维生素D_3对实验性糖尿病小鼠眼部结构的保护作用

背景研究证实，维生素D，通过其生物活化形式1，25-（OH），D，与维生素D受体结合，从而发挥抗炎、免疫调节、神经保护作用。此外，维生素D，可以增强胰岛素的敏感性及促进胰岛素的分泌，控制高血糖症，减轻角膜水肿。目的研究维生素D，对缓解实验性糖尿病小鼠眼部结构损伤的作用。方法健康SPF级C57BL／6小鼠22只（体质量20-25g），应用随机数字表法随机选取8只小鼠为维生素D，组，另取11只小鼠为糖尿病对照组，并取3只小鼠为正常对照组。利用腹腔注射质量分数2％链脲佐菌素（STZ）法制备实验性糖尿病模型，造模后2周维生素D，组小鼠行腹腔注射维生素D，5mg／kg，每周注射1次，共5次。各组每周进行血糖监测、直接检眼镜观察。各组每周随机摘取3只眼球，常规病理切片后于光学显微镜下观察眼球各部分结构，利用病理分析软件测量中央角膜、视盘旁1个视盘直径（DD）处脉络膜厚度及视网膜神经上皮层的厚度。结果糖尿病对照组小鼠造模后第1周角膜开始出现水肿，角膜平均厚度为（339．14＋11．13）μm，以后水肿持续但逐渐减轻（F=382．446，P=0．000）。维生素D，干预后水肿情况明显缓解，角膜厚度明显变薄（P〈0．05）。两组糖尿病小鼠第5周角膜上皮均开始萎缩（P〈0．05），糖尿病对照组至第7周萎缩情况更加严重，而维生素D，组小鼠至第7周萎缩已明显减轻（P=0．002）。糖尿病小鼠脉络膜自第1周开始萎缩（P=0．010），并随时间延长萎缩加重（F=437．411，P=0．000）。维生素D，干预后，第4周脉络膜萎缩趋势明显减缓，且用药后从第3周开始维生素D，组脉络膜厚度均大于糖尿病对照组（P〈0．05），糖尿病小鼠自第1周开始视网膜神经上皮层即可见明显的凹凸不平，轻度水肿（P=0．000），随时间延长，糖尿病造成的视网膜神经上皮层萎缩加重（F=91．859，P=0．000）。维生素D，组视网膜神经上皮层萎缩情况无明显改变。结论维生素D，对实验性糖尿病小鼠角膜及脉络膜有保护作用，但其对已萎缩的视网膜并无明显的修复作用。

石斛合剂对衰老糖尿病大鼠胰腺组织凋亡相关基因Bax,Bcl-2mRNA及蛋白表达的调控

目的观察石斛合剂对衰老及衰老糖尿病（DM）大鼠胰腺组织凋亡相关基因Bax、Bcl-2mRNA及蛋白表达的影响。方法采用D-半乳糖致衰，继而加高脂高糖及注射低剂量链脲佐菌素（STZ）制备衰老DM模型，测定血清中SOD、MDA浓度，并利用RT-PCR法和Western-Blot法检测大鼠胰腺组织凋亡相关基凼Bax、Bcl-2mRNA及蛋白表达水平。结果与衰老及衰老DM组相比，石斛合剂各治疗组MDA浓度明显降低（P〈0．05），SOD浓度明显升高（P〈0．05～0．01），衰老DM石斛合剂治疗组胰腺组织BaxmRNA及蛋白水平明显降低（P〈0.05～0．01），Bcl-2mRNA及蛋白水平明显升高（P〈0．05）。结论①衰老大鼠呈现Bax／Bcl-2比值显著升高，衰老DM大鼠Bax／Bcl-2比值升高更为显著，即衰老大鼠Bax和Bcl-2mRNA及蛋白表达失衡，且这种失衡在衰老DM大鼠显得更为突出；②石斛合剂降低血糖，显著升高衰老及衰老DM大鼠SOD水平，降低MDA水平，其分子机制之一与其降低衰老DM大鼠胰腺组织Bax、增加Bcl-2 mRNA及蛋白水平，即调整Bax和Bcl-2mRNA及蛋白表达的失衡有关。

链脲菌素诱导糖尿病性勃起功能障碍大鼠模型的建立

目的:通过腹腔注射链脲菌素制备糖尿病性(diabetes mellitus,DM)勃起功能障碍(erectile dysfunc-tion,ED)大鼠模型,为研究糖尿病性ED提供实验动物模型。方法:Wistar大鼠120只,随机分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三组,每组分再为糖尿病组(DM)20只,对照组(NDM)20只,DM组腹腔注射链脲菌素(streptozotocin,STZ,60mg/kg体重)建立DM动物模型后,注射阿朴吗啡(apomorphine,APO,80μg/kg)观察8周、12周及16周组大鼠阴茎勃起情况,制备DM性ED大鼠模型。结果:DM组大鼠成模49只,8、12、16周分别为17只、17只、15只,注射阿朴吗啡后勃起次数分别为(1.0±0.0)、(1.0±0.0)(、1.0±0.0),勃起率分别为35.3%、23.5%、13.3%,ED发生率分别为64.7%、76.5%、86.7%;NDM组60只,勃起次数分别为(2.2±0.8)、(2.3±0.8)、(2.0±0.7),勃起率均为100%,ED发生率为0。两组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论:链脲菌素诱导糖尿病性ED大鼠模型方法可行、可靠。

缬沙坦和氟伐他汀对糖尿病大鼠视网膜糖原合成激酶3β表达的影响

背景糖原合成激酶3p（GSK-3p）在糖代谢过程中起着重要作用，可能对糖尿病视网膜病变（DR）的发生有一定影响。研究表明缬沙坦能改善糖尿病鼠视网膜的视觉电生理表现。目的探讨缬沙坦和氟伐他汀对糖尿病大鼠视网膜GSK-3B表达的影响。方法将50只sD大鼠通过一次性腹腔注射65mg／kg链脲佐菌素（STZ）建立糖尿病模型，用随机数字表法将造模成功的47只大鼠随机分为4组。糖尿病对照组（12只）灌服质量分数0．5％羧甲基纤维素钠作为阳性对照，缬沙坦组（12只）、氟伐他汀组（11只）和缬沙坦联合氟伐他汀组（12只）分别于造模后3d灌服缬沙坦悬液、氟伐他汀悬液、缬沙坦＋氟伐他汀悬液，每日1次，共12周。另纳入10只正常大鼠作为正常对照组，给予质量分数0．1％柠檬酸一柠檬酸钠缓冲液进行腹腔注射，然后灌服0．5％羧甲基纤维素钠溶液。用药12周后采集各组大鼠尾静脉血检测大鼠空腹血糖水平；采用Westernblot法检测p-GSK-3B（Ser-9）蛋白在大鼠视网膜中的表达；采用免疫组织化学法检测p-GSK．3S（Set-9）在视网膜的表达定位。结果给药12周后，正常对照组、糖尿病对照组、缬沙坦组、氟伐他汀组及缬沙坦联合氟伐他汀组的空腹血糖分别为（5．28s0．30）、（26．08_＋3．33）、（26．03_＋2．66）、（25．90_＋2．86）、（25．99s2．14）mmol／L，差异有统计学意义（F=110．74，P〈0．01）。Westernblot结果显示，糖尿病对照组大鼠视网膜中p-GSK-3B（Ser-9）／13-aetin灰度值显著高于正常对照组（2．774s0．139”s1．927s0．111，q=15．79，P〈0．01）；缬沙坦组、氟伐他汀组及缬沙坦联合氟伐他汀组p-GSK-3B（Ser．9）表达显著低于糖尿病对照组（1．895±0．090、2．051±0．113、1．537±0．071口s2．774s0．139）（q=13．69、13．48、23．06，P〈0．01），且缬沙坦联合氟伐他汀组显著低于缬沙坦组和氟伐他汀组（q=6．67、9．58，P〈0．01）。免疫组织化学检测显示，p-GSK-3B（Ser-9）主要表达于视网膜神经节细胞层（GCL），正常对照组视网膜各层中p-GSK-3B（Ser-9）均呈弱表达，GCL略强。糖尿病对照组视网膜各层p-GSK-3B（Ser-9）表达较强，呈深棕色着染，但仍以GCL最为明显。缬沙坦组与氟伐他汀组各层视网膜p-GSK-3B（Ser-9）着色较糖尿病对照组明显减弱。缬沙坦联合氟伐他汀组各层视网膜p-GSK-3p（Ser-9）着色进一步减弱。结论糖尿病大鼠视网膜中p-GSK-3p（Set-9）的表达增加，主要位于GCL。缬沙坦、氟伐他汀均能够抑制p-GSK-3B（Set-9）的表达，联合用药作用更强。