乌头碱影响KB_(V200)细胞Pgp蛋白表达的组化实验

目的:通过观察Pgp蛋白表达的细胞阳性率探讨乌头碱抗KBV200细胞耐药机制。方法:以免疫组化法,分别测定6.25μg/mL、12.5μg/mL乌头碱作用后的KBV200细胞Pgp蛋白阳性表达率。结果:对照组Pgp蛋白表达的阳性细胞为96%;而6.25μg/mL、12.5μg/mL乌头碱作用后Pgp蛋白表达的阳性细胞率分别为83%、30%。结论:乌头碱能够降低KBV200细胞Pgp蛋白高表达,部分逆转KBV200细胞耐药性。

耐抗癫痫药大鼠模型脑内P-糖蛋白的表达

目的：通过耐丙戊酸钠（VPA）、耐卡马西平（CBZ）大鼠惊厥模型探讨癫痫耐药机制。方法：采用大鼠腹腔注射戊四氮（PTz）21d的点燃方法，建立大鼠惊厥模型。在此基础上分别以CBZ及VPA灌胃14d，建立耐CBZ及耐VPA大鼠惊厥模型。实验分4组：正常对照组、惊厥对照组、耐CBZ组及耐VPA组，每组8只鼠。以惊厥潜伏期和Racine行为学分级作为评定药效指标。采用免疫组化法检测大鼠脑内P-糖蛋白（Pgp）的表达变化；统计分析各组大鼠脑内Pgp表达量，探索癫痫大鼠的耐药机制。结果：①24只大鼠在连续腹腔注射PTZ21d达点燃标准，成功建立惊厥模型；②取16只惊厥大鼠分两组各灌胃CBZ及VPA14d后，两组大鼠惊厥潜伏期（5．84士2．94和6．23土2．57min）较惊厥对照组的惊厥潜伏期（3．32±1．83min）显著延长（P〈0．01），提示耐CBZ及耐VPA模型制备成功；③惊厥对照组PgP的表达（12．40±10．35）比正常对照组（1．62±0．85）增高，差异有统计学意义（P〈0．01）；耐CBZ组（38．67±17．28）及耐VPA组大鼠的PgP的表达（42．33±15．54）较惊厥对照组（12．40±10．35）增高，差异有显著意义（P〈0．01）；而耐CBZ组与耐VPA组之间PgP的差别则无统计学意义（P〉O．05）。结论：①大鼠腹腔注射PTz21d，建立惊厥模型，再进一步分别灌胃CBZ及VPA14d，成功建立耐CBZ及耐VPA模型；②CBZ和VPA可显著诱导Pgp的表达，而长期惊厥发作对其表达也可能有一定的诱导Pgp表达的作用。

环孢霉素A逆转Pgp多药耐药机理的研究

目的 探讨环孢霉素 A (Cs A)逆转糖蛋白 Pgp耐药细胞株 K5 6 2 /ADR耐药的机理。方法 采用RT- PCR、荧光法、MTT和共聚焦激光扫描显微镜等方法 ,研究 Cs A对柔红霉素 (DNR)在 Pgp耐药细胞株 K5 6 2 /ADR蓄积、毒性及分布的影响。结果 Cs A可明显增加 DNR在耐药细胞内的蓄积 ,恢复 DNR在耐药细胞核、浆的弥漫分布 ,提高耐药细胞对 DNR的敏感性。结论 Cs A通过增加耐药细胞内化疗药物含量和逆转化疗药物异常分布的作用 ,恢复耐药细胞对化疗药物的敏感性。

多药耐药基因PgP、ToPo-Ⅱ、GST-π与Ki-67在肺癌中的表达及其临床病理学意义

目的:探讨耐药基因PgP、ToPo-Ⅱ、GST-π和核增殖细胞抗原Ki-67在肺癌中的表达及其临床病理学意义。方法:应用免疫组织化学(SP法)检测58例肺癌中PgP、ToPo-Ⅱ、GST-π和增殖细胞核抗原Ki-67的表达情况。结果:PgP、ToPo-Ⅱ、GST-π在58例肺癌组织中的阳性率分别为17.1%、79.1%、72.3%;其中ToPo-Ⅱ在鳞癌和小细胞癌中的表达明显高于腺癌组织(P<0.05),PgP、GST-π在三种癌中的表达无差异;三种耐药基因的共表达在淋巴结有转移中的表达明显高于无转移组(P<0.05),而与癌症类型无相关性;Ki-67的表达与三种耐药基因无明显相关。结论:肺癌的耐药与多种耐药基因蛋白介导有关,联合检测肺癌中多种耐药基因蛋白的表达,对于临床选择合理的化疗药物及防止耐药有重要意义。

乳腺癌组织中CerbB-2、Ki-67、Pgp、GST-π、TopoⅡ的表达变化及意义

目的观察乳腺癌组织中CerbB-2、Ki-67、Pgp、GST-π、TopoⅡ的表达变化,并探讨其临床意义。方法采用免疫组化法检测170例乳腺癌组织中CerbB-2、Ki-67、Pgp、GST-π、TopoⅡ,分析其与乳腺癌临床病理指标的关系。结果乳腺癌组织中CerbB-2、Ki-67、Pgp、GST-π、TopoⅡ的阳性表达率分别为51.76%、78.24%、43.53%、62.35%、62.35%。CerbB-2的表达与乳腺癌直径及淋巴结转移有关(P均<0.05),Ki-67、Pgp的表达与乳腺癌组织学分级、淋巴结转移有关(P均<0.05),TopoⅡ的表达与乳腺癌组织学分级有关(P<0.05)。Ki-67的阳性表达与CerbB-2、TopoⅡ呈明显正相关(r=0.176、0.355,P均<0.05),Pgp阳性表达与TopoⅡ呈正相关(r=0.168,P<0.05)。结论乳腺癌组织中CerbB-2、Ki-67、Pgp、GST-π、TopoⅡ均有较高表达;除GST-π外,均与乳腺癌的发展有关,是判断其预后的重要指标。

低频重复经颅磁刺激对氯化锂-匹鲁卡品慢性癫痫大鼠海马CA3区PGP、MRP1、MVP表达的影响

目的研究低频重复经颅磁刺激(rTMS)对氯化锂-匹鲁卡品慢性癫痫大鼠海马CA3区P-糖蛋白(PGP)、多药耐药相关蛋白(MRP)1及主穹隆蛋白(MVP)表达水平的影响。方法 60只大鼠随机分为对照组,模型组,假刺激组,治疗组,每组15只。采用氯化锂-匹鲁卡品腹腔注射构建癫痫大鼠模型,治疗组采用rT MS治疗,比较各组治疗过程中癫痫发作次数及CA3区PGP、MRP1及MVP的表达水平。结果治疗组癫痫发作频率低于模型组及假刺激组(P<0.05)。治疗组PGP、MRP1及MVP表达水平显著低于模型组及假刺激组(P<0.05),较对照组显著升高(P<0.05)。结论低频rTMS可抑制模型大鼠海马CA3区PGP、MRP1及MVP过度表达,低频rTMS的抗痫作用可能与之有关。

用^(99)Tc^m-MIBI在体外评价肿瘤细胞多药耐药逆转剂逆转细胞多药耐药的效果

通过观察99Tcm-MIBI细胞内摄取变化探讨了单独或低剂量联合应用多药耐药逆转剂逆转肿瘤细胞多药耐药的效果,期望为进一步解决临床恶性肿瘤化疗面临的问题提供实验依据。选择人类髓系白血病K562细胞及其耐药细胞系K562/D各2×106个,分别加入8 MBq99Tcm-MIBI,观察不同时间不同浓度多药耐药逆转剂环孢菌素A(CsA0.1～0.4 mg/L)和/或维拉帕米(Ver 2.5～10 mg/L)存在时,K562细胞及K562/D细胞对99Tcm-MIBI摄取变化。结果显示:①不同浓度Ver或CsA存在时,K562细胞99Tcm-MIBI摄取略有增加,但差异无显著性(P>0.05);K562/D细胞对99Tcm-MIBI的摄取均明显增加,但不同浓度Ver间及不同浓度CsA间,摄取增加的差异没有显著性(P>0.05)。②2.5 mg/L Ver及0.1 mg/L CsA同时加入K562细胞系中,60 min时99Tcm-MIBI摄取率为0.303±0.076,增加率为183%,接近单独应用Ver(10mg/L)或单独应用CsA(0.4 mg/L)。这说明低剂量逆转剂联合应用能达到与单一较大剂量应用逆转剂相似的效果,为临床逆转Pgp介导的多药耐药提示新的信息。

反义寡核苷酸对多药抗性基因表达影响的研究

多药抗性现象是肿瘤有效化疗的主要障碍 ,其中 mdr1基因过量表达产生膜蛋白 Pg P是最关键的一种。利用该多药抗性表型标志建立了 ELISA法定量检测 mdr1的表达水平 ,并用反义寡核苷酸对基因的表达进行调控。结果表明天然寡核苷酸在 Lipofectin的介导下能一定程度地抑制 Pg

捻转血矛线虫P糖蛋白基因的表达与耐伊维菌素药物相关性

为了解P糖蛋白(Pgp)与捻转血矛线虫(Haemonchus contortus,Hco)耐伊维菌素(IVM)药物的相关性,分别从山西榆次和内蒙古乌审旗分离得到伊维菌素敏感和耐药虫株,并运用RT-qPCR法,检测比较Hco-Pgp-2和Hco-Pgp-9在捻转血矛线虫乌审旗耐药株(WS-R)和山西敏感株(SX-S)之间的表达差异性。结果显示,Hco-Pgp-2和Hco-Pgp-9在耐药株WS-R中,雌虫的表达量均低于雄虫;而在敏感株SX-S中,雌虫的表达量均高于雄虫。雌虫Hco-Pgp-2和Hco-Pgp-9表达量,均是耐药株WS-R低于敏感株SX-S,而雄虫则相反。由此推断,这种性别间的表达差异可能与虫体耐药性相关,可以作为耐药性监测的依据之一。

雌二醇对大鼠肝细胞胆汁分泌及细胞骨架再建的影响

目的 探讨雌激素对大鼠肝细胞胆汁分泌及细胞骨架再建的影响。方法 从F344大鼠肝脏分离肝细胞 ,行单层培养或肝细胞球状体三维培养 ,培养基中加入雌二醇 ,行位相差显微镜观察 ;进行肝细胞荧光素排泌实验及Rhodamine Phallodin染色观察 ,细胞间粘连相关蛋白质和胆汁分泌相关的Pgp糖蛋白测定采用免疫印记杂交。 结果 雌二醇 (E2 )使单层培养的肝细胞间毛细胆管样结构显著扩张 ,三维培养的肝细胞球状体中央出现空泡样改变 ,肌动蛋白在肝毛细胆管壁及球状体空泡壁周围聚集 ,荧光代谢物在扩张的毛细胆管及空泡中聚集 ,E2促进Pgp和RhoA和radixin的表达 ,其水平与空泡形成率相一致。结论 E2促进大鼠三维培养的肝细胞胆汁分泌 ,在RhoA和radixin介导下肌动蛋白重新分布 ,细胞骨架再建 ,调节紧密连接功能和聚集 ,导致毛细胆管样结构的扩张和三维培养时球状体空泡样结构的形成。