糖基化磷脂酰肌醇锚定型人B7-1基因重组蛋白锚定自体肿瘤细胞膜提高抗肿瘤免疫反应的实验研究

目的研制抗肿瘤免疫治疗的新疫苗。方法用含目的基因的质粒pcDNA3-GPI-B7-1转染CHO/DHFR+细胞,提取膜蛋白GPI-B7-1,经Western blot鉴定后,用蛋白转化法锚定在肿瘤细胞膜上,免疫C57BL/6小鼠后,取小鼠脾细胞进行T细胞扩增和CTL功能检测,并检测细胞培养液和小鼠血清中IL-2、TNF-α和IFN-γ水平。结果用GPI-B7-1修饰的肿瘤细胞膜免疫小鼠后可诱发肿瘤特异性T细胞扩增和CTL活性增强,细胞培养液中细胞因子检测为阳性。结论该疫苗能激发小鼠的免疫功能,具有一定的保护小鼠免受肿瘤细胞侵袭的作用。

人糖基磷脂酰肌醇(GPI)-B7-1真核表达载体的构建及表达

目的在仓鼠卵巢细胞CHO细胞中高效表达糖基磷脂酰肌醇GPI-B7-1(B7-1即CD80)融合蛋白,获得大量融合蛋白以研究GPI-B7-1在肿瘤治疗中的应用潜力。方法构建真核表达载体pc31/GPI-B7-1,利用脂质体lipofectamine2000将其转染CHO细胞,G418加压筛选抗性克隆,流式细胞仪检测细胞膜上GPI-B7-1融合蛋白的表达情况,SDS-PAGE、Westernblot分析鉴定其免疫活性。结果真核表达载体转染CHO细胞经G418筛选后,流式细胞分析证实为GPI锚定蛋白,SDS-PAGE在60kD左右蛋白表达量明显高于对照组,在Westernblot在60kD左右有一条强的棕色条带,说明GPI-B7-1在CHO中得到表达。结论在CHO细胞中高效表达GPI-B7-1融合蛋白,可获得大量融合蛋白,对进一步研究GPI-B7-1在肿瘤治疗中的应用打下基础。

肾移植患者ABCA1及GPIHBP1水平与术后血脂的相关性

目的分析尿毒症肾移植患者三磷酸腺苷结合盒亚家族A成员1(ABCA1)及糖基磷脂酰肌醇锚定高密度脂蛋白结合蛋白1(GPIHBP1)水平与术后血脂的相关性。方法回顾性分析2015年3月至2023年1月郑州大学第一附属医院肾移植科收治的97例尿毒症肾移植患者的临床资料,按照术后血脂情况分为血脂正常组(n=34)和血脂紊乱组(n=63),比较两组患者术后1个月、3个月、6个月、12个月的ABCA1、GPIHBP1、血脂(高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白、甘油三酯及总胆固醇)水平和他克莫司血药浓度,采用Pearson相关分析法分析术后ABCA1及GPIHBP1与血脂水平及他克莫司血药浓度的相关性,并比较两组患者随访12个月内并发症的发生情况。结果血脂紊乱组患者术后1个月、3个月、6个月、12个月的ABCA1、GPIHBP1、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇及他克莫司血药浓度明显高于血脂正常组,差异均有统计学意义(P<0.05);血脂紊乱组患者术后1个月、3个月、6个月及12个月的高密度脂蛋白胆固醇为(1.05±0.14)mmol/L、(1.14±0.18)mmol/L、(1.18±0.16)mmol/L、(1.23±0.17)mmol/L,均低于同时间段血脂正常组的(1.17±0.21)mmol/L、(1.37±0.28)mmol/L、(1.42±0.24)mmol/L、(1.50±0.32)mmol/L,差异均有统计学意义(P<0.05)。尿毒症肾移植患者的ABCA1与总胆固醇、他克莫司血药浓度呈正相关(P<0.05),与高密度脂蛋白胆固醇呈负相关(P<0.05),而GPIHBP1与总胆固醇、甘油三酯、他克莫司血药浓度均呈正相关(P<0.05)。血脂紊乱组患者的并发症总发生率为49.21%,明显高于血脂正常组的23.53%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论尿毒症肾移植患者ABCA1及GPIHBP1基因水平与他克莫司血药浓度及术后血脂水平有一定相关性,检测ABCA1及GPIHBP1基因水平能够为尿毒症肾移植患者术后管理提供一定依据。

血清GPAA1、OPN表达与急性髓系白血病预后的关系

目的 探讨血清糖基磷脂酰肌醇锚定吸附蛋白1(GPAA1)、骨桥蛋白(OPN)的表达与急性髓系白血病(AML)预后的关系。方法 回顾性分析60例AML患者(观察组)和60例健康体检志愿者(对照组)的临床资料,并根据预后将观察组患者分为预后良好组(46例)和预后不良组(14例),均检测其血清GPAA1、OPN水平,并分析血清GPAA1、OPN水平对AML预后检测的诊断效能及相关性。结果 与对照组比较,观察组血清GPAA1、OPN表达水平明显更高(P<0.05);与预后良好组相比,预后不良组血清GPAA1、OPN表达水平明显更高(P<0.05);GPAA1+OPN联合检测对AML预后的诊断灵敏度、特异度明显高于GPAA1、OPN单独检测(P<0.05);血清GPAA1、OPN与AML预后呈负相关性(P<0.05)。结论 血清GPAA1、OPN与AML预后存在一定关联,根据其表达水平变化情况,可有效判断患者的预后情况,可作为患者预后的预测指标。

GPI锚——一种复杂的蛋白质翻译后修饰

糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白(glycosylphosphatidylinositol-anchored proteins,GPI-APs)是一种在真核生物细胞膜表面普遍存在的蛋白质,最大特点是没有跨膜结构域和胞质尾区,通过翻译后修饰产生的GPI结构锚定在细胞膜上.GPI锚结构复杂,由磷酸氨基乙醇联结部、核心糖链和磷酸肌醇尾组成.核心糖链中的甘露糖、葡萄糖胺、磷酸肌醇残基可不同程度地被磷酸氨基乙醇和其他糖类修饰.尽管被精确解析出的GPI锚结构还较少,但已在分子水平上证明GPI锚具有非常多样的生物学功能,如信号传导、细胞黏附、蛋白质转运和免疫反应等等.近年来,由于实验技术的进步,GPI锚的相关研究也在逐步深入.对GPI锚独特的翻译后修饰及其功能的最新研究进行分析归纳.

儿童急性淋巴细胞白血病血清GPAA1、Endocan mRNA表达及临床意义

目的 探讨儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)血清糖基磷脂酰肌醇锚附着蛋白1(GPAA1)和Endocan mRNA表达及临床意义。方法 选取2018年1月—2021年1月宁夏医科大学总医院儿内科收治ALL患儿86例为ALL组,根据1年后是否复发分为未复发亚组70例与复发亚组16例,另选取医院同期体检健康儿童54例为健康对照组,采用qPCR法检测血清GPAA1、Endocan mRNA表达。采用Pearson相关性分析ALL患儿血清GPAA1 mRNA与Endocan mRNA表达的相关性,多因素Logistic回归分析ALL患儿复发的影响因素,受试者工作特征曲线(ROC)分析血清GPAA1、Endocan mRNA表达对ALL患儿复发的预测价值。结果 ALL组血清GPAA1、Endocan mRNA表达高于健康对照组(t=13.375、17.485,P均<0.001)。复发亚组血清GPAA1、Endocan mRNA表达水平高于未复发亚组(t=4.069、3.791,P均<0.001)。Pearson相关性分析显示,血清GPAA1 mRNA表达与Endocan mRNA表达呈正相关(r=0.564,P<0.001)。多因素Logistic回归分析显示,免疫表型T-ALL、WBC≥50×10~9/L、混合谱系白血病重排、危险度分型中高危及血清GPAA1、Endocan mRNA高表达为ALL患儿复发的独立危险因素[OR(95%CI)=1.958(1.612~4.748)、1.465 (1.076~1.995)、1.979 (1.094~3.581)、2.854 (2.327~5.916)、1.512 (1.054~2.170)、2.133 (1.080~4.214)]。ROC曲线分析显示,血清GPAA1、Endocan mRNA表达及二者联合预测ALL患儿复发的曲线下面积(AUC)分别为0.786、0.784、0.866,二者联合预测ALL患儿复发的AUC大于单独预测(Z=2.574、2.919,P=0.010、0.004)。结论 儿童ALL血清GPAA1、Endocan mRNA表达上调,为ALL患儿复发的独立危险因素,可作为ALL患儿复发的预测指标。

Caveolin-1与中枢神经系统疾病

Caveolae是细胞膜上特定的50～100 nm的微区域，呈烧瓶状，主要由caveolin、胆固醇、鞘磷脂、鞘糖脂、酰基鞘氨醇和糖基磷脂酰肌醇（ glycosyl phosphatidyl inositol ， GPI）锚着蛋白组成，可单独或成串出现，形成一个不被去垢剂溶解的区域。 Palada于1953年首先在电镜下发现了caveolae结构，并将之命名为质膜小泡（ plasmalemmal vesicle ）。2年后， Yamada 报道了相似的结果，并将之命名为小窝蛋白（caveolae）［1］。 caveolae的主要作用是介导细胞的内化和胞吞转化。

肾移植受者代谢标志物与血脂水平的相关性研究

目的分析肾移植受者血脂代谢、高脂血症、他克莫司药物代谢中共表达的基因及其与血脂水平的相关性。方法从比较毒理基因组学数据库(CTD)中筛选出共表达的基因。收集25例肾移植受者的一般资料,检测ATP结合盒亚家族A成员1(ABCA1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)、糖基磷脂酰肌醇锚定高密度脂蛋白结合蛋白1(GPIHBP1)的表达情况。对肾移植受者进行跟踪随访,收集术后1、3、6、12个月空腹血糖、糖化血红蛋白、甘油三酯、总蛋白、白蛋白、球蛋白、胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、他克莫司血药浓度,并分析受者高脂血症的发生情况。分析ABCA1、GPIHBP1、PPAR-γ与临床指标的相关性,及其与相关指标对肾移植术后高脂血症的诊断效能。结果共筛选出3个共表基因ABCA1、PPAR-γ、GPIHBP1。ABCA1与术后6个月胆固醇、术后3个月他克莫司血药浓度成正相关,与术后3个月空腹血糖呈负相关(均为P<0.05);GPIHBP1与术前胆固醇、术前甘油三酯呈负相关,与术后3个月他克莫司血药浓度呈正相关(均为P<0.05)。PPAR-γ与术前球蛋白、术前低密度脂蛋白呈负相关(均为P<0.05)。ABCA1、GPIHBP1、PPAR-γ联合术前球蛋白及术后1、6个月血糖水平诊断肾移植术后高甘油三酯血症的效果较好(AUC=0.900)。ABCA1、GPIHBP1、PPAR-γ联合术后1、6个月他克莫司血药浓度及术后6个月血糖水平诊断肾移植术后高胆固醇血症的效果较好(AUC=0.931)。结论ABCA1、GPIHBP1、PPAR-γ与肾移植术后血脂、他克莫司血药浓度等指标存在不同程度的相关关系,但用于预测肾移植术后高脂血症尚无确切依据。提升机体免疫力、规范的血糖管理可能是控制高脂血症的有益因素。

PIHBP1自身抗体是诱发高甘油三酯血症发生的重要原因

高甘油三酯血症能够加重患者心血管疾病以及胰腺炎的发病。大量文献报道糖基磷脂酰肌醇高密度脂蛋白结合蛋白（GPIHBP1）的自身抗体可以诱发血液中的甘油三酯的含量升高,因此经常将患有＂GPIHBP1自身抗体综合症（GPIHBP1 autoantibody syndrome）＂的患者看成是一类特殊的高甘油血症患者。然而,GPIHBP1与高甘油三脂血症之间的联系尚未清楚。

血清GPAA1、SF、OPN与儿童急性淋巴细胞白血病危险度的关系及对血栓发生风险的评估效能研究

目的:分析血清糖基磷脂酰肌醇锚附着蛋白1(GPAA1)、铁蛋白(SF)、骨桥蛋白(OPN)与儿童急性淋巴细胞白血病危险度的关系及对血栓发生风险的评估效能。方法:选择我院自2017年1月至2022年12月接诊的112例急性淋巴细胞白血病患儿作为观察组,另选112例性别、年龄与观察组相匹配的健康体检儿童作为对照组。检测两组血清GPAA1、SF、OPN表达水平,分析不同危险度的急性淋巴细胞白血病患儿血清GPAA1、SF、OPN表达水平的差异性,观察急性淋巴细胞白血病患儿的血栓发生情况,通过受试者工作特征曲线(ROC)下面积(AUC)评价血清GPAA1、SF、OPN预测急性淋巴细胞白血病患儿发生血栓的效能。结果:观察组血清GPAA1、SF、OPN表达水平均高于对照组(P<0.05);在低危、中危和高危的急性淋巴细胞白血病患儿中,血清GPAA1、SF、OPN表达水平有差异(P<0.05);经Spearman相关性分析,血清GPAA1、SF、OPN表达水平与儿童急性淋巴细胞白血病危险度呈正相关(P<0.05);在112例急性淋巴细胞白血病患儿中,发生血栓12例,占10.71%;经多因素Logistic回归分析,血清GPAA1、SF、OPN均是急性淋巴细胞白血病患儿发生血栓的独立预测因素(P<0.05);经ROC曲线分析,血清GPAA1、SF联合OPN预测急性淋巴细胞白血病患儿发生血栓的AUC为0.901。结论:血清GPAA1、SF、OPN与儿童急性淋巴细胞白血病危险度密切相关,联合预测患儿发生血栓的效能较好,对此病的诊治具有重要指导意义。

δ差异显示法筛选仔猪ETEC F4ad受体相关基因

初生仔猪泻痢的病原菌主要是肠毒素大肠杆菌(ETEC)F4,仔猪小肠上皮细胞有无F4受体对于仔猪抗病性具有重要意义。本试验采用δ差异显示法筛选仔猪F4ad受体相关基因。将获得的8条ESTs通过GenBank进行序列同源比对,发现其中1条与人糖基磷脂酰肌醇锚1(GPI1)基因有91%同源性。表明该基因可作为F4ad受体候选基因进行进一步研究。

我如何诊治阵发性睡眠性血红蛋白尿症

阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）是由位于X染色体上的PIG—A基因突变导致的获得性造血干细胞克隆性疾病，其病理缺陷是糖基磷脂酰肌醇（GPI）合成异常而致由GPI锚连在血细胞膜上的一组锚连蛋白（CD55、CD59等）缺失，临床主要表现为血管内溶血、骨髓衰竭、高风险并发血栓等。

自身抗体与高甘油三酯血症

部分重度高甘油三酯血症的病因与自身抗体相关,目前的研究显示,脂蛋白脂酶、糖基磷脂酰肌醇高密度脂蛋白结合蛋白1和载脂蛋白C-Ⅱ这3种参与脂代谢的重要功能蛋白的自身抗体均可导致高甘油三酯血症。本文拟对自身抗体诱发的高甘油三酯血症进行综述,探讨其诊治策略。