糖皮质激素受体配体的研究进展

糖皮质激素(GCs)应用于临床已有60余年的历史,临床上常用于治疗免疫性疾病和过敏性疾病,尤其近年来,随着免疫性及炎症性疾病发病率的增长,GCs类药物的临床应用也呈逐年上升趋势。因此,GCs的不良反应问题也愈发受到关注。剖析GCs作用机制,找到新的糖皮质激素受体(GR)配体,使其既有抗炎及免疫抑制作用,且不伴不良反应是医学领域亟待解决的重要问题。现就GR配体的研究进展作一综述。

动脉粥样硬化大鼠颈总动脉糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体配体的表达及意义

目的:通过检测动脉粥样硬化大鼠颈总动脉中糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体配体(glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor ligand,GITRL)的表达,探讨GITRL在动脉粥样硬化过程中的变化及意义。方法:建立大鼠动脉粥样硬化模型,取其颈总动脉,观察粥样硬化病变,采用免疫组织化学及蛋白质印迹(Western blotting)法检测GITRL的表达。结果:动脉粥样硬化大鼠颈总动脉的血管壁脂质沉积明显增多;弹性纤维不完整,连续性破坏、中断。动脉粥样硬化大鼠颈总动脉血管内GITRL的表达水平明显高于非动脉粥样硬化大鼠。结论:GITRL作为高脂饮食后表达上调的一种血管炎性分子,有望作为预测动脉粥样硬化发生的一种独立危险因素。

GITRL对Kupffer细胞内脂多糖诱导的吲哚胺2,3双加氧酶的作用研究

目的:研究糖皮质激素诱导的TNF受体配体(GITRL)对Kupffer细胞(KCs)内脂多糖(LPS)诱导的吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)的影响。方法:分离小鼠KCs后分为5组:Control组,只加培养基;LPS组,加入LPS(10μg/ml);LPS+Control siRNA组,转染Control siRNA后同LPS组;LPS+GITRLsiRNA组,转染GITRLsiRNA后同LPS组;LPS+Dex组,地塞米松(100μmol/L)处理后同LPS组。处理24小时后,分别采用免疫细胞化学染色、蛋白免疫印记和ELISA法检测KCs的GITRL、IDO表达及肿瘤坏死因子(TNF)-α分泌。结果:和Control组比较,LPS刺激后KCs上GITRL的表达明显上调(P<0.05),而沉默GITRL基因或者使用地塞米松能减弱其升高(P<0.05)。LPS可以诱导IDO和TNF-α在KCs上的高表达,然而GITRL基因沉默可以抑制其诱导的IDO和TNF-α的表达(P<0.05),同样地塞米松预处理也能够减弱其诱导的IDO和TNF-α的表达(P<0.05)。结论:GITRL介导了KCs内LPS诱导的IDO,地塞米松可通过下调GITRL的表达以降低LPS诱导的IDO。

CpGODN对哮喘小鼠肺组织GITR/GITRL表达的影响

目的观察CpGODN干预对哮喘小鼠肺组织GITR及GITRL表达的影响。方法 48只SPF级雄性BALB/c小鼠随机分为正常对照组(简称对照组),哮喘模型组(简称模型组),地塞米松治疗组,CpGODN治疗组。以卵清白蛋白(OVA)致敏和激发建立小鼠哮喘模型。观察肺组织病理;对支气管肺泡灌洗液(BALF)进行细胞分类及计数;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组化检测肺组织中GITR、GITRL的表达。结果 BALF中嗜酸性粒细胞平均(x±s,下同)计数:CpGODN组为(2.76±0.25)×107/L,地塞米松组为(1.05±1.72)×107/L,均低于模型组的(12.09±2.62)×107/L,差异有统计学意义(P<0.01),CpGODN组与地塞米松组比较差异无统计学意义(P>0.05)。RT-PCR、免疫组化结果:CpGODN组与地塞米松组GITR、GITRL表达高于模型组,差异有统计学意义(P均<0.05),CpGODN组GITRL mRNA、GITR蛋白表达高于地塞米松组,差异有统计学意义(P<0.05)。相关分析:肺组织GITR与GITRL表达呈正相关(P<0.01,n=40)。结论 CpGODN能改善哮喘小鼠气道炎症,显著增强哮喘小鼠模型中GITR及GITRL在肺组织中的表达。

结直肠癌组织中GITRL mRNA表达水平的检测及其临床意义

目的:建立检测人糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体配体(human glucocorticoid induced tumor necrosis factor receptor ligand,hGITRL)mRNA的实时荧光PCR方法,探讨hGITRL表达与结直肠癌发生发展的关系。方法:构建含hGITRL基因片段的标准质粒,通过实时荧光PCR检测20例结直肠癌组织与对应癌旁组织中GITRLmRNA的表达水平。结果:建立的hGITRLRT-PCR基因定量检测方法准确可靠(标准曲线相关系数为0.99983);在20例结直肠癌组织细胞中,GITRL表达水平较之对应的癌旁组织有所升高(P<0.05),且与肿瘤组织分型和临床分期存在相关性。结论:成功建立了检测hGITRLmRNA的实时荧光定量PCR方法,GITRL在结直肠癌组织细胞中表达量升高,且与癌症的严重程度呈现一定的相关性。

牙龈卟啉菌外膜蛋白ragB-GITRL真核共表达载体的构建及免疫原性研究

目的:构建牙龈卟啉菌外膜蛋白ragB和小鼠糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体的配体(mGITRL)真核共表达载体,在体内研究其免疫原性。方法:应用PCR扩增技术,从pMD18-T-ragB中获得ragB基因编码序列片段,克隆至真核共表达载体pIRES及pIRES-mGITRL。对重组质粒进行双酶切与测序鉴定后,以脂质体介导法转染至COS7细胞,通过Western blot检测其在COS7细胞中的表达。将成功构建的重组质粒免疫小鼠,应用ELISA法检测免疫后小鼠血清中抗RagB的水平。结果:PCR扩增目的基因,酶切和测序证实重组质粒pIRES-ragB及pIRES-ragB-mGITRL成功构建,Westernblot结果显示目的基因在COS7细胞及骨骼肌细胞中均过表达。小鼠血清中检测出高滴度的抗RagB的抗体。结论:pIRES-ragB-mGITRL表达载体的构建,为牙龈卟啉菌疫苗研究、预防和牙周炎治疗提供了实验依据。

测定GITR和GITRLELISA的建立及其临床初步应用

目的建立测定糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(GITR)及其配体(GITRL)的定量酶联免疫吸附试验(ELISA),并探讨GITR及GITRL定量测定在类风湿性关节炎(RA)及肿瘤疾病的诊断或病情监测中的临床应用。方法以鼠抗人GITR、GITRL单克隆抗体为包被抗体,以生物素-辣根过氧化物酶标记链霉亲和素(SA-HRP)检测系统,建立GITR和GITRL定量检测的双抗体夹心ELISA。测定105例RA患者、54例肿瘤患者及100名健康体检者的血清GITR、GITRL含量,并探讨其与疾病的关系。结果建立的测定GITR、GITRL定量ELISA线性相关系数的平方(r2)分别为0.94和0.90。RA组血清中GITR、GITRL含量均明显高于正常对照组(P均<0.001);肿瘤组GITR高于正常对照组(P<0.001),GITRL与正常对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论本研究成功建立了GITR、GITRL定量ELISA,血清GITR、GITRL含量测定可能会成为RA新的辅助性诊断指标和病情监测指标。

GITRL对肺癌移植瘤小鼠髓源性抑制细胞免疫抑制功能的调控及其分子机制

目的:研究糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体相关配体(glucocorticoid induced TNF receptor ligand,GITRL)对Lewis肺癌移植瘤小鼠来源的髓源性抑制细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)免疫抑制功能的调控作用,并探究其分子机制。方法:采用C57BL/6小鼠构建Lewis肺癌移植瘤模型,分选荷瘤小鼠脾脏中MDSCs,采用流式细胞术检测其表面GITR的表达;GITRL(5μg/mL)处理MDSCs 48 h后,流式细胞术检测MDSCs对羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记的CD4+T细胞增殖的影响,比色法检测MDSCs胞内精氨酸酶1(arginase-1,Arg-1)的活性,Griess偶联法检测效应分子一氧化氮的释放量,并通过蛋白质印迹法检测MDSCs胞内信号分子的表达变化。结果:Lewis肺癌移植瘤小鼠脾脏中MDSCs表达GITR分子;与对照组相比,GITRL处理的MDSCs对CD4+T细胞增殖的抑制能力下降,Arg-1活性降低(P<0.05),一氧化氮释放量减少(P<0.01);GITRL蛋白下调了MDSCs胞内JAK2和STAT3(P<0.05或P<0.01)信号的磷酸化蛋白水平。结论:GITRL蛋白通过抑制MDSCs胞内JAK2/STAT3信号通路,下调MDSCs的免疫抑制功能。

类风湿关节炎患者血清GITRL水平的变化和意义1

通过检测类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者血清糖皮质激素诱导型肿瘤坏死因子受体配体(glucocorticoid-induced TNFR-related protein ligand,GITRL)水平,探讨在RA发病中的作用。实验采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)测定RA患者(n=27)及健康人(n=23)血清GITRL的水平,分析血清中GITRL的含量与疾病临床表现和其他实验室检查结果之间的关系。结果显示RA患者血清中GITRL为6.08±4.61ng/ml,显著高于健康对照组血清中GITRL(0.38±0.29ng/ml,P<0.001)。进一步分析与RA活动的相关性,发现高疾病活动组(DAS28>5.1)的血清GITRL水平比中低活动组(DAS28<5.1)高两倍,差异具有统计学意义(P<0.05)。根据血清抗CCP抗体和类风湿因子水平分析,发现上述两种抗体阳性者患者血清的GITRL水平明显高于阴性型(P<0.05)。分析RA患者血清GITRL水平与临床和实验室指标的相关性,发现血清GITRL水平与晨僵时间、DAS28、血沉、C-反应蛋白呈正相关。由此我们得出结论RA患者外周血中GITRL水平增高,且与临床常用疾病活动指标呈正相关,提示测定血清GITRL水平具有作为监测RA疾病活动的潜在应用价值。

TNF-α诱导的人肺动脉内皮细胞GITRL的表达及意义

目的研究糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体家族相关蛋白配体(GITRL)在TNF-α诱导的人肺动脉内皮细胞(HPAECs)中的表达及意义。方法原代培养HPAECs,分别加入TNF-α0、5、10、20ng/ml培养2、12、24、48、72h后,采用RT-PCR和Western blot分别检测GITRL mRNA和蛋白表达,ELISA法检测GITRL在细胞上清液中的表达水平。结果 TNF-α呈浓度和时间依赖性地促进GITRL mRNA及其蛋白和上清液GITRL表达水平,其中TNF-α浓度为10ng/ml、培养时间为72h时的表达量最高(P<0.05或P<0.01)。结论 GITRL在TNF-α诱导的HPAECs中表达增加,提示GITR/GITRL可能参与HPAECs的损伤机制,在肺动脉高压的发病过程中起重要作用。