用HPLC和蒸发光散射检测对糖类分析的方法学

用HPLC分析糖类的方法已经有25年一成不变了，而且分离和检测糖类的方法也存在问题。许多常用于分离糖类的色谱柱耐用性和基线稳定性不好，因而造成疏水性小的分子在反相分离中缺乏比较性。另一方面许多常用的检测器对糖类检测灵敏度较低，而且需要较长的平衡时间，不能进行梯度洗脱。同时这类检测器对流动相的光谱性能有严格的要求。本文考察另外一种方法，并着重说明常规方法分离和检测糖类的缺点。

亲水作用色谱在糖类化合物分析中的应用

糖类化合物的结构和组成分析对于探究糖的结构与功能的关系具有重要作用。亲水作用色谱(HILIC)对糖类等极性化合物具有良好的分离效果。该文介绍了适合糖类分析的常用HILIC柱固定相及其分离机制,论述了强洗脱溶剂比例、流动相p H值、缓冲盐浓度和色谱柱温度对HILIC分离效果的影响,并举例说明了HILIC法在单糖组成、糖胺聚糖二糖组成、寡糖聚合度、糖苷、糖脂、糖醇以及N-/O-糖链分析中的应用。

糖类化合物PMP衍生分析进展

糖类物质的结构与组成分析在揭示其生物学功能方面发挥着重要作用,糖类化合物的衍生化分析是实现其高灵敏度定性和定量检测的有效方法。该文对一种条件温和、灵敏度高、选择性好的1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)的衍生化分析方法在糖类化合物的单糖组成、聚合度、取代度、异构体分析以及在N/O-糖链的释放和定量分析等方面的应用进展进行了综述。

江苏地产太子参中多糖、游离糖及氨基酸的含量分析

应用分光光度法对江苏地产太子参野生品及不同产地栽培品中多糖、游离糖的含量进行了测定,并用薄层扫描法测定了药材中精氮酸、组氨酸的含量。为评价药材的内在质量提供了资料。

不同炮制法对女贞子中酪醇和多糖含量的影响

目的：对女贞子的６ 种不同炮制品（清蒸、盐蒸、醋蒸、黄酒蒸、白酒蒸、酒炙品）的酪醇和多糖含量分别进行测定。方法：薄层扫描法和苯酚－硫酸法。结果：与生品比较，白酒蒸和酒炙品中酪醇的含量增加了２４．８５％ 和２６．９０％ ；其他炮制品酪醇含量与清蒸品比较，基本都有升高；不同炮制品的多糖含量与生品或清蒸品比较，则都是减少的。结论：临床用药以白酒蒸和酒炙品为好，但应注意多糖的综合利用。

血清DCP、GPC3和HSP70检测对AFP阴性PLC的诊断价值

目的探讨血清中异常凝血酶原(des-γ-carboxy prothrombin,DCP)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(glypican-3,GPC3)和热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)3种肿瘤标志物在甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)阴性原发性肝癌(primary liver carcinoma,PLC)中的诊断价值及联合检测的意义。方法收集AFP阴性PLC 48例患者,良性肝病40例,健康体检者40例为对照组。检测血清中DCP、GPC3和HSP70的浓度,并进行比较。结果 AFP阴性PLC组患者血清DCP、GPC3和HSP70水平及阳性率均高于良性肝病组及对照组,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。DCP、GPC3和HSP70联合检测对AFP阴性PLC诊断的敏感度、特异度及准确度均高于单独检测(均P<0.05)。结论 DCP、GPC3和HSP70联合检测对AFP阴性PLC的诊断具有重要价值。

曲霉半乳甘露聚糖检测对侵袭性曲霉病早期诊断的实验研究

目的:评价酶联免疫吸附试验(ELISA)检测曲霉半乳甘露聚糖(GM)抗原对侵袭性肺曲霉病(IA)的诊断价值,确定合适的阳性界值(cut-off)及对诊断和治疗的指导意义。方法:采用ELISA方法检测87例IA高危患者的血清曲霉GM抗原,比较cut-off 1.5、cut-off 1.0、cut-off 0.5时GM检测的敏感性、特异性、阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV)。结果:cut-off 1.5时,ELISA检测的敏感性、特异性、PPV、NPV分别为50%、96%、91%和71%;cut-off 1.0时分别为65%、92%、87%和77%;cut-off 0.5时分别为75%、88%、83%和81%。结论:曲霉菌半乳甘露聚糖抗原ELISA检测可用于临床诊断侵袭性曲霉菌感染,以0.5为折点对早期诊断很有意义,有利于高危患者曲霉感染病死率的降低。

通痹灵总碱对胶原诱导型关节炎大鼠软骨及其细胞代谢的影响(英文)

背景:中医对类风湿关节炎rheumatoidarthritis,RA的认识和治疗积累()比较丰富的经验,尤其是经过近几年来的研究,取得了令人瞩目的进展,具有治疗方法多,疗效确切,毒副作用少的特点,因而从中医领域进一步探寻治疗RA更为有效的药物和方法,有着重要的科学意义和社会意义。而中药能否在RA发病中通过多途径、多靶点、多环节作用方式,抑制或阻止软骨和骨的破坏并促进他们的新陈代谢及其损伤的修复的研究更是少有报道。目的:探讨中药通痹灵抗软骨破坏的作用机制。设计:以实验动物为研究对象的完全随机设计,对照实验研究。单位:一所大学金匮教研室。材料:实验于2002-08/2003-12在广州中医药大学第一附属医院综合实验室完成。Wistar清洁级大鼠,雌性,体质量(110±20)g,35只。由解放军第一军医大学动物实验室提供,动物合格证号:2002A041。将Wistar大鼠适应性喂养3d后,随机分为正常组、造模组、通痹灵总碱组。通痹灵总碱由广州中医药大学热带病研究所植物化学分析室提取。方法:以胶原诱导型关节炎大鼠为动物模型,分组灌胃治疗后,做大鼠趾关节病理切片,常规苏木精-伊红染色,观察软骨病变;培养软骨细胞,以rrIL-1β体外刺激软骨细胞导致软骨细胞基质降解作为药理模型,加用不同浓度的通痹灵总碱,并以地塞米松作为对照组,?

贝伐珠单抗对结直肠癌细胞串珠素表达的影响

目的探究贝伐珠单抗对结直肠癌细胞串珠素表达的影响。方法将处于对数生长期的肿瘤细胞(HCT116和HT29细胞)分为两组:对照组和实验组(加入终浓度为400μg/L的贝伐珠单抗48小时),采用RTPCR检测结直肠癌细胞串珠素mRNA表达。将同一批处于对数生长期的肿瘤细胞分为6组,一组为对照组,其余5组实验组分别加入终浓度为25、50、100、200和400μg/L的贝伐珠单抗,48小时后ELISA检测直肠癌细胞及培养液上清的串珠素蛋白水平,Western blot检测结直肠癌细胞串珠素的蛋白表达。结果与对照组比较,实验组肿瘤细胞串珠素mRNA及蛋白水平均上调(均P<0.05)。在细胞培养液中,与对照组比较,实验组的串珠素蛋白水平未出现显著变化(P>0.05)。结论贝伐珠单抗引起结直肠癌细胞串珠素mRNA和蛋白表达的上调,但未引起细胞培养液中串珠素蛋白的显著变化。

若干肿瘤标志物对原发性肝癌诊断的临床评价

目的:探讨AFP、TPA、TPS、CA199和CEA对原发性肝癌(PHC)的临床应用价值。方法:采用酶联免疫吸附法,分别测定85例PHC、19例肝转移癌、35例肝硬化、22例慢性肝炎患者和50例健康查体者血清AFP、TPA、TPS、CA199和CEA水平,并应用ROC曲线分析各项标志物对肝癌的诊断价值。结果:AFP对PHC的诊断价值最高;TPA、TPS和CA199在PHC和肝转移癌患者血清中均有高水平表达;CEA对PHC无诊断价值,但对肝转移癌具有一定的诊断价值。AFP联合检测TPA、TPS或CA199可以提高PHC的诊断敏感性,但特异性有所下降。结论:AFP联合CEA可以用于PHC与肝转移癌的鉴别,联合TPA或TPS有助于早期发现PHC的远处转移,联合TPS和CA199适合于无明显症状的门诊患者和PHC高危人群的筛查。

细胞因子对人视网膜色素上皮细胞syndecan-1表达的影响

目的检测细胞因子对人视网膜色素上皮(RPE)细胞syndecan-1表达的影响,并探讨其作用的信号转导途径。方法体外培养人RPE细胞,采用逆转录聚合酶链反应和免疫荧光法检测正常细胞syndecan-1mRNA、蛋白的表达;免疫荧光法定性、定量观察不同刺激因子作用下syndecan-1的表达变化,包括:7、35ng/ml肿瘤坏死因子(TNF)-α刺激24h,1、6μg/ml脂多糖(LPS)刺激11h,7ng/mlTNF-α刺激不同时间(0～24h,每2h为1个时间点,共13个时间点),30%单核/巨噬细胞株(THP-1细胞)上清液刺激3、14、43h;细胞外信号调节激酶(ERK)1/2通路特异性阻断剂PD098059预处理2h后对30%THP-1细胞上清液作用的调节;30%THP-1细胞上清液刺激细胞3h后0.25%胰酶作用5min,噻唑蓝法检测细胞贴壁情况。结果在正常RPE细胞中可检测到syndecan-1mRNA和蛋白的表达;未受刺激的RPE细胞细胞膜、细胞浆及核仁呈强的黄绿色荧光,细胞核呈浅绿色荧光;随TNF-α、LPS浓度及时间增加,荧光强度呈减弱趋势(P<0.01);30%THP-1细胞上清液刺激后细胞荧光强度明显减弱(P<0.001)。50μmol/LPD098059预处理2h后可部分阻断30%THP-1细胞上清液的下调作用。与对照组相比,THP-1细胞上清液作用3h后贴壁细胞数下降(P<0.05)。结论TNF-α和LPS可下调体外培养的人RPE细胞syndecan-1的表达;30%THP-1细胞上清液可下调RPE细胞syndecan-1的表达、促使细胞脱壁,且该作用至少通过了ERK1/2信号转导通路。

HPLC-CAD法测定阿卡波糖胶囊含量

目的:针对目前标准中阿卡波糖含量测定方法灵敏度低、氨基柱柱效流失严重、耐用性差等问题,建立了高效液相色谱-电喷雾检测器(HPLC-CAD)法测定阿卡波糖胶囊的含量。方法:采用Waters XBridge Amide色谱柱(4.6 mm×250 mm,3.5μm),以乙腈--00..22%%三乙胺溶液(70∶30)为流动相,流速为1.0mL·min^-1,柱温45℃;电喷雾检测器参数:雾化温度55℃,幂率1.0,采样频率10 Hz。结果:阿卡波糖与相邻杂质以及各杂质峰间的分离均良好;在0.05~1.0 mg·mL^-1范围内线性关系良好(R^2=0.9994);阿卡波糖高、中、低3种浓度的回收率分别为99.2%、100.7%和99.6%。5批样品中阿卡波糖的含量分别为100.1%、100.2%、99.5%、98.6%和100.4%,经t检验统计分析,P>0.05,表明建立的HPLC-CAD法与《中华人民共和国药典》收载的方法无显著性差异。结论:HPLC-CAD法操作简单,专属性强,灵敏度高,色谱柱柱效好,耐用性强,弥补了目前标准中阿卡波糖含量测定方法的不足,可作为阿卡波糖胶囊质量控制和评价的新方法。

支气管肺泡灌洗术GM检测对非粒细胞缺乏患者肺曲霉病的诊断效果

目的探讨支气管肺泡灌洗术半乳甘露聚糖(GM)检测对非粒细胞缺乏患者肺曲霉病的诊断效果。方法选取本院2016年5月至2017年5月收治的疑似侵袭性肺曲霉病患者64例为研究对象。根据相关诊断标准分为确诊组、临床诊断组、拟诊组和非真菌感染组。所有研究对象均行支气管肺泡灌洗术,并进行GM检测。结果确诊3例,临床诊断20例,拟诊14例,非真菌感染27例。支气管肺泡灌洗液及血清GM界值从0.5上升为1.0时,灵敏度均下降,而特异度、阳性预测值均上升。在相同GM界值时,支气管肺泡灌洗液GM检测方法灵敏度、阳性预测值和阴性预测值均显著高于血清GM检测(P<0.05),特异度显著低于血清GM检测(P<0.05)。支气管肺泡灌洗液GM界值≥0.86时,对侵袭性肺曲霉病的诊断效率最高,其灵敏度为80.26%,特异度为75.15%,曲线下面积为0.945(95%CI:0.782-0.986)。结论支气管肺泡灌洗液GM检测较血清GM检测更有助于非粒细胞缺乏患者侵袭性肺曲霉病的诊断,其最佳阈值为0.86。

肝硬化门脉高压症患者脂多糖结合蛋白检测的临床意义

目的研究肝硬化门脉高压症患者血浆脂多糖结合蛋白（LBP）检测的临床意义。方法62例肝硬化患者，按Child-Pugh分级标准分为3组，应用双抗体夹心ELISA法测定脂多糖结合蛋白（LBP）。结果各组血浆LBP水平为Child—PughC〉Child—PughB〉Child-PughA，在肝功能不同的患者之间Child-PughC级患者的检测结果显著于Child-PughA级和Child-PughB级患者（P〈0．01）。结论血浆LBP水平是反映肝硬化程度的一个有效指标，升高的血浆LBP水平在肝硬化门脉高压症的发病过程中起着重要的作用。