变性程度,通过实时定量聚合酶链反应与Western blot检测AQP3和AQP9表达改变情况；以常规培养的细胞为对照组,联合油酸及不同信号通路抑制剂诱导HepG2细胞,实时定量聚合酶链反应和Western blot方法检测AQP3和AQP9在非酒精性脂肪变性肝细胞模型中表达改变的相关信号分子机制.多组间数据比较采用单因素方差分析,两组间数据比较采用独立样本t检验. 结果 随着油酸刺激浓度的升高（0、250、500μmol/L）,肝细胞内脂肪变性程度增加,AQP3 mRNA表达逐渐下降,而AQP9 mRNA水平逐渐升高,油酸500μmol/L刺激下二者变化均最为明显,分别为0.47±0.18和1.57±0.21,与0 μmol/L组比较,差异均有统计学意义（t值分别为4.5450和3.0306,P值均＜0.05）；蛋白质水平检测结果与之一致.油酸联合磷脂酰肌醇-3激酶抑制剂LY294002处理后,AQP9 mRNA水平升高到4.55±0.62,与对照组的1.00±0.10、油酸单独干预组的2.43±0.53和LY294002单独干预组的1.90±0.16相比,差异均有统计学意义（t值分别为9.7909、4.5018和7.1683,P＜0.01或P＜ 0.05）.p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）抑制剂SB203580干预可使被油酸抑制的AQP3 mRNA水平恢复到与对照组相近水平（1.27±0.11）,AQP9 mRNA则从油酸明显上调的水平下降到0.38±0.09,与干预前相比,差异均有统计学意义（t值分别为5.7455和6.5727,P值均＜0.01）.细胞外信号调节激酶抑制剂PD98059和c-Jun N端激酶抑制SP600125干预对AQP3和AQP9的蛋白和基因水平均无明显作用.油酸诱导后,磷酸化丝/苏氨酸蛋白激酶蛋白相对表达水平从0.21±0.02下降到0.13±0.03,磷酸化p38蛋白相对表达水平从0.58±0.06升高到1.02±0.10,差异均有统计学意义（t值分别为3.8431和12.5289,P＜0.01或P＜0.05）.结论 油酸通过激活p38 MAPK信号通路下调AQP3的表达,而通过抑制磷脂酰肌醇-3激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶途径并激活p38MAPK途径刺激AQP9表达升高.

胰岛素信号通路磷脂酰肌醇-3激酶／丝氨酸苏氨酸蛋白激酶对海马神经元β-淀粉样前体蛋白裂解酶1表达的影响

目的通过胰岛素和磷脂酰肌醇-3激酶（P13K）抑制剂渥曼青霉素（wortmannin，WORT）对P13K／丝氨酸苏氨酸蛋白激酶（P13K／Akt）信号通路的激活和抑制作用，观察P13K／Akt信号通路对海马神经元β-淀粉样前体蛋白裂解酶1（BACEI）表达的影响。方法40只sD大鼠随机分为空白对照组、假手术组、胰岛素组和WORT组（每组10只），海马立体定向注射胰岛素和PDK抑制剂WORT。免疫组织化学和Westernblot法检测P13K／Akt信号传导相关蛋白以及BACEI的表达水平。结果注射胰岛素的海马P13K信号通路下游信号分子较对照组：Akt表达增加（0．952±O．060与0．835±0．029，t=4．9150，P=0．0001），Aktser473位点磷酸化（pAkt）水平上调（0．800±O．075与0．657±0．025，t：4．5598，P=0．0002），糖原合成激酶-3α（GSK-3α）磷酸化水平降低（0．604±0．062与0．726±0．041，t=3．5871，P=0．0018），而成熟的BACEl及其裂解产物p分泌酶C末端（母-CTF）表达下调。WORT组的P13K下游信号分子Akt、pAkt表达明显被抑制，磷酸化GSK-3仪表达增加，同时成熟的BACE1（1．004±0．096）和β-CTF（1．031±0．048）的表达较对照组（分别0．498±O．064，0．786±O．101）上调（分别t=11．5980，P=0．0000；t=4．2194，P=0．0004）。结论胰岛素信号通路P13K／Akt可以调节BACE1的表达和活性并参与阿尔茨海默病的发病机制。

胰岛素抵抗大鼠视黄醇结合蛋白4骨骼肌磷脂酰肌醇3激酶的表达及吡格列酮的干预作用

目的观察胰岛素抵抗（IR）大鼠体内视黄醇结合蛋白4（RBP4）、骨骼肌磷脂酰肌醇3激酶（P13K）和晚期氧化蛋白产物（AOPP）的水平，以及给予吡格列酮干预后其活性的变化，探讨RBP4与IR的关系及其可能的机制。方法将SPF级雄性Wistar大鼠35只随机分为2组，正常对照组（对照组）11只，饲以普通饲料；模型组24只，饲以高糖高脂饲料。模型组造模成功后再随机分为2个亚组，IR组和IR＋吡格列酮干预组（干预组），每组12只；IR组和干预组继续饲以高糖高脂饲料，干预组大鼠同时给予吡格列酮20mg·kg-1·d-1灌胃，持续8周。第16周末处死大鼠取血检测三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白（HDL—C）、低密度脂蛋白（LDL-C）及空腹血糖（FBG）、空腹胰岛素（FINS），计算胰岛素抵抗指数（HOME—IR）；酶联免疫吸附法（EuSA）检测血清RBP4水平，RT—PCR测定附睾脂肪组织RBP4表达；免疫组织化学染色检测骨骼肌P13K水平；紫外分光光度计法测定AOPP水平；并取大鼠腹腔内肠系膜、附睾、腹膜反折处的脂肪组织称质量，计算腹部脂肪含量与体质量的比值。结果（1）IR组大鼠体质量16周后明显增加，TG、LDL—C、FINS以及脂体比较对照组均明显升高，而HDL-C则明显降低；吡格列酮干预后，干预组体质量、TG、LDL—C、FINS以及脂体比较IR组有明显下降，HDL-C明显升高；（2）IR组大鼠血清及附睾脂肪组织RBP4水平和血清AOPP水平明显高于对照组，干预组水平明显降低；（3）IR组大鼠骨骼肌组织P13K表达水平明显低于对照组，吡格列酮干预其表达水平升高；（4）相关分析表明大鼠血清RBP4与FINS、脂体比、LDL-C呈正相关；与HDL-C、骨骼肌组织P13K水平呈负相关。结论（1）IR大鼠RBP4、AOPP水平升高，RBP4是致IR的脂肪细胞因子，并可引起机体脂代谢紊乱及氧化应激增强；（2）RBP4降低大鼠胰岛素敏感性可能与其削弱胰岛素信号转导作用有关；（3）吡格列酮可降低IR大鼠RBP4及血清AOPP水平，增加骨骼肌P13K表达，从而提高机体对胰岛素的敏感性。

磷脂酰肌醇蛋白聚糖3、热休克蛋白70和谷氨酰胺合成酶在肝细胞癌变中的表达及临床价值

目的探讨免疫组织化学套餐磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（GPC3）、热休克蛋白70（HSP70）和谷氨酰胺合成酶（GS）在肝细胞癌（HCC）诊断中的临床价值。方法应用免疫组织化学检测86例高分化HCC、100例低分化HCC、38例高级别异型增生结节（H-DN）、22例低级别异型增生结节（L—DN）、66例肝硬化结节、10例局灶性结节状增生（FNH）及22例正常肝组织中GPC3、HSP70和GS的表达情况。结果GPC3、HSP70和GS在HCC中的阳性表达率明显高于H．DN中的表达率（P〈0．05）。任何两个标志物的联合应用可提高高分化HCC的检出率，其中以GPC3和GS的联合应用最能提高诊断的敏感性和特异性，3个标志物联合应用时，检出率可达89．5％。结论GPC3、HSP70和GS3个标志物联合应用可进一步提高HCC诊断的可靠性。

缺血性脑损伤海马神经元磷酸肌醇系统的变化及其机制的探讨

采用四动脉闭塞全脑缺血模型，观察大鼠缺血３０ｍｉｎ再灌注２１ｄ不同时间中，外源性谷氨酸（Ｇｌｕ）对海马脑片磷脂酰肌醇（ＰＩ）代谢的影响和偶联该系统的Ｇ蛋白功能变化。结果显示，Ｇｌｕ（５００μｍｏｌ／Ｌ）对正常和缺血再灌注海马脑片肌醇磷酸（ＩＰ）生成均具明显的促进作用（Ｐ＜０．０１，ｎ＝９），其中以缺血再灌注后ＩＰ的升高为显著，并且这种Ｇｌｕ刺激的ＩＰ堆积效应随缺血再灌注时间的延长在２１ｄ中持续存在。与此同时，还观察到缺血再灌注２４ｈ至７ｄ中，海马神经元Ｇｌｕ受体密度（Ｂｍａｘ）显著下降（Ｐ＜０．０１，ｎ＝８），亲和力（Ｋｄ）无显著变化。提示脑缺血再灌注后Ｇｌｕ刺激的ＰＩ代谢增强是由于Ｇｌｕ受体与磷脂酶Ｃ（ＰＬＣ）间产生高反应所致。应用四氟化铝（ＡｌＦ＿４￣－）可得到与上述Ｇｌｕ刺激ＩＰ生成相同的结果，而氨甲酰胆碱（Ｃａｈ）和去甲肾上腺素（ＮＥ）对ＩＰ水平的作用不受脑缺血和再灌注的影响。表明缺血状态下的这种Ｇｌｕ与ＰＬＣ间的高反应可能是特异的，并通过偶联该系统的Ｇ蛋白功能变化介导。

磷脂酰肌醇3激酶抑制剂诱导猪卵巢颗粒细胞胰岛素抵抗的研究

目的观察磷脂酰肌醇3激酶（PI-3K）抑制剂——沃曼青霉素（wortmannin）诱导猪卵巢颗粒细胞胰岛素抵抗（IR）后，其信号传导通路中葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）、丝裂原激活蛋白激酶（MAPK）基因表达的变化。方法采用猪卵巢颗粒细胞体外培养，分别以浓度为0、1．0、1．5、3．0、5．0μmol／L的wortmannin作用48h后，以氚标记葡萄糖法及葡萄糖氧化酶法检测细胞的葡萄糖消耗量，以免疫荧光法分析GLUT4、MAPK蛋白定位表达情况，以RT-PCR方法对GLUT4、MAPK的mRNA进行半定量分析。结果浓度为1．5μmol／L的wortmannin降低细胞对葡萄糖的摄取量最高达40％（P〈0.05），残余葡萄糖含量增多约13．76％，出现明显的IR。免疫荧光法结果显示GLUT4、MAPK蛋白主要在细胞质表达。RT-PCR结果提示，GLUT4基因表达水平降低21．06％，MAPK表达水平升高56．43％。结论wortmannin可干扰细胞内的糖代谢信号传导通路，诱导IR的发生；同时可放大有丝分裂信号传导通路。

糖化肌醇磷脂结合蛋白在健康人淋巴细胞及其亚群的表达

目的 研究健康人淋巴细胞及其亚群上 ,糖化肌醇磷脂结合蛋白 (GPI锚蛋白 )之一CD5 9的表达 ,探讨淋巴细胞及其亚群能否做为诊断阵发性睡眠性血红蛋白尿症的指标。方法 采用流式细胞术多色分析法 ,结合多种细胞特异性抗体 ,分析淋巴细胞及其亚群和中性粒细胞上CD5 9的表达情况。结果 5 0名健康人中性粒细胞上CD5 9的表达均为完全阳性 ,表达率为 (98 6± 1 5 ) %。淋巴细胞上CD5 9的表达率为 (90 0± 14 9) % ,少量呈现阴性和不完全阳性表达。CD3+ T细胞与淋巴细胞类似 ,但完全阳性细胞少于后者 ,部分阳性和阴性细胞多于后者。与CD3+ T细胞相比 ,CD4+ T细胞上CD5 9的表达率增高 ,为 (92 9± 8 1) % ,完全阳性细胞增多 ,但仍有少量阴性细胞存在 ;CD8+ T细胞表达率明显下降 ,为 (74 6± 9 1) % ,完全阳性细胞减少 ,部分阳性和阴性细胞增多 ;CD45RA+ 和CD45RO+ T细胞的表达差异无显著意义 (P >0 0 5 ) ;活化T细胞的表达介于CD3+ 和CD8+ T细胞之间。B细胞的表达均为完全阳性 ,表达率高达 (96 3± 0 .6 ) % ,与中性粒细胞类似。结论 健康人淋巴细胞上CD5 9不完全阳性的表达主要与T细胞、尤其是CD8+ T细胞有关 ;B细胞表达均一 。

磷酯酰肌醇-3-激酶、丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶在2型糖尿病大鼠骨组织中的表达及意义

目的探讨磷酯酰肌醇-3-激酶（P13K）、丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶（Akt）在糖尿病大鼠骨组织中的表达及意义。方法将50只体重180—200g的6月龄雌性Wistar大鼠按随机数字表法分为对照组（n=24）和2型糖尿病组（n=26）。2型糖尿病组大鼠予高糖高脂饮食喂养8周后，腹腔注射链脲佐菌素30mg／kg，对照组大鼠正常饮食。糖尿病成模后12周两组大鼠分别行腰椎骨密度测定；应用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测骨组织P13K、Aktl和Akt2mRNA的相对表达。组间比较采用t检验。结果对照组大鼠骨密度高于糖尿病组，差异有统计学意义[（0．079±0．034）比（0．060±0．017）g／cm2，t=2．499，P〈0．05]；同时，对照组大鼠骨组织P13K、Aktl、Akt2mRNA均高于糖尿病组（分别为：0．65±0．05比0．51±0．04、0．756±O．031比0．694±0．017、0．77±0．04比0．66±0．04），差异均有统计学意义（t=4．969、3．924、4．515，均P〈0．01）。结论2型糖尿病大鼠骨组织P13K、Aktl及Akt2表达低于正常，这可能是2型糖尿病骨质疏松发生的分子生物学机制之一。

磷脂酰肌醇3-激酶γ基因敲除对急性胰腺炎小鼠腺泡细胞的影响

目的:探讨磷脂酰肌醇3-激酶γ(PI3Kγ)基因敲除对急性胰腺炎(AP)小鼠病变程度、腺泡细胞功能以及对HSP70表达的影响。方法:雄性野生型(WT)C57BL/6小鼠和雄性PI3Kγ基因敲除(KO)小鼠各12只,随机均分为对照组和AP组,采用腹腔内注射蛙皮素诱导在体AP模型,对照组以同样的方式和体积给予生理盐水;另取两种动物各8只,行胰腺腺泡细胞体外分离,用胆囊收缩素(CCK-8)刺激作为离体AP模型,对照组给予二甲基亚砜(DMSO)。观察胰腺组织病理变化、血清淀粉酶水平、胰腺组织和腺泡细胞胰蛋白酶活性和腺泡细胞淀粉酶释放率。Western blot检测胰腺组织及腺泡细胞中HSP70蛋白的表达。结果:病理学观察,两种小鼠的对照组胰腺未见异常,而AP组均出现不同程度的水肿、出血、坏死,经定量分析,KO小鼠胰腺炎腺泡细胞坏死数量和空泡数量明显少于WT小鼠(均P<0.05);两对照组间胰腺组织胰蛋白酶活性和体外腺泡细胞胰蛋白酶活性无明显差异(均P>0.05),但AP组(在体、离体)KO小鼠胰腺组织及腺泡的胰蛋白酶活性均低于WT小鼠(均P<0.05)。两种小鼠间血清淀粉酶水平及腺泡细胞淀粉酶释放曲线差异无统计学意义(P>0.05);与对照组比较,AP组(在体、离体)小鼠胰腺组织和腺泡细胞HSP70表达均增加,且KO小鼠表达量明显大于WT小鼠(均P<0.05)。结论:AP时,PI3Kγ可能通过下调HSP70表达水平和增强胰蛋白酶原活化促进腺泡细胞坏死,而对淀粉酶的分泌过程无明显影响。

肢体远隔缺血后适应通过磷脂酰肌醇3激酶／Akt通路保护大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤

目的 通过检测肢体远隔缺血后适应（limb ischemic postconditioning, LIP ）后p-Akt蛋白及胱天蛋白酶-9和Bcl-2 mRNA表达,探讨磷脂酰肌醇3激酶（phosphatidyl inositol 3 kinase, PI3K ）/Akt通路在LIP保护大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中的作用.方法 42只Wistar大鼠随机分为假手术组、脑缺血再灌注组和LIP组.缺血再灌注组和LIP组均采用线栓法制作大脑中动脉缺血再灌注模型. LIP组在脑缺血2 h后再灌注前实施3个循环健侧股动脉LIP（5 min缺血/5 min再灌注）.采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色测定脑梗死体积,免疫组化染色法检测p-Akt蛋白表达,原位杂交法检测胱天蛋白酶-9和Bcl-2 mRNA表达.结果 与脑缺血再灌注组比较,LIP组脑梗死体积显著缩小（P〈0.05）,p-Akt蛋白和Bcl-2 mRNA表达水平显著增高（P均〈0.05）,胱天蛋白酶-9 mRNA表达水平显著降低（P〈0.05）.结论 LIP可缩小局灶性脑缺血再灌注大鼠脑梗死体积,其机制可能与上调p-Akt蛋白和Bcl-2 mRNA表达以及下调胱天蛋白酶-9 mRNA表达有关,提示LIP可通过PI3K/Akt通路减轻脑缺血再灌注损伤.

糖基化在肿瘤免疫中的作用

蛋白质的糖基化是糖类在糖基转移酶（Glycosyltransferase,GTs）的催化下以共价键的形式与肽链连接的过程。根据糖肽键的不同,糖基化分为以下四种类型：N-连接糖基化、O-连接糖基化、糖基磷脂酰肌醇（Glycophosphatidylinositol,GPI）锚定糖基化和C-甘露糖化[1]。