乳腺癌组织中紧密连接蛋白CLDN6、基质金属蛋白酶2和Snail的表达及临床意义

目的分析乳腺癌组织及癌旁正常乳腺组织Claudin6、MMP2及Snail的蛋白水平,三者在乳腺癌组织中表达的相关性,上述三种蛋白表达与患者病理分期、淋巴结转移、肿瘤大小和年龄的相关性。方法选取2021年8月—2022年7月本院病理中心的38例乳腺癌和24例癌旁正常乳腺组织标本,采用免疫组化Sp法进行实验研究,检测Claudin6、MMP2及Snail的表达情况;分析乳腺癌组织上述三种蛋白表达及其与临床病理特征的相关性。结果癌组织中Claudin6阳性率较正常组织低,差异显著(P<0.01);癌组织中MMP2和Snail阳性表达率较正常组织高,差异具有统计学意义(P<0.05)。癌组织中Claudin6与MMP2表达呈负相关(P<0.01),Claudin6与Snai表达呈负相关(P<0.001),MMP2与Snail表达呈正相关(P≤0.001)。Claudin6、MMP2和Snail的表达水平与病理分期、肿瘤大小和患者年龄均不相关(P>0.05);淋巴结转移病例Claudin6阳性率显著低于无淋巴结转移病例(P<0.01);相反,淋巴结转移病例MMP2和Snail阳性率明显高于无淋巴结转移病例(P<0.05)。结论Claudin6蛋白在乳腺癌组织中低表达、MMp2及Snail蛋白在乳腺癌组织中高表达,在乳腺癌组织中Claudin6与MMP2蛋白、Claudin6与Snail蛋白表达均呈负相关;MMP2和Snail蛋白表达呈正相关。淋巴结转移病例CLDN6阳性率显著低于无淋巴结转移病例;淋巴结转移病例MMP2和Snail阳性率高于无淋巴结转移病例;推测紧密连接蛋白6可能通过阻断Snail/MMP2信号轴,抑制乳腺癌的上皮间质转化和转移。

紧密蛋白6在不同肿瘤中的表达与其相关机制

紧密连接(TJs) 是上皮细胞和内皮细胞之间重要的结构之一,它在不同细胞及组织间建立屏障以调节分子和离子的通过。TJs 由 40 多种蛋白质组成:跨膜蛋白和细胞质肌动蛋白结合蛋白。跨膜蛋白主要维持细胞之间稳定,构成了TJs的门和栅栏功能。跨膜蛋白包括 Claudins (CLDNs)、occludins和连接黏附分子,紧密蛋白6(Claudin 6) 是 CLDNs 家族中的成员之一,而Claudin 6在屏障的形成中起关键作用,参与维持着TJs结构和功能的稳定性。近年来,Claudin 6在恶性肿瘤中的作用得到了关注和研究。其表达可能与多种癌症的发生和发展有联系。本文对Claudin 6在不同肿瘤的表达及其与肿瘤发生、发展相关机制进行阐述。

子宫内膜癌组织中紧密连接蛋白6、紧密连接蛋白9的表达及临床意义

目的分析子宫内膜癌(EC)患者癌组织中紧密连接蛋白6(CLDN6)、紧密连接蛋白9(CLDN9)的表达水平及临床意义。方法选取2016年6月至2018年7月于青岛大学附属青岛市中心医院行手术治疗的68例EC患者作为研究对象,术中取其癌组织及癌旁组织,另将同期57例因宫颈病变切除全子宫、全子宫加双附件的患者的正常子宫内膜组织作为对照。检测不同组织中CLDN6、CLDN9蛋白表达情况,分析CLDN6、CLDN9表达与患者临床病理特征及预后的关系,并采用Ualcan数据库分析EC组织中CLDN6、CLDN9 mRNA表达情况及二者水平对患者预后的影响。结果CLDN6、CLDN9高表达患者的生存率均低于CLDN6、CLDN9低表达患者(P<0.05);癌组织中CLDN6、CLDN9蛋白阳性率均高于癌旁组织及正常子宫内膜组织(P<0.05),CLDN6、CLDN9蛋白水平与国际妇产科联盟(FIGO)分期、病理分级及淋巴结转移有关(P<0.05),CLDN6、CLDN9阳性患者3年生存率均低于CLDN6、CLDN9阴性患者(P<0.05)。结论CLDN6、CLDN9在EC患者癌组织中呈高表达,二者水平可预测患者预后情况。

CDC25C蛋白和CLDN6蛋白在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的:研究肝细胞癌(hepatic cell carcinoma,HCC)组织中细胞分裂周期蛋白25同源蛋白C(cell division cyclin 25 homolog C,CDC25C)与紧密连接蛋白Claudin-6(CLDN6)的表达情况,探讨其与HCC的发生、发展、预后的关系。方法:应用免疫组织化学SABC法检测58例HCC、24例癌旁组织和18例正常肝脏组织中CDC25C和CLDN6的表达情况,并分析两者与临床病理特征和术后无瘤生存期的关系。结果:CDC25C在HCC组织、癌旁组织、正常肝脏组织表达阳性率分别为86.2%、45.8%、11.1%,表达差异均有统计学意义(P<0.05)。CDC25C在HCC组织中的表达与乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、肿瘤直径大小和肿瘤分化程度有关(P<0.05)。CLDN6在HCC组织、癌旁组织、正常肝脏组织表达阳性率分别为77.6%、41.7%、16.7%,表达差异均有统计学意义(P<0.05)。CLDN6在HCC组织中的表达与肿瘤直径大小有关(P<0.05)。HCC中CDC25C阳性组及CDC25C阴性组的中位无瘤生存时间分别为12个月和15个月,差异有统计学意义(P<0.05)。CLDN6阳性组及CLDN6阴性组中位无瘤生存时间分别为12个月和14个月,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:CDC25C和CLDN6可能在肝细胞癌的发生、发展及复发过程中起重要作用,有望成为肝癌诊断及预测预后的重要指标。

CLDN6在子宫内膜癌组织中的表达及其与预后、免疫浸润的关系

目的基于TCGA数据库探讨紧密连接蛋白Claudin-6(CLDN6)mRNA在子宫内膜癌中的表达水平及其与预后、免疫浸润的关系。方法下载TCGA数据库中子宫内膜癌数据集,分析CLDN6 mRNA在子宫内膜癌中的表达,探讨子宫内膜癌患者CLDN6 mRNA高表达组和低表达组中位生存时间的差异,子宫内膜癌预后的危险因素采用Cox回归分析,子宫内膜癌组织中CLDN6 mRNA表达与免疫细胞浸润程度的相关性采用Spearman法分析,探讨子宫内膜癌组织中与CLDN6的共表达基因,并进行GO、KEGG富集分析。收集2021年1月至6月就诊于新乡医学院第一附属医院妇产科的20例子宫内膜癌患者的组织,采用免疫组化法验证癌组织及癌旁组织中CLDN6的表达。结果子宫内膜癌组织中CLDN6 mRNA表达水平为1.015(0.276,4.479),正常组织中CLDN6 mRNA表达水平为0.303(0.149,0.613),子宫内膜癌组织中CLDN6 mRNA表达上调(P<0.001)。CLDN6 mRNA低表达组和高表达组中位生存时间为3349 d和2614 d,与CLDN6 mRNA低表达组相比,CLDN6 mRNA高表达组中位生存时间显著缩短(P<0.001)。Cox回归分析证实,残留肿瘤分期R1&R2、组织学分级G3及CLDN6高表达是影响子宫内膜癌患者预后的影响因素。子宫内膜癌组织中CLDN6 mRNA表达与巨噬细胞等浸润程度呈显著正相关(P<0.05),与辅助性T细胞17(Th17)、中性粒细胞、调节性T细胞(Treg)等浸润程度呈显著负相关(P<0.05)。子宫内膜癌中与CLDN6存在显著相关的共表达基因有48个,共表达基因富集的分子功能主要为转录调节,KEGG信号通路主要为Hippo信号通路及分子黏附等。20例子宫内膜癌组织及配对的癌旁组织中,CLDN6在子宫内膜癌组织中高表达11例,中等表达6例,低表达3例,癌旁组织中CLDN6均无表达。CLDN6在子宫内膜癌中主要表达于细胞胞浆中。结论CLDN6高表达与子宫内膜癌不良预后有关,可能通过调控Hippo信号通路促进子宫内膜癌的发生发展。

槲皮素通过调控CLDN6基因表达量对子宫内膜异位症细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制研究

目的探讨槲皮素(Que)对紧密连接蛋白6(CLDN6)的表达及子宫内膜异位症细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并初步分析其可能作用机制。方法选取40例子宫内膜异位症患者为研究对象,活检时切取异位子宫内膜组织,分离与培养异位子宫内膜间质细胞(EcSCs)。以不同浓度(0、12.5、25、50μmol/L)Que干预EcSCs,通过MTT法检测不同浓度Que对EcSCs细胞增殖的影响,Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)与CLDN6蛋白表达。应用Transwell迁移及侵袭实验检测细胞迁移及侵袭情况。EcSCs中转染阴性对照(si-control)、si-CLDN6,并分析沉默CLDN6表达对EcSCs细胞增殖、迁移和侵袭的影响。后续实验分为4组:NC组、Que组、Que+pcDNA组、Que+pcDNA-CLDN6组,MTT与Transwell迁移及侵袭实验分别检测各组EcSCs增殖、迁移及侵袭能力,Western blot法检测PCNA、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9、上皮-间质转化(EMT)及整合素连接激酶(ILK)信号通路相关蛋白表达。结果 Que干预后EcSCs增殖、迁移及侵袭能力受到抑制,且呈剂量依赖性,可抑制CLDN6、PCNA、MMP-2、MMP-9蛋白表达;沉默CLDN6表达后能够抑制EcSCs增殖、迁移及侵袭能力;Que可抑制神经型钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、ILK、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)蛋白表达,促进E-cadherin蛋白表达,但转染CLDN6过表达载体后可逆转Que对EcSCs增殖、迁移及侵袭的抑制作用。结论 Que可通过抑制CLDN6表达而抑制子宫内膜异位症细胞增殖、迁移及侵袭,其可能作用机制为抑制ILK信号通路活化及EMT转换进程。

CLDN6对胰腺癌细胞增殖的影响及其在胰腺癌组织中的表达和临床意义

目的分析紧密连接蛋白6(CLDN6)在人胰腺癌组织中的表达及其与胰腺癌患者临床病理特征的关系,探究其对人胰腺癌细胞增殖及相关上皮细胞-间充质转化(EMT)蛋白表达的影响。方法选取2014年1月至2018年6月在郑州大学附属洛阳中心医院行手术切除的50例胰腺癌组织及癌旁组织,免疫组织化学法及qRT-PCR法检测50例胰腺癌组织及对应癌旁组织中CLDN6的表达情况,分析其与患者临床病理特征及预后的相关性;qRT-PCR法检测胰腺癌细胞株(AsPC-1、BxPC-3、Capan-1、PANC-1、HPAC、Hs 766T、MIA Paca-2)及正常胰腺导管上皮细胞株HPDE中CLDN6的表达。胰腺癌细胞株脂质体转染CLDN6 siRNA沉默基因,qRT-PCR检测转染情况;MTT法、平板克隆实验检测各胰腺癌细胞增殖及克隆形成能力;Western blotting检测上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)、波形纤维蛋白(VIM)及纤维连接蛋白(FN)的表达水平。结果胰腺癌组织中CLDN6表达水平为(19.44±1.22),明显高于癌旁组织的(1.35±0.71),差异有统计学意义(P=0.001),其表达水平与患者年龄、性别、肿瘤大小、病理学类型、肿瘤部位及CA19-9水平无关(P>0.05),而与TNM分期、肿瘤分化程度及淋巴结转移有关(P<0.05)。CLDN6阳性表达胰腺癌患者的中位生存期为8.993个月,短于阴性表达者的18.402个月,差异有统计学意义(P<0.05)。各胰腺癌细胞株中CLDN6表达量均高于HPDE细胞株(均P<0.05),成功构建沉默CLDN6的胰腺癌细胞AsPC-1-si-CLDN6、BxPC-3-si-CLDN6,转染CLDN6 siRNA沉默质粒的AsPC-1及BxPC-3细胞的增殖能力及克隆形成能力较转染前明显降低,E-cadherin表达明显增高,而N-cadherin、VIM及FN表达明显降低(均P<0.05)。结论CLDN6在胰腺癌中高表达,且与患者临床特征及预后相关,其可促进人胰腺癌细胞增殖及克隆形成,机制可能与其促进上皮细胞-间充质转化有关。

紧密连接蛋白-6基因对结肠癌小鼠模型肿瘤生长影响及其表达水平

目的观察紧密连接蛋白(claudin)-6基因对结肠癌小鼠模型肿瘤生长的影响。方法将40只雄性C57BL/6小鼠(购自西安交通大学实验动物中心)分采用随机对照组原则分为对照组(10只)和模型组(30只),模型组通过腹腔注射氧化偶氮甲烷(AOM)的方式诱导结肠癌模型,将建模成功的小鼠随机分为两组,即模型组(10只)和claudin-6组(10只)。其中claudin-6尾静脉注射claudin-6过表达质粒,每周1次,连续4周。模型组注射等量的阴性对照(NC)质粒,对照组腹腔注射等剂量的生理盐水。干预后将小鼠拉颈处死取出结肠癌组织和正常结肠癌组织,分别检测瘤体的体积和质量。采用苏木精-伊红(HE)染色检测建立模型,采用免疫组织化学染色检测组织中claudin-6蛋白的表达,采用定量聚合酶链反应(qPCR)检测claudin-6 mRNA的水平,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测claudin-6蛋白表达水平,采用微血管密度(MVD)检测结肠癌组织为血管生成。采用单因素方差分析(ANOVA)以评估组间差异,两两分析采用t检验。结果干预后claudin-6组的肿瘤体积和质量分别为(0.63±0.18)cm3和(0.57±0.15)g,均显著降低并低于对照组的(1.61±0.29)cm3和(1.46±0.34)g(t=6.754、8.695,P<0.05),差异有统计学意义。干预后模型组结肠癌组织中mRNA(1.98±0.21)和claudin-6蛋白(1.27±0.17)水平显著低于对照组(5.68±0.46和3.95±0.31,t=12.357、15.674,P<0.05),claudin-6组的mRNA(3.58±0.32)和claudin-6蛋白(2.46±0.27)水平显著高于模型组(1.98±0.21和1.27±0.17,t=5.647、6.358,P<0.05)。模型组的MVD水平(27.64±5.32)显著高于对照组(7.43±1.74,t=4.847,P<0.05),claudin-6组MVD水平(16.99±4.14)显著高于对照组(7.43±1.74,t=8.472,P<0.05),差异均有统计学意义。结论过表达claudin-6具有抑制结肠癌生长和血管生成的作用,提示claudin-6在结肠癌中的抑癌作用。