黄芪甲苷与丹参酮ⅡA配伍拮抗内皮细胞糖氧剥夺损伤促进血管新生

目的观察益气活血药对黄芪、丹参的有效活性成分黄芪甲苷(AstragalosideⅣ,AS-Ⅳ)与丹参酮ⅡA(TanshinoneⅡA,TanⅡA)配伍拮抗内皮细胞糖氧剥夺(Oxygen-glucose deprivation,OGD)损伤的效应,探索其促进血管新生的作用及机制。方法通过体外培养内皮细胞建立OGD损伤模型,实验设置对照组、模型组、AS-Ⅳ组、TanⅡA组和配伍组。分别采用CCK-8法、Transwell、体外血管形成实验观察AS-Ⅳ与TanⅡA配伍对内皮细胞增殖、迁移、成管能力的影响;利用AnnexinV-FITC细胞凋亡检测试剂盒检测内皮细胞的凋亡情况;免疫印迹法检测VE-cadherin、TGF-β1、VEGFA、eNOS的蛋白表达;免疫荧光法检测CD31、eNOS的蛋白表达;同时采用酶联免疫吸附法检测细胞培养上清液中一氧化氮(Nitric oxide,NO)的浓度。结果与正常对照组相比,糖氧剥夺使HUVECs增殖、迁移与成管功能受损,诱导细胞凋亡,降低VEcadherin、TGF-β1、VEGFA、CD31、eNOS的蛋白表达以及NO含量(P<0.01)。药物配伍组与模型组相比能修复损伤的内皮细胞,促进其增殖、迁移和成管,抑制糖氧剥夺诱导的细胞凋亡,提高VE-cadherin、TGF-β1、VEGFA、CD31、eNOS的蛋白表达以及NO含量(P<0.05)。结论AS-Ⅳ与TanⅡA配伍具有拮抗内皮细胞糖氧剥夺损伤、激活血管新生反应的作用,其机制可能是激活eNOS,促进内皮细胞NO的生成与释放。

AMPK激动剂AICAR抑制糖氧剥夺损伤后星形胶质细胞的炎性反应及对神经元损伤的保护作用

目的:探讨AMPK激动剂AICAR对糖氧剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)损伤后原代星形胶质细胞炎性反应的影响及对损伤神经元的保护作用。方法:通过构建原代培养星形胶质细胞和神经元的OGD模型,在正常培养的原代星形胶质细胞中加入对照溶剂和AICAR(0.5 mmol/L),后给予OGD处理,在复氧第12小时通过ELISA检测促炎因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6和IL-1β的表达变化,通过Western blotting方法检测磷酸化p38的蛋白表达;再将上述对照组和AICAR组OGD处理后的星形胶质细胞培养液,加入OGD损伤后的原代培养神经元中,通过LDH检测及免疫荧光双标方法,检测AICAR对缺糖缺氧损伤神经元的保护作用。结果:在原代培养神经元及星形胶质细胞OGD损伤模型中,与对照组比较,AICAR组显著地降低了OGD损伤后星形胶质细胞分泌的促炎因子TNF-α、IL-6和IL-1β(P<0.01),抑制p38磷酸化,且明显降低了缺糖缺氧造成的神经元损伤(P<0.01),促进损伤的神经突起修复。结论:AICAR抑制OGD损伤后星形胶质细胞炎性因子的释放,对OGD损伤神经元具有保护作用。

右美托咪定对神经元氧糖剥夺/复氧损伤的保护作用

目的探讨右美托咪定(Dex)对皮质神经元氧糖剥夺/复氧(OGD/R)损伤的神经保护作用及其可能机制。方法培养孕18 d的SD大鼠胎鼠皮质神经元细胞,随机分为对照组(Sham组,加入有糖细胞外液置于正常培养箱中培养)、模型组(OGD/R组,加入无糖细胞外液,置于37℃厌氧箱中培养制备OGD/R细胞模型)、阳性药物对照组(OGD/R+LW6组,OGD/R模型细胞加入1 mmol/L的LW6处理1 h)、OGD/R+低浓度Dex组(OGD/R模型细胞加入0.1μmol/L Dex处理1 h)、OGD/R+高浓度Dex组(OGD/R模型细胞加入1.0μmol/L Dex处理1 h)。应用CCK-8比色法、免疫荧光方法检测各组细胞的存活率,Western blot方法检测各组低氧诱导因子1α(HIF-1α)、激活转录因子-6(ATF-6)及下游靶点C/EBP同源蛋白(CHOP)的表达水平。结果CCK-8比色及免疫荧光染色结果显示,各组神经元存活率差异有显著性(F=63.46,P<0.05);两两比较显示,OGD/R组神经元存活率较Sham组显著降低(P<0.05),OGD/R+高浓度Dex组神经元存活率较OGD/R组显著提高(P<0.05)。Western blot结果显示,各组神经元HIF-1α、ATF-6、CHOP蛋白表达差异有显著性(F=80.30~155.36,P<0.05);两两比较显示,OGD/R组HIF-1α、ATF-6、CHOP蛋白表达较Sham组升高(P<0.05),OGD/R+高浓度Dex组HIF-1α、ATF-6、CHOP蛋白表达较OGD/R组降低(P<0.05)。结论Dex通过抑制HIF-1α表达对OGD/R损伤的神经元模型发挥保护作用。

Cu-ATSM保护内皮细胞糖氧剥夺再灌注损伤的机制

目的:探讨铜-二乙酰-2(N4-甲基氨基硫脲)(Cu-ATSM)对糖氧剥夺再灌注(OGD/R)后人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的作用及其潜在机制。方法:将体外培养的HUVECs分为Control组、OGD/R组、OGD/R+Cu-ATSM组;采用流式细胞术检测HUVECs的凋亡情况;采用Mito-tracker染色检测线粒体形态;JC-1染色分析各组线粒体膜电位的变化;采用蛋白质印迹法(Western blot)检测各组自噬相关蛋白如ATG5、Beclin1、LC3Ⅰ/Ⅱ的激活情况;采用免疫荧光检测各组细胞LC3Ⅱ的表达情况。结果:流式细胞术结果显示,与Control组比,OGD/R损伤后HUVECs凋亡数目显著上升,而当Cu-ATSM治疗后,凋亡的HUVECs显著减少(均P<0.05)。Mito-tracker及JC-1染色结果显示,与Control组比,OGD/R组损伤后线粒体的形态明显受到损伤,线粒体功能受损,膜电位下降,而OGD/R+Cu-ATSM组治疗后能够改善损伤的线粒体功能,维持线粒体形态和线粒体膜电位(均P<0.05)。Western blot结果显示,与Control组比,OGD/R组损伤后自噬相关信号通路如ATG5、Beclin1、LC3Ⅱ蛋白的表达量增多,而OGD/R+Cu-ATSM组治疗后的自噬相关蛋白表达量较OGD/R组下降(均P<0.05)。免疫荧光结果显示,与Control组比,OGD/R组损伤后LC3Ⅱ的表达显著增多,而OGD/R+Cu-ATSM治疗后的LC3Ⅱ显著减少。结论:Cu-ATSM能够改善HUVECs OGD/R损伤后的线粒体功能,减少HUVECs凋亡,其机制可能是通过抑制自噬实现的。

佛手苷内酯通过调控长链非编码RNA阿片样受体基因表达对糖氧剥夺诱导的PC12细胞损伤的影响

目的研究佛手苷内酯(BG)是否通过调控长链非编码RNA(lncRNA)阿片样受体基因(Oprm1)表达保护糖氧剥夺(OGD)诱导的PC12细胞损伤。方法将PC12细胞分为对照组(Con)、OGD组、OGD+BG低浓度(BG-L)组、OGD+BG中浓度(BG-M)组、OGD+BG高浓度(BG-H)组、OGD+pcDNA组、OGD+pcDNA-Oprm1组、OGD+BG+si-NC组和OGD+BG+si-Oprm1组。试剂盒测定丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。流式细胞术分析细胞凋亡率。Real-time PCR分析Oprm1表达水平。结果与Con组比较,OGD组PC12细胞凋亡率和MDA含量显著升高,Oprm1表达、SOD和GSH-Px活性显著降低(P<0.05)。与OGD组比较,OGD+BG-L组、OGD+BG-M组、OGD+BG-H组PC12细胞凋亡率和MDA含量显著降低,Oprm1表达、SOD和GSH-Px活性显著升高(P<0.05)。与OGD+pcDNA组比较,OGD+pcDNA-Oprm1组PC12细胞凋亡率和MDA含量显著降低,SOD和GSH-Px活性显著升高(P<0.05)。与OGD+BG+si-NC组比较,OGD+BG+si-Oprm1组PC12细胞凋亡率和MDA含量显著升高,SOD和GSH-Px活性显著降低(P<0.05)。结论BG可减轻OGD诱导的PC12细胞损伤,其机制与上调lncRNA Oprm1表达有关。

八味沉香散含药血清对H9c2细胞氧糖剥夺损伤的保护机制研究

目的研究八味沉香散含药血清对H9c2细胞氧糖剥夺损伤的保护机制。方法将H9c2细胞分为空白组、模型组和八味沉香散低、中、高剂量组(含药血清剂量依次为2.5、8、12 g/kg)。体外培养H9c2细胞并建立氧糖剥夺损伤模型,含药血清干预后检测细胞存活率,观察细胞形态,检测生化指标乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、呼吸链复合酶Ⅰ(ComplexⅠ)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)水平,检测细胞内活性氧(ROS)含量、线粒体膜电位和细胞凋亡情况,检测氧化应激相关蛋白[Kelch样ECH关联蛋白1(Keap1)、核转录因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)、NADH氧化还原酶辅酶10(Ndufa10)、硫氧还蛋白(Trx)]、凋亡相关蛋白[B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶3(Caspase-3)和细胞色素C(Cytc)]的表达。结果与空白组比较,模型组细胞形态破损,LDH、CK和MDA水平均显著升高(P<0.01),CAT、ComplexⅠ、SOD、GSH-Px水平和线粒体膜电位均显著降低(P<0.01),细胞内ROS含量和凋亡率均显著升高(P<0.01),氧化应激相关蛋白(Keap1、Nrf2、HO-1、Ndufa10和Trx)和促凋亡相关蛋白(Bax、Caspase-3、Cytc)表达水平均显著升高(P<0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平显著降低(P<0.05)。给予八味沉香散含药血清后,细胞形态改善,以上指标大部分显著逆转(P<0.05或P<0.01)。结论八味沉香散含药血清对H9c2细胞氧糖剥夺损伤有较好的保护作用,其机制与降低细胞氧化损伤、抑制细胞凋亡相关。

瑞马唑仑通过Keap1/Nrf2信号通路减轻大鼠神经元氧糖剥夺–复氧复糖损伤

目的:探讨瑞马唑仑是否通过激活Keap1/Nrf2通路减轻海马神经元氧糖剥夺–复氧复糖损伤的功能。方法:取SD大鼠乳鼠海马神经元培养至第8天,采用随机数字表法分为5组:对照组(C组)、模型组(M组)、氧糖剥夺–复氧复糖+瑞马唑仑组(R组)、氧糖剥夺–复氧复糖 + 瑞马唑仑 + 二甲基亚砜组(V组)、氧糖剥夺–复氧复糖 + 瑞马唑仑 + 鸦胆子苦醇组(B组),缺氧6 h后复氧20 h建立缺氧复氧模型,瑞马唑仑于复氧时加入,终浓度100 μM,鸦胆子苦醇及二甲基亚砜在缺氧前4 h加入,鸦胆子苦醇终浓度为500 nM,二甲基亚砜浓度<0.1%。复氧结束后检测CCK8细胞活性,细胞凋亡率,ROS水平,Nrf2、Keap1、Bcl2、Bax蛋白水平,免疫荧光检测Nrf2核转位及线粒体形态。结果:与C组比较,M组细胞活力降低,凋亡率及ROS活性升高,Bax蛋白水平升高,Nrf2、Keap1、Bcl2蛋白水平降低,Nrf2核转位增加,线粒体碎片化程度加重;与M组比较,R组的细胞活力升高,细胞凋亡率及ROS活性降低,Bax蛋白水平降低,Nrf2、Keap1、Bcl2蛋白水平升高,Nrf2核转位增加,线粒体碎片化程度减轻;V组与R组间无统计学差异;与V组比较,B组细胞活力降低,凋亡率及ROS活性升高,Bax蛋白水平升高,Nrf2、Keap1、Bcl2蛋白水平降低,Nrf2核转位减少,线粒体碎片化程度加重。结论:瑞马唑仑可激活Keap1/Nrf2通路,减少ROS蓄积及线粒体损伤,进而减少细胞凋亡,减轻大鼠海马神经元氧糖剥夺–复氧复糖损伤。

阿利吉伦对糖氧剥夺损伤SH-SY5Y细胞的保护机制

目的研究阿利吉仑(Aliskiren)对糖氧剥夺(oxygen-glucose deprivation, OGD)损伤的神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的保护机制。方法将SH-SY5Y细胞随机分成正常组[不作糖氧剥夺(oxygen-glucose deprivation, OGD)处理],OGD 组和阿利吉仑低、中、高剂量组(5.0, 10.0, 20. 0μmol/L),除了正常组,其余4组均OGD处理4h,流式细胞仪检测细胞凋亡;RT-PCR检测MKT、ERK和MTOR相应mRNA表达水平;Western印迹检测p-AKT^Thr308、p-AKT^Ser473、p-ERK1/2和p-MTOR蛋白表达水平。结果与OGD组相比,阿利吉仑组的细胞凋亡率呈剂量依赖性降低。RT-PCR和Western印迹检测结果表明:与正常组相比,OGD组的AKT、ERK和MTOR相应mRNA及磷酸化蛋白表达水平更低(P<0.05)。与OGD组比较,阿利吉仑组的AKT、ERA和MTOR相应mRNA及磷酸化蛋白表达水平呈剂量依赖性升高(P<0.05)。结论ERK1/2和PI3K/AKT/MTOR信号通路的激活可能是阿利吉仑对OGD损伤的SH-SY5Y细胞发挥保护作用的重要分子机制。

白藜芦醇苷对PC12细胞氧糖剥夺损伤模型的保护作用

目的探讨白藜芦醇苷对PC12细胞缺氧缺糖损伤模型的保护作用。方法以缺氧缺糖诱导PC12细胞损伤模型模拟脑缺血病理的改变,研究白藜芦醇苷对该缺氧缺糖损伤模型的影响。结果白藜芦醇苷能显著减少PC12细胞死亡,降低乳酸脱氢酶漏出量,一氧化氮含量及丙二醛生成,提高超氧化物歧化酶活性。结论白藜芦醇苷对PC12细胞缺氧缺糖损伤具有保护作用。

右美托咪定对PC12细胞氧糖剥夺损伤的保护作用

目的:研究右美托咪定对PC12细胞氧糖剥夺(OGD)损伤的保护作用及机制。方法:采用缺氧缺糖诱导PC12细胞损伤建立OGD损伤细胞模型,将OGD损伤的细胞分为右美托咪定低、中、高浓度组,溶剂组及模型组,并将正常培养的细胞作为正常对照组。各组细胞处理后采用MTT法检测细胞存活率,相应试剂盒分别检测乳酸脱氢酶(LDH)释放量和丙二醛(MDA)含量,AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,Westernblot检测各组细胞中CleavedCaspase-3和PI3K/AKT信号通路相关蛋白总AKT(t-AKT)、磷酸化的AKT(p-AKT)蛋白表达水平。结果:与正常对照组相比,模型组细胞存活率降低,而上清中LDH释放量和MDA含量增多,细胞凋亡率、CleavedCaspase-3和p-AKT蛋白表达水平升高(P<0.05)。与模型组相比,右美托咪定能够上调细胞存活率,降低LDH释放量和MDA含量,抑制CleavedCaspase-3和p-AKT蛋白表达水平(P<0.05)。结论:右美托咪定可能通过抑制PI3K/AKT信号通路的活化对氧糖剥夺损伤神经细胞发挥保护作用。

Poly I:C对氧糖剥夺损伤星形胶质细胞TLR3信号通路的影响

目的观察聚肌胞苷酸(polyinosinic polycytidylic acid,Poly I:C)对氧糖剥夺损伤(oxygen-glucose deprivation,OGD)星形胶质细胞TLR3信号转导通路的影响,探讨Poly I:C保护神经细胞的作用机制。方法通过缺血缺糖培养12h建立星形胶质细胞氧糖剥夺损伤模型,观察10μg/mL和20μg/mL Poly I:C预孵育对氧糖剥夺损伤星形胶质细胞Toll样受体3(Toll-like receptor 3,TLR3)、磷酸化干扰素调节因子3(phospho-interferon regulatory factor 3,pIRF3)、磷酸化核因子-κB(phospho-nuclear factor-κB,pNF-κB)蛋白表达的影响。结果①与空白对照组相比,星形胶质细胞氧糖剥夺12h后细胞TLR3、pNF-κB蛋白表达升高,而pIRF3蛋白表达无明显变化。②与OGD组相比,Poly I:C预处理组能促进细胞中pIRF3表达,而对细胞TLR3表达无明显影响,pNF-κB表达有下降趋势,但差异无统计学意义。结论 Poly I:C保护神经细胞作用可能与提高氧糖剥夺损伤星形胶质细胞pIRF3蛋白的表达,进而增加下游抗炎因子干扰素-β(IFN-β)的表达有关。

龙胆苦苷对新生大鼠氧糖剥夺再灌注损伤海马神经元Caspase-3、Bax和Bcl-2表达的影响

目的探讨龙胆苦苷(GP)对新生大鼠氧糖剥夺再灌注损伤海马神经元的抗凋亡保护作用及机制。方法采用无糖培养基加缺氧法建立原代新生大鼠海马神经元氧糖剥夺再灌注损伤模型,同时给予不同浓度的龙胆苦苷进行干预。应用Hoechst 33342染色法检测神经细胞的凋亡,并计算凋亡率;化学比色法测定神经细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出率;RT-PCR和Western blotting技术检测凋亡相关因子Caspase-3、Bax和Bcl-2 m RNA和蛋白的表达。结果与正常组比较,模型组Hoechst 33342染色神经元凋亡率明显升高,LDH漏出率增加,Caspase-3、Bax m RNA和蛋白的表达水平上调,Bcl-2 m RNA和蛋白的表达水平下降。与模型组比较,龙胆苦苷(40、20、10mg/L)可显著降低氧糖剥夺再灌注损伤神经元的凋亡率和LDH漏出率;龙胆苦苷(40mg/L)可明显抑制Caspase-3、Bax m RNA和蛋白的表达,升高Bcl-2 m RNA和蛋白的表达。结论龙胆苦苷对新生大鼠海马神经元氧糖剥夺再灌注损伤所诱发的神经细胞凋亡具有保护作用,其机制可能与上调Bcl-2表达,抑制Caspase-3、Bax表达有关。

氧糖剥夺/复氧损伤后星形胶质细胞iNOS的表达及胍丁胺的干预作用研究

目的观察星形胶质细胞缺血再灌注损伤后iNOS的表达及胍丁胺的干预作用。方法体外缺血再灌注诱导损伤原代培养的星形胶质细胞,检测培养液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)漏出量,并利用流式细胞术检测细胞凋亡和/或坏死率,同时测定NO生成量和诱导型一氧化氮合酶(inducible NOS,iNOS)的表达。结果胍丁胺显著提高缺血再灌注损伤细胞的存活率,降低细胞LDH漏出量。流式细胞仪分析显示胍丁胺主要是降低细胞坏死率而对凋亡率则无显著性影响。与阳性对照组相比,胍丁胺显著降低星形胶质细胞缺血再灌注损伤引起的NO产量,同时也减少了iNOS表达。结论胍丁胺对星形胶质细胞缺血再灌注损伤具有保护作用,其可能的作用机制是降低iNOS、抑制炎症因子NO合成,从而降低星形胶质细胞的炎症坏死。

不同配比辛芍组方对PC12细胞氧糖剥夺损伤的保护作用

目的:观察不同配比辛芍组方对PC12细胞氧糖剥夺损伤的保护作用,探讨组方的最佳配比。方法:采用连二亚硫酸钠(Na2S2O4)建立PC12细胞氧糖剥夺损伤(oxygen glucose deprivation,OGD)模型,将细胞分为空白组、模型组、阳性组(尼莫地平)、辛芍药物不同配比组(灯盏细辛与赤芍质量比分别为5∶0、4∶1、3∶2、2∶3、1∶4、0∶5),检测细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)释放量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)含量。结果:与正常组比较,模型组的细胞存活率和SOD活性显著降低(P<0.01),细胞LDH释放量、MDA和NO水平显著升高(P<0.01);与模型组比较,辛芍2∶3配比组显著提升细胞存活率(P<0.05),同时辛芍3∶2和2∶3配比组均显著降低细胞LDH释放量以及MDA和NO水平(P<0.05),提高SOD活性(P<0.05)。结论:辛芍2∶3配比对PC12细胞氧糖剥夺损伤的保护作用较好。

右美托咪定通过调控TLR4表达对神经细胞氧糖剥夺损伤保护作用的机制研究

目的探讨右美托咪定调控TLR4表达对神经细胞氧糖剥夺损伤的保护作用及其机制。方法体外培养PC12神经细胞,复制氧糖剥夺细胞模型,以低(0. 1μmol/L)、中(1. 0μmol/L)和高剂量(10. 0μmol/L)右美托咪定作用24 h后,CCK-8法检测细胞存活率,Western blot检测Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Toll样受体4(TLR4)蛋白的表达,RT-PCR法检测TLR4 mRNA的表达,ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)含量。在复制氧糖剥夺细胞模型中,以TLR4抑制剂TAK-242抑制TLR4表达后,给予右美托咪定作用,观察细胞存活率、Bax蛋白、Bcl-2蛋白、TLR4蛋白、TNF-α含量和IL-6含量的变化。结果低、中和高剂量右美托咪定作用后,PC12细胞存活率升高,Bax和TLR4蛋白表达、TLR4 mRNA表达以及TNF-α和IL-6含量降低,而Bcl-2蛋白表达升高(P<0. 05),且表现出浓度依赖性。TAK-242处理后,TLR4表达降低,PC12细胞存活率升高,Bax蛋白表达以及TNF-α和IL-6含量降低,而Bcl-2蛋白表达升高(P<0. 05);给予右美托咪定作用后,TAK-242的上述作用明显增强(P<0. 05)。结论右美托咪定可通过抑制TLR4表达保护神经细胞氧糖剥夺损伤。

可乐定对原代培养大鼠皮质神经元氧糖剥夺损伤的保护作用

目的研究可乐定对原代培养大鼠皮质神经元氧糖剥夺(OGD)损伤的保护作用。方法取培养8 d的皮质神经元,分为正常对照组、模型对照组、可乐定(1.0,3.0,10.0μmol·L-1)预处理组。神经元氧糖剥脱损伤模型通过化学性缺氧、孵育液缺糖的方法建立。神经元损伤程度采用噻唑蓝(MTT)染色法和检测乳酸脱氢酶(LDH)的释放量来进行评价,观察预给予可乐定(1.0,3.0,10.0μmol·L-1)对神经元损伤的保护作用。结果显微镜下,正常对照组细胞密集,胞体饱满,边缘光滑,有较强折光性;神经元存活率(100.00±32.12)%,LDH释放比率(100.00±37.51)%。模型对照组细胞核固缩,细胞膜不完整,折光性差,MTT染色吸光度值明显降低,神经元存活率(53.61±7.62)%,LDH释放量显著增加,释放率为(166.07±9.65)%。可乐定(1.0,3.0,10μmol·L-1)预处理可明显逆转ODG损伤所致细胞形态的改变,剂量依耐性升高MTT染色吸光度值,神经元存活率分别为(67.53±10.54)%,(71.50±9.79)%和(87.48±5.29)%,同时可明显降低LDH的释放量,释放率分别为(136.45±25.72)%,(130.92±24.94)%和(121.63±32.68)%。结论可乐定对原代培养大鼠皮质神经元ODG损伤具有良好的保护作用。

西洋参茎叶皂苷对PC12细胞氧糖剥夺损伤的保护作用

目的探讨西洋参茎叶皂苷对PC12细胞在氧糖剥夺损伤中的保护作用及可能机制。方法以缺氧缺糖诱导PC12细胞损伤模型(OGD)模拟脑缺血病理的改变,应用MTT法检测细胞存活率,分光光度计检测乳酸脱氢酶(LDH)释放量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)及一氧化氮(NO)含量,研究西洋参茎叶皂苷对该氧糖剥夺损伤模型的影响。结果与正常对照组比较,模型组PC12细胞在OGD损伤后细胞存活率和SOD活性显著下降(P<0.01),LDH释放量显著增加(P<0.01),MDA和NO水平均明显升高(P<0.01)。与模型组比较,西洋参茎叶皂苷高、中剂量组可明显提高细胞的存活率(P<0.01)和SOD活性(P<0.01),减少LDH释放(P<0.01),降低MDA和NO水平(P<0.01),差异具有统计学意义。结论西洋参茎叶皂苷对PC12细胞氧糖剥夺损伤具有保护作用,其保护机制可能与PQS稳定细胞膜,抗氧化损伤及清除自由基的作用有关。

七氟醚后处理对大鼠海马脑片氧糖剥夺损伤的保护作用

目的观察七氟醚后处理对大鼠海马脑片氧糖剥夺损伤(OGD)的保护作用。方法将符合标准的40片海马脑片随机均分为四组:2%七氟醚后处理组(2%Sev组)、4%七氟醚后处理组(4%Sev组)、6%七氟醚后处理组(6%Sev组)和氧糖剥夺损伤对照组(OGD组)。采用脑片灌注及电生理技术细胞外记录海马CA1区的顺向群锋电位(OPS)。利用2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色定量比色方法分析脑片损伤程度。结果 OGD组OPS恢复程度为(3.14±2.56)%,恢复率为10%,组织损伤率为0.63±0.05;2%Sev组OPS恢复程度为(46.24±29.34)%,OPS恢复率为40%,组织损伤率为0.51±0.06;4%Sev组OPS恢复程度为(62.40±34.93)%,OPS恢复率为60%,组织损伤率为0.41±0.07;6%Sev组OPS恢复程度为(75.92±45.31)%,OPS恢复率为70%,组织损伤率为0.37±0.06。与OGD组比较,2%Sev组、4%Sev组、6%Sev组的OPS恢复程度和OPS恢复率均明显升高,组织损伤率明显降低(P<0.01)。结论七氟醚后处理对大鼠海马脑片氧糖剥夺损伤具有一定的保护作用。

微小RNA-146b-5p在小胶质细胞糖氧剥夺/复氧损伤中的作用与机制

目的:探究微小RNA-146b-5p(miR-146b-5p)在小胶质细胞糖氧剥夺/复氧损伤(OGD/R)中的作用及机制。方法:建立小鼠小胶质细胞系EOC 13.31的OGD/R模型。将miR-146b-5p模拟物、miR-146b-5p抑制剂及相应的阴性对照,分别转染至EOC 13.31细胞中,然后再分别进行OGD/R处理,分别命名为OGD/R+miR-146b-5p mimic组、OGD/R+miR-146b-5p inhibitor组、OGD/R+NC mimic组和OGD/R+NC inhibitor组,以常规培养的细胞为对照组(Control组),只行OGD/R处理的细胞为OGD/R组,48h后检测相关指标。实时定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-146b-5p表达;采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞存活率;原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡率;酶联免疫吸附法(ELISA)测定超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)含量;蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测TRAF6蛋白表达;生物信息学和双荧光素酶报告基因实验分析miR-146b-5p和TRAF6之间的关系。结果:与Control组相比,OGD/R组中miR-146b-5p表达显著下调(P<0.01),TRAF6蛋白表达显著上调(P<0.01)。与OGD/R+NC mimic组比较,OGD/R+miR-146b-5p mimic组细胞存活率显著增高,凋亡率显著降低,MDA含量显著降低,SOD、CAT含量显著增高,TNF-α,IL-1β和IL-6含量显著降低,含TRAF6-WT的荧光素酶活性显著降低,TRAF6蛋白表达显著降低(P<0.05或P<0.01)。与OGD/R+NC inhibitor组比较,OGD/R+miR-146b-5p inhibitor组细胞的存活率显著降低,凋亡率显著升高,MDA含量显著增高,SOD、CAT含量显著降低,TNF-α,IL-1β和IL-6含量显著升高,TRAF6蛋白表达显著增加(P<0.05或P<0.01)。结论:miR-146b-5p通过靶向TRAF6促进小胶质细胞OGD/R模型细胞存活,抑制细胞凋亡,减轻氧化应激和炎症反应。

盐酸法舒地尔对体外培养星形胶质细胞氧糖剥夺损伤的保护作用

目的研究盐酸法舒地尔(FH)对大鼠皮质星形胶质细胞氧糖剥夺损伤(OGD)的保护作用。方法传代培养的大鼠皮质星形胶质细胞与无糖Na2S2O42 mmol·L-1孵育4 h,制备OGD模型。FH 5和10μmol·L-1在OGD前2 h加入。采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活;比色法检测乳酸脱氢酶(LDH);乙炔基脱氧尿苷(Ed U)掺入法检测星形胶质细胞DNA合成;Hoechst染色和丫啶橙(AO)/溴化乙啶(EB)荧光双染观察细胞凋亡;2,7-二氯氢化荧光素(DHCF-DA)荧光染色和硝基四氮唑蓝(NBT)还原实验检测细胞内活性氧(ROS)水平。结果与正常对照组比较,OGD模型组星形胶质细胞存活率为(24±6)%,下降了4倍(P<0.01);OGD模型组LDH释放量显著升高至(366±7)U·L-1(P<0.01)。加入FH 5和10μmol·L-1的预处理组,细胞存活率分别上升至(42±5)%和(43±5)%,LDH释放分别下降至290±18和(268±20)U·L-1(P<0.01),细胞Ed U阳性率由OGD模型组的(47±6)%,分别下降到(35±6)%和(29±5)%(P<0.01)。Hoechst染色及AO/EB双染实验结显示,FH能显著减少OGD损伤后细胞的凋亡及坏死,使晚期凋亡细胞比例减少(P<0.05);DCFH-DA荧光和NBT还原实验显示,FH降低OGD损伤后ROS水平,且FH10μmol·L-1的预处理组降低的幅度比5μmol·L-1的预处理组更明显,但两组差异无统计学意义。结论FH对传代培养的大鼠皮质星形胶质细胞OGD具有保护作用,其作用机制可能与降低细胞内ROS水平有关。