糙皮侧耳PoLIM基因家族鉴定与表达分析

在NCBI、JGI数据库中检索糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)PoLIMs,进行生物信息学分析;测定PoLIM 1~PoLIM 6在25℃培养7 d(菌丝期),16℃培养5 d(扭结前期)、10 d(扭结后期)、15 d(原基期)、22 d(子实体期)的相对表达量以及菌丝在4℃冷胁迫12、24、48 h的相对表达量。结果表明:PoLIM1~PoLIM6的氨基酸数量为353~1 673;等电点为7.26~9.98;亚细胞定位预测均在细胞核中;有10个保守基序;启动子序列中包含光、生长素、MYB转录因子以及低温胁迫等响应元件。就相对表达量而言,PoLIM1在子实体期较高;Po LIM2在扭结后期和子实体期较高;Po LIM3、Po LIM4、Po LIM6在菌丝期较高;Po LIM5在扭结后期较高,在原基期及子实体期降低。与对照(25℃)相比,4℃冷胁迫时Po LIM1、Po LIM3、Po LIM5、Po LIM6的相对表达量升高。

辽宁省玉米秸秆基质栽培糙皮侧耳菌株筛选评价

为筛选出适宜辽宁地区以玉米秸秆为主要栽培基质的优良糙皮侧耳菌株,以19个糙皮侧耳菌株为试验材料,对菌丝长势、满袋时间、污染率、生物学效率及农艺性状等指标进行测定和比较分析。结果表明,C14号菌株综合指标优于其他供试菌株,其母种和栽培种在玉米秸秆基质中菌丝长势均较好,生物学效率较高,为105.8%,子实体菌盖颜色深灰色,菌柄3.1~6.8 cm,朵大韧性好,菇型紧凑,菌盖肥厚,中等大小,光泽好,可作为生产用优良菌株。C10、C2号菌株子实体性状一般,但其母种及栽培种在玉米秸秆基质中菌丝长势强、生物学效率高,利用秸秆能力强,可作为品种选育的备选材料。

糙皮侧耳原基发育关联物质及代谢通路分析

为揭示糙皮侧耳原基发育的潜在调控物质,采用代谢组学的方法对糙皮侧耳菌丝体和原基细胞代谢物进行检测分析。结果表明,菌丝体与原基细胞的代谢物具有显著差异。采用正交偏最小二乘判别分析(OPLS‐DA),以VIP(varible importance in the projection)≥1和倍数变化≥2或≤0.5为条件共筛选到400种差异代谢物。调控通路分析表明,这些差异物质涉及33条代谢通路,其中丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸、氨酰tRNA生物合成、嘌呤代谢等8条代谢通路具有极显著影响。谷氨酸和谷氨酰胺涉及p<0.01的大部分代谢通路,可能在糙皮侧耳原基发育过程中具有重要调控作用。研究结果为糙皮侧耳以及其他大型真菌原基发育机制的探索提供了理论依据。

不同菌材栽培糙皮侧耳营养品质综合评价

目的分析不同菌材栽培糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)生长及营养品质差异,并对其营养品质进行综合评价。方法以贵州5种常见菌材锥栗(Castanea henryi)、构树(Broussonetia papyrifera)、刺槐(Robinia pseudoacacia)、光皮桦(Betula luminifera)、青冈(Quercus glauca)为主要培养料栽培糙皮侧耳,对糙皮侧耳菌丝生长、子实体主要农艺性状及营养品质进行分析。结果糙皮侧耳在光皮桦培养基上菌丝生长速率更快,在锥栗和刺槐栽培基质中子实体主要农艺性状更好。刺槐栽培基质中糙皮侧耳子实体粗蛋白、Cu、Zn、K元素含量最高,锥栗栽培基质中糙皮侧耳子实体多糖、Na、Mg、Fe、Ca元素含量最高。以5种菌材栽培的糙皮侧耳子实体总氨基酸、必需氨基酸含量为刺槐>青冈>光皮桦>构树>锥栗,总药用氨基酸含量为青冈>刺槐>光皮桦>构树>锥栗。5种菌材栽培的糙皮侧耳子实体呈味氨基酸主要为甜味和苦味氨基酸,其中光皮桦栽培的糙皮侧耳子实体鲜甜味更佳。必需氨基酸营养品质评价及营养品质综合评价结果表明刺槐栽培糙皮侧耳子实体综合营养品质更好。Fe、苏氨酸、丙氨酸、谷氨酸、精氨酸、天冬氨酸、组氨酸、Zn和多糖是5种菌材栽培的糙皮侧耳子实体主要差异营养成分。相关性分析结果显示菌材营养成分主要与糙皮侧耳菌丝生长、子实体主要农艺性状和矿物质元素含量显著相关。结论不同营养成分的菌材对糙皮侧耳子实体生长和营养品质的影响不同,刺槐更适合作为生产糙皮侧耳主栽菌材。

糙皮侧耳菌糠肥料对玉米苗期生长及土壤性状的影响

以玉米秸秆栽培糙皮侧耳后产生的菌糠制作出的有机肥为底肥进行玉米室内盆栽试验,结果表明:施加糙皮侧耳菌糠肥料对玉米苗期的生长发育具有一定的促进作用,每1kg土壤中添加12g菌糠肥料培育的玉米苗期株高比对照增加18%,地上部鲜质量比对照增加23.27%,地上部干质量比对照增加23.89%,叶绿素含量与光合作用速率也有显著提升;同时,施加糙皮侧耳菌糠肥料可使土壤有机质含量、土壤电导率、土壤阳离子交换量、土壤速效养分以及土壤全量养分均有增加,并降低了土壤p H值。

不同成熟度糙皮侧耳风味与能量代谢关系

为了解糙皮侧耳风味与能量的关系,对不同成熟度糙皮侧耳子实体风味、能量以及能量代谢相关酶活性进行研究。结果表明,在不同成熟度的糙皮侧耳中,等效鲜味浓度(equivalent umami concentration,EUC)、总挥发性物质、能荷、腺苷三磷酸酶(adenosine triphosphatase,ATPase)、细胞色素c氧化酶(cytochrome c oxidase,CCO)和琥珀酸脱氢酶(succinic dehydrogenase,SDH)活性具有显著差异。T4时期采收的糙皮侧耳子实体中的挥发性物质含量(八碳化合物)、能荷水平以及ATPase、SDH和CCO活性最高,而T3时期的EUC最高。此外,CCO活性与EUC和八碳化合物含量呈显著正相关关系(P<0.05),表明该酶对糙皮侧耳风味起着关键作用。综上,糙皮侧耳的独特风味与其能量状态密切相关。

转Pofst3糙皮侧耳菌株农艺性状和胞外酶活性分析

通过袋栽实验比较野生型、Pofst3过表达型和Pofst3反义沉默型糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)菌株(分别记为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)的菌丝生长速度、原基数量、子实体数量、菌柄直径、菌盖直径等农艺性状;测定其漆酶、木聚糖酶、纤维素酶活性。结果表明:Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ菌丝生长速度差异不显著;与Ⅰ相比,Ⅲ的原基和子实体数量多,菌柄直径大,菌盖直径小,原基和子实体中Pofst3的相对表达量低;与Ⅰ、Ⅱ相比,Ⅲ的漆酶、木聚糖酶及纤维素酶活性较高;Pofst3对糙皮侧耳发育的影响可能与其胞外酶活性相关。

糙皮侧耳乳酸脱氢酶鉴定及其菌丝高温胁迫下表达特征分析

乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)可催化丙酮酸与乳酸(lactic acid,LA)之间的可逆转化,为探索乳酸脱氢酶基因在糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)菌丝体高温胁迫响应中的作用,在糙皮侧耳(P. ostreatus)菌株CCMSSC00389基因组中鉴定获得了8个乳酸脱氢酶编码基因。生物信息学分析结果显示,3个基因编码D型乳酸脱氢酶,5个基因编码L型乳酸脱氢酶。氨基酸序列比对、系统发育、三维结构和亚细胞定位分析显示,3个D型乳酸脱氢酶的同源性较高,可能属于细胞色素C依赖的D型乳酸脱氢酶,D-LDH2和D-LDH3位于线粒体中;5个L型乳酸脱氢酶的氨基酸序列同源性较低,并按电子受体和亚细胞定位的不同分为3个类型。通过检测36℃、40℃高温胁迫下乳酸脱氢酶基因的表达量变化,明确D-ldh3、L-ldh5和L-ldh7表达特征相同,L-ldh6和L-ldh8的表达特征相同,D-ldh1、D-ldh2和L-ldh4则表现出不同的基因表达趋势,表明乳酸脱氢酶基因对不同高温胁迫温度的响应方式存在差异。高温胁迫条件下,乳酸脱氢酶总酶活性降低,胞内乳酸含量升高;外源添加乳酸脱氢酶抑制剂和乳酸都能显著抑制菌丝生长,表明乳酸脱氢酶能够调控热胁迫下糙皮侧耳的菌丝生长。推测糙皮侧耳乳酸脱氢酶通过降低基因转录水平和酶活性,影响了胞内乳酸脱氢向丙酮酸的转化,导致胞内乳酸的过量积累造成细胞损伤,最终抑制了菌丝生长速率。

尿素和麦麸对糙皮侧耳生长发育和子实体营养组成的影响

【目的】阐明尿素和麦麸对糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)生长发育和子实体营养组成的影响及机制,为糙皮侧耳氮源选择和培养料配方优化提供依据。【方法】以棉籽壳为主料,尿素和麦麸为氮源,设计16种培养料配方,对比研究培养料氮源形态、氮质量分数和碳氮比值对糙皮侧耳菌丝生长、子实体生物学效率和营养成分的影响,并从培养料NH+4含量和基质降解酶活分析其影响机制。【结果】随着培养料氮源添加量的增加,糙皮侧耳菌丝生长速率逐渐降低,子实体生物学效率先升高后降低。糙皮侧耳以尿素或麦麸为氮源时,培养料的最适氮质量分数和碳氮比值均不同;添加5 g·kg^(-1)尿素时,子实体生物学效率最高为118.1%,对应培养料氮质量分数和碳氮比值分别为1.52%和25.0∶1;添加300 g·kg^(-1)麦麸时,子实体生物学效率最高为122.9%,对应培养料氮质量分数和碳氮比值分别为1.86%和20.8∶1。2种氮源栽培的糙皮侧耳子实体营养成分存在显著差异,添加300 g·kg^(-1)麦麸时子实体总氨基酸和粗蛋白质量分数比添加5 g·kg^(-1)尿素时分别高25.6%和29.4%。添加5g·kg^(-1)尿素或300 g·kg^(-1)麦麸均可提高糙皮侧耳菌丝木质纤维素降解酶活力,但糙皮侧耳对尿素和麦麸2种氮源的利用方式不同。【结论】从子实体生物学效率和营养成分来看,麦麸更适宜作为棉籽壳熟料栽培糙皮侧耳的氮源。

四种外源信号物质对糙皮侧耳菌丝热胁迫适应性的影响

研究外源信号物质H_(2)O_(2)、Ca^(2+)、NO(供体硝普钠,sodium nitroprusside,SNP)、1,4-二氨基丁烷(putrescine, Put)对糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)菌株Xin831热胁迫适应性的影响。以无菌水为对照,在培养基中分别添加不同浓度H_(2)O_(2)(0.01、0.05、0.25、1.25、6.25 mmol·L^(-1))、Ca^(2+)(2.5、5、10、20、40 mmol·L^(-1))、NO供体SNP(0.1、0.2、0.4、0.6、0.8 mmol·L^(-1))、Put (25、50、100、200、400μmol·L^(-1)),待菌丝生长5 d后,分别设置常温(25℃)、40℃热胁迫处理24 h,测量并计算各处理下糙皮侧耳菌丝生长速率。结果表明:在常温条件下,0.01~1.25 mmol·L^(-1) H_(2)O_(2)、(2.5、10、20)mmol·L^(-1) Ca^(2+)、0.2 mmol·L^(-1) SNP、25~200μmol·L^(-1)Put对糙皮侧耳菌丝生长均具有促进作用,6.25 mmol·L^(-1) H_(2)O_(2)、40 mmol·L^(-1) Ca^(2+)、0.4~0.8 mmol·L^(-1) SNP抑制糙皮侧耳菌丝生长;在实验范围内,热胁迫条件下,不同浓度H_(2)O_(2)、Ca^(2+)、SNP、Put对糙皮侧耳菌丝恢复生长均具有促进作用。

糙皮侧耳PoEgt2基因克隆及不同发酵时期表达水平分析

从糙皮侧耳基因组中预测获得PoEgt2基因进行生物信息学分析和表达分析。结果显示:PoEgt2编码氨基酸546个,为胞内不稳定蛋白,无跨膜区和信号肽。蛋白质序列比对结果显示,糙皮侧耳PoEgt2与白黄侧耳、刺芹侧耳等侧耳属真菌同源性较高,与非侧耳属菌同源性较低。PoEgt2在糙皮侧耳发酵前期的表达量较高,于发酵4 d达到峰值,随后表达水平随时间下降。该研究可为高产麦角硫因的糙皮侧耳菌种改良和发酵条件优化提供科学依据。

糙皮侧耳菌株HXS-M1固态发酵复方中药工艺的优化

试验旨在优化糙皮侧耳菌株HXS-M1固态发酵复方中药的工艺条件。试验以糙皮侧耳菌作为复方中药发酵菌种,以菌株的产漆酶活力为评价指标,在单因素试验的基础上,采用响应面Box-Behnken设计建立数学模型,对糙皮侧耳菌固态发酵复方中药工艺进行优化。结果表明,优化的中草药发酵工艺为菌种接种量4.0%、发酵温度28.0℃、发酵时间25 d,在优化工艺条件下,菌株产漆酶活性为4014.02 U/g。研究表明,试验筛选确定了糙皮侧耳菌固态发酵复方中草药的生产工艺,为发酵中草药添加剂的产业化生产提供了技术参考。

糙皮侧耳HMG-box转录因子分析与候选基因克隆表达

在糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)的全基因组中鉴定出14个高速泳动蛋白(high-mobility group box,HMG-box)的编码基因(PoHMG1~PoHMG14),对其进行特征、结构与系统进化分析,发现所有的HMGbox转录因子蛋白的三级结构高度相似,相对分子质量为6893.79~60397.29,蛋白PoHMG6、PoHMG11、PoHMG12与PoHMG13之间的亲缘关系较近。基于糙皮侧耳在菌丝、原基、幼嫩子实体和成熟子实体时期的转录组数据,对筛选到的转录因子基因PoHMG11进行克隆分析并探究其功能及表达特性,发现该基因全长序列1517 bp,编码489个氨基酸,含有一个HMG-box结构域。通过大肠杆菌原核表达载体体外诱导表达出相对分子质量为5.5×104的蛋白,该重组蛋白在1 mol·L^(-1)IPTG、25℃诱导表达6 h时表达量最高。利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析糙皮侧耳在菌丝、原基、幼嫩子实体和成熟子实体阶段PoHMG11基因的相对表达量,发现该基因在成熟糙皮侧耳子实体中的表达量比其他生长发育时期显著升高5倍以上,推测该基因可能参与调控糙皮侧耳子实体成熟过程。

糙皮侧耳菌株HXS-M1液态发酵中药基质的筛选与优化

试验旨在筛选优化糙皮侧耳菌株HXS-M1液态发酵复方中药的培养基质成分与配比。以糙皮侧耳菌作为复方中药发酵菌种,以菌株产纤维素酶活力为考核指标,采用单因素试验对菌株适宜发酵培养基成分及添加量进行初步筛选;采用响应面Box-Behnken设计建立数学模型,对复方中药液态发酵培养基配比进行优化。结果显示,筛选的发酵中药基质成分为复方中药提取液为碳源、绿豆粉为氮源、碳酸钙为无机盐;优化确定的糙皮侧耳菌液态发酵复方中药培养基质配比为复方中药提取液43.0%、绿豆粉1.0%、碳酸钙0.1%,在此条件下菌株产羧甲基纤维素酶活力最为理想,达到39.92 U/mL。研究表明,试验筛选确定了糙皮侧耳菌HXS-M1液态发酵复方中草药的基质成分与配比,为进一步优选菌株HXS-M1发酵中草药工艺提供了技术参考。

白腐菌糙皮侧尔漆酶性质及其对蒽醌染料脱色性能的研究

白腐菌糙皮侧尔(Pleurotusostreatusstrain3.42)分泌胞外漆酶,但未发现分泌木质素过氧化物酶(LiP)和锰过氧化物酶(MnP)。每升反应液以0.5mmol2,2′-连氮-二(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)(ABTS)和0.1mmol的Cu2+为诱导剂可明显提高漆酶酶活,酶活分别可达1000和800U/mL。与其它真菌漆酶相比,该酶最适反应pH值为3.5,在pH值4.0～6.0之间酶活性稳定;最适反应温度为65℃,在醋酸缓冲液(pH值5.0)中,反应温度低于50℃时,漆酶非常稳定;该酶对对 甲氧基酚的氧化速度要快于邻-甲氧基酚。叠氮化钠对该漆酶有强烈的抑制作用。蒽醌染料活性艳蓝KN-R(RBBR)可被该漆酶(30U/mL)直接脱色,12h脱色率为70%;添加小分子的介体物质ABTS(5μmol/L),可使染料完全脱色。

四种木屑栽培糙皮侧耳子实体营养成分分析及氨基酸营养价值评价

研究梨、苹果、桃和核桃4种木屑栽培料对糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)子实体中营养成分和氨基酸的组成、含量及营养价值评价的影响。结果表明:在实验范围内,梨木屑栽培的糙皮侧耳子实体中总必需氨基酸含量和呈味氨基酸总量最高;苹果木屑栽培的糙皮侧耳子实体中粗纤维、镁、铜、锌、总药用氨基酸、鲜味氨基酸和甜味氨基酸的含量最高;桃木屑栽培的糙皮侧耳子实体中碳水化合物和灰分的含量最高;核桃木屑栽培的糙皮侧耳子实体中蛋白质、脂肪、粗多糖、钙和铁的含量最高;采用FAO/WHO的氨基酸模式,苹果木屑栽培的糙皮侧耳子实体的必需氨基酸比值系数分(SRC)最高,表明其蛋白质营养价值最高。

七种培养料对糙皮侧耳熟料栽培的影响

研究了棉籽壳、玉米芯、大豆秸、棉柴屑、金针菇(Flammulina velutipes)菌糠、废棉、木屑等7种培养料对糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)熟料栽培的影响。结果表明:大豆秸、玉米芯、废棉吸水能力和持水能力都比较强;糙皮侧耳栽培期间,7种培养料含水量和pH值呈现相似的变化规律,除灭菌后到菌丝满袋期培养料含水量和pH值上升外,其它时期均下降;糙皮侧耳菌丝在大豆秸上生长最快、长势最好,在木屑和玉米芯上生长最慢、长势最差;在废棉、大豆秸上产量较高,在木屑上产量最低。

灵芝与糙皮侧耳原生质体融合子基因组RAPD分析

以获得弱木栓质化灵芝菌株为目的 ,利用液体培养 4d的灵芝菌丝体和培养 3d的糙皮侧耳菌丝体为材料 ,在PEG Ca2 +系统中诱导原生质体融合 ,获融合子 19株 ,融合率为 1.9×10 -5。根据其生物学特性 ,选取F3、F8两融合子及两亲本菌株的基因进行RAPD分析。结果表明 ,两亲本的核物质在融合子中发生了重组 ,并影响了酶蛋白的表达 。

糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)的AFLP指纹图谱分析

在对糙皮侧耳 (Pleurotusostreatus)的AFLP分析条件进行优化的基础上 ,利用该技术建立了 14株产自不同地区的糙皮侧耳DNA指纹图谱 ,并进行了数据分析。结果表明 ,在合成的 14条引物的不同组合中 ,引物对E 3 M 3可以产生较多的DNA多态片段 ,E AGC M CAT引物对的扩增效果最好 ,共获得 184条DNA扩增带 ,其中多态性条带 10 1条 ,占 5 4 89%。利用UPGMA法对所获数据进行聚类分析 ,计算得到糙皮侧耳菌株之间的遗传距离 ,发现不同品种间遗传距离差异较大 ,从 0 192到 0 75 4 ,说明糙皮侧耳的遗传多样性比较丰富。绘制的指纹分析树状图表明 ,14个糙皮侧耳菌株被分为 6个组群 ,其中P17和杂 3的相似性系数最高 ,达到了 81 2 % ,而侧

采用灰色关联度法评价玉米秸秆栽培的糙皮侧耳菌株

采用灰色关联度法筛选适合玉米秸秆栽培的糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)菌株,10个菌株每株各栽培100袋,以菌丝满袋时间、菌丝长势、菌丝生长速度、污染率、菌盖直径、单包产量和生物学效率为主要性状指标,进行关联分析。结果表明:玉米秸秆栽培的糙皮侧耳菌株与理想"参考菌株"的关联度大小排序为3302、抗病2号、3500、丰优2010、春秋抗王、2008-A、特抗650、灰美2号、高产8105、红平菇。3302和抗病2号与理想"参考菌株"的关联度最大,与理想"参考菌株"最接近。