鲨鱼硫酸软骨素二糖组成分析及其4S/6S比值的讨论

目的研究鲨鱼来源硫酸软骨素的二糖组成,并对鲨鱼硫酸软骨素(shark-CS)4S/6S(N-乙酰半乳糖胺上4-硫酸化基团/N-乙酰半乳糖胺上6-硫酸化基团)比值进行探讨。方法通过酶解液相色谱法及文献比较对鲨鱼来源的硫酸软骨素二糖组成进行分析。结果鲨鱼硫酸软骨素主要由6-硫酸化软骨素二糖(ΔDi-6S)、4-硫酸化软骨素二糖(ΔDi-4S)、2,6-硫酸化软骨素二糖(ΔDi-2,6diS)以及无硫酸化的软骨素二糖(ΔDi-0S)组成,其百分含量分别为28%~65%、10%~44%、9%~25%、0.5%~23%。Shark-CS 4S/6S比值不超过0.8。结论提出Shark-CS 4S/6S比值的正确计算方法,解决了数据相互矛盾的问题。指出USP43中关于shark-CSΔDi-6S峰面积百分比大于ΔDi-4S峰面积百分比的不合理规定,为USP43修订提供参考与依据。

大鼠肾脏糖胺聚糖的种类及二糖组成分析

采用两步酶解和离子交换色谱从Wistar大鼠肾脏中提取糖胺聚糖,以醋酸纤维素薄膜电泳分析糖胺聚糖种类,以弱阴离子交换色谱分离各种糖胺聚糖。纯化后的糖胺聚糖分别经特定糖胺聚糖酶裂解,采用强阴离子交换高效液相色谱(SAX-HPLC)紫外检测分析其二糖组成。结果表明,Wistar大鼠肾脏糖胺聚糖主要由硫酸乙酰肝素和少量硫酸皮肤素组成。硫酸乙酰肝素含有8种二糖,其中含有乙酰基二糖总含量高达77.6%,非硫酸化二糖(Ⅳ-A)含量为59.7%;硫酸皮肤素含有6种二糖,其中单硫酸化二糖总含量为54.8%,非硫酸化二糖含量为32.9%。

老龙皮多糖分离纯化及糖组成研究

目的分离纯化老龙皮多糖,并对其糖组成进行测定。方法采用冷水浸提、75%乙醇沉淀、离子交换和凝胶过滤等方法分离纯化老龙皮多糖,采用PMP衍生法及高效液相色谱法测定其糖组成。结果对老龙皮多糖进行了系统分离,得到5个组分,即LKY1,LKY2,LKY3,LKY4,LKY5,并对含量较高的LKY1和LKY2进行进一步分离和糖组成测定。结论初步分离纯化得到5种均一性多糖,并确定其中两种的糖组成,为老龙皮多糖的结构研究提供了一定的研究基础。

厦门海域水体中胶体多糖的醛糖组成

利用切向超滤技术从厦门海域水体中提取制备出不同来源(海洋、河口与河流)的胶体及不同粒径的海洋胶体,分析并比较其多糖的醛糖组成。结果表明,各种胶体含有相同的醛糖组分,即鼠李糖、岩藻糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖,粒径相同的高分子量胶体以葡萄糖和半乳糖为优势组分,海洋胶体与河流胶体的醛糖组成相似,低分子量海洋胶体的鼠李糖丰度是高分子量海洋胶体的2倍多。这些结果进一步说明了浮游植物和陆源输入是胶体有机物的重要来源,微生物作用和原生动物的摄食可能使天然水体中胶体物质的醛糖组成趋于一致。

猪肝组织中硫酸乙酰肝素的分离纯化及二糖组成分析

目的从少量猪肝组织中分离纯化硫酸乙酰肝素(HS)并进行二糖组成分析。方法分别采用胰蛋白酶及中性蛋白酶对猪肝组织进行酶解,再分别采用AG 50W-X2强阳离子交换色谱、Sephadex G-10凝胶过滤色谱、Q-Sepharose Fast Flow强阴离子交换色谱法纯化。将纯化的HS分别采用肝素酶Ⅰ和Ⅲ降解,所得到的二糖经2-氨基苯甲酰胺标记后,采用PA03色谱柱分析其二糖组成。结果经色谱和电泳分析,所得到的HS不含蛋白质及其它糖胺聚糖,其二糖组成以非硫酸化和低硫酸化二糖为主。结论该方法可以有效分离、纯化猪肝组织中的HS,并适用于少量组织中HS二糖组成分析。

柱前衍生化高效液相色谱法分析银耳多糖的单糖组成

采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮柱前衍生化反相高效液相色谱法,建立了5种常见单糖的最佳分离条件,并将该条件用于银耳多糖的单糖组成分析。银耳多糖中含有甘露糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、木糖、岩藻糖,摩尔比为3.894:1.264:0.044:1.000:0.265。该方法简单、快速、灵敏度高、重现性良好,可用于银耳多糖的质量控制。

维药胡桐泪的多糖含量测定及其糖组成分析

目的:测定市场上实际流通的商品胡桐泪药材中多糖的含量并对其单糖组成进行分析,以多糖为指标评价药材质量。方法:采用苯酚-硫酸法对总多糖进行含量测定;应用核磁共振氢谱(1H-NMR)分析单糖组成;运用高效凝胶渗透色谱(HPGPC)测定总多糖的分子量分布。结果:以葡萄糖计,4批新式胡桐泪总多糖含量平均值为(7.36±1.74)%,6批老式胡桐泪总多糖含量平均值为(1.53±0.99)%;新式与老式胡桐泪总多糖的单糖组成相似,主要由阿拉伯糖和半乳糖组成,还含有木糖、甘露糖、鼠李糖等,部分样品尚含有较高含量的葡萄糖;新旧类型样品总多糖在分子量分布上存在较大差异。结论:新式胡桐泪的总多糖含量平均值较老式高,以多糖含量为评价指标时,新式样品总体质量较老式更好;应用核磁共振氢谱可以快速、准确地鉴定单糖组成。

高效阴离子交换-脉冲安培法分析藻酸双酯钠的单糖组成和比例

藻酸双酯钠为类肝素药物,临床上主要用于治疗缺血性心、脑血管疾病,本研究建立藻酸双酯钠的单糖组成和单糖比例测定方法。通过正交分析的方法确定了样品前处理最佳反应条件,样品经过三氟乙酸水解,氢氧化钠溶液中和,采用高效阴离子交换-脉冲安培检测法,使用CarboPac?PA20阴离子交换柱分离,流动相采用200 mmol·L^(-1)氢氧化钠溶液和1 mol·L^(-1)醋酸钠溶液梯度洗脱,采用脉冲安培检测器,金工作电极, Ag/AgCl参比电极进行检测。对方法的线性、准确度和精密度进行了考察,结果表明该方法具有简单、专属、灵敏、应用范围广等特点。对不同企业藻酸双酯钠原料药进行了测定,能够准确测定藻酸双酯钠单糖组成,为藻酸双酯钠的结构鉴定提供单糖信息。

伊拉兔肺中硫酸软骨素C的分离纯化及二糖组成分析

目的:从伊拉兔肺中提取分离硫酸软骨素C(chondroitin sulfate C,CSC),并对其进行二糖组成分析。方法:采用丙酮、氯仿-甲醇(2∶1)对兔肺进行脱脂,利用木瓜蛋白酶对脱脂粉进行酶解。提取的粗品经75%乙醇沉淀,氯代十六烷基吡啶(CPC)将其中的酸性多糖富集获得总糖胺聚糖TFH。采用Q-Sepharose Fast Flow树脂对TFH分级纯化获得TF-C。采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生反相HPLC法分析单糖组成,利用硫酸软骨素酶ABC降解,SAX-HPLC法分析二糖组成。结果:所得TF-C不含蛋白质,主要由葡萄糖醛酸(Glc A)和氨基半乳糖(Gal N)组成,二糖组成以不饱和△UA-Gal NAc6S为主,含有少量的△UA-GalNAc4S。结论:首次从伊拉兔肺中分离获得低硫酸化高纯度CSC,为伊拉兔肺高值化产品的开发和利用提供了理论依据。

基于完全酸水解组成糖特征的几种法定基源麻黄多糖鉴别研究

草麻黄多糖具有重要的免疫抑制作用,因此对几种法定基源麻黄属多糖进行鉴别是一项重要的工作。本研究采用PMP柱前衍生超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)技术分析草麻黄、中麻黄、木贼麻黄和麻黄根多糖的完全酸水解单糖组成,考察其组成糖种类和含量变化,运用主成分分析多元统计分析方法,对源自草麻黄、中麻黄、木贼麻黄和麻黄根的二十批几种法定基源麻黄多糖实现了区分和辨别。甘露糖(1)、氨基葡萄糖(2)、半乳糖醛酸(8)和葡萄糖(9)在区分草麻黄多糖与麻黄根、中麻黄和木贼麻黄等三种麻黄多糖中起到了重要作用,半乳糖(10)在区分木贼麻黄多糖与草麻黄、中麻黄和麻黄根等三种麻黄多糖中起到了重要作用。PMP柱前衍生UPLC-MS/MS技术结合多元统计学分析方法,通过完全酸水解组成糖种类和含量的变化规律进行草麻黄、中麻黄、木贼麻黄和麻黄根多糖鉴别研究,该方法稳定可行,且重现性好,可为麻黄属多糖的质量评价提供有力参考。

芦笋皂苷的提取纯化及其糖基组成

芦笋皂苷是以芦笋下脚料为原料提取出来的一种糖甙化合物。目的是充分利用再生资源,变废为宝,同时解决芦笋下脚料废弃物所造成的环境污染问题。实验探讨了乙醇浓度、液料比、温度、时间等工艺条件对芦笋皂苷提取率的影响,筛选出最佳提取工艺:乙醇浓度95 %、液料比(V W)为6∶1、温度90℃、时间4h。从新鲜芦笋下脚料、芦笋干品提取皂苷的平均得率分别为1 70 %、4 0 1%。芦笋皂苷经氧化铝柱层析分离,以4 0 %乙醇的溶液为洗脱剂,洗出曲线为单一对称峰。采用UV、IR、HPLC等色谱对芦笋皂苷的结构特点、糖基组成进行初步分析。结果显示芦笋皂苷具有呋喃甾烷的结构特征,其糖基由木糖(Xyl)、岩藻糖(Fuc)、阿拉伯糖(Ara)组成,摩尔比为Xyl∶Fuc∶Ara =1 0∶0 13∶19 4 2 ,平均分子质量(Mw)为185 0 0。

不同熟化方式对食用型甘薯中可溶性糖分组成的影响

为了探究不同熟化方式对甘薯块根中可溶性糖分组成及含量的影响,采用80%的乙醇水溶液低温振荡提取、离子色谱—脉冲安培法同时检测提取液中多种可溶性糖分,测定了生薯和蒸制、烤制、微波3种熟化方式下甘薯块根中可溶性糖分组成及其含量,并以生薯样品为对照,分析了不同熟化方式下食用型甘薯可溶性糖组成及其变化特征。结果表明,通过本方法在提取液中共检测出半乳糖、甘露糖、葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糖、水苏糖共7种可溶性糖组分;不同熟化方式下以烤制样品中可溶性糖组分总量最高,达410.4 g/kg,生薯粉中可溶性糖组分总量最低,仅占到烤制样品的29.6%,不同处理对可溶性糖组分总量影响的顺序为烤制>微波>蒸制>生薯;生薯中占比最大的3种糖分别是葡萄糖、果糖和蔗糖,3种糖分占可溶性糖组分总量的95%以上;熟化后样品中占比最大的为麦芽糖,其次为蔗糖,烤制样品中麦芽糖占可溶性糖组分总量的50%以上。

离子色谱-脉冲积分安培法同时测定甘薯中10种可溶性糖组分

为建立离子色谱-脉冲积分安培法(IC-PAD)同时检测提取液中10种可溶性糖组分(葡萄糖、果糖、半乳糖、甘露糖、鼠李糖、阿拉伯糖、蔗糖、麦芽糖、棉子糖和水苏糖)的方法,通过80%乙醇水溶液低温超声振荡对甘薯粉样品进行提取,以Thermo Dionex Carbo Pac PA20(3 mm×150 mm)阴离子交换色谱柱为分析柱,以Carbo Pac PA20(3 mm×50 mm)为保护柱,以不同浓度的NaOH、CH3COONa组合淋洗液进行梯度淋洗分离,柱温30℃,进样体积10μL,采用离子色谱-脉冲积分安培方法检测。结果表明:6种单糖线性范围0.02~10 mg/L,其它4种糖线性范围为0.02~20 mg/L,10种糖组分加标回收率94.5%~106.5%,相对标准偏差0.57%~1.89%。本方法线性范围广、操作简单、分析速度快、灵敏度高,重现性好,可用于对甘薯提取液中多种可溶性糖组分的同时测定。利用本方法对实际样品的测定结果表明,不同干燥方式对甘薯可溶性糖含量的影响不同,与冷冻干燥相比,热风干燥增加了甘薯样品中可溶性糖含量,还促进了其它糖分转化生成棉子糖和水苏糖两种功能性低聚糖。

安康鱼鱼骨糖胺聚糖的提取及组成分析

目的提取安康鱼鱼骨中的糖胺聚糖并分析其二糖组成。方法以碱解-酶解法提取安康鱼头骨中的糖胺聚糖,检测提取物中总糖醛酸、总氮、总硫含量,并进行红外检测及高效液相色谱(HPLC)分析。结果提取物总硫含量与硫酸软骨素差别较大,红外图谱中指纹区域与硫酸软骨素标准图谱不符,酶解液相图谱与硫酸软骨素不同。结论该提取物并非硫酸软骨素,而是一种非硫酸化的糖胺聚糖。

基于氨基柱的高效液相色谱-示差折光检测器方法分析媚丽葡萄香气糖苷的糖基组成

建立了基于氨基柱的高效液相色谱分析媚丽葡萄香气糖苷的糖基组成的方法。媚丽葡萄果皮经提取缓冲液(0.1 mol/L Na_2HPO_4-NaH_2PO_4,pH 7.0,13%(V/V)乙醇)浸提,葡萄香气糖苷提取物在柠檬酸-磷酸盐缓冲液(pH 5.0)中用AR2000糖苷酶水解,释放出糖基,经氨基柱分离,用高效液相色谱-示差折光检测器(HPLC-RID)分析。色谱分析条件为:柱温35℃,RID温度35℃,进样量20μL,流动相为乙腈-乙酸乙酯-水(60:25:15,V/V),流速1.0 mL/min。结果表明,鼠李糖、木糖、阿拉伯糖、芹菜糖和葡萄糖在线性范围内线性关系良好(R^2>0.996),检出限为93~123 mg/L,定量限309~409 mg/L,5 g/L各单糖的峰面积的精密度(n=10)为2.3%~6.4%;糖基样品的各单糖加标回收率在73.8%~125.7%之间。以糖基类别划分的媚丽葡萄各类香气糖苷的摩尔百分比为:6-O-α-L-吡喃鼠李糖基-β-D-吡喃葡萄糖苷,4.1%~6.1%;6-O-β-D-吡喃木糖基-β-D-吡喃葡萄糖苷,2.3%~8.8%;6-O-α-L-呋喃阿拉伯糖基-β-D-吡喃葡萄糖苷,0.1%~3.9%;6-O-α-L-呋喃芹菜糖基-β-D-吡喃葡萄糖苷,5.5%~9.8%;6-O-β-D-吡喃葡萄糖基-β-D-吡喃葡萄糖苷,76.3%~86.8%。媚丽葡萄成熟过程中,各类香气糖苷的含量及其总量与浆果成熟度之间没有明显的相关性。

龙胆多糖提取分离纯化及其组成糖分析

目的从龙胆中提取分离水溶性多糖,研究其组成糖成分,为进一步开发利用龙胆多糖提供参考。方法主要采用SephadexG-100凝胶色谱柱分离纯化,利用气相色谱法测定各糖的组成比例。结果从龙胆水溶性多糖中分离纯化得到2种不同的均一多糖组分TP-1、TP-2,组成糖均一样。结论 2种均一多糖首次从龙胆中分离得到,组成糖的比例并不一样。

大鲵低聚糖肽性质初步研究

采用化学方法对大鲵低聚糖肽的氨基酸组成、糖组成及糖肽连接方式进行了初步研究。结果表明,大鲵低聚糖肽含蛋白量为80.01%、总糖含量为15.15%。其含有的氨基葡萄糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸及唾液酸分别为3.39%、0.65%、2.45%和0.60%。其氨基酸组成中,苏氨酸的含量最高,达13.1%,其次是脯氨酸、丙氨酸、亮氨酸、精氨酸、苯丙氨酸等。大鲵低聚糖肽的β-消旋反应和血凝集反应,表明大鲵低聚糖肽中糖肽键以O-连接的形式存在。

米糠多糖理化性质研究

通过Molish、Benidick、I-KI等颜色反应研究米糠多糖的理化性质,并运用NMR、HPLC、IR等现代分析手段对米糠多糖的单糖组成、分子量分布、理化性质进行了研究。结果表明米糠多糖中葡萄糖、木糖、半乳糖、阿拉伯糖的摩尔比为1.669∶1∶0.225∶1.228,分子量在4.878×105(±0.506%)范围的多糖含量为70.8%,分子量在9.802×104(±3.368%)范围的多糖含量为29.2%。

酶解条件对麦麸低聚木糖含量及其性质的影响

采用酶法水解麦麸水不溶性阿拉伯木聚糖制备低聚木糖,研究酶解温度、酶解时间和加酶量对低聚木糖含量及其糖组成、平均聚合度以及益生元活性的影响。结果表明:随着酶解时间由1h延长至2 h、酶解温度由40℃增加至50℃和加酶量由0.125 g/L增加至1 g/L时,低聚木糖含量增加,平均聚合度减小,木二糖、木三糖和木四糖的相对含量比值减小;不同酶解条件下得到的低聚木糖培养青春双歧杆菌的菌体浓度含量均有不同程度的增加;青春双歧杆菌代谢不同酶解条件下得到的低聚木糖发酵液中代谢产物均含乳酸、乙酸和丙酸,乙酸含量最高,其产酸量变化趋势与菌体浓度和低聚木糖含量相一致,与低聚木糖平均聚合度相反。当酶解温度50℃,酶解时间2 h和加酶量1 g/L时,低聚木糖含量达到最大为101 mg/g,平均聚合度降至最小3.23,木二糖、木三糖和木四糖的相对含量比值也最小,菌体浓度增值倍数达到最大为5.65倍。

注射用益气复脉(冻干)中糖类成分研究

目的建立测定注射用益气复脉(YQFM)中糖类成分的薄层色谱(TLC)法联合高效液相色谱-电喷雾检测器(HPLC-CAD)法。方法采用TLC法对YQFM中的糖类成分进行鉴别;采用HPLC-CAD法对YQFM中糖类成分的含量进行分析,色谱柱采用Shodex Asahipak NH2P-50柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为水(A)-乙腈(B),梯度洗脱,10~35 min时10%A→40%A。结果TLC法测定结果显示,YQFM主要由果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖4种糖组成。HPLC-CAD法经系统方法学考察,线性关系良好,果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖的平均加样回收率分别为106.45%,100.00%,98.08%,99.57%,RSD分别为2.24%,4.50%,4.25%,4.41%(n=6);4种糖的平均质量比为3.4∶1.0∶1.1∶0.7,4种糖总量为16.05%~17.68%。结论该方法可用于YQFM中的糖类成分分析,简便准确,重复性好,专属性强,可为YQFM的质量标准提高提供参考。