铜绿假单胞菌-甘露糖敏感血细胞凝集素抗肿瘤的作用机制及临床应用

铜绿假单胞菌-甘露糖敏感血细胞凝集素(PA-MSHA)在抗肿瘤领域的应用不断增加。PA-MSHA可以通过抑制表皮生长因子受体(EGFR)通路促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞侵袭和迁移、分化以及改变耐药和细胞上皮-间充质转化(EMT)状态,同时PA-MSHA也通过Toll样受体(TLR)增强巨噬细胞和T细胞对肿瘤细胞的免疫杀伤和抑制。该文梳理并综述关于PA-MSHA抗肿瘤的机制及临床应用,认为PA-MSHA通过作用于细胞甘露糖基的调节过程改变了EGFR和TLR蛋白的糖基化。PA-MSHA可能作用的细胞膜蛋白包括更多的高甘露糖基信号通路受体,阐明PA-MSHA和甘露糖基之间的深层次关系对PA-MSHA的机制研究及临床应用意义重大。

苯硼酸类糖敏感材料在胰岛素控释系统中的应用

近年来,葡萄糖敏感材料因在糖尿病治疗领域中的潜在应用而受到广泛关注,其中基于苯硼酸(PBA)的糖敏感材料因其稳定性、可持续响应等优点被广泛应用于自调节胰岛素控释系统中。本文主要综述了近年来基于苯硼酸的葡萄糖敏感微/纳米凝胶、自组装胶束、囊泡以及纳米粒的研究进展,并简要介绍了这些材料的制备方法。相信随着苯硼酸类糖敏感材料性能的不断优化,它将更加适合应用于胰岛素控释系统中。

新型含苯硼酸基团的两亲性共聚物微球的制备及其糖敏感性能

将3-丙烯酰胺基苯硼酸与马来酸酐改性β-环糊精反应,合成了一种新型的共聚物,并采用13C NMR,IR和UV-Vis等技术对共聚物的结构进行了表征.利用SEM研究了聚合物在甲醇中的自组装形态.通过在不同溶剂中溶解性能的研究,探讨了共聚物与甲醇的络合机理以及自组装机理.以格列奇特为模型药物,研究了聚合物微球在不同环境下的振荡释放行为.结果表明,载药微球在30 min内对葡萄糖刺激迅速响应,在葡萄糖浓度为3 g/L和无糖环境之间的振荡释放呈'开-关'式自调释放.

基于对巯基苯硼酸的糖敏感水凝胶的制备

本文通过简单直接混合海藻酸钠、对巯基苯硼酸和Ca Cl2构建水凝胶。通过扫描电子显微镜观察到水凝胶具有明显的大孔多孔结构。溶胀实验证实随着对巯基苯硼酸浓度的增加,水凝胶的稳定性逐渐增强。此外,随着溶液中葡萄糖浓度的增加,凝胶降解速率逐渐加快。该多孔糖敏感水凝胶有望作为药物载体用于糖尿病的治疗。

霍乱弧菌甘露糖敏感血凝素研究进展

霍乱是一种烈性肠道传染病,是我国传染病防治法规定的甲类传染病。国内外不少学者发现,菌毛与霍乱弧菌的黏附定居有关,其中甘露糖敏感血凝素(MSHA)属于Ⅳ型菌毛,决定Ⅳ型菌毛的血凝活性。MSHA为一免疫原,同时在霍乱弧菌在环境中存活方面起着特殊作用。主要由霍乱弧菌ElTor生物型和O139产生,古典生物型存在其结构基因mshA,但仅以极低水平表达并不产生MSHA。MSHA在霍乱弧菌疫苗及相关诊断试剂盒的研制方面有一定的实用价值。

聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸-N,N-二甲基丙烯酰胺-丙烯酰胺)凝胶的合成和糖敏感性能

用自由基引发3-丙烯酰胺基苯硼酸（AAPBA）、N，N-二甲基丙烯酰胺（DMAA）和丙烯酰胺（AAm）共聚交联制得新型三嵌段水凝胶P（AAPBA-CO-DMAA-CO-AAm），与传统的两嵌段聚合物相比，该凝胶具有良好的糖敏感特性，在质量浓度200ms／dL以上有较高的糖响应特性，这一数值接近糖尿病病人的血糖阈值，其溶胀度达10倍以上，同时糖响应时间缩短到2～3h．振荡实验结果表明，所得凝胶对糖呈现出良好的刺激．响应特性．

铜绿假单胞菌-甘露糖敏感血凝素腹腔喷洒给药对结直肠癌患者围手术期免疫水平的影响

目的探讨铜绿假单胞菌(PA)-甘露糖敏感血凝素(MSHA)腹腔喷洒给药对结直肠癌患者围手术期免疫水平的影响。方法结直肠癌患者61例均行手术治疗;手术关腹前,A组(31例)腹腔喷洒PA-MSHA 15mL,C组(30例)腹腔喷洒生理盐水15mL。比较两组术前和术后第3天外周血淋巴细胞和单核细胞以及两组术前和术后第5天血清免疫相关指标水平。结果A组和C组术后第3天淋巴细胞计数和淋巴细胞百分比均降低,术后第5天血清IL-6水平升高(P<0.01)。C组术后第3天单核细胞计数降低,A组术后第5天血清IL-2、TNF-α水平均升高(P<0.05)。与C组比较,A组术后第3天淋巴细胞计数升高(P<0.05)。与C组比较,A组术后第5天血清IL-2、IL-6及TNF-α水平均升高(P<0.05或P<0.01)。两组患者术后至出院不良反应发生率相仿(P>0.05)。结论PA-MSHA腹腔喷洒给药可有效改善结直肠癌患者围手术期免疫水平。

铜绿假单胞菌甘露糖敏感血凝素对深Ⅱ度烧伤模型大鼠皮肤修复作用的研究

目的探究铜绿假单胞菌甘露糖敏感血凝素(pseudomonas aeruginosa mannose-sensitive hemagglutinin,PA-MSHA)对深Ⅱ度烧伤模型大鼠皮肤的修复作用,通过对不同剂量PA-MSHA的应用,观察其对烧伤创面愈合速度以及组织病理学变化,以期为烧伤治疗提供新的治疗思路。方法采用控温烫伤仪构建深Ⅱ度烧伤模型大鼠,将造模成功的大鼠随机分为生理盐水组、湿润烧伤膏组、PA-MSHA 8×10^(8)/mL组、20×10^(8)/mL组、50×10^(8)/mL组、125×10^(8)/mL组,每组10只。各给药组大鼠分别给予相应药物,每天上、下午给药2次,持续给药至伤口愈合,观察各组大鼠烧伤创面愈合情况和烧伤皮肤组织病理形态学变化。结果与生理盐水组相比,PA-MSHA 125×10^(8)/mL组在第7天、第14天可见烧伤面积的缩小,差异具有统计学意义(P<0.05);与生理盐水组相比,湿润烧伤膏组烧伤面积增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。烧伤治疗后期,生理盐水和PA-MSHA药物治疗组的烧伤面积未见显著性差异(P>0.05)。与生理盐水组比较,湿润烧伤膏组和PA-MSHA各剂量组皮肤组织可见较厚的新生表皮层,真皮层中结缔组织和新生血管均明显增多。结论PA-MSHA可修复深Ⅱ度烧伤模型大鼠皮肤,其机制可能与减轻烧伤创面炎症反应,促进血管新生有关。

甘露糖敏感性绿脓杆菌制剂对加热后肝癌细胞生物学特性的影响

目的 探讨甘露糖敏感性绿脓杆菌制剂（PA-MSHA）对水浴加热后有转移潜能的人肝癌MHCC97L细胞增殖和侵袭能力的影响及其机制。方法 42℃水浴加热前2 h加入1×10^11/L PA-MSHA,加热组不加药,对照组不加热、不加药,其他处理相同并在同一时间点观察。在不同的时间观察细胞增殖、生长曲线、克隆形成率、流式细胞术分析细胞周期（FCM）、侵袭、运动、酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测血管内皮生长因子（VEGF）和基质金属蛋白酶（MMP）-2蛋白表达。结果PA-MSHA能够逆转加热对人肝癌MHCC97L细胞的增殖促进作用,和对照组比较,加热联合PA-MSHA能明显抑制人肝癌MHCC97L细胞的增殖（P〈0.01）,其最大抑制效应为加热后48 h（42.3%）,细胞倍增时间延长了1.68倍,加热联合PA-MSHA组其加热后48、96 h的细胞集落形成率均明显降低（P〈0.01）,FCM显示,加热联合PA-MSHA能逆转加热对细胞周期的影响,和对照组比较,其48 h的G1期细胞比例明显升高,S＋G2期细胞比例明显降低（P〈0.01）,其96 h的G1期和S＋G2期细胞比例差异无统计学意义（P〈0.05）。加热联合PA-MSHA组其加热后48 h和96 h相同数量的细胞穿过人工基底膜到达Transwell小室膜背面的细胞平均数（侵袭实验）和穿过Transwell小室膜到达背面的MHCC97L细胞平均数（运动实验）均明显低于加热组（P〈0.01）,ELISA法检测相同数量细胞的上清液发现,加热联合PA-MSHA组其加热后48、96 h细胞VEGF和MMP-2蛋白的分泌量和加热组比较差异无统计学意义（P〈0.05）。结论 PA-MSHA能抑制体外加热后肝癌细胞的增殖,其作用和抑制细胞进入DNA合成期和分裂期有关,进一步抑制其侵袭运动能力,其作用和MMP-2、VEGF表达无关。

铜绿假单胞菌-甘露糖敏感血凝菌毛株对膀胱癌细胞增殖的抑制作用及机制

目的 观察铜绿假单胞菌-甘露糖敏感血凝菌毛株（PA-MSHA）对膀胱癌细胞株的作用,探讨其作用机制.方法 使用细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测肿瘤细胞的增殖,荧光染色法检测细胞凋亡形态,分光光度法检测凋亡因子半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-2和Caspase-9的水平.结果 磷酸盐缓冲液（PBS）组作用T24和5637细胞A450值分别为1.31和1.62,PA-MSHA组A450值分别为0.28和0.41,两组差异有统计学意义（P＜0.05）;PA-MSHA处理后的膀胱癌细胞出现凋亡小体;PA-MSHA能够活化T24和5637细胞中Caspase-3及Caspase-9蛋白,与PBS组比较差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 PA-MSHA可以抑制T24和5637细胞增殖,并诱导凋亡.

铜绿假单胞菌甘露糖敏感血凝素对脓毒症大鼠急性肺损伤的保护作用

目的探讨铜绿假单胞菌甘露糖敏感血凝素(PA-MSHA)对脓毒症致急性肺损伤的影响及可能机制。方法以盲肠结扎穿孔法(CLP)复制大鼠脓毒症模型。按随机数字法将120只健康SD大鼠分为假手术对照组(SC组)、脓毒症组(CLP组)、术前治疗组(Pre T组)和术后治疗组(Pos T组),每组各30只。于制模后12、24、36 h分别采集外周血测定血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、IL-10及转化生长因子β(TGF-β)浓度并计算肺损伤病理评分。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肺组织Toll样受体4(TLR4)m RNA表达,并作肺组织TLR4 m RNA表达与病理学评分的Pearson相关性分析。结果 SC组各时间点血清细胞因子浓度无明显变化(F=0.04、0.09、1.25、1.77,P均>0.05)。与CLP组和Pos T组相比,各时间点Pre T组的血清TNF-α、IL-6浓度明显较低,而IL-10、TGF-β浓度明显较高(P均<0.05),而Pos T组仅在术后36 h的IL-10高于CLP组(P<0.05)。四组大鼠间的肺组织TLR4 m RNA表达水平及四组间各时间点肺组织病理学评分比较,差异均有统计学意义(F=66.01、20.03、71.21、69.02,P均<0.05),SC组及Pre T组明显优于CLP组和Pos T组(P均<0.05)。同时,肺组织TLR4 m RNA表达与病理学评分存在明显的相关性(r=0.732,P<0.05)。结论术前给予PA-MSHA可减轻脓毒症大鼠肺病理损伤,其机制可能与调节外周血单核细胞TLR4表达水平、调控细胞因子平衡、减轻炎症级联放大效应有关。

下丘脑主要核团对机体血糖的影响

最早提出大脑调节葡萄糖稳态观点的是生理学家Claude Bermard。1854年,Dr Bemard发现刺穿兔脑的第四脑室会导致糖尿病的发生[1]。在之后的几十年里,葡萄糖代谢的中枢调节理论不断有新的突破,人们发现了糖敏感神经元,并且证明了它们在维持正常血糖中的作用。这类特殊的神经元群,能通过感知激素(如胰岛素和瘦素)和营养物质(如葡萄糖和脂肪酸)调节血糖稳态,主要集中于下丘脑和脑干等区域。其中,下丘脑在调节内分泌轴、生殖功能和能量平衡中发挥尤为重要的作用。

PA-MSHA抗肿瘤效应的免疫机制研究

目的研究铜绿假单胞菌甘露糖敏感血凝菌毛株(pseudomonas aeruginosa-mannose sensitive hemagglutinin,PA-MSHA)处理树突状细胞(dendritic cells,DCs)后对其功能及激活T细胞杀伤肿瘤细胞效应的影响。方法取小鼠骨髓来源的DC,观察PA-MSHA体外处理后对DC表面分子、吞噬功能及T细胞杀伤功能的影响。结果 PA-MSHA处理的DC其表面分子CD40、I-E表达显著上升,吞噬功能显著下降,由DC诱导的活化T细胞对肿瘤细胞的杀伤效应显著高于对照组。结论 PA-MSHA能有效促进DC成熟并增强抗肿瘤免疫效应。

铜绿假单胞菌制剂在恶性肿瘤中的辅助治疗作用

当前,恶性肿瘤已越来越趋向于多方面的综合治疗.带有甘露糖敏感性血凝菌毛的铜绿假单胞菌(pseudomonas aeruginosa-mannosesensitive hemagglutinin,PA-MSHA)制剂是一类用于免疫治疗的生物制剂,正被应用于恶性肿瘤的治疗过程中.本文重点介绍PA-MSHA制剂对恶性肿瘤辅助治疗作用的研究进展.

预防性应用PA—MSHA对严重脓毒症中性粒细胞移行的影响

目的通过观察铜绿假单胞菌一甘露糖敏感血凝素（PA—MSHA）对严重脓毒症大鼠中性粒细胞体外移行的影响，探讨严重脓毒症发病机制及PA—MSHA对严重脓毒症的作用。方法大鼠随机分为对照组（C组）、严重脓毒症组（Ss组）、PA—MSHA预处理组（PA组）和PA—MSHA预处理严重脓毒症组（PA—SS组）。严重脓毒症动物模型通过人粪便悬液腹腔注射制作。PA—MSHA预处理方案为连续7d0．3mLPA—MSHA皮下注射。观察大鼠一般情况，48h生存情况，大体解剖观察，中性粒细胞体外趋化数，细胞因子IL-6、iNOS、IL-10水平。结果PA—ss组在一般情况、48h生存情况、大体解剖观察上均优于sS组，细胞因子水平也较sS组下降。sS组及PA—ss组与c组和PA组比较，中性粒细胞体外趋化数量显著下降（P〈0．01）。C组与PA组、SS组与PA—SS组中性粒细胞体外趋化细胞数比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论严重脓毒症时中性粒细胞体外移行能力发生严重障碍，连续7d0．3mLPA—MSHA预处理无法改善严重脓毒症中性粒细胞体外移行能力，但可通过下调炎症因子水平，减缓严重脓毒症病情恶化，延长生存时间，为临床救治争取宝贵时间。

含硼酸基团环境响应型高分子聚合物的研究进展

系统综述了含硼酸基团的环境响应型高分子聚合物在药物缓释领域及生物医药领域中的研究进展。对含苯硼酸基团的智能高分子系统:聚乙烯醇-硼酸(PVA-PBA)系统,N-异丙基丙稀酰胺-3-丙稀酰胺苯硼酸(NIPAAm-AAPBA)系统,以及其它含氨基的高分子和3-丙烯酰胺苯硼酸共聚系统对环境敏感度及系统的相应变化,与其在药物控释中的应用作了较详细的论述和比较。并对含硼酸基团的高分子系统在生物医药领域中的应用做了一定的概述。

PA-MSHA菌苗治疗复发性口腔溃疡

目的观察ＰＡ－ＭＳＨＡ菌苗（绿脓杆菌甘露糖敏感血凝菌毛株菌苗）治疗复发性口腔溃疡的疗效．方法 的例复发性口腔溃疡患者被分为菌苗组（３８例）和转移因子对照组（２例），并对二组疗效进行比较．结果菌苗组的总有效率（９４．７４％）明显高于转移因子对照组（６７．８６％），二者有显著性差异（Ｐ＜０．０１）．结论 菌苗的良好治疗效果是由于其免疫调节作用和微量元素、维生素的调节作用．

PA-MSHA疫苗增强急性髓细胞白血病源DC对Treg的抑制作用

目的:探讨带有甘露糖敏感血凝菌毛的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosawith mannose sensitive hemagglutina-tion pili,PA-MSHA)疫苗处理后急性髓细胞白血病源性树突状细胞(dendritic cells derived from acute myeloid leukemia,AML-DC)对调节性T细胞(regulatory Tcell,Treg)的抑制作用。方法:rhGM-CSF和rhII-4诱导的AML-DC分为对照组、PA-MSHA组和TNF-α组,培养24h后观察3组AML-DC的形态、流式细胞术检测各组AML-DC的表型、MTT法和混合淋巴细胞反应检测AML-DC对淋巴细胞增殖的作用。磁珠法分离健康人外周血CD4+T细胞,加入各组AML-DC中诱导Treg,ELISA法检测各组Treg上清液中IL-10、TGF-β的水平,流式细胞术检测Treg表面CD4、CD25的表达,RT-PCR法检测Treg中Foxp3mRNA的表达水平。结果:PA-MSHA组和TNF-α组AML-DC呈树突状形态,且CDla、CD80、CD83、CD86和HLA-DR表达较对照组明显升高(P<0.05)。PA-MSHA组和TNF-α组AML-DC诱导的T细胞增殖能力显著增强(P<0.05)。PA-MSHA组和TNF-α组AML-DC诱导产生的Treg分泌较低水平的IL-10、TGF-β(P<0.05),CD4、CD25的表达及Foxp3mRNA水平均较对照组明显降低(P<0.05)。上述各指标PA-MSHA组和TNF-α组间均无明显差异。结论:PA-MSHA疫苗可促进AML-DC的成熟,抑制初始T细胞向Treg的分化,增强AML-DC对AML患者Treg的抑制作用。

PA—MSHA对脓毒症大鼠中性粒细胞移行影响的研究

目的通过观察铜绿假单胞菌甘露糖敏感血凝素（PA—MSHA）对脓毒症大鼠模型中性粒细胞移行的影响，探讨脓毒症的发病机制及PA—MSHA在脓毒症防治中的作用。方法将实验大鼠随机分为6组，即假手术组（c组）、脓毒症7h组（s7组）、脓毒症15h组（S15组）、PA—MSHA预处理组（PA组）、PA—MSHA预处理脓毒症7h组（PA—s7组）和PA—MSHA预处理脓毒症15h组（PA—S15组）。腹腔注射人粪便悬液制作多微生物腹腔感染脓毒症模型。假手术组腹腔注射等量生理盐水，预处理组在造模前连续7d给予0．3mLPA—MSHA皮下注射。观察大鼠一般情况及72h生存率；采用percoll非连续密度离心法分离外周中性粒细胞，应用transwell小室法测定各组大鼠中性粒细胞体外移行数量。结果s7组及S15组大鼠一般情况较PA—s7组及PA—S15组严重。与s组比较，PA—S组72h累积生存率明显增加（P〈0．01）。s7组、S15组中性粒细胞体外移行数明显低于C组（P〈0．01），且S15组中性粒细胞数目明显低于s7组（P〈0．叭）。与s7组比较，PA—s7组中性粒细胞移行数量明显升高（P〈0．01）。结论脓毒症时，中性粒细胞体外移行作用受到抑制，随着病情进展，中性粒细胞体外移行受抑制程度更加明显。PA—MSHA可能通过增强脓毒症早期中性粒细胞移行作用，提高生存率，对脓毒症具有一定的防治作用。

PA-MSHA引起注射局部急性炎症及白细胞介素17、肿瘤坏死因子α和Toll样受体4的表达改变

为研究皮下注射铜绿假单胞菌甘露糖敏感血凝菌毛株(Pseudomonas aeruginosa mannose sensitive hemagglutinin,PA-MSHA)注射液后局部组织的病理学改变及白细胞介素17(interleukin 17,IL-17)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)和Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)表达情况,将30只小鼠随机分为两组,分别皮下注射PA-MSHA和生理盐水,在注射后6、12、24、48及72h取注射局部组织,苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色后观察病理形态改变,并用免疫组化染色和图像分析检测IL-17、TNF-α和TLR4表达水平。结果显示,小鼠皮下注射PA-MSHA后,在给药部位引起以中性粒细胞浸润为主的急性炎症;局部炎症灶中IL-17、TNF-α和TLR4表达在注射后6h升高,24h达到高峰,然后逐渐减低,至72h实验组与对照组无差异;3种炎症因子的表达与炎症反应程度相平行。结果表明,皮下注射PA-MSHA能引起局部组织急性炎症反应,且能改变局部免疫状态。