草石蚕多糖的制备及其对高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞的影响

为研究草石蚕多糖对高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)的影响。草石蚕水提液经脱蛋白、AB-8大孔树脂柱层析分离,得草石蚕粗多糖并进行分级醇沉分离得到30%醇沉组分(SSMP-30%)、60%醇沉组分(SSMP-60%)和90%醇沉组分(SSMP-90%),其中SSMP-90%的含量最高。以高糖诱导HBZY-1为细胞模型对醇沉组分进行体外活性测试。结果表明,不同醇沉组分对模型细胞均无毒性,与高糖对照组比较,SSMP-30%和SSMP-90%组分对高糖诱导HBZY-1的增殖具有显著抑制作用(P<0.01),且呈浓度依赖性,其中SSMP-90%的活性最强。提示其对高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞具有保护作用。

当归多糖通过调控miR-148a-3p抑制高糖诱导的视网膜神经节细胞氧化应激损伤及凋亡研究

目的观察当归多糖对高糖诱导的视网膜神经节细胞(RGC)氧化应激损伤及凋亡的影响,并探讨可能机制。方法取对数期RGC-5细胞,分为对照组(常规培养基培养)、高糖组(含葡萄糖30 mmol/L的培养基培养)及高糖+低、中、高剂量组(分别用含葡萄糖30 mmol/L与当归多糖100、200、400 mg/L的培养基培养)。另取对数期RGC-5细胞,将细胞分为高糖+mi R-NC组、高糖+mi R-148a-3p mimics组、高糖+mi R-148a-3p inhibitor组、高糖+当归多糖+mi R-148a-3p mimics组、高糖+当归多糖+mi R-148a-3p inhibitor组。ELISA法检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)水平;Annexin V/PITC双染法检测细胞凋亡率;Western blot法检测细胞Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达量。结果与对照组比较,高糖组SOD活性、Bcl-2蛋白表达量降低,MDA水平、凋亡率、Bax蛋白表达量升高(P<0.05);与高糖组比较,高糖+低剂量组SOD活性、Bcl-2蛋白表达量升高,MDA水平、凋亡率、Bax蛋白表达量降低(P<0.05);与高糖+低剂量组比较,高糖+中剂量组SOD活性、Bcl-2蛋白表达量升高,MDA水平、凋亡率、Bax蛋白表达量降低(P<0.05);与高糖+中剂量组比较,高糖+高剂量组SOD活性、Bcl-2蛋白表达量升高,MDA水平、凋亡率、Bax蛋白表达量降低(P<0.05)。与高糖+mi R-NC组比较,高糖+mi R-148a-3p mimics组mi R-148a-3p表达量及SOD活性、Bcl-2蛋白表达量升高,MDA水平、凋亡率、Bax蛋白表达量降低(P<0.05),高糖+mi R-148a-3p inhibitor组mi R-148a-3p表达量及SOD活性、Bcl-2蛋白表达量降低,MDA水平、凋亡率、Bax蛋白表达量升高(P<0.05);与高糖+mi R-148a-3p mimics组比较,高糖+当归多糖+mi R-148a-3p mimics组mi R-148a-3p表达量及SOD活性、Bcl-2蛋白表达量升高,MDA水平、凋亡率、Bax蛋白表达量降低(P<0.05);与高糖+mi R-148a-3p inhibitor组比较,高糖+当归多糖+mi R-148a-3p inhibitor组mi R-148a-3p表达量及SOD活性、Bcl-2蛋白表达量升高,MDA水平、凋亡率、Bax蛋白表达量降低(P<0.05)。结论当归多糖可减轻高糖诱导的RGC氧化应激损伤,减少细胞凋亡,且表现为剂量依赖性,其作用机制可能与上调mi R-148a-3p表达有关。

高糖诱导线粒体损伤对足细胞影响的研究进展

糖尿病肾病(diabetic nephropathy, DN)是糖尿病患者最常见、最有害的微血管并发症,其发病率逐年上升。足细胞是一种终末分化的肾小球脏层上皮细胞,其数量的减少,足突融合消失或裂隙膜蛋白表达减少都是大量蛋白尿发生的细胞分子学基础。线粒体作为一种具有半自主性的细胞器,在多种多样的细胞生物过程中扮演重要角色,包括生成三磷酸腺苷(ATP)、调节细胞代谢与增殖、细胞内钙稳态、细胞信号传导等。

黄芪多糖调控TXNIP/NLRP3炎症小体对高糖诱导的人视网膜内皮细胞凋亡的作用机制

目的探究黄芪多糖调控TXNIP/NLRP3炎症小体对高糖诱导的人视网膜内皮细胞凋亡的作用机制。方法将hRECs细胞随机分为Control组、HG组、APS组和APS+pcDNA3.1-TXNIP组。采用CCK-8和流式细胞仪检测细胞存活率和凋亡率;DCFH-DA荧光探针检测活性氧(ROS)水平;检测细胞中氧化应激和炎症因子水平;蛋白质印迹法检测细胞中TXNIP、NLRP3、IL-1β和caspase-1蛋白表达。结果和Control组相比,HG组细胞存活率、SOD活性和GSH-Px含量明显降低,细胞凋亡率、ROS相对荧光强度、MDA含量、IL-1β和IL-18含量及细胞中TXNIP、NLRP3、IL-1β、caspase-1蛋白表达明显增加(P<0.05);和HG组相比,APS组细胞存活率、SOD活性和GSH-Px含量明显增加,细胞凋亡率、ROS相对荧光强度、MDA含量、IL-1β和IL-18含量及细胞中TXNIP、NLRP3、IL-1β、caspase-1蛋白表达明显降低(P<0.05);和APS组相比,APS+pcDNA3.1-TXNIP组细胞存活率、SOD活性和GSH-Px含量明显降低,细胞凋亡率、ROS相对荧光强度、MDA含量、IL-1β和IL-18含量及细胞中TXNIP、NLRP3、IL-1β、caspase-1蛋白表达明显增加(P<0.05)。结论黄芪多糖可抑制高糖诱导的视网膜内皮细胞凋亡、炎症反应和氧化应激损伤,其作用机制可能和抑制TXNIP/NLRP3通路激活有关。

宁夏枸杞总黄酮对高糖诱导损伤人脐静脉内皮细胞抗氧化作用的影响

目的探讨宁夏枸杞总黄酮对高糖诱导损伤的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)抗氧化作用的影响。方法利用体外培养HUVEC,采用高糖诱导HUVEC建立氧化应激损伤模型,实验分为正常对照组、高糖损伤模型组、枸杞黄酮保护组(100、200、400mg·L-1),以及阳性对照(维生素C 30mg·L-1)组。MTT法测定细胞存活率、测定各组细胞上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮合酶(NOS)活性,及丙二醛(MDA)的含量和一氧化氮(NO)释放量。结果与正常对照组比较高糖损伤模型组MDA含量增高,LDH活性上升,SOD活性明显下降,NO、NOS生成量及活性均下降(均P<0.01)。与高糖损伤模型组比较,枸杞黄酮保护组MDA含量下降,LDH活性下降,SOD活性增高(P均<0.01、P<0.05),NO、NOS的生成量及活性明显增高(P均<0.01),且上述各指标的变化程度随枸杞总黄酮浓度的增加而改变。结论宁夏枸杞总黄酮显著提高高糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤模型的抗氧化作用,这可能与宁夏枸杞总黄酮抗脂质氧化,提高抗氧化酶活性及NO的释放量有关。

麦麸中阿魏酸糖酯对高糖诱导HepG2细胞氧化应激的影响

研究麦麸中阿魏酸糖酯(FGs)对高糖诱导损伤的Hep G2细胞氧化应激的影响。Hep G2细胞分为正常对照组、高糖诱导损伤组、阿魏酸糖酯低剂量组(0.0565μmol/L)、阿魏酸糖酯中剂量组(0.113μmol/L)和阿魏酸糖酯高剂量组(0.565μmol/L),以荧光探针法检测细胞ROS水平,分光光度法测定细胞总超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力,用油红O脂类染色法观察细胞脂质沉淀情况。与高糖诱导损伤组相比,FGs高、中、低剂量组细胞的ROS水平显著降低(P<0.01),CAT活力显著上升(P<0.01),细胞脂质沉淀量明显减少;FGs中、高剂量组细胞的GSH-PX活力显著上升(P<0.01);高浓度组的T-SOD活力为(48.05±1.40)U/mg,与高糖诱导损伤组的T-SOD活力相比具有极显著差异(P<0.01)。阿魏酸糖酯通过增强细胞抗氧化酶活性,抑制胞内ROS生成,抑制高糖诱导Hep G2细胞的氧化应激。

芦丁对高糖诱导心肌细胞中tTG表达的调控作用

糖尿病性心肌病（DCM）在代谢紊乱及微血管病变的基础上可引发心肌灶性坏死,出现心功能异常,导致心力衰竭、心律失常以及心源性休克,甚至猝死。组织转谷氨酰胺酶（tTG）为转谷氨酰胺酶家族的成员,它是钙离子的依赖剂[3]。据报道,tTG存在于各种组织器官中,可在各组织中发挥重要的调控作用。

维生素E对高糖诱导人腹膜间皮细胞纤维连结蛋白表达及活性氧生成的影响

持续不卧床腹膜透析（CAPD）是目前治疗终末期肾病（ESRD）的主要替代治疗方法之一,以往的研究已表明高糖可导致腹膜间皮细胞损伤,细胞外基质产生增多,最终导致腹膜纤维化。高糖引起腹膜纤维化的机制至今尚未阐明。氧化应激（OS）是指由于促氧化与抗氧化系统两者平衡失调导致活性氧（ROS） 过度产生造成的组织损伤。研究已经证实腹膜透析患者普遍存在氧化应激。

谷氧还蛋白1对高糖诱导的血管内皮细胞凋亡保护作用的研究

目的观察谷氧还蛋白1(glutaredoxin1,Grx1)在高糖诱导的血管内皮细胞凋亡中的保护作用。方法在高糖环境中培养人脐静脉内皮细胞,制备人脐静脉内皮细胞损伤模型,细胞分为正常对照组、损伤组、Grx1预保护组。倒置显微镜下观察细胞形态、(MTT比色法)检测细胞活力以初步观察Grx1对细胞损伤的保护作用;利用Hoechst33258染色法荧光显微镜观察细胞凋亡的形态学变化;采用Annexin V-FITC/PI双染法,流式细胞仪检测Grx1对内皮细胞凋亡的影响。结果光镜观察结果显示,Grx1预保护组与损伤组比较细胞状态明显改善;MTT法显示高糖环境下,Grx1可减轻高糖引起的细胞活性降低;Ho-echst33258染色实验显示,Grx1可明显改善高糖所致的内皮细胞变形、皱缩等损伤表现。流式细胞术检测显示当Grx1存在时,细胞凋亡率明显下降。结论Grx1对高糖诱导的血管内皮细胞凋亡具有明显的保护作用。

HMGB1基因对高糖诱导的血管内皮细胞损伤的影响

目的:探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)基因对高糖诱导的血管内皮细胞损伤的影响及作用机制。方法:培养人血管内皮细胞,实验分为NG组(5.5 mmol/L葡萄糖处理)、HG组(33.3 mmol/L葡萄糖处理)、HG+si-NC组(转染si RNA阴性对照及33.3 mmol/L葡萄糖处理)和HG+si-HMGB1组(转染HMGB1 si RNA及33.3 mmol/L葡萄糖处理)。比较各组细胞HMGB1、p65和IκB-α蛋白表达,细胞活力、氧化应激及炎症反应水平差异。结果:与NG组比,HG组HMGB1 mRNA和蛋白表达升高,细胞活力降低,LDH和ROS升高,SOD降低,ICAM-1、MCP-1和IL-6水平升高,p65表达上调,IκB-α表达下调(P<0.05)。与HG+si-NC组比,HG+si-HMGB1组HMGB1 mRNA和蛋白的表达降低,细胞活力升高,LDH和ROS降低,SOD升高,ICAM-1、MCP-1和IL-6降低,p65表达下调,IκB-α表达上调(P<0.05)。结论:抑制HMGB1表达能提高血管内皮细胞的活力,减轻氧化损伤及炎症反应,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路的激活有关。

GABA对谷氨酸和低糖诱导的人少突胶质细胞瘤细胞凋亡增加的影响(英文)

目的 观察GABA对谷氨酸和低糖诱导的人少突胶质细胞瘤细胞凋亡增多的影响 ,并探讨其可能的机制。方法 采用免疫组织化学方法和相关的试剂盒测定凋亡百分率的变化和bcl 2、bax、c fos蛋白的表达。结果 ①GABA可以显著抑制谷氨酸和低糖诱导的细胞凋亡百分率的增加 (P <0 .0 5 ) ;②GABA对谷氨酸和低糖诱导的bcl 2、bax蛋白的表达增加无明显影响 ;③谷氨酸 ,低糖和GABA对c fos蛋白的表达没有明显影响。结论 ①GABA可能通过降低细胞凋亡的百分率而具有神经保护作用 ;②GABA的神经保护作用可能是通过其它途径而与bcl 2、bax蛋白的表达无关。

重组腺病毒IκBαM抑制高糖诱导的血管内皮细胞凋亡

目的 研究NF κB在高浓度葡萄糖 (高糖 )诱导的ECV 30 4血管内皮细胞凋亡中的作用。方法 用携有NF κB抑制物IκBα突变体的IκBαM重组腺病毒 (AdIκBαM)感染ECV 30 4细胞 ,利用WesternBlot、EMSA、电镜、流式细胞仪等检测方法 ,研究NF κB在高糖诱导的血管内皮细胞凋亡中所起的作用 ,以及阻断NF κB活性对血管内皮细胞凋亡及细胞周期改变的影响。结果 高糖能诱导ECV 30 4细胞IκBα的降解和NF κB的激活 ,G0 G1 百分比增加 ,S和G2 M比例下降 ,延缓G0 G1 向S期过渡 ,出现细胞凋亡的形态学改变 ,而感染AdIκBαM的ECV 30 4 IκBαM细胞则能加速G0 G1 向S期过渡 ,未出现细胞凋亡的形态学改变。结论 AdIκBαM能抑制高糖诱导的ECV 30 4细胞NF κB的过度活化及对ECV 30 4细胞的致凋亡作用 ,加速细胞周期转换 ,证实NF

当归多糖调控miR-148a-3p对高糖诱导视网膜神经节细胞损伤的影响

目的:探讨当归多糖调控 miR-148a-3p 对高糖诱导视网膜神经节细胞损伤的影响。 方法:将高糖诱导视网膜神经节细胞(RGCs)分为 9 组,均进行 CCK-8 实验和流式细胞术检验 RGCs 增殖抑制率和凋亡率,测定 RGCs 内 SOD、MDA,用 RT-qPCR 检测 miR-148a-3p 表达。 结果:HG+当归多糖+miR-148a-3p In￣hibitor 组中 RGCs 增殖抑制率和凋亡率均低于其他组(P<0.05);HG+当归多糖+miR-148a-3p Inhibitor 组中RGCs 内 SOD 含量最高,MDA 最低(P<0.05);HG+当归多糖+miR-148a-3p Inhibitor 组中 miR-148a-3p 表达低于其他组(P<0.05)。 结论:当归多糖可上调 miR-148a-3p,促进 RGCs 增殖,抑制凋亡,减轻对高糖诱导RGCs 的损伤。

高糖诱导的血脑屏障损伤的分子基础和机制

目的：在细胞水平探讨AMPK—NADPH氧化酶→氧化应激→紧密连接蛋白→血脑屏障之间的内在联系，研究AMPK对氧化应激、

丙酮酸乙酯对高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖、基质金属蛋白酶-2及层粘连蛋白表达的影响

目的探讨丙酮酸乙酯(EP)对高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞株(HBZY-1细胞)增殖、基质金属蛋白酶(MMP)-2及层粘连蛋白(FN)表达的影响。方法将HBZY-1细胞分为NG组、HG组、EP1组、EP2组、EP3组,分别加入5. 6 mmol/L葡萄糖、30. 0 mmol/L葡萄糖、30. 0 mmol/L葡萄糖+1. 0 mmol/L EP、30. 0 mmol/L葡萄糖+3. 0 mmol/L EP、30. 0 mmol/L葡萄糖+5. 0 mmol/L EP。比较5组HBZY-1细胞干预后12 h、24 h、48 h的增殖情况,以及干预后24 h MMP-2、FN的表达水平。结果在各个时间点,HG组细胞的增殖能力均高于其他4组细胞(均P <0. 05)。与NG组比较,HG组MMP-2表达水平降低,而FN表达水平升高(均P <0. 05)。HG组、EP1组、EP2组、EP3组MMP-2表达水平依次升高,FN表达水平依次降低(均P <0. 05)。结论 EP可抑制高糖诱导的HBZY-1细胞过度增殖,并可上调MMP-2、下调FN表达。

糖诱导型启动子调控ALD6基因表达降低黄酒中的高级醇生成量

高级醇是影响中国黄酒风味和饮用品质的重要因素之一,适量高级醇可赋予黄酒醇柔、协调的口感,但高级醇过高会导致酒体产生杂醇味,且有强烈的致醉性。在酿酒酵母中,过表达ALD6基因可以显著降低高级醇的生成量,但是过多乙酸的生成会抑制细胞的生长和代谢。由于黄酒发酵是双边发酵,可以通过筛选合适的糖诱导型启动子调控ALD6的表达,在降低高级醇生成量的同时减弱其对细胞生长的抑制作用。该研究选取了6个HXT系列的糖诱导型启动子P_(hxt1)、P_(hxt2)、P_(hxt3)、P_(hxt4)、P_(hxt5)和P_(hxt7)调控乙醛脱氢酶基因ALD6的表达,黄酒发酵结果显示,相较于出发菌株a17,各诱导型重组菌株总高级醇生成量分别下降22.29%、19.26%、42.56%、37.84%、16.72%和30.74%。对比组成型重组菌株a-P_(pgk1)-A和诱导型重组菌株a-P_(hxt3)-A发现,二者相较于出发菌株a17均可显著降低总高级醇的生成,但与a-P_(pgk1)-A相比,a-P_(hxt3)-A的生长及发酵性能与a17基本一致,在降低高级醇生成量的同时减弱了过表达ALD6产生乙酸对发酵的不利影响。

大黄素对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1/ERK1/2及FN蛋白表达的影响

目的探讨大黄素（emodin，EMO）对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞（glomerular mesangial cells，MCs）转化生长因子-β1（TGF-β1）/细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）及细胞外基质（extracellular matrix，ECM）FN蛋白表达的影响。方法将常规培养的MCs分为正常组（NG，5.56 mmol/L葡萄糖）、 甘露醇组（MA，5.56 mmol/L葡萄糖＋24.44 mmol/L甘露醇）、溶剂组（0.1% DMSO＋30 mmol/L葡萄糖）、高糖组（HG，30 mmol/L葡萄糖）及大黄素干预组（1 μmol/L、10 μmol/L EMO＋30 mmol/L葡萄糖）。CCK-8检测细胞增殖情况；Western blotting检测各组细胞TGF-β1、p-ERK1/2、FN蛋白表达。结果与正常组比较，高糖培养48 h MCs增殖显著（P〈0.05，P〈0.01），p-ERK1/2、TGF-β1、FN蛋白表达明显增高（P〈0.05）；与高糖组比较，大黄素干预组能抑制MCs增殖，并显著降低p-ERK1/2、TGF-β1、FN蛋白表达（P〈0.05或P〈0.01）。结论大黄素能抑制高糖诱导下的MCs细胞增殖，下调TGF-β1、p-ERK1/2、FN蛋白表达，从而发挥对糖尿病肾病（diabetic nephropathy，DN）的防治作用。

G蛋白偶联胆汁酸受体1激活对高糖诱导小鼠心肌细胞肥大的影响

目的探讨G蛋白偶联胆汁酸受体1(TGR5)激活对高糖诱导小鼠心肌细胞肥大的影响。方法原代培养小鼠心肌细胞,将细胞分为对照组、高糖组、高糖+INT-777(TGR5受体激动剂)组、高糖+INT-777+TGR5shRNA(以TGR5干扰慢病毒包装)组。采用图像分析系统测定各组细胞表面积,通过RT-PCR及Western blotting方法检测TGR5干扰慢病毒效率,RT-PCR检测各组促肥大因子(心房钠尿因子、β-肌球蛋白重链)mRNA表达变化。结果成功培养小鼠心肌细胞。与对照组比较,高糖组心肌细胞表面积及促肥大因子mRNA表达增加(P均<0.05)。激活TGR5后,由高糖导致的心肌细胞表面积及促肥大因子mRNA表达的增加受到抑制(P均<0.05)。与激活TGR5组比较,干扰TGR5基因后,心肌细胞表面积及促肥大因子mRNA表达明显增加(P均<0.05)。结论激活TGR5受体可以抑制高糖诱导的心肌细胞肥大及促肥大因子mRNA表达,可能是糖尿病性心肌病重要的药物治疗靶点。

基于游离质粒的木糖诱导型枯草芽孢杆菌转化体系的建立及其应用

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)作为食品级安全菌株,因其具有理化特征清晰、培养发酵方便等特点,广泛应用于异源蛋白质的高效表达以及高附加值物质的合成。传统的B.subtilis遗传转化方法存在操作流程繁琐、效率低等缺点,因此,开发方便高效的遗传转化系统具有重要意义。转录因子ComK被证实能调控B.subtilis感受态的形成,并在B.subtilis高效转化中有重要作用。构建1个含有木糖诱导启动子P_(xyl)调控comK表达的穿梭质粒pUBC01⁃P_(xyl)⁃comK的菌株B.subtilis K1,经木糖诱导条件优化后,质粒pHY300⁃p43⁃egfp的转化效率达到4.8×10^(3) CFU·μg^(-1)。此外,质粒pUBC01⁃P_(xyl)⁃comK可在无胁迫条件下连续培养及消除。木糖诱导感受态体系及质粒消除极大地提高了芽孢杆菌基因编辑和菌株改造的便捷性,同时增强了菌株尤其是生产菌株的性状稳定性。