氧、糖剥夺预处理对大鼠海马神经元热休克蛋白70、c-fos表达的影响

目的:观察氧、糖剥夺预处理对体外培养大鼠海马神经元热休克蛋白70(HSP70)、c-fos基因表达的影响,探讨预处理的神经保护机制。方法:取新生SD大鼠海马组织神经元进行原代培养,培养至12d时,随机分为4组:对照组,单纯氧、糖剥夺组,氧、糖剥夺预处理组和致死性氧、糖剥夺组(n=30)。以换用无糖Earle’s液培养作缺糖处理,通入含体积分数为85%N2、含体积分数为10%H2和含体积分数为5%CO2混合气体作缺氧处理,各组均采用相应的处理方法。应用免疫细胞化学SP法检测各组神经元HSP70及c-fos的表达。结果:HSP70及c-fos的表达在4组比较差异有统计学意义(F=31.76,50.44,P<0.05);氧、糖剥夺预处理组HSP70及c-fos的表达较对照组、单纯氧、糖剥夺组和致死性氧、糖剥夺组显著增加。结论:氧、糖剥夺预处理可能通过诱导HSP70及c-fos的表达,发挥其神经保护作用。

OGD动态处理后大鼠海马神经元线粒体裂解及凋亡相关蛋白的变化

目的大鼠海马神经元经过不同时间糖氧剥夺(oxygen and glucose deprivation,OGD)处理后,观察其线粒体形态改变与凋亡相关蛋白的变化。方法将原代培养大鼠海马神经元随机分为5组:空白对照组(对照组)与OGD处理30min组、45min组、60min组及90min组,采用激光共聚焦显微镜观察线粒体形态;JC-1检测线粒体膜电位变化;Western blot检测胞质内磷酸化线粒体动力相关蛋白(P-Drp1蛋白)、细胞色素C(CytC)及含半胱氨酸的天冬氨酸水解蛋白3(caspase 3)蛋白的表达。结果随着OGD处理时间延长,(1)P-Drp1蛋白表达下降,线粒体裂解率逐渐增加(P<0.05);(2)线粒体膜电位下降越严重;(3)与对照组相比,60min组及90min组CytC、caspase 3蛋白的表达显著增加(P<0.05)。结论随着OGD处理延长,线粒体裂解增加,膜电位下降,膜通透性增加,且在OGD处理60min时伴随凋亡发生。