糖蛋白M6B对RAW264.7巨噬细胞炎症因子表达的影响

目的研究糖蛋白M6B(glycoprotein M6B,GPM6B)对巨噬细胞炎症因子IL-1β、TNF-α、IFN-γ和IL-6的影响。方法(1)Western blot和qPCR检测RAW264.7经典激活的巨噬细胞(classically activated macrophage,M1)和替代激活的巨噬细胞(alternatively activated macrophage,M2)中GPM6B表达量变化。(2)分别用对照组(shScramble)和GPM6B干涉组(sh-GPM6B1和sh-GPM6B2)的慢病毒感染RAW264.7巨噬细胞系,荧光显微镜下观察病毒的感染效率。Western blot和qPCR检测GPM6B的干涉效率。(3)qPCR检测对照组和GPM6B干涉组促炎因子IL-1β、TNF-α和IFN-γ的mRNA表达水平,ELISA法检测上清中IL-1β和IL-6的含量。(4)Western blot检测干涉GPM6B后炎症相关分子p65和Iκα的磷酸化水平变化。结果(1)相比于对照组,RAW264.7巨噬细胞M1型中GPM6B蛋白和mRNA水平均显著升高(P<0.05),而M2型中GPM6B蛋白和mRNA水平均显著降低(P<0.05)。(2)与sh-Scramble组相比,sh-GPM6B1组和sh-GPM6B2组GPM6B蛋白和m RNA水平均显著降低(P<0.05)。(3)干涉GPM6B后促炎因子IL-1β、TNF-α和IFN-γ的m RNA表达水平和上清中IL-1β和IL-6均显著降低(P<0.05)。(4)干涉GPM6B后炎症相关分子p65和Iκα的磷酸化水平降低。结论干涉GPM6B可抑制RAW264.7巨噬细胞促炎因子的表达。

猪繁殖与呼吸综合征病毒M/GP5糖蛋白复合物可通过唾液酸依赖途径与唾液酸黏附素受体结合

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是世界范围内威胁猪健康的最主要的因素,被认为是当今养猪业中最重要的病毒病。在过去的几年中,对病毒侵入宿主细胞的研究使许多病毒受体及病毒进入调控因子被鉴定出来。然而,与这些大分子相对应的病毒组分仍不清楚,这使得合理开发新型疫苗变得很困难。该研究的主要目的是鉴定巨噬细胞上的关键性PRRSV受体—唾液酸黏附素相对应的病毒组分。为此,作者构建了可溶性的唾液酸黏附素并对其进行验证。在唾液酸依赖途径中,可溶性的唾液酸黏附素可以与PRRSV结合,并阻断PRRSV对巨噬细胞的感染,因此可以确定唾液酸黏附素是巨噬细胞上PRRSV所必需的受体。尽管唾液酸也存在于膜糖蛋白GP3、GP4和GP5中,但是只有PRRSV的M/GP5糖蛋白复合物被证实为唾液酸黏附素的配基。试验结果发现,两者之间的相互作用依赖于唾液酸黏附素结合唾液酸的能力及GP5上的唾液酸。这些研究结果不仅有利于更好的了解PRRSV的生物学特性,而且该研究结果及研究方法是开发PRRSV新型疫苗的关键。

猪繁殖与呼吸综合征病毒M/GP5糖蛋白复合物以唾液酸依赖方式与Sn受体结合

猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)是世界范围内威胁猪健康的主要病原之一,其所引起的病毒病也是当今养猪业最重要的猪病。在过去研究多集中在病毒侵入宿主细胞必须识别的许多病毒受体和侵入介质,但病毒作用物的分子机制仍不清楚,以致难以研制出有效的疫苗。本研究的主要目的是鉴定sialoadhesin(Sn)受体作用的主要病毒作用物,Sn受体是巨噬细胞上PRRSV的主要受体。为此本试验构建了可溶性Sn,其能通过唾液酸依赖途径与PRRSV结合,从而中和巨噬细胞感染的PRRSV,因此Sn是巨噬细胞上重要的PRRSV受体。虽然唾液酸作用于GP3、GP4和GP5整个糖蛋白,但只有PRRSVM/GP5糖蛋白复合物才能作为Sn的配体。试验证明了Sn具有唾液酸结合力及GP5存在唾液酸,该研究结果不仅有助于更好的了解PRRSV的生物特性,更能为研究新的PRRSV疫苗提供了主要思路。

敲低GPM6B促进白色脂肪细胞向棕色脂肪表型转变

目的研究糖蛋白M6B(Glycoprotein M6B,GPM6B)在白色脂肪细胞向棕色脂肪表型转变中的作用。方法 (1) Western blot和qPCR检测小鼠白色脂肪组织(white adipose tissue, WAT)和棕色脂肪组织(brown adipose tissue, BAT)中GPM6B的表达。(2)分别用对照组(shScramble)和敲低GPM6B组(shGPM6B1和shGPM6B2)的慢病毒液感染C3H10T1/2小鼠间充质细胞系,荧光显微镜下观察病毒的转染效率。Western blot和qPCR检测GPM6B的干涉效率。(3)将shScramble, shGPM6B1和shGPM6B2的稳转细胞系分别给予白色脂肪诱导分化液8 d,油红O染色观察脂滴形态,Western blot检测棕色脂肪标记基因解偶联蛋白(uncoupling protein, UCP1)的表达,qPCR检测热生成相关基因的mRNA表达。结果 (1)与WAT比,BAT中GPM6B的表达在蛋白和mRNA水平均显著降低(P<0.05)。(2)与shScramble组相比,shGPM6B1组和shGPM6B2组GPM6B的干涉效率在蛋白和mRNA水平均显著降低(P<0.05)。(3)敲低GPM6B后,白色脂肪细胞的脂滴变小,UCP1的表达和热生成相关基因的mRNA均显著升高(P<0.05)。结论敲低GPM6B促进白色脂肪细胞向棕色脂肪表型转变。

汉坦病毒H8205株MIL-2融合基因的构建

目的研究汉坦病毒新型裸DNA疫苗,构建融合基因pcDNA3.1/HisBIL2M(G1+G2)。方法采用PCR扩增汉坦病毒H8205株G1和G2基因片段,将回收的G1和G2片段经双酶切插入到pcDNA3.1/HisBIL2,构建成新的质粒pcDNA3.1/HisBIL2M。结果融合基因转录一分子量为100kD左右的蛋白,对照组则未见电泳条带出现,回收的片段与预期的相符。结论成功构建pcDNA3.1/HisBIL2M融合基因。

抗β2糖蛋白Ⅰ抗体IgA/G/M、血小板聚集率、血浆纤维蛋白原及D-二聚体的变化对妊娠期静脉血栓的指导作用

目的抗β2糖蛋白Ⅰ抗体IgA/G/M、血小板聚集率、血浆纤维蛋白原、D-二聚体是妊娠期凝血功能指标,本研究通过测定妊娠期静脉血栓患者以上指标表达水平,为妊娠期静脉血栓的预防、治疗、诊断提供一定的理论依据。方法选择2018年2月—2019年12月河南省直属机关第二门诊部妊娠期静脉血栓患者60例作为研究对象,分为中孕组、晚孕组各30例,选择同期33例健康孕妇作为对照组。测定所有研究对象血中抗β2糖蛋白Ⅰ抗体IgA/G/M、血小板聚集率、血浆纤维蛋白原、D-二聚体水平。结果中孕组和晚孕组的抗β2糖蛋白Ⅰ抗体IgA/G/M、血小板聚集率、血浆纤维蛋白原、D-二聚体水平与对照组比较,均有明显升高(P<0.05),但中孕组和晚孕组两组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。对照组孕妇血浆中抗β2糖蛋白Ⅰ抗体IgA/G/M、血小板聚集率、血浆纤维蛋白原、D-二聚体无明显相关性(P>0.05),抗β2糖蛋白Ⅰ抗体IgA/G/M,血小板聚集率,血浆纤维蛋白原,D-二聚体进入方程,为妊娠期静脉血栓密切相关的危险因素(P<0.05),且D-二聚体最为重要。结论妊娠期静脉血栓患者血浆中抗β2糖蛋白Ⅰ抗体IgA/G/M、血小板聚集率、血浆纤维蛋白原、D-二聚体浓度较对照组孕妇明显升高,提示以上指标与妊娠期静脉血栓形成有密切关系,与疾病的严重程度相关,血管内皮损伤在妊娠期静脉血栓中发挥着重要作用。

结直肠癌组织中GPM6A的表达及其临床意义

目的研究糖蛋白M6A(GPM6A)在结直肠癌(CRC)组织中的表达,探讨GPM6A作为关键因子在CRC循环肿瘤细胞(CTCs)中的潜在价值。方法采用免疫组化法分别检测GPM6A在70例原发性CRC组织及癌旁正常组织的表达水平。利用GEPIA2分析TCGA数据库中GPM6A在CRC不同分期中的表达水平,利用在线数据库ctcRbase获得GPM6A在CRC原发灶、转移灶及CTCs中的表达水平。最后分析GPM6A与CRC细胞上皮-间质转变(EMT)功能状态相关基因的关系。结果GPM6A在CRC中高表达,在癌旁正常组织中低表达或不表达(P<0.001);GPM6A的表达随着肿瘤分期升高而升高(F=2.87,P=0.036)。相较于CRC原发灶和转移灶,GPM6A在CTCs中的表达最高。GPM6A与CRC细胞EMT状态相关基因半乳糖苷酶β1样2(GLB1L2)成负相关(r=-0.13,P<0.05),而与Ⅳ型胶原α2链(COL4A2)、补C1s(C1S)、I型胶原α2链(COL1A2)和钙桥1(CALD1)成正相关(r=0.26、0.43、0.21、0.67,P均<0.05)。结论GPM6A是驱使CRC进展的促癌因子,且GPM6A可能是CRC细胞发生EMT的关键因子,其高水平的表达使GPM6A有可能成为监测CRC复发的生物学标志物。

GPM6A在突触发育及相关神经精神疾病中的研究进展

突触发育、形成和可塑性异常被认为是神经精神疾病神经元功能改变的基础。糖蛋白M6A(glycoprotein M6a, GPM6A)是一种在中枢神经系统神经元上表达的细胞表面跨膜蛋白。该文综述了GPM6A在神经元发育和突触形成中的作用,以及与各种神经精神疾病之间的关系。深入了解GPM6A的分子功能有助于为相关神经精神疾病提供一个新的诊断和治疗靶点。