猪传染性胃肠炎病毒纤突糖蛋白N端基因的克隆

以RT -PCR方法扩增出TGEV纤突糖蛋白 (S)N端基因片段 ,它包含D、C两个抗原位点 ,长 1 2kb ,平端连接方法将其与质粒PUC18的ECORⅠ多克隆位点相连 ,电转化DH5α 。

小整联蛋白结合配体N端联结糖蛋白家族在硬组织发育中的调控作用

硬组织发育是生物机体发育过程中的重要组成部分,小整联蛋白结合配体N端联结糖蛋白家族在硬组织发育过程中发挥重要的调控作用,如:促进干细胞的成牙本质分化或成骨分化,调控成牙本质细胞或成骨细胞的基因表达等。编码小整联蛋白结合配体N端联结糖蛋白家族的基因发生突变可引起硬组织矿化异常,导致如低血磷性佝偻病、牙本质发育不全等多种疾病。近年来,学者们对该蛋白家族在硬组织发育中的调控作用开展了深入研究,揭示了该蛋白家族的主要分子调控机制,加深了对其作用及机制的认知。因此,本文对小整联蛋白结合配体N端联结糖蛋白家族在生物硬组织发育中的调控作用及其机制的研究进展进行总结和综述。

水痘-带状疱疹病毒糖蛋白N的单克隆抗体制备及初步研究

水痘-带状疱疹病毒(VZV)是水痘和带状疱疹的共同致病原,其糖蛋白N(gN)在子代病毒的组装、成熟和出胞过程中发挥重要作用。但是目前关于VZV gN的研究还很少,其蛋白性质和具体分子功能仍不清楚。本研究目的是制备抗VZV gN的单克隆抗体,对该蛋白在VZV感染细胞和人皮肤组织内的表达和分布情况进行初步探究。本研究选择抗原性和亲水性较强的gN区段基因,构建rGST-gN融合蛋白的原核表达质粒,将鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌后用IPTG诱导融合蛋白表达,经亲和层析柱纯化rGST-gN融合蛋白后使用PSP酶切除GST标签,将获得的重组蛋白rgN免疫BALB/c小鼠,使用杂交瘤技术制备其单克隆抗体;共获得24株稳定分泌抗VZV gN单克隆抗体的杂交瘤细胞株,选取其中一株性能最优的12E10进行单克隆抗体生产纯化和抗体鉴定;单克隆抗体12E10为IgG2a亚型,其ELISA效价达到1∶10 000;通过Western blot、免疫荧光及免疫组织化学染色方法鉴定,该抗体能够特异性识别细胞和组织中表达的VZV gN;本研究应用该抗体首次确定了gN在VZV感染细胞中的反式高尔基体定位,并且确定了gN在VZV感染人皮肤组织中的表达。以上工作为今后深入研究VZV gN功能奠定了基础。

狂犬病毒CVS-N2c毒株糖蛋白基因的克隆和重组腺病毒的构建

克隆了狂犬病毒CVS N2c毒株糖蛋白 (GP)基因 ,并进行了GP全基因序列测定和对比分析。结果显示CVS N2cGP基因编码区长 15 75bp ,编码 5 2 4个氨基酸 ,与国内外发表的狂犬病毒疫苗株 3aG株、ERA株、和HEP Flury株GP基因的核酸序列同源性分别为 89 0 % ,89 3% ,94 5 % ,而推导的氨基酸序列同源性分别为 87 6 %、88 4 %、和91 2 %。在此基础上 ,用pAdEasy载体系统构建了表达GP基因的重组腺病毒。电镜下确定重组病毒颗粒的直径约70nm ,Westernblot显示重组病毒表达的GP蛋白可被兔抗狂犬病毒血清识别 ,表达的GP蛋白分子量约为 6 6kD ,与天然的狂犬病毒GP的分子量相符。该表达CVS N2c毒株GP基因的重组腺病毒是筛选有效狂犬病毒基因工程疫苗的基础。

人类8型疱疹病毒K8.1N基因编码包膜糖蛋白的原核表达及其抗原特异性分析

目的:制备人类8型疱疹病毒(HHV-8)K8.1N基因编码包膜糖蛋白的原核表达融合蛋白,并鉴定其抗原特异性。方法:将重组质粒pET41a-K8.1N转化大肠杆菌BL21感受态细胞,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达谷胱甘肽S转移酶(GST)/K8.1N融合蛋白,经Glutathione Sepharose4B亲和层析柱纯化。采用Western blot法观察GST/K8.1N融合蛋白(作为抗原)与新疆地区、法国卡波西肉瘤(KS)患者血清以及四川健康儿童血清的血清学反应。结果:IPTG诱导后的菌体裂解蛋白,经12%聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)后,显示有一个46kD的融合蛋白表达,经Westernblot法鉴定此融合蛋白能被KS患者血清特异性地识别,新疆地区KS患者血清检出率为78.6%,法国KS为12.0%,四川健康儿童血清无一例与GST/K8.1N融合蛋白发生反应。结论:HHV-8包膜糖蛋白编码基因在大肠杆菌BL21中获得正确表达,并与KS患者血清具有特异识别性。

小整合素结合配体N端联结糖蛋白家族的研究进展

小整合素结合配体N端联结糖蛋白家族是一组主要在牙及骨组织中表达的蛋白质,具有通用的外显子内含子结构,影响细胞的增殖和分化。目前包括骨桥蛋白、骨涎蛋白、牙本质基质蛋白1、牙本质涎磷蛋白、基质细胞外磷酸糖蛋白和釉蛋白等6个成员。本文就该家族的成员组成、生物学特性和生物学功能等方面作一综述。

秦巴山区人巨细胞病毒gN基因型分布及其与宫内感染的关系

目的探讨陕西秦巴山区母婴人巨细胞病毒(HCMV)感染流行株的包膜糖蛋白gN基因型分布及其与HCMV宫内感染结局的相关性。方法采用ELISA法检测434例孕期妇女血清中HCMV-Ig M及HCMV-IgG,判断秦巴山区孕期妇女HCMV感染情况;采用PCR方法检测孕妇血清和新生儿尿液中的HCMV gN基因,利用限制性核酸内切酶SacⅠ、SalⅠ和ScaⅠ分别对HCMVgN基因进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析。结果①434例孕妇血清中HCMV-Ig M阳性35例,阳性率8.06%;HCMVgN DNA阳性25例,阳性率为5.76%。新生儿尿液中HCMVgN DNA阳性17例,阳性率为3.92%。在35例HCMV-Ig M阳性孕妇中,其配对新生儿尿液HCMV gN DNA阳性11例,HCMV宫内传播率为31.43%。②42例HCMV gN DNA阳性标本(25例孕妇及17例新生儿)gN3型2例、gN4型40例,8例症状性HCMV感染婴儿与8例无症状性感染婴儿及其母亲均具有相同的基因型gN4型;1例病理性黄疸患儿与其母亲基因型为gN3。③新生儿感染症状及预后与基因型之间无相关性。结论陕西秦巴山区母婴HCMV流行株以gN4型为主。gN3、gN4基因型可引起母婴传播。

N糖基化抑制对脑胶质瘤细胞株SWO-38 N-GSLs合成的影响

目的 探讨N糖基化抑制对肿瘤细胞中性鞘糖脂 (N GSLs)合成的影响。方法 以衣霉素 (Tunicamycin)为N 糖基化抑制剂 ,观察其对胶质瘤细胞株SWO 38糖蛋白及N GSLs合成的影响。结果 当衣霉素浓度≥ 5ug ml,作用时间≥ 8小时 ,它可以在体外选择性地抑制N糖蛋白的合成 ,同时也抑制N GSLs的合成 ,而对N GSLs单一组分的相对百分含量无明显影响。结论 N 糖基化抑制剂在抑制细胞N糖蛋白合成的同时 ,对细胞N GSLs的合成也有抑制作用。

SFTSV N端糖蛋白重组腺病毒的鉴定和免疫研究

目的获得表达发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)N端糖蛋白(Gn)的重组人5型腺病毒(Ad5-Gn),鉴定其生物学特性及诱导产生中和抗体的能力。方法利用AdEasy腺病毒包装系统,构建pAD-Amp-Gn表达载体,转染HEK-293细胞,获得重组腺病毒Ad5-Gn。用Ad5-Gn感染细胞,利用免疫荧光染色和Western印迹鉴定SFTSV Gn的表达水平;将Ad5-Gn病毒注射BALB/c小鼠,观察小鼠行为学并检测特异性中和抗体水平,评价Ad5-Gn的安全性和免疫原性。结果免疫荧光染色和Western印迹结果表明,Ad5-Gn感染细胞后能检测到SFTSV Gn表达,且大小符合预期。Ad5-Gn不影响小鼠生长,免疫小鼠4周后产生的中和抗体平均效价为1∶341。结论获得了表达SFTSV Gn的Ad5-Gn候选疫苗,其毒力低且能诱导小鼠产生较高的中和抗体,为进一步研制SFTSV疫苗奠定了基础。

基质金属蛋白酶在牙本质龋中的作用

基质金属蛋白酶(MMPs)是一类蛋白水解酶,在体内可水解细胞外基质成分。在牙本质龋发生的过程中,致龋菌释放的酸使pH值下降,来自于唾液和牙本质的MMPs被激活,当唾液缓冲系统使pH值恢复中性后,MMPs可水解脱矿的牙本质。基质金属蛋白酶抑制剂如MMPs组织特异性抑制剂及从天然来源的物质中提取出的某些成分可有效抑制MMPs活性。本文就MMPs生物学特性、在牙本质龋中的作用以及其抑制剂的研究进展作一综述。