大鼠系膜细胞系的建立及鉴定

大鼠系膜细胞系的建立及鉴定梅长林张黎明陈蕾关键词系膜细胞系低氧鉴定中图法分类号Ｒ３２９．２５肾小球系膜细胞有多种生理功能，在肾小球疾病的发生、发展中起着重要作用〔１〕。长期以来，原代培养的大鼠系膜细胞一直是研究肾小球疾病发病机理的最常用细胞模型。然而...

转铁蛋白受体和免疫球蛋白A/MFc受体并非人系膜细胞主要的IgA_1受体

目的 :探讨转铁蛋白受体 (TfR)和免疫球蛋白A/MFc受体 (Fcα/μR)是否为人系膜细胞 (HMC)主要的免疫球蛋白A(IgA)受体。方法 :亲和层析提取血清IgA1,热聚合并用 [12 5I]标记 ,RT -PCR法检测TfR与Fcα/μRmRNA在HMC及人系膜细胞系 (HMCL)中的表达 ,放射配基结合法检测聚合IgA1(aIgA1)与HMCL的结合动力学特征 ,Westernblot方法观察IgAN患者aIgA1与正常人aIgA1刺激HMCL引起的细胞外信号调节激酶 (ERK)蛋白磷酸化水平的异同。结果 :TfR和Fcα/μRmRNA在原代培养的HMC均有表达 ,在HMCL未见表达。aIgA1与HMCL之间的结合具有特异性和饱和性 ,最高结合量为 (496 . 7± 2 0 0 . 3)fmol/10 5细胞 ,结合位点为 (3. 0± 1. 2 )× 10 6/细胞 ,解离常数Kd值为 (6 . 4± 1. 7)× 10 -7mol/L。IgAN患者aIgA1与正常人aIgA1均呈时间依赖性诱导ERK蛋白磷酸化 ,但IgAN患者aIgA1的作用明显强于正常人aIgA1(P <0. 0 1) ,且持续时间更长 (P <0 . 0 5 )。结论 :HMCL细胞存在特异性IgA1受体 ,但该受体并非TfR和Fcα/μR。

p38MAPK对大鼠肾小球系膜细胞表达PPAR-γ的影响

目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38mitogen-activatedproteinkinase,p38MAPK)和过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(peroxisomeproliferator-activatedreceptors-γ,PPAR-γ)的关系,从而研究p38MAPK和PPAR-γ在糖尿病肾病中的作用机制。方法分别以高葡萄糖、高胰岛素、过氧化氢和糖基化终产物孵育大鼠肾小球系膜细胞系HBZY-1;先分别以p38MAPK特异抑制剂SB203580预处理细胞系HBZY-1,再给予上述4种因素孵育细胞系HBZY-1,观察细胞系HBZY-1p38MAPK和PPAR-γ的表达。结果高葡萄糖、高胰岛素、过氧化氢和糖基化终产物均可独立激活p38MAPK,使其磷酸化表达量增加,PPAR-γ表达明显减少;SB203580预处理后,PPAR-γ表达显著增加。结论在大鼠肾小球系膜细胞,p38MAPK对PPAR-γ具有拮抗作用,表明PPAR-γ的激活可能具有直接的肾脏保护作用。

亚硒酸钠对大鼠肾小球系膜细胞表达VEGF的调控

目的观察亚硒酸钠对大鼠肾小球系膜细胞系HBZY-1表达血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的影响,从而研究硒在防治糖尿病肾病中的作用机制。方法分别以高葡萄糖、高胰岛素、过氧化氢和糖基化终产物孵育细胞系HBZY-1;先给予亚硒酸钠预处理细胞后,再分别给予上述4种因素孵育细胞系HBZY-1,观察细胞系HBZY-1 VEGF蛋白表达。结果4种刺激因素均可作为独立因素,导致细胞系HBZY-1 VEGF蛋白表达量增加;亚硒酸钠能抑制上述4种因素所致的VEGF蛋白表达。结论亚硒酸钠通过抑制VEGF在细胞系HBZY-1中的表达,从而有效地防治糖尿病肾病的发生发展。

硒对人肾小球系膜细胞硒蛋白表达的影响

目的体外模拟低硒(Se)条件,检测Se对人肾小球系膜细胞硒蛋白的表达影响。方法低硒条件(0.5%胎牛血清)处理人肾小球系膜细胞系(HMCs)5 d,紧接着以不同浓度(0、10 nM、25 nM、50 nM、100 nM、250 nM)亚硒酸钠刺激细胞不同时间(0 h、1 h、3 h、6 h、12 h、24 h),建立HMCs低硒及补硒细胞模型。低硒培养HMCs 0~9 d,使用细胞谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒检测细胞谷胱甘肽过氧化物酶活性。RT-PCR法检测标准培养条件下HMCs25种硒蛋白表达谱。实时定量PCR法及western-blotting法检测补硒实验中硒蛋白表达变化。结果人体25种硒蛋白中的21种可被检测到,仅有4种硒蛋白(GpX2,GpX3,GpX6和DIO1)的表达未达到可被检测到的水平。低硒培养条件下,9种硒蛋白的表达显著下调,包括:GpX1、TrxR2、DIO2、DIO3、SelH、SelN、SelR、SelT、SelW。其中,GpX1、SelN、SelW的表达对浓度梯度和时间梯度的补硒敏感。结论 HMCs的硒蛋白GpX1、SelN、SelW的表达受浓度梯度和时间梯度补硒的影响。进一步的研究需要集中在Se对硒蛋白表达的调控和其在CKD进展中的作用上。

C肽对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响

目的:探讨C肽对体外高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞系HBZY-1生长的影响。方法:对照组仅含低糖MEM培养液;实验组:高糖MEM培养液含不同浓度的C肽,分别培养24h,48h,72h,用四甲基偶氮唑盐光吸收法(MTT)检测细胞系HBZY-1的增殖情况。结果:高糖诱导大鼠系膜细胞系HBZY-1的增殖;不同浓度的C肽对高糖诱导的细胞系HBZY-1增殖影响程度不同。10,50,300nmol/LC肽作用24h可明显抑制细胞增殖(P<0.05),而0.5,900nmol/L作用不显著。结论:C肽可抑制高糖诱导的大鼠系膜细胞系HBZY-1的增殖;呈时间、剂量依赖效应。C肽可能对糖尿病肾病的防治起到有益的作用。