上调糖皮质诱导型蛋白激酶-1能够保护Aβ_(1～42)诱导的细胞凋亡

目的探讨上调糖皮质诱导型蛋白激酶(SGK-1)能否保护Aβ1～42诱导的细胞毒性及其保护机制。方法在HEK293细胞中给予不同浓度Aβ1～42聚集体处理,摸索合适的诱导细胞毒性的浓度。HEK293细胞转染SGK-1质粒24 h后再给予Aβ1～42处理24 h,通过细胞活性分析以及Western印迹实验检测凋亡相关通路变化。结果过表达SGK-1能够明显改善HEK293细胞由Aβ1～42诱导的细胞毒性(P<0.05),SGK-1的上调伴随着JNK-1(P<0.01)和Caspase-3的抑制(P<0.05)。结论上调SGK-1可能通过抑制JNK-1的激活从而抑制Caspase-3的活化来保护细胞,上调SGK-1可以作为治疗阿尔茨海默病(AD)患者Aβ细胞毒性的保护靶点。

坎地沙坦对糖尿病肾病小鼠血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1表达的影响及意义

目的研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)Ⅰ型受体(AT1)拮抗剂坎地沙坦(candesartan)对糖尿病肾病(D iabetic nephrop-athy,DN)小鼠血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1(SGK1)表达的影响及意义。方法采用链脲佐菌素(STZ)单次腹腔注射诱导小鼠糖尿病肾病(DN)模型。将正常C57BL/6小鼠随机分成3组,每组12只:正常对照组(N组)、糖尿病肾病组(D组)、Candesartan治疗组(DC组)。治疗8 wk后取肾组织,观察肾脏病理改变;半定量RT-PCR法检测各组肾皮质SGK1及结缔组织生长因子(CTGF)mRNA的表达;W estern b lot检测各组肾皮质中SGK1及CTGF蛋白的表达。结果与N组相比,D组小鼠肾重/体重、24 h尿蛋白量,肾小球滤过率均明显增加;肾皮质中SGK1、CTGF mRNA及蛋白质的表达均明显升高。经Candesartan干预后(DC组),相应生化指标较D组有明显改善,SGK1、CTGF的表达水平较D组亦有明显下调。纤维化指标CTGF的表达与SGK1呈正相关。结论Candesartan可以延缓糖尿病肾病的肾脏纤维化过程,它对细胞内SGK1信号转导途径的抑制作用可能是其抗纤维化作用的主要环节,该作用与AngⅡ-AT1途径被阻断有关。

血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1在梗阻性肾病肾小球中的表达及姜黄素对其的影响

目的:探索在单侧输尿管梗阻(UUO)性肾病变进程中,血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1(SGK1)在肾小球中的表达变化及姜黄素对其的影响。方法:采用右侧输尿管接扎术诱导大鼠UUO模型,将54只大鼠随机分为假手术组、模型组、姜黄素组3组,每组18只。术后第3、7及14 d分别随机处死各组中的6只大鼠,检测血尿素氮(BUN)、血清肌酐(SCr)。应用免疫组化技术检测肾小球中SGK1蛋白的表达。结果:模型组大鼠肾小球中的SGK1蛋白的表达第3 d开始上调,第7 d和14 d继续升高。与模型组相比,姜黄素组BUN、SCr的改变不明显,但肾小球中的SGK1蛋白表达均显著下降。结论:随UUO肾病变发展,肾小球中SGK1持续高表达,进一步提示SGK1在梗阻性肾病的肾小球纤维化病变进程中起重要作用。姜黄素能抑制肾小球中SGK1的表达,从而抑制肾小球的纤维化。

血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶3在乳腺癌分子诊断与治疗中的意义

目的研究血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶(SGK)3过表达对乳腺癌细胞生物学行为的影响及检测SGK3与乳腺癌临床病理特征的关系。方法利用真核表达载体SGK3-pEGFP-N1瞬时转染乳腺癌MDA-MB-231细胞,细胞划痕实验和流式细胞术检测SGK3过表达对细胞周期、凋亡和迁移的影响;利用组织芯片,通过免疫组化法检测分析SGK3与乳腺癌临床病理特征的相关性。结果 SGK3过表达可促进MDA-MB-231细胞迁移(P<0. 05)、抑制细胞凋亡(P<0. 01),但对细胞周期无明显影响。SGK3在不同TNM分级、同一分级不同淋巴结转移及孕激素受体(PR)+和PR-的浸润性乳腺癌组织中的表达差异均无统计学意义(P>0. 05)。结论尽管SGK3过表达对乳腺癌恶性生物学行为有影响,且其表达与乳腺癌临床病理特征相关,但其在乳腺癌分子诊断与治疗中的意义尚需确定。

血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1在糖尿病小鼠肾皮质中的表达变化

目的探索在糖尿病(diabetes mellitus,DM)肾脏病变进程中,血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1(serumand glucocorticoid-inducible kinase 1,SGK1)在肾皮质中的表达变化。方法采用链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)单次腹腔注射诱导小鼠DM模型,设DM组和正常对照(normal control,NC)组,在DM模型1、3、4、6和12周时,检测肾重指数、血糖和糖化血红蛋白(HbA1c),RT-PCR方法检测肾皮质SGK1 mRNA的表达,Western blot法检测肾皮质SGK1蛋白的表达,同时应用免疫组织化学技术检测肾皮质中肾小球的SGK1蛋白的表达。结果与NC组相比,从第1周末起到第12周末DM组小鼠肾重指数、血糖和HbA1c均显著增加;第1周末肾皮质SGK1 mRNA和蛋白以及肾小球中SGK1蛋白的表达即开始上调,到第4周末肾皮质SGK1 mRNA和蛋白表达达到顶峰,第6周至第12周仍有较高表达。结论随DM肾脏病变发展,肾皮质及肾小球中SGK1持续高表达,进一步提示它在DM肾脏病变进程中起重要作用。

血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1在高血压肾损害大鼠模型中的表达

目的探讨血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1（SGK1）在高血压肾损害大鼠模型中的表达及其意义。方法采用NG-硝基-L-精氨酸甲酯（L-NAME）诱导大鼠高血压模型，观察肾脏组织病理学改变；检测尿微量白蛋白（mAlb）、β2微球蛋白（β2-MG）和血肌酐（SCr）浓度；实时PCR法检测肾皮质sGK1 mRNA的表达；Western blot法检测肾皮质SGK1蛋白的表达。结果8周时高血压组大鼠肾脏组织可见小动脉中膜增厚，管腔缩小，肾小球和肾小管缺血样改变，伴有问质基质增生和炎症细胞浸润。尿mALB和β2-MG显著增加，SCr改变不明显。肾皮质SGK1 mRNA和蛋白表达显著上调，与对照组比较有统计学差异（P〈0．01）。结论高血压组大鼠肾皮质SGK1基因表达明显增加，提示SGK1可能在高血压肾损害的发病机制中发挥了重要作用。

糖皮质激素诱导的蛋白激酶3种亚型在高糖诱导的人肾小管上皮细胞中的表达

目的 :研究高糖环境下人近端肾小管上皮细胞 (HKC)中血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶 (SGK) 3种亚型SGK1、SGK2和SGK3的表达 ,探讨SGK 3种亚型在介导高糖致肾小管上皮细胞过度合成细胞外基质 (ECM)中的作用。方法 :将细胞分为对照组、高糖组和渗透压对照组。分别采用RT -PCR方法和Westernblotting方法检测SGK1、SGK2和SGK3mRNA水平和SGK1蛋白水平的表达 ,ELISA方法和间接免疫荧光方法检测培养液中和HKC胞内纤连蛋白 (FN)含量。结果 :HKC细胞中存在SGK1、SGK2和SGK3的表达。高糖刺激下 ,SGK1、SGK2和SGK3mRNA和SGK1蛋白表达明显升高 (P <0 0 1) ;同时伴有HKCFN合成和分泌的增加 ,这与SGK上调存在一定联系。结论 :高糖能促进近端肾小管上皮细胞SGK1、SGK2和SGK3的表达 ,并可能通过SGK1、SGK2和SGK3介导的信号转导途径促进细胞外基质积聚 ,可能在糖尿病肾病的发生和发展中发挥致病作用。

血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1在肾脏中的研究现状及展望

血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1（SGK1）是Webster等在1993年用血清和糖皮质激素刺激大鼠乳房肿瘤细胞，筛选其表达产物后发现的。当细胞受血清或糖皮质激素刺激时，SGK1基因在30min内表达迅速升高5～10倍，故命名为血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶。它是一种与蛋白激酶B（PKB／AKT）等第二信使蛋白具有极高的同源性的丝氨酸和／或苏氨酸蛋白激酶。

血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1介导外膜成纤维细胞表型转化

目的探讨血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1(SGK1)是否参与血管外膜成纤维细胞(AF)表型转化。方法选取雄性SD大鼠,组织切块法培养胸主动脉AF,将未用转化生长因子β1(TGF-β1)刺激的AF分别作为空白组、对照1和2组,用2.5、5.0、10.0和15.0ng/ml TGF-β1诱导AF依次为A、B、C和D组;分别用50μmol/L的EMD638683和SB203580预处理细胞为抑制剂1和2组;用5ng/ml TGF-β1刺激细胞分别为刺激1和2组。Western blot检测SGK1、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原蛋白相对表达量。结果与空白组比较,A、B和C组SGK1表达显著增加(P<0.05),B组SGK1表达量最高;B、C和D组α-SMA表达显著增加(P<0.05),C组α-SMA表达量最高(P<0.05)。与对照1组比较,刺激1组细胞α-SMA和Ⅰ型胶原蛋白表达明显升高(P<0.05),与刺激1组比较,抑制剂1组细胞α-SMA和Ⅰ型胶原蛋白表达显著降低(P<0.05);与对照2组比较,刺激2组细胞SGK1表达明显升高(P<0.05),与刺激2组比较,抑制剂2组细胞SGK1表达显著降低(P<0.05)。结论 SGK1通过p38促分裂素原活化蛋白激酶参与TGF-β1诱导的血管AF表型转化,参与血管的病理性重构。

糖皮质激素诱导的蛋白激酶在缺血大鼠海马神经元细胞中的保护作用

目的探讨糖皮质激素诱导的蛋白激酶1(SGK1)在大鼠海马神经元细胞中缺血再灌注中的保护作用。方法将海马神经元细胞根据氧糖剥夺(脑缺血)诱导时间不同分为正常海马神经元细胞组,氧糖剥夺诱导120 min组、氧糖剥夺诱导120 min后正常恢复10 min组、氧糖剥夺诱导120 min后正常恢复30 min组和氧糖剥夺诱导120 min后正常恢复60 min组。采用Annexin V-FITC/PI流式细胞术对样品进行检测,区分实验样本中正常、坏死、凋亡细胞。结果随着氧糖剥夺(脑缺血)时间的延长而神经元细胞凋亡的数量呈现不断增加的趋势;而随着氧糖剥夺(脑缺血)时间的延长,SGK1在蛋白水平的表达出现不断下降的趋势;和对照组相比其神经元细胞凋亡的数量明显减少;SGK1蛋白的过表达受到抑制。结论SGK1可以有效减少氧糖剥夺SD大鼠海马神经元细胞的凋亡,而SGK1调控神经元细胞凋亡的模式是通过PI3K/Akt/GSK3β信号通路来介导。

血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶-1和缺氧在子痫前期发病作用的研究

目的:研究血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶-1(serum and glucocorticoids-inducible kinase-1,SGK1)在子痫前期胎盘组织中的分布和表达,以及缺氧对胎盘滋养细胞SGK1表达的影响。方法:选择2012年12月至2013年11月在重庆医科大学附属第二医院剖宫产分娩的50例子痫前期孕妇为研究对象,其中子痫前期轻度组25例,子痫前期重度组25例,以同期行择期性剖宫产术的25例正常孕妇为对照组。免疫组化检测SGK1在胎盘组织的分布及表达,Western blot检测SGK1在胎盘组织蛋白水平的表达。在常氧条件下(21%O2、5%CO2)和缺氧条件下(1%O2、5%CO2)培养HTR-8/SVneo滋养层细胞,Western blot检测SGK1蛋白的表达。结果:免疫组化结果表明子痫前期轻度组、重度组SGK1的蛋白表达量均较对照组明显增加(P=0.000),子痫前期重度组SGK1的蛋白表达量较子痫前期轻度组明显增加(P=0.028)。Western blot结果表明子痫前期轻度组、重度组SGK1的蛋白表达量均较对照组明显增加(P=0.000),子痫前期重度组SGK1的蛋白表达量较子痫前期轻度组明显增加(P=0.000)。Masson染色结果显示子痫前期轻度组、重度组的纤维化率均较对照组明显增加(P=0.000),子痫前期重度组纤维化率较子痫前期轻度组明显增加(P=0.000)。细胞实验部分:Western blot结果表明缺氧组SGK1的蛋白表达量较常氧组明显增加(P=0.000);缺氧组CTGF的蛋白表达量较常氧组明显增加(P=0.001)。Masson染色结果显示缺氧组纤维化率较常氧组明显增加(P=0.000)。结论:SGK1在子痫前期胎盘组织表达明显升高,提示SGK1可能在子痫前期的发病中发挥重要作用,缺氧通过刺激SGK1表达升高,参与子痫前期的发生。

血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶3与肿瘤发生发展关系的研究进展

血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶3(SGK3)是属于AGC(PKA/PKG/PKC)激酶家族的一个Ser/Thr双重特异性蛋白激酶。与其他蛋白激酶不同,SGK3不仅局限于磷酸化调节,而且还受细胞内定位调节及快速转录水平的调节,其于磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)信号通路的下游被激活后在真核生物的基因组中快速而广泛地表达,影响细胞内信号传导。正常情况下,SGK3在生物体内稳定地发挥保守性作用,但是在肿瘤中被异常调节,会导致肿瘤细胞迁移和侵袭。SGK3在多种肿瘤中异常表达,依赖PI3K/蛋白激酶B(AKT)信号通路调控肿瘤细胞进程。SGK3的激活可组成一个与Ⅰ类PI3K及AKT无关的通路hVPS34-SGK3,从而导致化疗耐药的发生。现基于国内外对SGK3的研究成果,针对SGK3的结构、作用机制及其对肝癌、乳腺癌、前列腺癌、多形性胶质母细胞瘤、肾癌和鼻咽癌等不同肿瘤发生发展过程的影响进行综述。

糖皮质激素诱导的蛋白激酶1对早期动脉粥样硬化形成中的研究进展

动脉粥样硬化是动脉硬化的血管疾病中最常见、最重要的一种类型，可累及主动脉、冠状动脉、颅脑动脉及全身其他大中动脉血管，并能导致心脑血管事件发生，危及生命。动脉粥样硬化已被公认是血管壁的一种慢性炎症疾病，在炎性反应过程中，单核细胞和（或）巨噬细胞参与其中，

血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1对肿瘤影响的研究进展

血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶(SGK)是一种AGC家族的丝氨酸苏氨酸蛋白激酶,包括SGK1、SGK2、SGK3三个亚型,三者中对SGK1的研究最为深入。它参与离子转运、脂肪细胞分化、免疫细胞活化、炎症等多种生理和病理过程。SGK1在多种肿瘤中过度表达,包括前列腺癌、结直肠癌、胶质母细胞瘤、乳腺癌和宫颈癌等,而在多形性胶质母细胞瘤中低表达。针对SGK1通过不同的信号通路促进肿瘤生长、转移、治疗抵抗性,本文关注SGK1在不同肿瘤中的表达情况以及其对肿瘤细胞增殖、凋亡、侵袭、转移、自噬等影响的最新研究进展并作一综述,旨在探讨新型SGK1抑制剂治疗恶性肿瘤的可行性及临床推广应用前景,以期为不同类型肿瘤的治疗提供创新性策略,从而提高肿瘤的临床疗效。

血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶-1与流产相关情况的研究进展

血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶-1(SGK1)是一种丝氨酸苏氨酸蛋白激酶,在哺乳动物几乎所有的组织中均能检测到。SGK1参与Na离子转运、T细胞活化、炎症抑制、脂肪细胞分化等多种临床生理和病理过程,并在其中起重要作用,并且参与胚胎种植和妊娠维持的生理过程,与不孕、流产等疾病密切相关。本文就SGK1与流产相关情况的研究进展及其临床意义予以综述。

血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1对大鼠肾动脉平滑肌细胞增殖的作用及机制

目的探讨血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1（SGK1）对大鼠。肾动脉平滑肌细胞增殖的作用及其可能的分子学机制。方法组织块贴壁法原代培养的大鼠平滑肌细胞（VSMCs），将带有SGK1显性激活型突变体质粒（pIRES2-EGFP^-S422D SGK1 mutant SD）转染VSMCs，采用细胞计数，细胞流式技术、MTT比色法分析转染后平滑肌细胞增殖及细胞周期情况，应用Western Blot方法检测SGK1对细胞周期调控蛋白p27^kip1、p21^cip1、和增殖细胞核抗原（PCNA）的作用。结果SGK1能刺激平滑肌细胞增殖，使滞于G0／G1期细胞减少，周期调控蛋白p27^kip1、p21^cip1表达下降，PCNA表达升高。结论SGK1可能通过调节PCNA，p27^kip1和p21^cip1蛋白，参与细胞周期的调控，促进平滑肌细胞增殖。

血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶3在小鼠不同细胞周期1-细胞期受精卵中的表达水平及其亚细胞定位

目的:检测血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶3 (SGK3)在小鼠不同细胞周期1-细胞期受精卵中的表达水平及其亚细胞定位,初步阐明SGK3对哺乳动物受精卵早期发育的调控机制。方法:通过超排卵技术和受精卵体外培养收集小鼠1-细胞期受精卵,分别采用实时荧光定量PCR法(RT-qPCR)和Western blotting法检测小鼠不同细胞周期1-细胞期受精卵中SGK3 mRNA和蛋白表达水平,采用免疫荧光法观察SGK3在小鼠不同细胞周期1-细胞期受精卵中的亚细胞定位情况。结果:在小鼠不同细胞周期1-细胞期受精卵中均有SGK3 mRNA和蛋白表达;与G_(1)期、S期和M期比较,G_(2)期小鼠1-细胞期受精卵中SGK3 mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.01)。免疫荧光法检测,在G_(1)期和S期SGK3 (红色荧光)定位于小鼠1-细胞期受精卵细胞质,在G_(2)期部分SGK3进入细胞核,在M期SGK3广泛分布于小鼠1-细胞期受精卵中。结论:SGK3在小鼠不同细胞周期1-细胞期受精卵中动态表达,SGK3在受精卵细胞分裂过程中存在核浆穿梭,SGK3的定位改变可能推动小鼠1-细胞期受精卵G_(2)/M转换和有丝分裂进程。

血清糖皮质激素调节蛋白激酶3过表达对乳腺癌细胞凋亡的影响

目的探讨血清糖皮质激素调节蛋白激酶3(SGK3)基因过表达对乳腺癌细胞凋亡的影响。方法构建pEGFP-N1-SGK3重组质粒,用载体质粒pEGFP-N1和重组质粒pEGFP-N1-SGK3转染乳腺癌MCF7细胞;MTT法观察转染细胞的增殖情况,流式细胞术分析细胞凋亡情况,RT-PCR检测凋亡相关基因表达。结果利用pEGFP-N1-SGK3质粒转染乳腺癌MCF7细胞,建立表达SGK3蛋白的细胞系;通过细胞增殖实验发现,SGK3的过表达可促进MCF7细胞增殖;流式细胞术分析显示,外源性SGK3可抑制MCF7细胞凋亡的发生,并影响凋亡相关基因bad、bcl-xl的表达。结论 SGK3的过表达可抑制乳腺癌MCF7细胞凋亡。

血清和糖皮质激素调节蛋白激酶2α过表达通过Wnt/β-Catenin信号通路抑制肝癌细胞株BEL7402增殖

血清和糖皮质激素调节蛋白激酶(SGK)家族参与调节生长因子和激素的信号转导.为了研究SGK家族成员SGK2α在细胞中的功能,构建了真核表达质粒pEGFP-N1-SGK2α并瞬时转染HEK293细胞,通过激光共聚焦显微镜观察发现融合蛋白SGK2α-GFP主要定位于细胞浆,免疫共沉淀实验发现SGK2α与糖原合成激酶3β(GSK3β)存在相互作用.利用PCDNA6-V5-HisB-SGK2α质粒转染肝癌BEL7402细胞,建立稳定表达SGK2α蛋白的细胞系,通过细胞增殖实验发现,SGK2α的过表达使BEL7402细胞生长速度减慢、细胞倍增时间延长.裸鼠成瘤实验发现,与对照组细胞相比表达SGK2α的BEL7402细胞在裸鼠中的成瘤能力明显降低.免疫印迹实验证实,SGK2α的过表达不影响GSK3β的表达,但却使β-catenin和Cyclin D1的表达下调.提示影响Wnt/β-catenin信号通路关键分子的表达可能是外源性SGK2α蛋白过表达抑制BEL7402细胞增殖的分子机制.

糖皮质激素抑制缓激肽引起的PC12细胞外钙内流与蛋白激酶C有关

缓激肽（BK）可引起PC12细胞的[Ca2＋]i；升高，该作用不通过电压敏感性钙通道，而是由G蛋白转导，通过内钙释放和外钙内流引起的。BK的作用可受到皮质疏（B）的快速抑制。本研究利用无钙／再加钙方法，把BK对内钙释放和外钙内流作用分开来进行研究。结果发现：（1）B可以抑制BK引起的外钙内流，对内钙释放影响不明显；（2）B－BSA（牛血清白蛋自偶联的皮质疏）对BK所引起外钙内流的抑制作用与游离的B作用类似；（3）PKC激活剂（PMA）可以模拟，而PKC的抑制剂G66976可以逆转B的抑制作用；（4）百日咳毒素（PTX）预处理可以阻断B抑制BK引起的外钙内流。结果提示：B可能作用在膜受体上，通过PTX敏感的G蛋白-PKC途径抑制BK引起的外钙内流。