阻断ERK途径对PTH培育的大鼠系膜细胞分泌纤维连接蛋白的影响

目的 探讨阻断蛋白激酶(ERK)途径对甲状旁腺素(PTH)培育大鼠系膜细胞上清的纤维连接蛋白(FN)的影响。方法 采用酶联免疫吸附(ELISA)法观察PTH培育的大鼠系膜细胞的上清液中FN的变化。结果 PTH10^-8mol／L培育的大鼠系膜细胞上清液中FN呈现时间依赖性增加；而ERK酶抑制剂能够明显抑制PⅢ培育的大鼠系膜细胞上清FN的浓度。在一定的范围内呈剂量(5～50μmol／L)以及时间(6～48h)依赖性。结论 ERK途径对PTH培育的大鼠系膜细胞上清液的FN有影响；对探讨慢性肾功能衰竭的高PTH血症对机体的毒性作用，特别对肾小球系膜细胞外基质的形成及硬化的机制可能有一定价值。

TGF-β1通过p38MAPK信号通路调控肾小球系膜细胞分泌纤维连接蛋白的研究

目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号转导通路在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的肾小球系膜细胞(MC)分泌纤维连接蛋白(FN)过程中的作用。方法应用WesternBlot法检测系膜细胞内p38MAPK活性;应用ELISA法检测培养上清中FN。结果TGF-β1可诱导MC内p38MAPK活化,刺激15minp38MAPK活性增加,30min后,p38MAPK活性达高峰,1h后几乎恢复至正常水平,2h后再次升高,24h时仍高于正常。TGF-β1可促进MC分泌FN,p38MAPK特异性抑制剂SB203580显著抑制TGF-β1诱导的MC分泌FN。结论p38MAPK通路在TGF-β1引起的系膜细胞外基质成分之一的FN分泌增加中发挥一定的作用。SB203580能部分抑制TGF-β1诱导的FN的合成,可能对糖尿病肾病具有一定的治疗作用。

甲状旁腺激素促进系膜细胞合成分泌转化生长因子β和纤维连接蛋白的实验研究

目的 :研究甲状旁腺激素 (PTH)对大鼠系膜细胞合成与分泌转化生长因子 β(TGF β)和纤维连接蛋白(FN)的影响及其可能机制。 方法 :①分别以 10 -12 、10 -11、10 -10 、10 -9、10 -8mmol/L的hPTH1 3 4刺激大鼠系膜细胞6、12、2 4、48h后 ,ELISA方法测定上清中TGF β和FN的浓度 ;②分别以 10 -12 ～ 10 -8mol/L的hPTH1 3 4刺激大鼠系膜细胞 48h后 ,半定量RT PCR方法检测细胞TGF βmRNA的表达 ;③以 10 -8mol/L的hPTH1 3 4分别刺激大鼠系膜细胞 6～ 48h ,采用半定量RT PCR方法检测细胞TGF βmRNA的表达。④分别以 10 -12 ～ 10 -8mol/L的hPTH1 3 4和 10ng/L的抗TGF β抗体共培养大鼠系膜细胞 ,以无抗TGF β抗体为对照 ,48h后测定上清中FN的水平。⑤以 10 -8mol/L的hPTH1 3 4与 10 μg/L的抗TGF β抗体共同刺激大鼠系膜细胞 ,分别于 6～ 48h测定上清中FN的浓度 ,以无抗TGF β抗体为对照。 结果 :①ELISA结果显示 ,hPTH1 3 4促进大鼠系膜细胞合成与分泌TGF β和FN ,且具有浓度依赖和时间依赖性特点 ,当PTH浓度为 10 -8mol/L时 ,其促分泌作用达高峰 (P <0 0 1) ;②半定量RT PCR方法结果显示 ,hPTH1 3 4促进大鼠系膜细胞TGF βmRNA的表达 ,并具有浓度依赖和时间依赖性特点 (各组与对照组间P <0 0 5 ) ;?

醛固酮对肾小球系膜细胞合成分泌纤维连接蛋白和TGF-β1表达的影响

目的研究醛固酮(ALD)及其受体拮抗剂螺内酯(SPI)对大鼠肾小球系膜细胞合成分泌纤维连接蛋白(FN),以及对转化生长因子β1(TGF-β1)基因表达的影响。方法(1)以不同浓度的ALD(10-11、10-9、10-7mol/L)及/或10-7mol/LSPI刺激肾小球系膜细胞48h后,用ELISA法测定培养上清中FN的浓度。用半定量RT-PCR法检测该细胞中FNmRNA和TGF-β1mRNA的表达。(2)以10-9mol/L的ALD刺激系膜细胞不同时间(24、48、72h)后,分别用上述方法测定培养上清中FN的浓度和细胞中FNmRNA和TGF-β1mRNA的表达。结果(1)ELISA的结果显示,ALD可促进系膜细胞合成分泌FN,且呈剂量和时间依赖性,SPI能拮抗ALD的作用。(2)半定量RT-PCR的结果显示,ALD可促进系膜细胞FNmRNA和TGF-β1mRNA的表达,也呈剂量和时间依赖性,SPI也能拮抗ALD的作用。结论ALD在蛋白和基因水平上均可促进大鼠肾小球系膜细胞合成分泌FN,及TGF-β1mRNA的表达,SPI能拮抗ALD的作用,具有一定的肾脏保护作用,从而有益于延缓肾小球硬化的进展。

VD3调控ROS介导的TXNIP/NLRP3通路抑制高糖诱导肾系膜细胞纤维化的机制研究

目的:探究活性维生素D3(VD3)对高糖诱导下肾系膜细胞纤维化特征的影响,并探讨相关作用机制。方法:培养大鼠肾小球系膜细胞系HBZY-1,将其分为正常葡萄糖培养(NG)组、正常葡萄糖联合VD3培养(NG+VD3)组、高葡萄糖培养(HG)组、高葡萄糖联合VD3培养(HG+VD3)组、高葡萄糖联合N-乙酰半胱氨酸培养(HG+NAC)组。CCK-8法检测各组细胞的增殖活性,流式细胞术检测各组细胞的凋亡率,DCFH-DA法检测各组细胞中活性氧(ROS)含量,酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组细胞上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-18、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,实时荧光定量聚合酶反应(RT-qPCR)检测各组细胞中纤维化标志物转化生长因子-β1(TGF-β1)、纤维连接蛋白(FN)、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)及硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)的mRNA表达,蛋白质免疫印记(Western blot)检测各组细胞中TGF-β1、FN、ICAM-1及TXNIP、NLRP3的蛋白表达。结果:与NG组比较,HG组增殖活性显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著减少(P<0.05),ROS含量显著上升(P<0.05),细胞上清液中IL-1β、IL-18、TNF-α水平显著升高(P<0.05),细胞中TGF-β1、FN、ICAM-1、TXNIP、NLRP3的mRNA和蛋白相对表达水平显著上调(P<0.05);与HG组比较,HG+VD3组和HG+NAC组增殖活性显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著增加(P<0.05),ROS含量显著下降(P<0.05),细胞上清液中IL-1β、IL-18、TNF-α水平显著降低(P<0.05),同时,细胞中TGF-β1、FN、ICAM-1及TXNIP、NLRP3的mRNA和蛋白相对表达水平显著下调(P<0.05)。结论:VD3能够减轻高糖诱导的肾系膜细胞过度增殖及纤维化,该机制可能与调控ROS/TXNIP/NLRP3通路有关。

醛固酮对肾小球系膜细胞合成分泌纤维连接蛋白的影响

目的研究醛固酮(aldosteroen,ALD)及其受体拮抗剂螺内酯(spironolactone,SPI)对大鼠肾小球系膜细胞合成分泌纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的影响。方法以不同浓度的ALD(10-11、10-9、10-7mol/L)和/或10-7mol/L SPI刺激系膜细胞48 h后,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定培养上清中FN的浓度,应用半定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞FN mRNA的表达;以10-9mol/L浓度的ALD刺激系膜细胞不同时间(24、48、72 h)后,应用ELISA测定培养上清中FN的浓度,应用半定量RT-PCR方法检测细胞FN mRNA的表达。结果ELISA结果显示,ALD促进大鼠肾小球系膜细胞合成分泌FN,且具有浓度依赖和时间依赖性的特点,SPI能够拮抗ALD的作用。半定量RT-PCR方法结果显示,ALD促进培养的大鼠肾小球系膜细胞FN mR-NA的表达,且具有浓度依赖和时间依赖性的特点,SPI能够拮抗ALD的作用。结论ALD从蛋白和基因水平促进大鼠肾小球系膜细胞合成分泌FN,且具有浓度依赖和时间依赖性的特点,SPI能够拮抗ALD的作用,从而可能有益于延缓肾小球硬化的进展。

甘草素调节Hippo/YAP/TAZ信号通路对高糖诱导的肾小球系膜细胞炎症反应及纤维化的影响

目的探讨甘草素(LQ)调节Hippo/Yes相关蛋白(YAP)/含有PDZ结合位点转录共激活因子(TAZ)通路对高糖(HG)诱导的肾小球系膜细胞炎症反应及纤维化的影响。方法将HBZY-1细胞分为对照组(Ct组)、高糖组(HG组)、低剂量LQ组(LQ-L组,20μmmol/L)、高剂量LQ组(LQ-H组,40μmmol/L)、pcDNA3.1组(转染pcDNA3.1)、pcDNA3.1-YAP/TAZ组(转染pcDNA3.1-YAP/TAZ)、LQ-H+pcDNA3.1组(40μmmol/L+转染pcDNA3.1)、LQ-H+pcDNA3.1-YAP/TAZ组(40μmmol/L+转染pcDNA3.1-YAP/TAZ)。qRT-PCR、Western blot检测转染效果。CCK-8法检测细胞增殖;ELISA检测细胞上清中TNF-α、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、IL-1β水平;免疫荧光检测IV型胶原纤维(Collagen IV)、纤连蛋白(FN)蛋白表达;Western blot检测结缔组织生长因子(CTGF)、TGF-β1、YAP1、TAZ蛋白表达。结果HBZY-1细胞成功高表达YAP1/TAZ;与Ct组比较,HG组HBZY-1细胞OD450值、TNF-α、MCP-1、IL-1β、Collagen IV、FN蛋白相对荧光强度、CTGF、TGF-β1、YAP1、TAZ蛋白表达升高(P<0.05);与HG组比较,LQ-L组、LQ-H组HBZY-1细胞OD450值、TNF-α、MCP-1、IL-1β、Collagen IV、FN蛋白相对荧光强度、CTGF、TGF-β1、YAP1、TAZ蛋白表达降低(P<0.05);与HG组、pcDNA3.1组比较,pcDNA3.1-YAP/TAZ组HBZY-1细胞OD450值、TNF-α、MCP-1、IL-1β、Collagen IV、FN蛋白相对荧光强度、CTGF、TGF-β1、YAP1、TAZ蛋白表达升高(P<0.05);pcDNA3.1-YAP/TAZ减弱了高剂量LQ对HG诱导的HBZY-1细胞炎症反应及纤维化的抑制作用。结论LQ可能通过抑制Hippo/YAP/TAZ通路抑制HG诱导的HBZY-1细胞炎症反应及纤维化。

糖尿病肾病系膜细胞增殖功能、[Ca^(2+)]i和分泌纤维连接蛋白的研究

目的 :探讨糖尿病肾病系膜细胞功能改变及意义。方法 :采用STZ复制糖尿病模型 ,取肾进行系膜细胞培养 ,3 H -TdR法测定细胞增殖 ,用fluro - 3探针经共聚焦显微镜检测 [Ca2 + ]i 变化 ,ELISA法测定纤维连接蛋白 (FN)分泌量。结果 :糖尿病大鼠系膜细胞3 H -TdR掺入率和FN分泌量较正常大鼠增加 ,基础 [Ca2 + ]i 两组无差异 ,但糖尿病系膜细胞 [Ca2 + ]i 对血管紧张素II反应明显减弱。结论 :糖尿病系膜细胞增殖和分泌FN增加参与了糖尿病肾病细胞外基质的积聚 ,其 [Ca2 +

甘草酸对高糖诱导的肾小球系膜细胞炎性因子及纤维化因子的影响

目的探讨甘草酸(GA)对高糖诱导的肾小球系膜细胞(SV40 MES13)炎性因子及纤维化因子的影响。方法将培养的小鼠肾小球系膜细胞(SV40 MES13)分为对照(NG)组(5.6 mmol/L葡萄糖)、高糖(HG)组(30 mmol/L葡萄糖)及HG+GA组(30 mmol/L葡萄糖+200μmol/L GA)。采用Western blotting检测各组细胞炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6、IL-8及纤维化因子α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达水平,免疫荧光检测各组IL-1β、TNF-α、α-SMA在细胞内的荧光表达强度,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测各组细胞培养上清中IL-1β、TNF-α、IL-6及IL-8的表达水平。结果Western blotting检测结果显示,与NG组比较,HG组IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8及α-SMA蛋白的表达水平明显升高(P<0.01);与HG组比较,HG+GA组IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8和α-SMA蛋白表达量降低(P<0.05)。细胞免疫荧光结果显示,与NG组比较,HG组细胞内IL-1β、TNF-α和α-SMA因子的荧光强度明显增强(P<0.05);与HG组相比,HG+GA组细胞内IL-1β、TNF-α和α-SMA因子荧光强度明显降低(P<0.05)。ELISA检测结果显示,与NG组比较,HG组细胞培养上清中IL-1β、IL-6、TNF-α和IL-8蛋白表达水平升高(P<0.01);与HG组比较,HG+GA组IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-8表达水平明显降低(P<0.05)。结论甘草酸对高糖诱导的肾小球系膜细胞的炎性因子及纤维化因子的表达均具有不同程度的抑制作用,可能在糖尿病肾病的预防方面发挥重要作用。

姜黄素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞增殖及纤维连接蛋白表达的影响

目的:研究姜黄素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞增殖及纤维连接蛋白(FN)表达的影响。方法:以大鼠系膜细胞(MCs)为受试对象,将MCs分为7组:①正常对照组(5mmol/L葡萄糖,NG组),②高糖组(30mmol/L葡萄糖,HG组),③高糖+6.25μmol/L姜黄素组,④高糖+12.5μmol/L姜黄素组,⑤高糖+25μmol/L姜黄素组,⑥高糖+50μmol/L姜黄素组,⑦高糖+100μmol/L姜黄素组。分别作用24h后,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖情况,用WesternBlot法测定细胞内FN蛋白表达。结果:作用24h后,高糖明显诱导MCs增殖并上调细胞内FN表达。不同浓度姜黄素均能抑制高糖诱导的细胞增生,并抑制FN蛋白表达增加。结论:姜黄素能抑制高糖诱导的MCs增殖,并下调FN蛋白表达,提示姜黄素可能通过阻抑FN表达减少细胞外基质积聚,从而发挥对糖尿病肾脏的保护作用。

重组人红细胞生成素影响系膜细胞生长与纤维连接蛋白表达的实验研究

目的通过观察重组人红细胞生成素(rhEPO)影响肾小球系膜细胞生长,以及表达纤维连接蛋白(FN)的作用,探讨应用rhEPO后对肾组织可能产生的生物学效应。方法培养的大鼠肾小球系膜细胞在不同剂量(1、10、100和1000U.ml-1)rhEPO的作用下,细胞计数和蛋白浓度测定评价细胞是否肥大;蛋白免疫印迹法检测FN蛋白表达的变化。♂CD-1小鼠接受单次(n=8)腹腔注射rhEPO(1000 U.kg-1体重),注射后24 h处死并分离肾小球以检测其FN表达量的变化。结果①rhEPO能够增加系膜细胞蛋白质的含量,以100 U.ml-1工作浓度rhEPO的作用效果最为明显[(1.269±0.382)μg.10-3cellsvs(0.247±0.058)μg.10-3cells;P<0.01)];②rhEPO能够刺激系膜细胞上调FN蛋白的表达,与对照组相比,100 U.ml-1的rhEPO明显增加系膜细胞FN蛋白的表达,随着rhEPO浓度的增加,系膜细胞FN的表达进一步增多,呈剂量依赖性;③间接免疫荧光检测可见rhEPO作用系膜细胞24 h后,可见大量呈网状、条索状,甚至板块状FN蛋白分布于细胞间隙;④单次腹腔注射rhEPO后24 h的肾小球FN增加。结论rhEPO可以造成系膜细胞的肥大,同时诱导系膜细胞增加FN合成,提示rhEPO可以通过影响系膜细胞的功能造成肾小球功能的异常。

大黄素对培养人系膜细胞纤维连接蛋白产生的抑制作用

本文以纤维连接蛋白（ＦＮ）为指标，观察了大黄组份之一大黄素素，对培养人系膜细胞细胞外基质产生的影响、结果用ＥＬＩＳＡ检测、免疫荧光染色以及系膜细胞小丘形成的大小、多寡等多种指标证明了大黄素能够浓度依赖性地抑制系膜细胞分泌的和细胞膜相关的ＦＮ水平，并能拮抗ＴＧＦβ对系膜细胞ＦＮ产生的刺激作用。大黄素的这一药理作用可能与大黄治疗多种慢性肾脏疾病的机理有关。

二氢杨梅素对高糖诱导的肾小球系膜细胞增殖及纤维连接蛋白堆积的影响

目的:研究二氢杨梅素(DMY)对高糖(HG)诱导的肾小球系膜细胞(MCs)的增殖及纤维连接蛋白(FN)堆积的影响,探讨其对糖尿病肾病肾小球硬化的作用机制。方法:将细胞分为正常组(5.5 mmol/L葡萄糖)、HG组(30 mmol/L葡萄糖)和DMY低、中、高浓度组(30 mmol/L葡萄糖+22.5、45、90μmol/L DMY),培养48 h后采用MTT法检测细胞的增殖活性[以光密度(OD)值反映];采用分子对接法对DMY与Smad2的结合状态进行模拟分析;将细胞分为正常组(5.5 mmol/L葡萄糖)、HG组(30 mmol/L葡萄糖)、DMY组(30 mmol/L葡萄糖+45μmol/L DMY)和DMY对照组(5.5 mmol/L葡萄糖+45μmol/L DMY),培养5 h后采用Western blot法检测细胞中磷酸化Smad2(p-Smad2)及细胞外基质蛋白FN的表达水平。结果:MTT检测结果显示,与正常组比较,HG组细胞的OD值显著升高(P<0.05);与HG组比较,DMY各浓度组细胞的OD值均显著降低(P<0.05)。DMY与Smad2蛋白分子结合的吉布斯自由能(ΔG)为-5.64 k J/mol,抑制常数Ki为73.53μmol/L,在第465、464、461、458这4个氨基酸残基位点有氢键供体与受体的结合。Western blot结果显示,与正常组比较,HG组细胞中p-Smad2及细胞外基质蛋白FN表达水平均显著升高(P<0.05);与HG组比较,DMY组细胞中p-Smad2及细胞外基质蛋白FN表达水平显著降低(P<0.05)。结论:DMY可抑制HG诱导的MCs增殖,并通过与Smad2结合,抑制Smad2的磷酸化,继而降低细胞外基质蛋白FN的表达,从而改善糖尿病肾病肾小球硬化。

全反式维甲酸抑制TGF-β_1诱导的大鼠肾系膜细胞纤维连接蛋白表达及Smad2,3,4核转位

目的采用转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)在体外刺激大鼠肾系膜细胞表达纤维连接蛋白(fibronectin),观察全反式维甲酸(all-trans retinoicacid,atRA)对它的作用及对TGF-β1的Smad通路的影响。方法用Western blot方法检测TGF-β1诱导的肾系膜细胞纤维连接蛋白表达,Smad2的磷酸化,磷酸化Smad2、总Smad2/3和Smad4的核转位,以及atRA对TGF-β1的这些作用的影响。结果atRA能抑制TGF-β1诱导的肾系膜细胞纤维连接蛋白表达。atRA对TGF-β1引起的Smad2的磷酸化无明显作用,但atRA能部分阻断TGF-β1引起的磷酸化Smad2、Smad2/3和Smad4核转位。结论atRA体外拮抗TGF-β1的致纤维化效应可能是由其减少磷酸化Smad2、Smad2/3、Smad4的核转位所致。

糖基化终产物对人肾小球系膜细胞结缔组织生长因子及纤维连接蛋白基因表达的影响

目的:探讨体外培养条件下糖基化终产物(AGEs)对人肾小球系膜细胞结缔组织生长因子(CTGF)及纤维连接蛋白(FN)基因表达的影响。方法:用不同浓度体外制备的AGEs干预系膜细胞及同一浓度的AGEs干预细胞不同时间。应用RT-PCR检测细胞中CTGF和FN的mRNA水平。结果:随着AGEs干预浓度的增加或干预时间的延长,系膜细胞CTGF和FN mR-NA水平与对照组相比显著上升。结论:AGEs可导致人肾小球系膜细胞CTGF和FN mRNA的表达增加,在糖尿病肾病的发生、发展中起一定作用。

细胞内活性氧在晚期糖基化终产物促肾小球系膜细胞合成纤维连接蛋白中的作用

目的观察晚期糖基化终末产物(AGEs)对大鼠肾小球系膜细胞合成和分泌纤维连接蛋白的影响及细胞内活性氧(ROS)在其中的作用。方法在体外制备AGEs,分别用不同浓度的(0,100,500,1000μg/mL)AGEs及抗氧化剂N-酰-L-半胱氨酸(NAC 30 mmol/L)作用于肾小球系膜细胞,以氧化敏感的荧光染料2、7-二氢二氯荧光素(DCFH)染色,流式细胞仪测定细胞内ROS强度;再用RT-PCR和ELISA方法测定系膜细胞中纤维连接蛋白的表达。结果AGEs能使细胞内ROS水平明显升高(P<0.05),呈现浓度依赖效应;AGEs同时以时效和量效方式促进肾小球系膜细胞中纤维连接蛋白基因和蛋白的表达(P<0.05);而NAC能够明显抑制AGEs所致的细胞内ROS升高,同时抑制肾小球系膜细胞中纤维连接蛋白的合成和分泌(P<0.05)。结论AGEs可能部分通过诱导细胞内ROS,促进肾小球系膜细胞表达分泌纤维连接蛋白,从而引起肾小球系膜基质增生,最终导致肾小球纤维化,而抗氧化治疗可能有助于阻止糖尿病肾病的氧化应激损害和肾小球纤维化的发展进程。

PDGF对大鼠肾小球系膜细胞表达纤维连接蛋白和PAI-1的影响

目的:探讨血小板源性生长因子(PDGF)对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞表达纤维连接蛋白(FN)和纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI1)的影响。方法:分别以0、5、10ng/ml的PDGFBB刺激体外培养的大鼠肾小球系膜细胞12、24、48h,以ELISA法检测培养上清中FN水平,发色底物显色法检测PAI1的活性;以0、5、10ng/ml的PDGFBB刺激大鼠系膜细胞24h和10ng/mlPDGFBB分别作用0、12、24、48h,RTPCR方法检测系膜细胞PAI1mRNA的表达。结果:PDGFBB在10ng/ml以内随浓度增加可促进大鼠肾小球系膜细胞PAI1mRNA和FN表达,在48h内其表达呈时间依赖性。而PAI1活性在24h时表达最高,以后逐渐下降。结论:PDGFBB可上调FN和PAI1及其mRNA表达,提示PDGF可能通过促进细胞外基质合成并抑制其降解而导致肾小球细胞外基质的积聚。

单核细胞趋化蛋白-1对系膜细胞增殖及纤维连接蛋白和Ⅰ型胶原基因表达的影响

目的观察单核细胞趋化蛋白1(MCP1)对体外培养的大鼠系膜细胞增殖及纤维连接蛋白(FN)和Ⅰ型胶原(COLⅠ)基因表达的影响。方法采用不同浓度的MCP1刺激体外培养的系膜细胞,于不同的时间应用MTT法测定系膜细胞增殖活性,半定量RTPCR的方法测定细胞FN和COLⅠmRNA的相对表达量。结果随着MCP1浓度的增高,刺激时间的延长,MCP1明显促进系膜细胞的增殖、上调细胞FN和COLⅠmRNA的表达(Ρ<0.01),表现为剂量和时间依赖性。结论MCP1能促进大鼠系膜细胞的增殖及上调细胞FN和COLⅠmRNA的表达。MCP1可能在系膜增生性肾小球肾炎的发病过程中起一定的作用。

SOCS2基因转染对人肾小球系膜细胞TGF-β、Ⅳ型胶原蛋白、纤维连接蛋白表达的影响

目的观察过表达细胞因子信号转导抑制因子(SOCS2)对人肾小球系膜细胞(HMCs)中转化生长因子β(TGF-β)、Ⅳ型胶原蛋白(CollagenⅣ)、纤维连接蛋白(FN)表达的影响,并探讨其可能机制。方法体外培养HMCs,分为A、B、C、D、E、F组,A、B组分别加入Ad-SOCS2病毒液(含SOCS2的腺病毒病毒液)、Ad-null病毒液(只含腺病毒的病毒液),24 h后将培养液更换成高糖培养液;C组加入30 mmol/L的D-葡萄糖;D、E组分别加入Ad-SOCS2病毒液、Ad-null病毒液,24 h后将培养液更换成常规培养液;F组加入5.5 mmol/L的D-葡萄糖+24.5mmol的D-甘露醇。Western blotting法检测各组TGF-β、CollagenⅣ、FN及贾纳斯激酶2(JAK2)、信号传导及转录激活因子3(STAT3)、磷酸化贾纳斯激酶2(p-JAK2)、磷酸化信号传导及转录激活因子3(p-STAT3)。结果与F组比较,A、B、C组TGF-β、CollagenⅣ、FN、p-JAK2、p-STAT3的相对表达量升高;与C组比较,A组TGF-β、CollagenⅣ、FN、p-JAK2、p-STAT3的相对表达量降低;P均<0.01。结论 SOCS2通过抑制JAK/STAT信号通路来下调HMCs中TGF-β、CollagenⅣ、FN表达。

活血化瘀、益气补肾中药复方对高糖刺激下大鼠肾小球系膜细胞增殖及纤维连接蛋白表达的影响

目的研究活血化瘀、益气补肾中药复方对高糖刺激下大鼠肾小球系膜细胞(RMCs)增殖及纤维连接蛋白(FN)表达的影响。方法以大鼠RMCs为研究对象,用高糖和不同浓度的中药处理RMCs,分别作用24、48 h后,用噻唑蓝(MTT)法检测RMCs的增殖情况,实时定量PCR法检测FN mRNA表达,ELISA法检测FN蛋白表达。结果处理24 h和48 h,与对照组比较,单纯高糖组细胞增殖明显升高(P<0.01,P<0.01);FN mRNA表达及蛋白表达也明显升高(P<0.01);与高糖组比较,24 h时各浓度中药组RMCs增殖及FN蛋白及mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05);48 h时各浓度中药组RMCs增殖及FN蛋白及mRNA表达较高糖组明显下降(P<0.01,P<0.01)。结论高糖能够刺激RMCs增殖及FN蛋白及mRNA表达,中药处理24 h对高糖刺激的RMCs增殖及FN蛋白及mRNA表达的作用不明显,中药处理48 h能够逆转高糖刺激下RMCs的增殖及降低FN蛋白及mRNA的表达。