柚皮苷改善侧脑室灌注HIV-1糖蛋白120(gp120)所致的大鼠学习和记忆障碍

目的研究柚皮苷对配体门控离子通道7嘌呤能P2X受体(P2X7)介导的1型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)包膜糖蛋白120(gp120)所致大鼠认知障碍的保护作用。方法水迷宫实验观察柚皮苷对侧脑室灌注gp120拟痴呆大鼠认知功能障碍的影响,反转录PCR检测海马组织P2X7受体mRNA的水平,Western blot法检测海马组织P2X7受体蛋白的水平。结果 Morris水迷宫可见柚皮苷治疗组大鼠的逃避潜伏期和寻找目标错误次数与gp120模型组相比缩短。Western blot法和PCR检测结果显示,柚皮苷治疗组P2X7受体蛋白和mRNA的表达与模型组相比有所下降。结论柚皮苷具有改善侧脑室灌注gp120所致大鼠学习记忆障碍的作用,其机制可能与对抗P2X7受体表达上调有关。

经HIV包膜蛋白gp120刺激的T细胞外泌体促进巨噬细胞M2极化

目的:本研究旨在探讨经HIV膜蛋白gp120处理后人T淋巴细胞系(H9)外泌体对巨噬细胞极化的影响。方法:采用CCK8试剂盒检测gp120处理后人T淋巴细胞H9活力;采用ELISA法检测H9细胞上清液中炎症因子水平;通过电镜和Western blot实验鉴定外泌体特征;PHK67染色观察外泌体进入巨噬细胞情况;最后通过ELISA和免疫荧光检测巨噬细胞极化标记物,分析gp120处理后T细胞外泌体对巨噬细胞极化的影响。结果:HIV gp120蛋白抑制人T淋巴细胞H9增殖并促进炎症因子释放。成功提取人T淋巴细胞H9外泌体,电镜下为中间凹陷的膜结构,高表达标记蛋白CD9、CD63、CD81。PHK67染色结果显示H9细胞外泌体可进入巨噬细胞。经gp120处理的H9细胞外泌体可促进巨噬细胞向M2型极化。结论:HIV膜蛋白gp120处理人T淋巴细胞H9分泌的外泌体能够促进巨噬细胞M2极化,可能是gp120在免疫调节中的新机制。

HIV-1表面糖蛋白gp120 DNA疫苗质粒的构建与表达

目的 构建含HIV-1表面糖蛋白基因的真核表达质粒,并在Hela细胞内表达。方法 在核酸疫苗载体质粒 pVAX1中插入gp120基因,构建真核表达质粒pVAXGP。在体外用脂质体法将重组质粒转染Hela细胞,并用间接免疫荧光试验、免疫印迹试验和Dot-ELISA对表达产物进行检测。结果 间接免疫荧光试验结果显示,转染重组质粒的细胞表面有绿色荧光。免疫印迹试验和Dot-ELISA结果均显示,重组质粒转染细胞的裂解物中存在表达的gp120蛋白。结论 已成功地构建了真核表达质粒,且表达的蛋白具有良好的反应原性和特异性。

HIV-1糖蛋白gp120激发人小胶质细胞钙内流效应和ERK磷酸化

目的:探讨HIV-1糖蛋白gp120对人小胶质细胞钙离子内流和ERK磷酸化的作用及其机制。方法:用钙离子探针Fluo-4标记粘附在盖玻片上的人小胶质细胞,运用共聚焦显微镜以荧光强度为指标实时观察各种条件下的细胞内钙离子水平的变化;用gp120处理并用anti-gp120-FITC进行染色,运用共聚焦显微镜术和流式细胞术分析人小胶质细胞与gp120结合情况;用抗磷酸化ERK抗体免疫荧光方法进行染色,运用共聚焦显微镜术和流式细胞术进行ERK磷酸化水平分析。结果:共聚焦显微镜检测结果显示HIV-1糖蛋白gp120能够激发人小胶质细胞钙离子内流效应;共聚焦显微镜和流式细胞仪分析结果显示gp120可以与人小胶质细胞结合;共聚焦显微镜和流式细胞仪分析结果显示gp120刺激可增加人小胶质细胞ERK磷酸化。结论:HIV-1糖蛋白gp120能在人小胶质细胞激发钙离子内流并且增加胞内ERK的磷酸化,从而导致了小胶质细胞的活化,这一效应提示,在HIV-1相关性脑炎中,gp120可能参与了某些发病机制。

人免疫缺陷病毒Ⅰ型外膜糖蛋白gp^(120)和gp^(160)在重组痘苗病毒中的表达及其抗原性研究

人免疫缺陷病毒Ⅰ型（HIV-1）是严重威胁人类健康的病原体，其主要抗原是病毒外膜糖蛋白gp160（gp120＋gp41）。本文报道运用遗传工程技术，在噬菌体T7启动子或痘苗病毒启动子P7．5控制下，在重组痘苗病毒系统中构建和表达HIV－1gp120和gp160。进一步研究表明，在此系统中表达的重组HIV－1gp120和gp160以糖蛋白形式存在，保留着病毒在自然状况下的抗原表位构象，可同病毒特异性中和单克隆抗体反应，可作为重要的候选重组疫苗蛋白。

艾滋病相关痴呆机制研究:鼠海马脑片CA1区突触传递及可塑性与HIV-1包膜糖蛋白gp120的关系(英文)

背景:目前对艾滋病相关性痴呆(HIV-1associateddementia,HAD)仍没有特效的治疗药物,主要因为对HIV-1感染引起的神经损伤和坏死的机制,仍没有完全阐明。目的:探讨人类免疫缺陷病毒I型(humanimmunodeficiencyvirusItype,HIV-1)包膜糖蛋白gp120对鼠海马脑片CA1区的突触传递及可塑性的影响,以期阐明HAD的形成机制。设计:配对设计。单位:暨南大学医学院的病理生理教研室。材料:实验于2003-01/10在暨南大学医学院病理生理教研室犤国家中医药管理局三级重点实验室(登记号:TCM-03-131)犦完成。实验用2～5周龄雄性SD大鼠。干预:应用离体脑片灌流及记录技术。主要观察指标:记录大鼠海马CA1区的兴奋性突触后电位(excitatorypostsynapticpotential,EPSP),研究了gp120对高频电刺激Schaffer侧支引起的鼠长时程增强效应(long-termpotentiation,LTP)的影响。结果:发现gp120对大鼠海马CA1区LTP产生抑制作用犤LTP的平均幅度由正常的(216.1±14.0)%降到(90.8±6.0)%,n=12,P<0.01犦,对其基础EPSP没有影响。PKA/PKC蛋白激酶抑制剂H7可以反转这种抑制效应犤LTP的平均幅度为(198.8±16.2)%,n=8,P<0.01犦。结论:gp120可能是通过抑制海马CA1区的LTP而参与HAD的形成。

HIV-1包膜糖蛋白gp120对大鼠海马脑片电生理特性的影响

目的探讨人类免疫缺陷病毒I型(HIV-1)的包膜糖蛋白gp120对大鼠海马脑片CA1区神经元电生理特性及突触传递的影响。方法用盲法全细胞记录技术,观察gp120对大鼠海马脑片CA1区神经元电生理特性及对高频电刺激Schaffer侧支引起的鼠海马长时程增强效应(LTP)的影响。结果①在电流钳,gp120可使终末去极化电流激发快速动作电位的数目增加;②在电压钳,gp120对大鼠海马CA1区神经元的全细胞电流无明显作用;③将gp120(100 pmol/L)与海马脑片共孵育1h后,在钳制电压为-60 mV时,发现HFS后海马CA1区的兴奋性突触后电流(EPSC)显著减小,LTP的强度减少到(108.5±8.0)%(n=11,P<0.01)。结论gp120可使海马神经元的兴奋性增加,并可能通过抑制海马CA1区的LTP诱发参与艾滋病痴呆(HIV-1 associated dementia,HAD)的病理生理过程。

HIV-1B亚型包膜糖蛋白gp120基因真核表达载体的构建及其在HepG2细胞中的表达

目的克隆人类免疫缺陷病毒Ⅰ型B亚型包膜糖蛋白gp120基因,构建真核表达载体,并在真核细胞中表达,进一步为制备自行设计的以λ噬菌体作为载体的HIV核酸疫苗奠定基础。方法以克隆好的HIV-1B亚型U26942全基因质粒DNA作为模板,根据Genbank中gp120基因的核苷酸序列设计引物,并在引物的5'端分别引入BamHⅠ及XhoⅠ酶切位点,特异性地扩增gp120基因。TA克隆后经双酶切、测序等鉴定重组质粒,再经双酶切、连接构建含gp120编码基因的真核表达载体,并进行酶切鉴定分析pcDNA3.1(+)/gp120。在脂质体介导下转染HepG2细胞,经G418压力筛选建立稳定转染gp120基因的细胞系,用RT-PCR及Westernboltting检测其在HepG2细胞中的表达。结果重组质粒经BamHⅠ、XhoⅠ双酶切成5.4kb与1.44kb的片断,表明表达载体pcDNA3.1(+)中插入了gp120基因片断,测序结果表明编码框正确。RT-PCR及Westernblotting证实稳定转染gp120基因的HepG2细胞系中有该基因的表达。结论成功构建了HIV-1B亚型包膜糖蛋白gp120基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)/gp120,并在HepG2细胞中获得稳定表达。

肝素与HIV-1膜表面蛋白gp120相互作用的预测和模拟

用分子模拟软件研究肝素与 HIV-1膜表面蛋白 gp1 2 0的相互作用 .将肝素中的单糖、二糖和三糖片段作为探针对 gp1 2 0蛋白进行搜索 ,统计分析确定肝素结合区域 .用肝素六糖片段和结合区域进行反应分子对接 ,获得两种结合模式 .最终建立的模型能够很好地解释肝素体外抑制 HIV-1的现象 。

铁死亡在HIV-1 gp120 V3环致小胶质细胞炎症中的作用机制研究

目的:探讨人类免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)gp120 V3环致CHME-5小胶质细胞炎症反应与铁死亡的关系,并观察p53和铁死亡对该炎症反应的影响及可能机制。方法:体外培养人源CHME-5小胶质细胞,设立空白组、随机肽段组、HIV-1 gp120 V3环组、HIV-1 gp120 V3环+ferrostatin-1(Fer-1;铁死亡抑制剂)组和HIV-1 gp120 V3环+pifithrin-α(p53抑制剂)组。分别采用HIV-1 gp120 V3环(终浓度2 mg/L)和随机肽段(终浓度2 mg/L)处理CHME-5细胞24 h;Fer-1(终浓度20μmol/L)和pifithrin-α(终浓度10μmol/L)预处理CHME-5细胞2 h,HIV-1 gp120 V3环(终浓度2 mg/L)再处理24 h。ELISA法检测各组细胞上清液中炎症因子水平;Western blot法检测铁死亡相关蛋白[转铁蛋白受体1(transferrin receptor-1,TFR-1)、溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)和谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)]及p53的蛋白表达;酶标仪法检测细胞内亚铁离子(Fe2+)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性。结果:(1)ELISA结果显示,与对照组相比,gp120 V3环组炎症因子白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平显著升高(P<0.01);与gp120 V3环组相比,gp120 V3环+Fer-1组和gp120 V3环+pifithrin-α组炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α水平显著下降(P<0.01);(2)Western blot结果显示,与对照组相比,gp120 V3环组蛋白p53显著上调(P<0.01),铁死亡相关蛋白TFR-1显著上调(P<0.01),SLC7A11和GPX4显著下调(P<0.01);与gp120 V3环组相比,gp120 V3环+pifithrin-α组铁死亡相关蛋白TFR-1显著下降(P<0.05),SLC7A11和GPX4蛋白显著升高(P<0.05);(3)与对照组相比,gp120 V3环组Fe2+含量显著增加(P<0.01),GSH-Px活性显著降低(P<0.01);与gp120 V3环组相比,gp120 V3环+Fer-1组和gp120 V3环+pifithrin-α组Fe2+含量显著下降(P<0.05),GSH-Px活性显著升高(P<0.01)。结论:HIV-1 gp120 V3环致CHME-5小胶质细胞炎症中存在铁死亡,且抑制铁死亡能减轻炎症。HIV-1 gp120 V3环致CHME-5小胶质细胞炎症与p53蛋白调控铁死亡有关,抑制p53可减轻铁死亡和炎症反应。

N-甲基-D-天冬氨酸受体阻断剂缓解HIV-1/gp120诱导大鼠学习记忆障碍的作用及机制

目的研究阻断N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartic acid receptor,NMDAR)对gp120诱导大鼠学习记忆障碍的缓解作用及机制。方法(1)32只SD大鼠随机分为空白对照组、假手术组、gp120组、gp120+Memantine组。除空白对照组外,其余组均双侧海马注射,建立大鼠学习记忆障碍模型。Memantine于造模前3天腹腔注射给药。注射后第3~8天进行水迷宫实验,第10天分离各组大鼠海马,qRT-PCR检测TNF-α、IL-10、CXCL-12表达。(2)以gp120和NMDA诱导建立细胞损伤模型;将细胞分为空白对照组、gp120组、gp120+Memantine组、NMDA组、NMDA+Memantine组。Memantine需预先处理40 min。MTT、LDH法检测细胞存活率和LDH含量,ELISA法检测细胞IL-1β、TNF-α含量,AO/EB染色检测细胞凋亡,qRT-PCR检测IRE1α、JNK、GRP78和CHOP表达。结果(1)与gp120组相比,gp120+Memantine组逃避潜伏期及游泳距离明显减少,目标象限时间百分比和平台穿越次数增加,TNF-α、CXCL-12的mRNA表达量减少。(2)与gp120组和NMDA组相比,gp120+Memantine组和NMDA+Memantine组细胞活力上升,细胞状态良好,IL-1β、TNF-α、IRE1α、JNK、GRP78和CHOP的表达量下降。结论NMDAR参与了gp120诱导的HAND,阻断NMDAR可以显著改善gp120诱导的大鼠学习记忆障碍和神经细胞损伤,其机制与抑制神经炎症、凋亡反应和内质网应激相关IRE1α-JNK-CHOP通路有关。

表达中国流行株HIV-1 gp120外膜蛋白靶细胞模型的建立

利用pDispaly真核表达载体构建了用于表达中国流行株HIV-1gp120的真核表达质粒pD-120,通过脂质体转染法将其导入人宫颈癌细胞(HeLa),经G418反复加压筛选,直到细胞不再死亡为止,8代后获得稳定表达中国流行株HIV-1gp120蛋白的靶细胞复制模型HeLa-gp,SDS-PAGE,蛋白印迹与间接免疫荧光分析表明,重组蛋白得到很好表达,并具有良好生物活性,为抗AIDS/HIV治疗用基因工程制剂或靶向药物的活性检测奠定了坚实基础。

HIV-1膜蛋白基因gp120和gp41的合成及在毕赤酵母中的表达

目的合成适合酵母表达的HIV-1膜蛋白gp120和gp41基因,在毕赤酵母中高效表达分泌型重组HIV-1 gp120和gp41抗原。方法选用酵母偏爱的同义密码子替换野生型gp120和gp41基因的酵母稀有密码子,采取基因搭桥法及聚合酶链反应(PCR),合成HIV-1 gp120和gp41基因,构建分泌型重组质粒并转化毕赤酵母菌株GS115,经甲醇诱导表达HIV-1外膜糖蛋白gp120和gp41。结果DNA测序证实合成的HIV-1 gp120和gp41基因正确克隆到表达载体中;聚丙烯酰胺凝胶电泳及免疫印迹显示gp120和gp41在毕赤酵母中高效分泌表达。结论gp120和gp41合成基因在毕赤酵母表达系统高效分泌表达。

人类免疫缺陷病毒蛋白HIV gp120对培养的大鼠背根神经节神经元的神经毒性作用(英文)

为探讨人类免疫缺陷病毒(HIV)gp120对体外培养的大鼠背根神经节(DRG)神经元的神经毒性作用,我们建立了胎鼠DRG分散培养和器官型培养的模型。以上分散培养和器官型培养的DRG,经不同浓度(250pmol/L,1nmol/L)的HIVgp120处理(2次/7d)。分散培养的DRG细胞行微管相关蛋白2(MAP2)免疫荧光染色,然后利用荧光显微镜观察神经元胞体和突起的变化情况。器官型培养的DRG在电子显微镜下观察其超微结构的改变。经HIVgp120处理的神经元突起的数目和长度的变化,HIVgp120处理组与对照组相比有显著性意义(P<0.001),而神经元的直径则没有变化(P>0.05)。应用以上不同浓度的HIVgp120处理后,神经元的超微结构出现明显改变,线粒体嵴减少或消失,微管和神经丝之间出现了大量的高电子密度颗粒。以上结果表明,HIVgp120对培养的DRG神经元具有直接的神经毒性作用,其中以线粒体的改变较为敏感。

朝鲜淫羊藿多糖对HIV-1包膜蛋白质gp120的免疫佐剂活性

目的评价淫羊藿总多糖(EKP)中组分B(EKP-B)和均一多糖B-1(EKP-B-1)对人类免疫缺陷病毒HIV-1 gp120蛋白的免疫佐剂活性。方法 EKP-B(150μg)、EKP-B-1(150μg)、铝佐剂(200μg)和生理盐水分别与HIV-1gp120(20μg)配伍肌内注射免疫小鼠1次。免疫后2和4周收集小鼠血清,ELISA法检测小鼠血清特异性抗体滴度。4周后处死小鼠,MTT法测定小鼠脾T淋巴细胞和B淋巴细胞增殖反应,ELISA法检测免疫小鼠血清干扰素γ(IFN-γ)和白介素4(IL-4)含量,流式细胞术测定脾细胞中CD4+/CD8+和CD3+/CD19+T细胞亚群百分比。结果免疫后2周,与HIV-1gp120单独免疫组相比,EKP-B-1与HIV-1gp120配伍可提高小鼠血清特异性抗体滴度(P<0.05),EKP-B无明显作用。免疫后4周,EKP-B和EKP-B-1与HIV-1gp120配伍均能明显提高小鼠血清特异性抗体滴度(P<0.05),还能明显促进B细胞增殖反应和IFN-γ的分泌(P<0.01),对小鼠脾T淋巴细胞增殖以及胸腺IL-4的分泌无明显影响,同时EKP-B还能提高脾细胞CD3+/CD19+细胞百分率(P<0.01),EKP-B-1提高脾细胞CD4+/CD8+细胞百分率(P<0.05)。结论 EKP-B和EKP-B-1(每只鼠150μg)对HIV-1gp120抗原显示良好的佐剂活性,能明显提高HIV-1gp120免疫小鼠的体液免疫和细胞免疫功能,提示EKP-B和EKP-B-1有可能作为艾滋病疫苗的佐剂。

IFN-γ与HIV-1gp120融合蛋白的表达及其免疫调节作用

目的:研究gamm a干扰素(IFN-γ)对人类免疫缺陷病毒(H IV-1)gp120蛋白免疫小鼠后效果的调节作用。方法:利用分子生物学技术,构建表达中国流行株H IV-1gp 120 N端片段基因的原核质粒p et44b-gp 120,及共表达H IV-1gp 120 N端片段基因与IFN-γ基因的原核质粒p et44b-gp 120/IFN-γ,在E.coli BL 21(DE 3)细胞中进行低温诱导蛋白表达,然后经纯化后免疫BALB/c小鼠。实验设皮下注射gp120/IFN-γ组、gp120组和PBS三组,以检测H IV-1gp120诱导的T细胞增殖能力,CTL杀伤作用以及Th1型细胞因子(IL-2,IFN-γ)和Th2型细胞因子(IL-4,IL-10)的表达情况。结果:通过PAGE和W estern b lot检测,证实上述两种蛋白在DE 3细胞中得到表达。免疫学实验表明,针对H IV-1 gp120的特异性T淋巴细胞增殖作用、特异性CTL杀伤作用,以及Th1型细胞因子IL-2和IFN-γ表达在三组之间均有显著性差异(P<0.05),gp120/IFN-γ组高于gp120组,gp120组高于PBS组(P<0.05)。反映体液免疫反应的Th2型细胞因子IL-4和IL-10的表达在三组之间没有显著性差异(P>0.05)。结论:协同应用IFN-γ基因可明显加强H IV-1gp 120基因的细胞免疫反应。

抗HIV-1 gp120单链抗体导向SEAD227A融合蛋白原核温控型表达载体构建及表达

人工合成了能广泛识别HIV—1 gp120的单链抗体(SeFv120)基因和金黄色葡萄菌外毒素A(SEA)基因，将SEA基因第227位编码Asp(D)的密码子GAT转换成编码Ala(A)的密码子GCT，并对两基因进行密码子优化。构建原核温控型表达质粒pBV—120和pBV—SL120，经条件优化，pBV—120和pBV—SL120分别在E．coli BL21(DE3)plys中44℃诱导6h、42℃诱导7h获得最佳表达，表达量分别占菌体总蛋白的27．673％和32．519％。目的蛋白经包涵体洗脱、分子筛层析折叠复性后可与HIV—1抗原条发生良好的结合反应。

HIV-1膜蛋白gp120V3环的神经毒性研究

目的体外观察人类免疫缺陷病毒-1(human immunodeficiency virus-1,HIV-1)膜蛋白gp120 V3环的神经毒性。方法通过小鼠大脑皮质原代神经细胞培养条件下TUNEL检测和培养上清乳酸脱氢酶释放试验,结合抗微管蛋白-2(microtubule associated protein-2,MAP-2)免疫荧光试验,观察人重组gp120蛋白神经毒性,并通过蛋白印迹法初步探讨其与凋亡调控蛋白bax与bcl-2的关系。结果重组人gp120 V3环多肽可诱导神经元凋亡和抑制神经突起形成,并呈浓度依赖性。gp120 V3环诱导神经细胞凋亡与抑制bcl-2表达有关。结论 HIV-1膜蛋白gp120 V3环具有神经毒性。

基于网络药理学探讨Win55,212-2对GP120诱导大鼠艾滋性认知功能障碍的影响及其机制

目的:基于网络药理学探讨Win55,212-2对艾滋病病毒-1(HIV-1)包膜蛋白GP120诱导大鼠艾滋性认知功能障碍(HAND)的影响及其机制。方法:通过GeneCards、OMIM、DisGeNET和NDCI数据库获取HAND相关靶点,GeneCards、Pharm Mapper、SwissTargetPrediction数据库获取Win55,212-2相关靶点,再通过Venny 2.1.0在线工具映射获得HAND与Win55,212-2的交集靶点。采用String 11.5数据库和Cytoscape 3.7.2软件构建交集靶点的蛋白相互作用(PPI)网络并筛选出核心靶点;通过David 6.8数据库对交集靶点进行GO和KEGG通路富集分析,并通过微生物信息学在线工具对富集结果进行可视化。最后采用Cytoscape 3.7.2软件构建“药物—靶点—疾病—通路”网络。通过脑部立体定位注射技术建立GP120诱导的HAND大鼠模型,术后第3天进行新物体识别测试,检测各组大鼠的认知功能。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组大鼠海马组织中P38 MAPK通路和下游炎症因子TNF-α、CXCL-12 mRNA表达水平。结果:Win55,212-2与HAND的共同作用靶点81个,GO和KEGG分析结果显示Win55,212-2治疗HAND的核心靶点包括AKT1、TNF、ALB、MAPK3等;主要通路涉及cAMP信号通路、AGE-RAGE信号通路、TNF信号通路、MAPK信号通路等。新物体识别测试结果显示,Win55,212-2提高了GP120诱导HAND大鼠的辨别指数,RT-qPCR结果显示Win55,212-2降低了P38、TNF-α、CXCL-12的mRNA表达水平(均P<0.01)。结论:Win55,212-2通过下调P38 MAPK通路并抑制下游炎症因子TNF-α、CXCL-12的表达而起到神经保护作用,这可能是其改善GP120诱导大鼠HAND的机制。

抗人免疫缺陷病毒I型(HIV-1)外膜蛋白gp120单链抗体基因的构建及测序鉴定

目的 构建抗HIV 1gp120单链抗体基因,为进一步用于HIV 1感染的诊断和治疗奠定基础。方法 利用 RT PCR法,从抗HIV 1gp120单克隆抗体杂交瘤细胞扩增得到抗体轻链和重链的可变区基因,经重叠延伸反应, 在体外随机合成单链抗体基因(ScFv),并克隆到pGEM Easy T载体中,经测序及Blast同源性分析。结果 该 ScFV基因全长为666bp,为VH Linker VL结构,VH基因为396bp,编码132个氨基酸;Linker为(Gly4Ser)3短 肽;VL基因为270bp,编码90个氨基酸。VH基因与小鼠IgG2a重链可变区的同源性达95%,VL基因与小鼠免 疫球蛋白κ轻链可变区的同源性达98%。结论 成功构建了抗HIV 1gp120单链抗体基因。