穴位埋线对多重慢性应激下衰老模型大鼠海马糖皮质激素受体mRNA表达的调节

目的:通过对衰老模型大鼠进行多重慢性应激,观察多重慢性应激对大鼠海马糖皮质激素受体mRNA(GR-mR-N A)表达的影响,同时,对多重慢性应激下衰老模型大鼠进行穴位埋线,探讨穴位埋线对衰老的干预作用。方法:健康3月龄SD雄性大鼠48只,随机分为4组:空白对照组、D-半乳糖组、复合衰老组、复合衰老加埋线组。空白对照组:仅给予6周腹腔注射生理盐水。D-半乳糖组:仅给予6周腹腔注射D-半乳糖。复合衰老组:给予6周腹腔注射D-半乳糖,同时从第3周开始给予制动应激,应激每天1次,共应激4周;从第3周开始进行噪声刺激,每天1次,每次30min,共4周;从第3周开始,进行昼夜颠倒的光刺激,共4周。复合衰老加埋线组:造模方法同复合衰老组,另外每周埋线1次,共6周。实验结束后断头,并取出约20mg海马组织,测量每只大鼠海马糖皮质激素受体mRNA表达。结果:各组大鼠海马糖皮质激素受体mRNA表达的变化:与空白对照组相比,D-半乳糖组、复合衰老组海马的GR-mRNA基因表达均减少(P<0.05)。复合衰老组与D-半乳糖组比较,差异有显著性意义(P<0.05);复合衰老加埋线组与复合衰老组比较,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:复合衰老组的海马糖皮质激素水平过高,下调了GR-mRNA的表达,其受损较D-半乳糖组更为严重,穴位埋线可以调节复合衰老模型大鼠海马中糖皮质激素受体的基因表达,从而减轻慢性应激对大鼠海马的损伤,起到延缓衰老的作用。

滋阴清热方对MRL/lpr狼疮鼠皮质醇及糖皮质激素受体mRNA表达的影响

目的观察MRL/lpr狼疮鼠皮质醇及糖皮质激素受体(GR)mRNA表达的变化及滋阴清热方对其水平的影响,探讨中药减轻激素不良反应的机理。方法 40只MRL/lpr狼疮模型鼠随机分为4组,即模型组、中药组、西药组、中西药组。分别给予生理盐水、滋阴清热方、强的松悬液、滋阴清热复方+强的松悬液灌胃,均每日1次,每次0.5mL,连续用药10周。另选用昆明小鼠10只作为正常对照组。应用放射免疫法测定MRL/lpr狼疮鼠糖皮质醇水平,反转录酶-聚合酶链反应法(RT-PCR)检测GR mRNA,观察各组皮质醇、GR mRNA表达的变化。结果模型组血清皮质醇水平与正常组比较,P>0.05,而GRα mRNA表达明显低于正常组(P<0.05)。西药组GRα mRNA、GRβmRNA下调水平高于中药组和中西药组(P<0.01或P<0.05)。结论滋阴清热方可上调MRL/lpr狼疮鼠GR mRNA表达水平,从而增强糖皮质激素的临床疗效,减少激素不良反应。

氟美松对一次及二次打击急性肺损伤大鼠糖皮质激素受体mRNA及细胞因子的影响

目的观察氟美松对一、二次打击急性肺损伤大鼠糖皮质激素受体及细胞因子的影响。方法将48只雄性SD大鼠随机分为对照组(NS组),尾静脉注射+气管内滴入0.9%氯化钠注射液;一次打击组(HCl组),气管内滴入pH为1.8的盐酸(HCl)2 mL/kg;二次打击组(LPS+HCl组),尾静脉注射脂多糖(LPS)4 mg/kg,4 h后气管内再滴入pH为1.8的HCl 0.5 mL/kg;对照氟美松干预组(N+D组);一次打击干预组(H+D组)、二次打击干预组(L+H+D组);氟美松干预组。造模结束后立即腹腔注射氟美松2 mg/kg。结果一、二次打击组糖皮质激素受体(GR)mRNA均显著低于对照组,二次打击组在激素干预前显著低于干预后水平,一次打击组在激素干预前后无明显变化;一、二次打击组BALF中细胞总数、PMN分类计数、蛋白含量均显著高于对照组,激素干预后二次打击组显著低于干预前水平,一次打击组在激素干预前后无明显变化;一、二次打击组TNF-α,IL-1β,IL-4,IL-10均显著高于对照组;二次打击组TNF-α及IL-1β在激素干预前显著高于干预后水平,二次打击组IL-4和IL-10在激素干预前显著低于干预后水平,一次打击组在激素干预前后无明显变化。结论 ALI的病理生理过程和致病因素是紧密相连的,糖皮质激素的干预效果和病因是密切相关的,能减轻静脉注射LPS在气管内滴入HCl致ALI的肺部炎症性损伤,但对单纯较大量HCl吸入致ALI无明显改善作用。

柴胡皂甙d上调人急性早幼粒白血病细胞糖皮质激素受体mRNA对细胞生长的影响

目的：观察柴胡皂甙d（SSd）对人急性早幼粒白血症细胞（HL60）糖皮质激素受体（GR）mRNA表达的调节作用及对细胞生长的影响。方法：用从柴胡中提取的单体成分SSd，以3H-胸腺嘧啶（3H－TdR）掺入法和流式细胞仪观察细胞生长，用Northernblot分析SSd对GRmRNA的改变。结果：经SSd作用后，HL60细胞2H－TdR掺入率明显降低，呈时间和剂量依赖关系，SSd10μg／ml处理48h作用最明显；流式细胞仅分析细胞呈现G0／G1期阻滞现象，GRmRNA表达增加。结论：SSd可上调HL60细胞GRmRNA表达并抑制细胞生长。

养阴抗毒胶囊2号对阴虚大鼠糖皮质激素受体mRNA水平的影响

目的:利用氢化可的松法建立阴虚大鼠模型,观察养阴抗毒胶囊2号对阴虚大鼠模型肝组织糖皮质激素受体(GR)mRNA水平的影响,探讨其减轻激素副作用的机理。方法:SD大鼠40只,随机分为空白对照组、阴虚模型组、养阴抗毒胶囊2号组、六味地黄丸组和桂附地黄丸组。在中药预处理及造模给药9天后处死,放射免疫方法检测各组血浆皮质醇(CORT)含量,RT-PCR半定量测定肝组织GR mRNA水平,并进行图像分析和数据处理。结果:与模型组相比,养阴抗毒胶囊2号组和六味地黄丸组大鼠血浆CORT含量均显著降低(P<0.05),同时肝组织GR mRNA水平均明显升高(P<0.05),并且养阴抗毒胶囊2号组优于六味地黄丸组(P<0.05);而桂附地黄丸组大鼠的血浆CORT含量和肝组织GR mR-NA水平均与模型组没有差别(P>0.05)。结论:养阴抗毒胶囊2号能明显降低阴虚大鼠模型血浆CORT水平,提高肝组织GR mRNA水平,提示它可能改善HPA轴功能亢进状态,从而减轻激素副作用。

糖皮质激素受体mRNA在儿童原发性肾病综合征中的表达意义

目的:探讨不同类型糖皮质激素(GC)对儿童原发性肾病综合征(PNS)患者糖皮质激素受体(GR)的影响。方法:正常儿童为对照组(N组)20例;55例初治PNS患儿随机分为泼尼松组(A组)17例,曲安西龙组(B组)20例,甲基泼尼松龙组(C组)18例,均给予相应GC治疗并在0、4及8周时取静脉血,通过半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测外周血单个核细胞(PBMCs)中GRα和GRβ的mRNA表达水平。结果:未经GC治疗时PNS组GRα低于N组,GRβ高于N组,差异有统计学意义(P<0.05)。各组患儿经GC治疗后,GRα、GRβ指标组间、时间效应差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);GRα指标时间与组间无交互作用(P>0.05),GRβ指标时间与组间存在交互作用(P<0.05)。55例PNS患儿中GC耐药组6例,敏感组49例,2组患儿经GC治疗后,GRα、GRβ指标组间、时间效应差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);各组GRα指标时间与组间效应无交互作用(P>0.05),但GRβ指标时间与组间存在交互作用(P<0.05)。结论:在调节GR的表达水平上甲基泼尼松龙治疗PNS效果较好。

左归丸、右归丸对老年大鼠海马糖皮质激素受体mRNA表达的影响

目的 :观察左归丸、右归丸对老年大鼠海马糖皮质激素受体 (GR)mRNA表达的影响 ,探讨海马对下丘脑 垂体 肾上腺 (HPA)轴的调节作用 ,以及左归丸、右归丸延缓老年大鼠神经内分泌调控退化的作用机制。方法 :以自然衰老大鼠为动物模型 ,采用原位杂交法 ,观察药物对大鼠海马各分区 (DG、CA1、CA2、CA3 )GRmRNA表达变化。结果 :老年大鼠海马各分区GRmRNA表达均明显减弱 ,而左归丸、右归丸能不同程度地提高老年大鼠海马DG、CA1和CA3分区低下的GRmRNA的表达。结论 :左归丸、右归丸通过提高GRmRNA表达 ,进而改善海马对HPA轴的抑制性调控作用 ,以延缓机体衰老。

肝肾不足型重型斑秃患者血皮质醇及糖皮质激素受体mRNA的表达状况

目的探讨肝肾不足型重型斑秃患者血皮质醇、外周血单个核细胞(PBMC)中糖皮质激素受体mRNA(GRmRNA)表达状况与斑秃发病关系。方法采用化学发光法检测23例肝肾不足型重型斑秃患者血皮质醇表达水平,并用逆转录-实时荧光定量聚合酶链反应分别检测该23例患者应用糖皮质激素(GC)治疗前后PBMC中GRmRNA表达水平,并与20例正常对照组相对比。结果重型斑秃组与正常对照组两组血清皮质醇水平差异无统计学意义(P>0.05),重型斑秃组治疗前、后GRmRNA表达水平均低于正常对照组(P<0.05),并且治疗后GRmRNA表达水平比治疗前更低(P<0.01)。结论重型斑秃患者存在GC-GR紊乱,GRmRNA表达水平降低可能参与了重型斑秃的发病机制。肝肾不足型重型斑秃患者PBMC中GR mRNA表达水平显著低于正常对照组,这可能是重型斑秃肝肾不足证型在受体及基因水平上的病理变化,也可能是重型斑秃肝肾不足证型的微观本质之一。

糖皮质激素对大鼠糖皮质激素受体mRNA的下降调节

作者以血浆糖皮质激素浓度固定的动物模型,研究了糖皮质激素对大鼠糖皮质激素受体(GR)mRNA的调节作用。以人GR cDNA为探针,采用分子杂交技术检测GR mRNA的大小和相对含量,结果显示,大鼠GR nlRNA大小约为7.0 kb;皮下注射氢化可的松后1 h肝GR mRNA无明显变化,6 h后开始明显减少,3 d后降至最低水平,仅为对照的44.0±5.0％,11 d后GR mRNA仍未完全恢复。与肝GRmRNA相比较,皮下注射氢化可的松后24 h大鼠脑GR mRNA变化并不明显。与以前用同种动物模型所得到的有关糖皮质激素对大鼠GR调节的资料相比较,提示糖皮质激素对GR的调节除发生于mRNA水平外,尚有其他机制参与,而且具有组织特异性特点。

参附汤上调HL60细胞热休克蛋白和糖皮质激素受体mRNA表达及其对细胞存活的影响

目的 :探讨中药方剂参附汤对HL6 0细胞热休克反应时热休克蛋白信使核糖核酸 (heatshockproteinmRNA ,HSPmRNA)和糖皮质激素受体信使核糖核酸 (glucocorticoidreceptormRNA ,GRmRNA)表达及对细胞存活率的影响。方法 :建立细胞热休克模型 ,用动物血清学方法制备参附汤 (SFT)血清 ,用Northernblot分析HSPmRNA和GRmRNA的改变 ,用台盼蓝拒染法观察细胞存活率。结果 :HL6 0细胞热休克反应时GRmRNA明显减少 ,细胞存活率下降 ,HSPmRNA则增加 ;该细胞经SFT处理后在热休克反应时 ,GRmRNA表达增加 ,细胞存活率提高 ,HSPmRNA进一步增加。结论 :SFT可上调HL6 0细胞热休克反应时HSPmRNA和GRmRNA表达 ,提高糖皮质激素的生物学效应和抗细胞损伤能力 ,从而提高HL6 0细胞在热休克时的存活率 ,这可能是临床上SFT用于治疗失血性休克的机制之一。

褪黑素对HIBD新生大鼠皮质酮及糖皮质激素受体mRNA的影响

目的对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠使用外源性褪黑素(MT),观察血浆皮质酮(CS)和肾上腺组织中糖皮质激素受体(GR)mRNA的变化。方法新生7日龄SD大鼠随机分为治疗组(T)、模型组(K)、假手术组(H)、生理组(S),在不同时间点采用放射免疫分析法检测各组血浆的CS浓度,RT-PCR法检测肾上腺组织中GRmRNA表达。结果HIBD后血浆CS水平显著升高,肾上腺组织中GRmRNA表达下调,外源性MT逆转了两者的变化。结论血浆CS和肾上腺组织中GR参与HIBD的病理生理过程,外源性MT可能通过降低内源性CS的浓度,使GR表达上调,减轻HIBD后的过度应激损伤。

束缚应激大鼠海马糖皮质激素受体mRNA的表达及米非司酮的干预作用

目的探讨慢性束缚应激抑郁大鼠海马区糖皮质激素受体(GR)mRNA的表达变化及GR拮抗剂米非司酮对其水平的影响。方法24只雄性SD大鼠随机分为束缚应激组(MS组)、米非司酮组(RU组)和正常对照组(NC组)各8只,前2组用长期束缚制动方法建立大鼠应激抑郁模型,建模第3周起RU组给予米非司酮54 mg/kg.d连续注射7 d。用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组大鼠海马区GRmRNA表达的变化。结果MS组大鼠体重、糖水消耗百分比和行为学评分较NC组明显降低(P<0.01),MS组GRmRNA表达较NC组明显降低(P<0.01);注射米非司酮7 d后RU组大鼠体重、糖水消耗百分比、行为学评分、GRm-RNA表达和NC组差异无统计学意义(P>0.05)。结论GRmRNA表达的变化可能是心理应激介导的抑郁症的重要作用机制之一,米非司酮能改善该受体的表达。

糖皮质激素受体mRNA的快速检测法

糖皮质激素不仅对机体的正常生长、分化、发育等生理过程有重要调节作用,而且也是临床上最常用的激素类药物之一,主要用于抗炎抗过敏、抗休克及作为肿瘤化疗药物等。糖皮质激素的这些生物学效应是由靶细胞内糖皮质激素受体(GR)介导的,因此从基因水平上阐明病理情况下GR表达的改变是具有重要意义的。为了适应临床取材难等具体情况,本文介绍一种简便迅速的微量RNA抽提方法和两种不需要专门抽提RNA。

创伤性脑损伤后大鼠海马区糖皮质激素受体mRNA的表达

目的研究创伤性脑损伤(TBI)后大鼠海马区糖皮质激素受体(GR)mRNA表达的变化及其对大鼠认知功能的影响。方法建立大鼠头颅侧向旋转加速脑创伤模型,应用逆转录酶-聚合酶链式反应(RT-PCR)和Morris水迷宫检测伤后大鼠海马区GR mRNA的表达与学习记忆功能的关系。结果伤后4～7 d大鼠海马区GR持续低表达;Morris水迷宫检测伤后大鼠出现认知功能障碍。结论 TBI大鼠海马区GR mRNA的降低影响大鼠认知功能。

参附汤对HL60细胞糖皮质激素受体mRNA表达的影响

为探讨参附汤(SFT)大鼠血清对人白血病细胞株HL60糖皮质激素受体(GR)及其信使核糖核酸(mRNA)的影响.用动物血清学方法制备SFT血清制剂,取浓度为1×106/ml HL60细胞的细胞悬液培养液150μl加入浓度为20%SFT血清,置于96孔培养板内,培养48h后测定GRmRNA和GR,并以生理盐水血清和含小牛血清细胞培养液作对照.用放射配体结合法分析GR,用Northern blot分析GRmRNA的改变.结果:SFT可增加HL60细胞GR和GRmRNA的含量,生理盐水组则抑制两者的表达.结论:SFT对GR的表达有正向调节作用,结合临床上SFT的抗休克作用,提示SFT的这一作用可能是通过正向调节GR表达后,增加了GC的生物学效应来实现的,其作用点在mRNA转录水平.

狼疮肾炎患者外周血单个核细胞NF-κB与糖皮质激素受体mRNA的表达

目的:检测狼疮肾炎患者单个核细胞核因子-κB(NF-κB)与糖皮质激素受体mRNA(GR-mRNA)的表达水平。方法:免疫组织化学方法及逆转录酶链反应检测狼疮肾炎患者和正常对照组外周血单个核细胞NF-κB与糖皮质激素受休mRNA的表达。结果:与对照组相比,狼疮肾炎患者外周血单个核细胞GR mRNA表达水平降低,NF-κB表达水平升高(P<0.01);激素治疗前,激素敏感组、激素依赖组及激素抵抗组GR mRNA表达水平均降低(P<0.01),NF-κB表达水平升高(P<0.01)。激素敏感组与激素抵抗组GR mRNA表达水平有统计学差异(P<0.01)。结论:NF-κB与GR mRNA的异常表达可能与狼疮肾炎病情及糖皮质激素疗效不同有关。

糖皮质激素受体mRNA表达与早产儿呼吸窘迫综合征之间的关系

目的探讨早产儿呼吸窘迫综合征(RDS)与糖皮质激素受体(GR)mRNA表达水平之间的关系及其临床意义。方法将2012年11月到2014年4月分娩的46例患有RDS的早产儿纳入实验组,56例无RDS的早产儿纳入对照组。采用实时荧光定量PCR技术检测102例胎龄在24~35周的早产儿外周血单核细胞(PMBC)中GRαmRNA和GRβmRNA的表达水平,分析其与RDS发生及临床特征之间的关系。将GRαmRNA表达量<0.083332为GRα-Ⅰ组,GRαmRNA表达量>0.083332为GRα-Ⅱ组;GRβmRNA表达量<0.00005241为GRβ-Ⅰ组,GRβmRNA表达量>0.00005241为GRβ-Ⅱ组。比较每组之间在氧气罩的持续时间、鼻罩持续气道正压通气(CPAP)、机械通气、住院时间、到达全肠内喂养时间、脓毒症发作、表面活性剂的使用种类、支气管肺发育不良(BPD)和红细胞输血数量水平。结果 RDS组GRαmRNA的表达水平低于正常组(P<0.05),而GRβmRNA的表达水平在两组间无显著差异(P>0.05)。GRαmRNA表达量低的组中更易发生RDS(P<0.05)。GRβ-Ⅰ组的氧气罩使用时间和ICU住院时间变短,败血症发作及红细胞输血次数减少(P<0.05);GRβ-Ⅱ组内则具有较高的住院费用(P<0.05)。结论 GRαmRNA表达高的早产儿RDS发病率低;GRβmRNA表达低的患儿具有较好的临床随访结果。

鸡外周血淋巴细胞糖皮质激素受体mRNA的快速检测法

采用异硫氰酸胍变性法提取鸡外周血淋巴细胞总RNA,通过斑点杂交试验探索了以糖皮质激素受体cDNA为探针定量检测鸡糖皮质激素受体mRNA的简便快速方法。

热休克抑制人肝癌SMMC-7721细胞糖皮质激素受体mRNA表达及其机制探讨

目的:探讨热休克时细胞糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)mRNA减少的机制。方法:利用RT-PCR半定量的方法研究热休克时人肝癌SMMC-7721细胞GR mRNA的总体变化。制备GR基因跨外显子3、4、5的RNA探针和GR基因内含子E的RNA探针,对热休克后不同时间的细胞进行原位杂交,激光扫描共聚焦显微镜观察,计算机图像分析系统进行分析,研究GR mRNA转录、降解及前体剪接的变化。结果:RT-PCR实验证实,热休克反应时SMMC-7721细胞GRmRNA含量降低。原位杂交实验证实,SMMC-7721细胞热休克时,外显子和内含子探针杂交显色所得的积分灰度值(GRmRNA和GR mRNA前体的量)比未热休克处理组低(P<0.05);加放线菌素D抑制转录后进行热休克反应,内含子探针杂交显色所得的积分灰度值(GR mRNA前体的量)比单纯加放线菌素D(未进行热休克组)高,而外显子探针杂交显色所得的积分灰度值(GR mRNA的量)比单纯加放线菌素D组低(P<0.05)。结论:热休克反应时GR mRNA转录过程受抑,GR mRNA前体剪接过程存在障碍,GR mRNA降解加快。