糖肾方治疗糖尿病肾病心肌纤维化的实验研究及网络药理学研究

目的:研究糖肾方治疗糖尿病肾病(DKD)心肌纤维化的作用及潜在机制。方法:采用单侧肾切除合并链脲佐菌素诱导的DKD大鼠心肌纤维化模型,糖肾方治疗20周后取心脏组织进行Masson染色;应用网络药理学方法构建糖肾方活性化合物成分-心肌纤维化潜在靶点网络,以及蛋白-蛋白相互作用网络,筛选关键靶点并进行靶点类型归属、富集分析和通路富集分析。结果:糖肾方显著减少DKD大鼠心肌胶原沉积;糖肾方含有268个化合物活性成分,对应277个心肌纤维化潜在靶点,主要调控IL6、IL4、TLR4、IL1A等炎症反应和血管生成相关基因,涉及细胞因子-细胞因子受体相互作用通路、液体剪切应力和动脉粥样硬化信号通路、肿瘤相关蛋白多糖、糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路等136条通路。结论:糖肾方具有治疗DKD心肌纤维化的作用,炎症反应和血管生成相关基因可能是其关键靶点。

ADAMTSL3促大鼠糖尿病肾病心肌纤维化和SGLT-2抑制剂的疗效观察

目的 探讨ADAMTSL3(Adisintegrin-like and metalloprotease domain with thrombospondin type I motifs-like-3)在大鼠糖尿病肾病心肌纤维化中的作用机制和SGLT-2抑制剂(Sodium-glucose co-transporter 2)的应用效果。方法 SPF级雄性Wistar大鼠28只经高脂高糖饲料喂养联合腹腔注射链脲佐菌素(SMZ)50 mg/kg进行糖尿病肾病造模,造模成功后分为模型组和治疗组,另设正常对照组大鼠,治疗组给予SGLT-2抑制剂(卡格列净10 mg/kg)灌胃。3组大鼠进行心脏B超动态分析心脏结构改变。对大鼠心肌组织进行病理染色、qRT-PCR、Western Blot检测ADAMTSL3基因表达水平,同时观察使用SGLT-2抑制剂后大鼠心肌的病理改变。结果 与正常对照组相比,模型组在左心室重量(LVM)、左心室收缩末壁厚度(LVPWs)、左心室短轴缩短率(LVFS%)、左射血分数(LVEF%)上的差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组相比,治疗组大鼠糖尿病肾病诱导心肌组织纤维化相对面积降低,以及在大鼠心肌纤维化中的Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)、纤维连接蛋白(Fibronectin)表达降低(P<0.05)。与正常对照组相比,模型组大鼠心肌组织的ADAMTSL3蛋白表达显著增加;与模型组相比,治疗组大鼠心肌组织的ADAMTSL3蛋白表达显著降低(P<0.05)。与正常对照组相比,模型组中衰老标志物p-p53、p21、p16表达水平升高;与模型组相比,治疗组p-p53、p16表达水平均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ADAMTSL3表达与纤维化相关,因此ADAMTSL3参与促进糖尿病肾病大鼠心肌纤维化,SGLT-2抑制剂治疗可逆转其心肌纤维化病变。

金雀异黄素通过调控TGF-β1/Smad3信号通路对2型糖尿病大鼠心肌纤维化的影响

目的 探讨金雀异黄素减轻糖尿病大鼠心肌纤维化的作用及潜在机制。方法 通过高脂饮食结合腹腔注射链脲菌素(STZ)法建立大鼠2型糖尿病(T2DM)模型,并随机分为模型组、二甲双胍组(100 mg/kg)及金雀异黄素低、高剂量组(50、100 mg/kg),另设正常组给予常规饮食,每组10只。各给药组灌胃给药8周,检测体质量、心功能、心脏质量及心脏指数,血清CK-MB、AST及LDH活性,观察心肌纤维化程度,心肌组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad同源物3(Smad3)mRNA和蛋白表达,心肌组织Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)和Ⅲ型胶原(CollagenⅢ)蛋白分布及表达。结果 与模型组比较,金雀异黄素各剂量组大鼠体质量、每搏输出量(SV)及射血分数(EF)升高(P<0.01),心脏指数、左心室收缩末期内径(LVIDs)、血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)活性降低(P<0.05,P<0.01),心肌组织胶原相对面积及CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白表达均降低(P<0.05,P<0.01),心肌组织TGF-β1、Smad3 mRNA和蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),金雀异黄素高剂量组左心室舒张末期内径(LVIDd)降低(P<0.05)。结论 金雀异黄素可通过抑制TGF-β1/Smad3信号通路,减轻2型糖尿病大鼠心肌纤维化作用,进而发挥保护心脏效应。

左归降糖舒心方调控TLR4/NF-κB通路抑制糖尿病心肌病小鼠心肌纤维化的机制研究

目的 基于Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)/核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路探讨左归降糖舒心方对糖尿病心肌病MKR小鼠心肌纤维化及炎症因子的影响。方法 以8周龄雄性MKR小鼠为实验对象,采用高脂饮食联合腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)40 mg/kg构建糖尿病心肌病模型,随机分为中药高剂量组[33.67 g/(kg·d)左归降糖舒心方2 g/mL]、中药低剂量组[16.84 g/(kg·d)左归降糖舒心方2 g/mL]、西药联合组[0.23 g/(kg·d)二甲双胍联合1.5 mg/(kg·d)依那普利]和模型组(等容量蒸馏水);另设FVB小鼠为空白对照组(等容量蒸馏水)。每组10只,连续给药8周后取材。收集尾静脉血液检测空腹血糖水平;采用HE、Masson染色观察心肌病理改变,电镜观察心肌组织超微结构变化;采用ELISA检测小鼠血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)含量;采用Western blot法检测TLR4、NF-κB p56、p-NF-κB p56/NF-κB p56蛋白表达情况;RT-qPCR及Western blot检测小鼠心肌组织Ⅰ型胶原(collagen type I,CollagenⅠ)、Ⅲ型胶原(collagen typeⅢ,CollagenⅢ)及α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达水平。结果 与空白对照组比较,模型组小鼠空腹血糖及血清中TNF-α、IL-1β含量增高(P<0.01);心肌细胞结构紊乱,胶原含量增加,心肌细胞重度退行性变;心肌组织中TLR4、NF-κB p56、p-NF-κB p56/NF-κB p56蛋白表达上调(P<0.01),CollagenⅠ、CollagenⅢ、α-SMA mRNA及蛋白表达增加(P<0.05,P<0.01),中药高剂量组小鼠心肌组织CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白表达增加(P<0.01)。与模型组比较,中药高、低剂量组和西药联合组小鼠空腹血糖及血清中TNF-α、IL-1β含量均降低(P<0.01);心肌结构改善,胶原沉积减少;心肌组织中TLR4、NF-κB p56、p-NF-κB p56/NF-κB p56蛋白表达下调(P<0.01),CollagenⅠ、CollagenⅢ、α-SMA蛋白及mRNA表达下调(P<0.01)。与西药联合组比较,中药低剂量组小鼠空腹血糖及血清中TNF-α、IL-1β含量均升高(P<0.01),心肌结构无明显改善,胶原沉积无显著减少;心肌组织中TLR4、NF-κB p56、p-NF-κB p56/NF-κB p56蛋白表达上调(P<0.01),CollagenⅠ、CollagenⅢ、α-SMA蛋白及mRNA表达上调(P<0.01)。结论 左归降糖舒心方能抑制心肌炎性反应、改善心肌细胞结构,其作用机制可能与调控TLR4/NF-κB通路、下调细胞炎症因子表达、抑制心肌纤维化有关。

2型糖尿病老年病人心肌纤维化T1-Mapping与左心室应变参数的相关性分析

目的探究2型糖尿病(T2DM)老年病人心肌纤维化T1-Mapping参数与左心室应变参数之间的相关性。方法以2019年8月至2022年8月在孝感市中心医院就诊的T2DM病人82例为研究对象,根据病人的病程分为短期T2DM组40例(病程<5年)和长期T2DM组42例(病程≥5年),以同期招募的健康志愿者40例为对照组。比较各组间左心室应变参数及T1-Mapping参数。采用多元线性逐步回归法分析T1-Mapping参数的影响因素。采用相关性分析T1-Mapping参数与左心室应变参数的相关性。结果短期T2DM组病人左室周向峰值舒张应变率(PDSR)[1.25(0.95,1.50)1/s比1.40(1.20,1.70)1/s]较对照组降低(P<0.05),细胞外体积(ECV)[31.00(29.00,33.50)%比29.00(27.00,32.00)%]较对照组升高(P<0.05)。与对照组比较,长期T2DM组病人左室纵向峰值应变(PS)[−14.50(−12.38,−16.50)%比−16.15(−14.60,−18.30)%]、径向PDSR[(−2.58±0.83)1/s比(−3.32±0.88)1/s]、周向PDSR[0.90(0.70,1.20)1/s比1.40(1.20,1.70)1/s]、纵向PDSR[0.70(0.58,0.90)1/s比1.10(0.80,1.38)1/s]降低(P<0.05),ECV[34.00(32.00,35.00)%比29.00(27.00,32.00)%]升高(P<0.05)。与短期T2DM组比较,长期T2DM组病人左室纵向PS[−14.50(−12.38,−16.50)%比−16.15(−14.45,−18.38)%]、径向PDSR[(−2.58±0.83)1/s比(−3.61±0.76)1/s]、周向PDSR[0.90(0.70,1.20)1/s比1.25(0.95,1.50)1/s]、纵向PDSR[0.70(0.58,0.90)1/s比1.10(0.80,1.30)1/s]降低(P<0.05),ECV[34.00(32.00,35.00)%比31.00(29.00,33.50)%]升高(P<0.05)。多元线性回归分析结果示,糖尿病病程是T2DM病人ECV的独立影响因素(β=0.29,P<0.05)。Spearman相关性分析结果示,T2DM病人ECV与左室纵向PS(r_(s)=0.35,P<0.05)、纵向峰值收缩应变率(PSSR)(r_(s)=0.31,P<0.05)呈显著正相关,与左室周向PDSR(r_(s)=−0.29,P<0.05)、纵向PDSR(r_(s)=−0.43,P<0.05)呈显著负相关。结论心脏磁共振T1-Mapping可能发现T2DM病人早期心肌纤维化,T1-Mapping参数与左心室应变参数显著相关。

梓醇对2型糖尿病大鼠心肌纤维化及心肌细胞形态学的影响

目的:探讨梓醇对2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)大鼠心肌纤维化及形态学的影响。方法:采用随机数字表法将90只SPF级雄性Wistar大鼠随机分为正常组10只和实验组80只。实验组大鼠高脂高糖饲料喂养8周后,腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)溶液15 mg/kg制备T2DM模型。将成模大鼠根据空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)、体质量随机分为模型组、二甲双胍组与梓醇低、中、高剂量组。二甲双胍组灌胃二甲双胍混悬液90 mg/kg,梓醇低、中、高剂量组分别灌胃梓醇2.5、5、10 mg/kg,正常组和模型组灌胃等体积生理盐水,每日1次,均灌胃12周。末次给药后,测定各组大鼠FPG;免疫组化法检测心肌组织转化生长因子β_(1)(transforming growth factor-β_(1),TGF-β_(1))表达;HE染色观察心肌组织结构情况。结果:与模型组比较,梓醇高、中、低剂量组大鼠FPG及心肌TGF-β_(1)降低(P<0.05);梓醇高剂量组与正常组比较,心肌纤维、胞质、胶原纤维、细胞核均无显著差异。模型组与梓醇低剂量组心肌纤维排列紊乱或不规整,部分溶解、断裂,甚至呈小片状分布,胞质染色不均匀,中度或轻度肿胀;部分细胞核变形,固缩,甚至碎裂消失;心肌间隙显著增宽,可见大量或少量炎性细胞或成纤维细胞。二甲双胍组与梓醇中剂量组心肌纤维排列略规整,心肌细胞核极少部分变形;心肌间隙略增宽,炎性细胞较少。结论:梓醇可降低T2DM大鼠FPG与心肌纤维化水平,可能为保护T2DM大鼠心肌细胞的有效手段。

氧化苦参碱对糖尿病心肌病小鼠心肌纤维化的作用及机制

目的研究氧化苦参碱(OMT)对高脂高糖饮食(HFD)联合链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病(DM)心肌病(DCM)模型小鼠心肌纤维化(MF)的影响及其机制。方法61只C57BL/6小鼠分为对照组(n=12,Control组,正常维持饲料)和HFD组(n=49,HFD组,高脂高糖饮食),喂养12周后检测胰岛素(INS)抵抗及注射葡萄糖耐量(IPGTT)实验;对出现INS抵抗和糖耐量异常的小鼠腹腔注射剂量为30 mg/kg STZ、2 d注射1次、共注射4次,以1周后小鼠空腹血糖(FBG)≥11.1 mmol/L为2型DM造模成功;将造模成功的HFD组小鼠随机分为模型组(n=13,DCM组)、25 mg/kg OMT低剂量组(n=13,OMT-L组)、50 mg/kg OMT高剂量组(n=12,OMT-H组)及250 mg/kg二甲双胍组(n=11,Met组),Control组和DCM组灌胃生理盐水,另3组分别灌胃相应药物,干预2个月并监测FBG;采用小动物超声仪检测各组小鼠左心室射血分数(EF)和短轴缩短率(FS%),采用试剂盒检测各组小鼠血清胆固醇(CHO)、甘油三酯(TGs)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,苏木精-伊红(HE)和Masson染色观察各组小鼠心肌组织的形态学特征和胶原沉积情况,Western blot检测各组小鼠心肌组织中MF相关蛋白[α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、Ⅲ型胶原(CollagenⅢ)、纤维连接蛋白(FN)]及沉默信息调节因子1(SIRT1)表达,采用免疫组织化学染色法(IHC)检测各组小鼠心肌组织中α-SMA和SIRT1蛋白的表达。结果OMT-H组小鼠FBG较DCM组降低(P<0.05),EF和FS%较DCM组升高(P<0.05);OMT组小鼠血清T-CHO、TGs及LDL-C水平较DCM组降低(P<0.05),HDL-C含量较DCM组升高(P<0.05);与DCM组相比,OMT组小鼠心肌组织细胞形态正常且胶原沉积面积减少;OMT组小鼠心肌组织中MF相关蛋白的表达较DCM组降低(P<0.05),SIRT1蛋白表达较DCM组上升(P<0.05);IHC结果显示,与DCM组相比,OMT组小鼠心肌组织中α-SMA蛋白表达降低、SIRT1蛋白表达上升(P<0.05)。结论OMT改善DM小鼠MF,其作用机制可能与调节SIRT1信号有关。

基于TGF-β1/p38MAPK/CREB信号通路探讨心衰康胶囊对糖尿病大鼠心肌纤维化的改善作用

目的探究心衰康胶囊是否通过调控TGF-β1/p38MAPK/CREB信号通路改善糖尿病大鼠心肌纤维化。方法清洁SPF级雄性大鼠32只,随机分为对照组、模型组、心衰康胶囊组(1.0 g·kg^(-1)·d^(-1))、缬沙坦组(30 mg·kg^(-1)·d^(-1))。除对照组外,按30 mg/kg体质量腹腔注射浓度为1 mg/mL的链脲佐菌素(STZ)制备糖尿病模型大鼠,对照组和模型组均0.9%氯化钠溶液灌胃。采用苏木素-伊红(HE)染色观察糖尿病大鼠心肌组织病理变化;免疫组织化学法检测转化生长因子-β1(TGF-β1)蛋白表达水平;酶联免疫吸附剂测定(ELISA)法检测大鼠TGF-β1、大鼠B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)、半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)蛋白水平;Western Blot法检测心肌组织中TGF-β1、磷酸化-丝裂原活化蛋白激酶p38抗体(p-p38MAPK)、cAMP反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)蛋白表达水平的变化。结果与对照组比较,模型组大鼠心肌排列紊乱,组织肿胀,有大量炎性细胞浸润,Bcl-2、p-CREB蛋白表达水平明显降低(P<0.01),TGF-β1、Caspase-3、p-p38 MAPK蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01);与模型组相比,心衰康胶囊组大鼠心肌纤维排列较整齐,炎性浸润减少,组织间隙无明显水肿,TGF-β1、p-p38 MAPK、Caspase-3蛋白表达水平明显降低(P<0.01,P<0.05),p-CREB、Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.05,P<0.01)。结论心衰康胶囊可抑制糖尿病大鼠的心肌纤维化以及细胞凋亡,其改善作用可能与调控TGF-β1/p38MAPK/CREB信号通路有关。

SO_(2)对2型糖尿病大鼠心肌纤维化的影响及与MST1/LATS1的关系

目的 探讨外源性气体信号分子二氧化硫(SO_(2))在2型糖尿病(T2DM)大鼠心肌纤维化中的作用,并观察其对促凋亡蛋白及MST1/LATS1通路蛋白表达的影响。方法 40只雄性SD大鼠被随机分为对照组、糖尿病组、糖尿病+SO_(2)组、SO_(2)组,其中糖尿病组和糖尿病+SO_(2)组使用链脲佐菌素(STZ)腹腔内注射复制糖尿病大鼠模型,当血糖≥16.7 mmol/L时表示糖尿病模型复制成功,随后以高糖高脂饲料进行喂养。对照组和SO_(2)组注射等量柠檬酸-柠檬酸钠溶液,之后糖尿病+SO_(2)组和SO_(2)组以外源性SO_(2)供体腹腔内注射持续4周。对大鼠心肌组织进行Masson染色,观察心肌胶原纤维形成情况;透射电镜观察心肌超微结构;TUNEL染色观察心肌组织细胞凋亡情况;Western blotting检测心肌组织CollagenⅠ、CollagenⅢ、MST1、LATS1、Cleaved-Caspase-3、Cleaved-Caspase-9蛋白表达。结果 糖尿病组Masson染色阳性面积较对照组大(P <0.05),糖尿病+SO_(2)组较糖尿病组小(P <0.05),对照组与SO_(2)组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。糖尿病组心肌组织CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白相对表达量较对照组高(P <0.05),糖尿病+SO_(2)组较糖尿病组低(P <0.05),对照组与SO_(2)组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。糖尿病组心肌组织细胞凋亡率较对照组高(P <0.05),糖尿病+SO_(2)组较糖尿病组低(P <0.05),对照组与SO_(2)组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。糖尿病+SO_(2)组心肌组织CleavedCaspase-3、Cleaved-Caspase-9、MST1和LATS1蛋白相对表达量较糖尿病组低(P <0.05),对照组与SO_(2)组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 SO_(2)调节了2型糖尿病大鼠心肌组织中促凋亡蛋白及MST1/LATS1通路蛋白的表达,并与心肌纤维化的改善呈相关性。

低密度脂蛋白受体相关蛋白5对糖尿病合并心肌梗死患者心肌纤维化的影响

目的:探讨血清低密度脂蛋白受体相关蛋白5(LRP5)对2型糖尿病(T2DM)合并急性心肌梗死(AMI)患者心肌纤维化(MF)的影响。方法:选取四川省盐亭县人民医院2021年3月至2023年11月收治的142例AMI患者,其中45例合并T2DM的患者为T2DM+AMI组,97例未合并T2DM的患者为AMI组。比较2组一般资料、LRP5表达水平、心功能指标和MF指标;采用Pearson相关分析T2DM+AMI组患者LRP5表达水平与心功能和MF指标的相关性;采用单因素有序logistic回归分析T2DM+AMI组患者LRP5表达水平对MF指标的影响。结果:T2DM+AMI组多支血管病变比例、Killip分级Ⅲ~Ⅳ级患者比例高于AMI组(P<0.05);T2DM+AMI组左室射血分数(LVEF)、每搏输出量(SV)、心输出量(CO),二尖瓣口舒张早期和晚期血流速度峰值的比值(E/A)低于AMI组(P<0.05);T2DM+AMI组透明质酸(HA)、Ⅰ型前胶原(PCⅠ)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达水平高于AMI组(P<0.05);相关分析显示,T2DM+AMI患者LRP5表达水平与LVEF、SV、CO、E/A呈负相关(r=-0.275、-0.211、-0.242、-0.234,P均<0.05),与HA、PCⅠ、PCⅢ、TGF-β1、MMP-2呈正相关(r=0.316、0.332、0.354、0.395、0.366,P均<0.05);单因素有序logistic回归分析结果显示LRP5是T2DM+AMI患者HA(OR=1.291)、PCⅠ(OR=1.273)、PCⅢ(OR=1.682)、TGF-β1(OR=1.935)、MMP-2(OR=1.643)表达水平增加的危险因素(P<0.05)。结论:T2DM合并AMI患者心功能恶化与MF程度比单纯AMI患者更加严重,LRP5表达水平增加是T2DM合并AMI患者发生MF的危险因素。

硫化氢对糖尿病大鼠心肌纤维化及MAPK1/3和MMP-8表达的影响

目的探讨气体信号分子硫化氢(H2S)对糖尿病大鼠心肌纤维化及MAPK1/3和MMP-8蛋白表达的影响。方法 40只SD大鼠随机分为4组:正常对照组、糖尿病大鼠组(STZ组)、硫化氢干预糖尿病大鼠组(STZ+H2S组)和硫化氢干预正常大鼠组(H2S组)。用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)(40 mg/kg)建立糖尿病大鼠模型;对照组每天腹腔注射生理盐水;STZ+H2S组与H2S组每天腹腔注射硫氢化钠(H2S供体)溶液(100μmol/kg),8周后处死大鼠,HE染色观察心肌纤维病理形态学变化,Western blot法检测Collagen I、MAPK1/3和MMP-8蛋白的表达。结果与对照组相比,糖尿病组大鼠心肌组织胶原含量明显升高,心肌间质纤维化,Collagen I、MAPK1/3和MMP-8蛋白表达水平显著升高(P<0.05);糖尿病大鼠经硫化氢干预后大部分心肌纤维呈平行排列,结构清晰,间质有少量疏松结缔组织,Collagen I、MAPK1/3和MMP-8蛋白表达水平明显下调(P<0.05),而非糖尿病硫化氢干预组心肌纤维化程度及心肌组织Collagen I、MAPK1/3和MMP-8蛋白表达水平较对照组均无明显差异(P>0.05)。结论 H2S可改善糖尿病大鼠心肌纤维化,其机制可能与抑制MAPK1/3/MMP-8信号通路有关。

法舒地尔抑制氧化应激反应减轻2型糖尿病大鼠心肌纤维化

目的探讨RhoA/ROCK通路在糖尿病大鼠心肌纤维化形成中的作用。方法高脂饮食联合腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)建立2型糖尿病大鼠模型。实验分为对照(NC)组,糖尿病(DM)组和法舒地尔干预(DF)组(每天腹腔注射10 mg/kg,分两次注射)。24周末,应用HE染色观察大鼠心脏组织形态;电子显微镜观察心肌的超微结构;Masson染色观察心肌胶原沉积情况;羟脯氨酸(HYP)检测心肌胶原含量;测定超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量;免疫组化法检测一氧化氮合酶(eNOS)表达;Western blot法检测心肌中磷酸化肌球蛋白磷酸酯酶靶点亚单位1(MYPT1)表达,代表ROCK活性。结果糖尿病组大鼠较对照组大鼠心肌组织ROCK活性明显增强(P<0.01),MDA含量增高(P<0.01),SOD活力降低(P<0.01),eNOS表达明显下调(P<0.01),心肌胶原明显增多(P<0.01)。法舒地尔干预组大鼠较糖尿病组心肌组织ROCK活性显著降低(P<0.01),MDA含量降低(P<0.05),SOD活力增加(P<0.01),eNOS表达上调(P<0.05),心肌胶原明显减少(P<0.01)。结论 ROCK抑制剂法舒地尔抑制心肌组织氧化应激反应并上调eNOS表达,有效地减轻2型糖尿病大鼠心肌纤维化。

厄贝沙坦对抗糖尿病大鼠心肌纤维化作用及机制

目的:观察厄贝沙坦对抗糖尿病大鼠心肌纤维化的作用,并分析细胞外调节信号激酶(ERK)通路在其中的作用。方法:健康雄性SD大鼠32只,随机分成两组:正常对照组(CON,n=10),实验组(n=22)。实验组糖尿病造模成功20只,随机分为2组(n=10):糖尿病组(DM)、厄贝沙坦+糖尿病组(Ir+DM)。8周后测定空腹血糖(FBG)水平,计算各组大鼠体重(BW)、心体比(H/B)和左室重量指数(LVWI);Masson染色观察心肌形态及纤维化的发生;ELISA检测心肌组织胶原Ⅰ(colⅠ)、胶原Ⅲ(colⅢ)含量;Western blot检测心肌组织ERK1/2、p-ERK1/2蛋白的表达。结果:与CON组相比,DM组大鼠FBG水平、H/B、LVWI显著升高,体重显著减轻,colⅠ、colⅢ含量显著增加,心肌组织p-ERK1/2蛋白表达及p-ERK1/2/ERK1/2比值增加(P<0.05,P<0.01),ERK1/2无明显变化。Masson染色显示DM组心肌胶原纤维粗大,交织成网状,排列分布不均,沉积增多。与DM组大鼠相比,厄贝沙坦干预后大鼠体重明显增加,H/B、LVWI、心肌组织colⅠ、colⅢ含量明显降低(P<0.05,P<0.01),p-ERK1/2蛋白表达及p-ERK1/2/ERK1/2比值降低(P<0.01),且心肌形态改善明显。结论:糖尿病可诱导心肌纤维化的发生,厄贝沙坦可通过抑制ERK的活化减轻糖尿病诱导的心肌纤维化损伤。

加味桃核承气汤及不同提取物对糖尿病大鼠心肌纤维化的影响

目的观察加味桃核承气汤及不同提取物对糖尿病大鼠心肌纤维化的影响。方法用链脲佐菌素腹腔注射复制糖尿病大鼠模型,观察加味桃核承气汤全方煎剂及水提醇沉、正丁醇、乙酸乙脂不同提取处理成分群对糖尿病大鼠心肌纤维化影响,并与达美康对照,共治疗8周。测定心脏湿重/体重比、心肌羟脯氨酸及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达。结果各组心脏/体重比值与空白组比较,全方组未显示出差异,其余各组均显著增加(P<0.01);心肌羟脯氨酸含量测定也显示出相似的效果;各组心肌Ⅰ型胶原mRNA表达均较空白组下降,但无统计学意义;Ⅲ型胶原蛋白mRNA表达模型组较空白组显著升高,中药全方、水提醇沉及正丁醇组较模型组显著降低(P<0.05-0.01)。结论加味桃核承气汤全方煎剂及水提醇沉、正丁醇提取物能阻止糖尿病大鼠心肌胶原异常增生,维持Ⅰ/Ⅲ型胶原正常比值,作用似优于达美康。

抗纤益心方通过TGF-β/Smads信号通路改善糖尿病心肌病大鼠心肌纤维化和心功能的研究

目的:研究抗纤益心方是否通过转化生长因子(TGF)-β/Smads信号通路参与改善糖尿病心肌病(DC)大鼠心肌纤维化和心功能。方法:将40只大鼠随机分成4组各10只:对照组(C组)大鼠予单次腹腔注射生理盐水,抗纤益心方组(AF组)大鼠在C组基础上加用抗纤益心方溶液灌胃,DC组大鼠予单次腹腔注射链脲佐菌素制作DC模型,DC+AF组大鼠予单次腹腔注射链脲佐菌素和抗纤益心方溶液灌胃处理;观察4组大鼠经过不同处理后心功能及心肌纤维化变化情况。结果:DC组与DC+AF组大鼠血糖浓度明显高于C组(P<0.05);DC组大鼠左室舒张末压(LVEDP)显著上升(P<0.05),左室收缩压(LVSP)显著下降(P<0.05),DC+AF组大鼠LVSP明显高于DC组(P<0.05),LVEDP低于DC组(P<0.05);DC组与DC+AF组大鼠Ⅰ型胶原水平明显高于C组(P<0.05),DC+AF组大鼠Ⅰ型胶原水平显著低于DC组(P<0.05);DC组大鼠TGF-β1、Smad2及Smad3的磷酸化水平显著高于C组(P<0.05),而DC+AF组大鼠TGF-β1、Smad2及Smad3的磷酸化水平明显低于DC组(P<0.05)。结论:抗纤益心方对DC大鼠心肌纤维化具有一定的抑制作用,并能改善大鼠心功能,其作用机制与TGF-β/Smads信号系统密切相关。

丹蛭降糖胶囊对糖尿病血糖波动模型大鼠心肌纤维化的影响

目的:探讨丹蛭降糖胶囊对糖尿病血糖波动模型大鼠心肌纤维化的影响及其可能机制。方法:大鼠腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病模型,并在此基础上通过错时给予胰岛素或葡萄糖建立糖尿病血糖波动模型。在给予丹蛭降糖胶囊治疗6 w后,测定大鼠心脏指数,ELISA法测定心肌组织血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、Ⅰ型和Ⅲ型胶原及转化生长因子β_1(TGF-β_1)水平,Western blot法检测心肌组织Smad3磷酸化水平和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶组织抑制物-2(TIMP-2)蛋白水平,比色法检测心肌组织总抗氧化能力(TAC)和丙二醛(MDA)水平。结果:给予丹蛭降糖胶囊治疗6 w后,模型大鼠心脏指数和心肌组织Ⅰ、Ⅲ型胶原含量较模型组显著降低(P<0.05或P<0.01),心肌组织AngⅡ、TGF-β_1及磷酸化Smad3水平也显著降低(P<0.05或P<0.01);同时丹蛭降糖胶囊能显著升高模型大鼠心肌组织MMP-2蛋白表达水平,降低心肌组织TIMP-2蛋白表达水平,并显著提高心肌组织总抗氧化能力,减少脂质过氧化产物MDA含量(P<0.05或P<0.01)。结论:丹蛭降糖胶囊能显著抑制糖尿病血糖波动模型大鼠心肌纤维化,其机制与增强心肌组织抗氧化能力、抑制心肌局部RAS激活及TGF-β_1/Smad3信号通路活化、调控MMP-2/TIMP-2蛋白表达水平有关。

低剂量乙醇干预减轻糖尿病大鼠心肌纤维化的机制探讨

目的:观察低剂量乙醇干预对糖尿病大鼠心肌纤维化的影响,并初步探讨其机制。方法:雄性SD大鼠分成正常对照组(Con),糖尿病4周组(DM 4w),糖尿病8周组(DM 8w)和乙醇+糖尿病8周组(Et OH+DM 8w)。造模8周后,检测血流动力学指标、心体比、心肌羟脯氨酸(Hp)含量,Masson染色测量胶原容积分数(CVF),Realtime PCR测定乙醛脱氢酶2(ALDH2)mRNA改变,Western blot测定p-JNK和JNK蛋白表达。结果:与Con组大鼠相比,DM 4w组各项指标无明显改变;随病程延长,DM 8w组平均动脉压(MAP)和心率(HR)降低,心体比、Hp含量及CVF增高;ALDH2 mRNA表达下降,p-JNK/JNK增加(P<0.05)。与DM 8w组大鼠相比,Et OH+DM 8w组上述指标均有改善(P<0.05)。结论:低剂量乙醇可能通过增高ALDH2表达、抑制JNK表达,改善糖尿病大鼠心肌纤维化损伤。

TGF-β/Smads信号通路参与苦参素抑制糖尿病心肌病大鼠心肌纤维化及改善心功能作用

目的观察TGF-β/Smads信号通路是否参与苦参素抑制糖尿病心肌病大鼠心肌纤维化及改善心功能作用。方法采用链脲佐菌素单次腹腔注射法制作糖尿病心肌病大鼠模型,苦参素灌胃法对其进行干预。分别建立对照组(Ctrl)、苦参素组(Mat)、糖尿病心肌病组(Db CM)和糖尿病心肌病+苦参素组(Db CM+Mat)。对照组仅予以单次腹腔注射生理盐水,苦参组先予以单次腹腔内注射生理盐水,随后应用苦参素溶液灌胃;糖尿病心肌病组仅予以单次腹腔注射链脲佐菌素,糖尿病心肌病+苦参素组先予以单次腹腔注射链脲佐菌素,随后应用苦参素溶液灌胃。应用心脏血流动力学检查每组大鼠左室收缩压力(left ventricular systolic pressure,LVSP)及左室舒张末压力(left ventricular end-diastolic pressure,LVEDP)以评估心脏功能;采用免疫荧光染色法评估心肌纤维化程度;采用蛋白免疫印迹法检测转化生长因子-β1(transforming growth factor beta-1,TGF-β1)、磷酸化的Smad2和Smad3蛋白水平以评估TGF-β1/Smads信号通路的活化。结果与对照组相比,糖尿病心肌病组大鼠心脏LVSP显著下降(P<0.05),LVEDP显著升高(P<0.05);Ⅰ型胶原表达显著增加(P<0.05);TGF-β1(P<0.05)及P-Smad2/3(P<0.05)蛋白水平表达均显著上调。与糖尿病心肌病组相比,糖尿病心肌病+苦参素组大鼠LVSP显著升高(P<0.05),LVEDP显著下降(P<0.05);Ⅰ型胶原表达显著减少(P<0.05);TGF-β1及P-Smad2/3蛋白水平表达均显著下调(P<0.05)。结论 TGF-β/Smads信号通路参与苦参素抑制糖尿病心肌病大鼠心肌纤维化及改善心功能作用。

滋膵通脉饮对糖尿病心肌病大鼠心肌纤维化和转化生长因子β1/Smads信号通路的影响

目的探讨滋膵通脉饮对糖尿病心肌病大鼠转化生长因子(TGF)-β1/Smads3信号通路的影响。方法将SD大鼠随机分为空白对照组,模型组,滋膵通脉饮高、低剂量组(17.6 g·kg^-1,8.8 g·kg^-1)和依那普利组(0.53 mg·kg^-1),空白对照组予以腹腔注射等量柠檬酸-柠檬酸三钠缓冲液,余组大鼠采用高脂高糖饲料喂养+单次腹腔注射链脲佐菌素的方法构建2型糖尿病大鼠模型。造模结束后,模型组和空白对照组灌服同等容积的蒸馏水,余组分别给与药物干预,共干预4周。4周后观察心脏指数和左室指数,PCR技术检测大鼠心肌组织转化生长因子(TGF)-β1 mRNA、Smads3 mRNA和Smads7 mRNA的表达,蛋白印迹法检测心肌组织TGF-β1、Smads3、Smads7的蛋白表达。Masson染色观察大鼠心肌结构的改变,计算胶原容积分数。结果与空白对照组比较,模型组心脏指数和左室指数明显升高(P<0.01);与模型组比较,滋膵通脉饮高剂量组、滋膵通脉饮低剂量组和依那普利组心脏指数和左室指数明显降低(P<0.05,P<0.01);与空白对照组比较,模型组大鼠TGF-β1 mRNA、Smads3 mRNA和TGF-β1、Smads3蛋白表达明显升高(P<0.01);与模型组比较,滋膵通脉饮高剂量组、滋膵通脉饮低剂量组和依那普利组TGF-β1 mRNA、Smads3 mRNA和TGF-β1、Smads3蛋白表达明显降低(P<0.01);与空白对照组比较,模型组大鼠Smads7 mRNA和Smads7蛋白表达明显降低(P<0.01);与模型组比较,滋膵通脉饮高剂量组、滋膵通脉饮低剂量组和依那普利组Smads7 mRNA和Smads7蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。Masson染色结果显示:空白对照组大鼠肌纤维排列整齐,肌纤维连接完好。模型组大鼠心肌纤维排列紊乱,胶原纤维增多,可见纤维断裂。高剂量组大鼠肌纤维排列整齐,可见极少量胶原纤维。低剂量组大鼠肌纤维排列稍紊乱。依那普利组可见极少量胶原纤维,肌纤维断裂不明显。与空白对照组比较,模型组大鼠胶原容积分数明显升高(P<0.01);与模型组比较,滋膵通脉饮高剂量组、滋膵通脉饮低剂量组和依那普利组胶原容积分数明显降低(P<0.01)。结论滋膵通脉饮能抑制糖尿病心肌病大鼠心肌纤维化,改善心肌重构,其作用可能与调节TGF-β1/Smads信号通路有关。

硫化氢对糖尿病大鼠心肌纤维化及PPARγ、NF-κB表达的影响

目的:初步探讨硫化氢(H2S)对糖尿病心肌纤维化的影响及其作用机制。方法:采用链脲佐菌素(STZ)单次腹腔注射的方法制作大鼠糖尿病模型,以硫氢化钠作为外源性H2S供体。将40只雄性SD大鼠随机分为对照组、STZ组、STZ+H2S组及H2S组,每组各10只。8周后处死大鼠,HE染色及VG染色观察心肌胶原分布情况,并用图像分析系统测量心肌间质胶原容积分数。Western blotting观察大鼠心肌组织中Ⅰ型胶原、PPARγ和NF-κB的表达水平。结果:与对照组相比,STZ组大鼠心肌组织胶原纤维明显增多,Ⅰ型胶原表达水平明显升高(P<0.05),PPARγ表达明显减少(P<0.05),NF-κB蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。与STZ组相比,STZ+H2S组心肌胶原纤维较少,Ⅰ型胶原表达明显降低(P<0.05),PPARγ表达显著上调(P<0.05),NF-κB蛋白表达显著降低(P<0.05),而H2S组大鼠心肌组织Ⅰ型胶原、PPARγ以及和NF-κB蛋白表达水平较对照组均无显著差异。结论:硫化氢可改善糖尿病心肌纤维化,其内在机制可能与PPARγ-NF-κB途径有关。