人类疱疹病毒7型糖蛋白(gL)的研究

克隆人类疱疹病毒7型(HHV-7)糖蛋白gL,分别连接入酵母双杂交载体pAS2-1、pACT2。通过双杂交技术,分析gL基因表达蛋白与gH、CD4的相互作用。发现含gL、gH基因的重组酵母菌Y190具有β-半乳糖苷酶活性,而含gL、CD4基因的重组Y190未检测到相应活性。结果表明,gL表达蛋白在酵母双杂交系统中能够与另一HHV-7糖蛋白gH结合,而与HHV-7已知受体CD4无相互作用。

自由基损伤和β2糖蛋白1在自身免疫疾病中的作用

目的 研究被自由基氧化修饰的 β2糖蛋白 1(β2 GP1)在自身免疫疾病中自身抗体产生中的作用。方法 采用高氯酸沉淀 ,两步肝素连接的交联琼脂糖凝胶层析结合葡聚糖凝胶 G- 10 0分离纯化大鼠 β2 GP1;应用自由基氧化修饰大鼠 β2 GP1;氧化修饰的 β2 GP1(oxβ2 GP1)、β2 GP1分别加与不加心磷脂 (CL)及 CL 免疫大鼠 ,EL ISA方法检测免疫大鼠血清中抗 β2 GP1抗体和抗心磷脂抗体 (ACA)。结果 两步亲和层析结合凝胶过滤层析有效地分离纯化了大鼠 β2 GP1,蛋白纯度达 90 .78% ;通过羰基含量测定证实了自由基对 β2 GP1的氧化修饰 ;oxβ2 GP1加 CL、β2 GP1加 CL、oxβ2 GP1免疫组与空白对照组、实验对照组比较 ACA水平有显著升高 (P<0 .0 0 1) ,oxβ2 GP1加 CL 免疫组与 β2 GP1加 CL 免疫组比较 ACA水平差异有显著性 (P<0 .0 5 ) ;oxβ2 GP1免疫组与oxβ2 GP1加 CL 免疫组比较 ACA水平差异不显著 (P>0 .0 5 ) ;oxβ2 GP1加 CL、oxβ2 GP1免疫组与对照组比较 ,抗oxβ2 GP1抗体水平有显著升高 (P<0 .0 5 )。结论 两步肝素连接的交联琼脂糖凝胶层析结合葡聚糖凝胶 G- 10 0能有效地分离纯化 β2 GP1;oxβ2 GP1诱导了 ACA和抗 oxβ2 GP1抗体的产生 ;β2

水痘-带状疱疹病毒糖蛋白H/L重组真核表达质粒的构建及其免疫效果评价

目的构建水痘-带状疱疹病毒(varicella zoster virus,VZV)糖蛋白H(glycoprotein H,gH)和糖蛋白L(glyco-p rotein L,gL)重组真核表达质粒,用质粒免疫小鼠,评价其免疫效果。方法以提取的VZV基因组DNA为模板,PCR扩增gH胞外区基因(g H795)和gL全长基因,与pCI-neo载体连接,构建重组真核表达质粒pCI-neo-VZV-gH795-His和p CI-neo-VZV-gL-His;将质粒单独或与CpG1826佐剂共同免疫小鼠,免疫周期为0、3、5周,采血周期为3、5、7周,检测血清抗体效价、中和效价和膜免疫荧光抗体(fluorescent antibody to membrane antigen,FAMA)效价。结果重组真核表达质粒pCI-neo-VZV-g H795-His和pCI-neo-VZV-gL-His经双酶切(XbaⅠ/EcoRⅠ)和测序证明构建正确。单质粒免疫小鼠,血清抗体效价较低,双质粒免疫小鼠,血清抗体效价微弱升高,双质粒与佐剂共同免疫小鼠,血清抗体效价达1∶6000以上,CpG1826对于抗体产生具有较明显的促进作用。仅双质粒与佐剂共免疫组小鼠血清显示出中和活性,免疫后7周,血清中和效价达1∶62。双质粒与佐剂共免疫组免疫后7周小鼠血清FAMA效价为1∶8~1∶16,其余各组均为阴性。结论gH(或gHgL复合物)具有一定的免疫原性,本实验为其进一步的免疫原性研究奠定了基础。