HIV-1 Tat对小鼠脑微血管紧密连接蛋白claudin 5及Aβ转运蛋白的作用研究

目的:探讨HIV-1反式转录激活因子(HIV-1 Tat)诱导小鼠脑微血管紧密连接蛋白整合膜蛋白5(claudin 5)及β淀粉样蛋白(Aβ)转运蛋白低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP-1)、晚期糖基化终产物受体(RAGE)的表达变化及其相互关系。方法:将18只8周龄C57BL/6小鼠随机分成对照组和HIV-1 Tat组,每组9只。对照组静脉注射100μL生理盐水;HIV-1 Tat组静脉注射HIV-1 Tat(100μg/kg)100μL。组织匀浆法测定脑内伊文思蓝(EB)的泄漏量,行蛋白免疫印迹法(WB)及实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测小鼠脑微血管claudin 5、LRP-1和RAGE蛋白及mRNA表达。结果:与对照组相比,HIV-1 Tat组小鼠脑EB泄漏量显著增加(P<0.05);小鼠脑微血管claudin 5、LRP-1蛋白和mRNA水平显著下调(P<0.05),RAGE蛋白和mRNA水平上调(P<0.05);claudin 5与LRP-1蛋白水平呈正相关关系(r=0.886,P<0.05),而与RAGE蛋白水平呈负相关关系(r=-0.943,P<0.05)。结论:HIV-1 Tat通过下调claudin 5表达增加BBB通透性,而通过下调LRP-1表达减少Aβ从脑内向血液中转运及上调RAGE表达增加Aβ脑内转运。

乳腺癌中Tspan8、ITGA5表达情况与临床病理特征及预后的关系

目的探讨乳腺癌中四跨膜蛋白8(Tspan8)、整合素α5(ITGA5)的表达与临床病理特征及预后的关系。方法将2018年4月至2020年4月该院收治的136例乳腺癌患者纳入研究。收集患者乳腺癌组织标本及对应的癌旁组织标本。采用免疫组化法检测Tspan8、ITGA5在乳腺癌组织及对应癌旁组织中的表达情况,分析Tspan8、ITGA5表达情况与乳腺癌患者临床病理特征的关系。对出院的乳腺癌患者行连续36个月的随访,记录患者生存状况,比较不同临床病理特征乳腺癌患者的3年生存率。采用多因素Cox回归分析乳腺癌患者腋窝淋巴结转移的影响因素。结果乳腺癌组织的Tspan8、ITGA5阳性表达率高于癌旁组织(P<0.05)。低分化、肿瘤最大径≥3 cm、TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期、有腋窝淋巴结转移、其他分子分型的乳腺癌患者Tspan8、ITGA5阳性表达率高于中/高分化、肿瘤最大径<3 cm、TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期、无腋窝淋巴结转移、三阴性分型的乳腺癌患者(P<0.05)。Tspan8、ITGA5阳性表达患者的3年生存率分别低于Tspan8、ITGA5阴性表达患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。低分化、TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期、有腋窝淋巴结转移、其他分子分型及Tspan8、ITGA5阳性表达患者的3年生存率低于中/高分化、TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期、无腋窝淋巴结转移、三阴性分型及Tspan8、ITGA5阴性表达患者(P<0.05)。TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期(HR=2.289,95%CI:1.519~3.447)、其他分子分型(HR=2.622,95%CI:1.744~3.942)及Tspan8阳性表达(HR=3.622,95%CI:2.159~6.077)、ITGA5阳性表达(HR=3.142,95%CI:2.022~4.884)均为乳腺癌患者腋窝淋巴结转移的危险因素(P<0.05)。结论Tspan8、ITGA5在乳腺癌患者中呈高表达,均与患者临床病理特征及预后有关。

金黄色葡萄球菌和纤维连接蛋白结合蛋白A对血管内皮细胞紧密连接的破坏作用

目的观察金黄色葡萄球菌和纤维连接蛋白结合蛋白A基因(fnBA)敲除金黄色葡萄球菌菌株对人微血管内皮细胞(HMEC-1)紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-5的影响,并探讨金黄色葡萄球菌侵袭血管内皮细胞的机制。方法将野生金黄色葡萄球菌菌株NCTC8325与HMEC-1按100︰1比例共培养,实时定量RT-PCR检测共培养30 min、60 min和120 min时HMEC-1紧密连接成份ZO-1和Claudin-5 mRNA的表达,同时应用Western blot分析和免疫组织化学染色观察共培养不同时间紧密连接蛋白ZO-1和Claudin-5的表达。构建fnBA基因敲除突变菌株NCTC8325ΔfnbA,以野生金黄色葡萄球菌菌株NCTC8325为阳性对照,观察突变株NCTC8325ΔfnbA与HMEC-1共培养120 min后紧密连接蛋白ZO-1和Claudin-5的变化。结果金黄色葡萄球菌NCTC8325与HMEC-1共培养30 min、60 min和120 min后紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-5 mRNA的表达在30 min、120 min时较对照组显著下降[30 min时与对照组比较:ZO-1:t=4.104、P=0.015,Claudin-5 mRNA:t=2.802、P=0.049;120 min时与对照组比较:ZO-1:t=3.478、P=0.025,Claudin-5 mRNA:t=1.802、P=0.261],但60 min时ZO-1、Claudin-5 mRNA的表达有一过性升高。与金黄色葡萄球菌NCTC8325共培养后,免疫组织化学结果发现在30 min时ZO-1和Claudin-5两种紧密连接蛋白较对照组表达显著下降(t=33.6、59.03,P均<0.001),120 min时ZO-1和Claudin-5两种紧密连接蛋白较对照组表达亦显著下降(t=31.8、60.75,P均<0.001);Western blot与免疫组组织化学结果一致。与突变菌株NCTC8325ΔfnbA共培养30 min、60 min和120 min后,在30 min和60 min时ZO-1、Claudin-5蛋白的表达与NCTC8325组差异无统计学意义(P均>0.05),在120 min时ZO-1和Claudin-5蛋白的表达较NCTC8325组显著升高,差异均有统计学意义(ZO-1:t=14.89、P<0.001,Claudin-5:t=7.008、P=0.002)。结论金黄色葡萄球菌能通过下调紧密连接蛋白破坏HMEC-1紧密连接屏障,且其表面蛋白FnBPA发挥了重要作用。

SMIM22、miR-150-5p在子宫内膜癌组织中的表达及与预后的关系

目的研究小整合膜蛋白22(SMIM22)、微小RNA-150-5p(miR-150-5p)在子宫内膜癌组织中的表达,及其与患者临床特征和预后的关系。方法收集2017年1月至2018年5月在本院行手术治疗的子宫内膜癌患者98例基本资料为研究对象,分别检测癌组织和癌旁组织中miR-150-5p、SMIM22的表达情况;分析二者与子宫内膜癌患者临床特征的关系以及对患者3年累积生存率的影响。结果癌组织中SMIM22阳性表达率高于癌旁组织(P<0.05);miR-150-5p低于癌旁组织(P<0.05);SMIM22、miR-150-5p表达水平均与患者FIGO分期、淋巴结转移、脉管浸润有关(P<0.05);子宫内膜癌组织中SMIM22高表达组3年累积生存率为33.33%,低于低表达组患者81.58%(χ^(2)=18.845,P=0.000);miR-150-5p高表达组3年累积生存率为71.43%,高于低表达组患者(44.29%)(χ^(2)=6.844,P=0.009);Cox回归分析得出SMIM22、脉管浸润及FIGO分期是影响子宫内膜癌患者预后的主要因素(P<0.05)。结论子宫内膜癌组织中SMIM22表达水平较高,miR-150-5p表达水平较低,二者均与患者临床病理特征和3年累积生存率有关。