紧密连接蛋白-1、3、4在乳腺癌患者中的表达及其临床意义

目的探讨紧密连接蛋白(claudin)-1、3、4在乳腺癌患者中的表达及其临床意义。方法收集2013年5月—2014年4月首都医科大学附属北京潞河医院病理科标本,其中乳腺癌组织和对应的癌旁正常乳腺组织均81例,分析claudin-1、3、4与乳腺癌患者年龄、部位、大小、激素受体状态、Ki67增殖活性、淋巴结转移、脉管侵犯及临床分期的关系。结果 claudin-1、3、4在癌组织中的阳性表达均低于癌旁正常组织,claudin-1在癌组织的表达(79.0%)与癌旁组织的表达(84.0%)比较差异无统计学意义(χ~2=0.655,P>0.05)。claudin-3、4在癌组织中的表达(54.3%、77.8%)与癌旁组织中的表达(85.2%、92.6%)比较差异均有统计学意义(χ~2=18.290、7.043,P<0.01);claudin-3、4在淋巴结转移组的表达(82.8%、93.1%)高于淋巴结无转移组的表达(42.3%、61.5%),二者比较差异有统计学意义(χ~2=0.365、0.322,P<0.05);claudin-3在临床分期亚组的表达(16.7%)与Ⅱ/Ⅲ亚组中的表达(44.4%)比较差异有统计学意义(χ~2=0.284,P<0.05);claudin-1的表达在不同临床病理因素间差异无统计学意义。结论 claudin-3、4蛋白在乳腺癌的发生、浸润、转移过程中发挥重要作用,可以作为癌瘤发生、发展及评估预后的生物学标记物。

紧密连接蛋白-1介导E-cadherin促进前列腺癌发生进展机制研究

目的:探讨紧密连接蛋白(Claudin)-1和E-钙黏蛋白(E-cadherin)在前列腺癌组织中的表达及其在前列腺癌中的作用机制。方法:应用免疫组织化学SP法检测72例前列腺癌组织和42例前列腺增生组织中Claudin-1和E-cadherin的表达状况,研究二者的表达状况与前列腺癌临床病理特征之间的关系,分析二者在前列腺癌中表达的相关性。结果:Claudin-1在前列腺癌组织中表达阳性率为63.89%(46/72),显著高于前列腺增生组织的33.33%(14/42),E-cadherin在前列腺癌中表达率为13.89%(10/72),低于在前列腺增生中E-cadherin的表达率90.48%(38/42),差异有统计学意义(均P<0.01)。Claudin-1和E-cadherin蛋白表达与前列腺癌Gleason评分、临床分期有关(P<0.05),与PSA增高无关(P>0.05)。Spearman相关分析显示Claudin-1和E-cadherin表达呈负相关(r=–0.68)。结论:Claudin-1和E-cadherin在前列腺癌中异常表达,它们的异常表达可能共同参与了前列腺癌的发生、进展,联合检测它们有望提高对前列腺癌预后的评估。

甲状腺乳头状癌中紧密连接蛋白-1的表达与临床意义

目的探讨甲状腺乳头状癌(PTC)组织中紧密连接蛋白-1(Claudin-1)的表达与临床意义。方法收集2017年1月至2019年10月平顶山市第一人民医院和中国人民解放军联勤保障部队第九八九医院平顶山医疗区甲状腺手术存档标本共计271例。采用免疫组化EliVision两步法检测116例PTC、145例甲状腺良性病变(BTL)和10例甲状腺滤泡癌中Claudin-1的表达状况,并分析其表达与PTC病人临床病理特征之间的关系。结果在116例PTC中Claudin-1高表达率为97.4%;在145例BTL中高表达率为11.7%;在10例滤泡癌中高表达率为10.0%。此外,Claudin-1在16例有PTC转移的淋巴结中全部高表达(100%),并且与甲状腺内原发癌灶的表达一致;在40例肿瘤周围的正常甲状腺组织中全部不表达。Claudin-1表达在PTC与BTL(χ^(2)=189.282)、PTC与滤泡癌的比较(χ^(2)=71.810),均差异有统计学意义(均P<0.001)。Claudin-1的表达与病人性别、年龄、癌结节长径与数目、淋巴结转移及TNM分期无关(P>0.05)。Claudin-1诊断PTC的灵敏度为97.4%,Claudin-1在PTC分别与BTL和滤泡癌的鉴别诊断中的特异度为88.3%和90.0%。结论Claudin-1有助于PTC分别与BTL和滤泡癌的鉴别诊断;Claudin-1的高表达可能是PTC肿瘤细胞黏附性强的关键因素。

紧密连接蛋白-1在下咽鳞状细胞癌组织中的表达及临床意义

目的研究紧密连接蛋白-1(zonulaoccluden-1,ZO-1)在下咽鳞状细胞癌(hypopharyngeal squamous cell carcinoma,HSCC)组织中的表达及临床意义。方法取HSCC组织标本52例,采用组织芯片免疫组织化学SP法检测其组织芯片中ZO-1蛋白的表达水平,结合随访资料,分析ZO-1表达与临床病理特征及患者预后的关系。结果 ZO-1蛋白在HSCC组织中的表达低于癌旁组织,且其表达水平与肿瘤的分化程度、T分级、肿瘤位置及淋巴转移密切相关。Log-rank单因素分析结果显示肿瘤分化程度、T分级、淋巴结转移、肿瘤位置与HSCC患者的生存预后相关,ZO-1表达水平低的患者生存率低于ZO-1表达水平高的患者。Cox风险回归模型的多因素分析显示肿瘤的分化程度、淋巴结转移、ZO-1表达水平及T分级均是HSCC患者预后不良的独立预后影响因素。结论 ZO-1可能成为HSCC预后的一个独立影响因素,其低表达与HSCC的发生发展密切相关。

血清半乳糖血凝素-1、紧密连接蛋白-1对甲状腺癌病情评估的价值

目的探讨甲状腺癌患者血清中半乳糖血凝素-1(Gal-1)、紧密连接蛋白-1(Cla-1)水平测定对甲状腺肿瘤病情评估的价值。方法收集该院收治的甲状腺肿瘤患者104例,其中甲状腺乳头癌32例,甲状腺滤泡癌18例,甲状腺腺瘤54例;另选取20例甲状腺功能各指标、甲状腺彩超均正常的志愿者作为对照组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清Gal-1、Cla-1水平,采用qRT-PCR和Westernbolt检测组织Gal-1、Cla-1mRNA和蛋白表达情况,qRT-PCR检测肿瘤组织细胞增殖促进基因、肿瘤侵袭基因mRNA的表达量。采用Pearson相关分析甲状腺癌患者血清Gal-1和Cla-1与细胞增殖、肿瘤侵袭基因mRNA表达的相关关系。结果4组研究对象性别差异有统计学意义(P<0.05),4组血清Gal-1、Cla-1水平差异均有统计学意义(P<0.05),其中甲状腺乳头癌组血清Gal-1和Cla-1水平均高于其余3组;甲状腺滤泡癌组血清Gal-1和Cla-1水平均高于甲状腺腺瘤组和对照组,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,甲状腺腺瘤组Gal-1水平显著升高(P<0.05)。与对照组相比,甲状腺乳头癌组、甲状腺滤泡癌组、甲状腺腺瘤组的组织中Gal-1、Cla-1mRNA和蛋白表达量均显著降低(P<0.05)。甲状腺癌患者肿瘤组织细胞增殖促进基因EDAG-1和SurvivinmRNA表达量均高于对照组,CCNG2mRNA表达量均低于对照组(P<0.05);肿瘤侵袭基因STAT3和FAKmRNA表达量高于对照组,Beclin-1mRNA表达量均低于对照组(P<0.05)。血清Gal-1与EDAG-1、Survivin、FAK呈明显正相关关系,血清Cla-1与Survivin、STAT3、FAK呈明显正相关关系;两者均与CCNG2、Beclin-1呈负相关关系。结论Gal-1、Cla-1有望成为血清标志物,为甲状腺癌早期诊断和筛查提供依据。

非小细胞肺癌患者紧密连接蛋白-1基因启动子甲基化分析及其临床意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者中紧密连接蛋白-1(ZO-1)基因甲基化检测的临床意义。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应MS-PCR检测101例NSCLC患者癌组织及癌旁组织ZO-1基因启动子甲基化状态,以61例肺部良性病变患者作为对照,并用实时荧光定量PCR和Western blotting分别检测63例甲基化阳性组和200例阴性组中的mRNA和蛋白表达。结果 ZO-1 mRNA和蛋白在启动子甲基化阳性和阴性组中的差异有显著统计学意义(t=-26.028,P<0.01;t=-37.216,P<0.01)。ZO-1启动子甲基化在癌组织(32.7%,33/101)和正常组织中(11.5%,7/61)的差异有显著统计学意义(χ2=9.190,P<0.01)。癌旁组织ZO-1启动子甲基化在淋巴结转移组(35.5%,11/31)和未转移组中(17.1%,12/70)中的差异有显著统计学意义(χ2=4.110,P<0.05),癌组织ZO-1启动子甲基化在2年生存组(27.5%,14/51)和2年死亡组(43.2%,19/44)中的显著差异有统计学意义(χ2=4.150,P<0.05)。结论 ZO-1启动子甲基化影响了其mRNA转录和蛋白的表达,癌旁组织和癌组织ZO-1启动子甲基化分别可能作为NSCLC患者淋巴结转移和2年内生存的预测因子。

重症急性胰腺炎大鼠紧密连接蛋白-1的表达与肠黏膜屏障损伤

目的研究紧密连接蛋白-1(ZO-1)在重症急性胰腺炎(SAP)大鼠回肠组织中的表达情况,初步探讨SAP时肠黏膜屏障损伤的可能机理。方法 SD雄性大鼠50只,按完全随机法分为假手术组和SAP组,SAP组按取材时间不同又分为3、6、12及24 h 4个亚组,每组10只。SAP组采用Aho法逆行穿刺胆胰管注射5%牛磺脱氧胆酸钠建立SAP模型,分别于造模后第3、6、12及24 h处死大鼠,假手术组直接处死。建模成功后检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平及二胺氧化酶(DAO)活性,同时观察胰腺和回肠组织的病理改变,分别用免疫组织化学蛋白定位及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测回肠组织中ZO-1蛋白和mRNA表达水平。结果与假手术组〔TNF-:α(10.83±0.96)ng/L;DAO:(354.79±3.67)U/L;ZO-1蛋白:(10.40±0.45)分;ZO-1 mRNA:0.878±0.014 8〕相比较,SAP组制模后不同时相大鼠血清中TNF-α水平〔3 h:(125.30±0.94)ng/L;6 h:(181.89±4.93)ng/L;12 h:(230.58±1.28)ng/L;24 h:(198.89±4.83)ng/L〕明显升高(P<0.05),血浆中DAO活性〔3 h:(235.77±0.67)U/L;6 h:(117.22±5.58)U/L;12 h:(106.69±1.39)U/L;24 h:(91.18±1.09)U/L〕明显降低(P<0.05);回肠组织中ZO-1蛋白〔3 h:(8.70±0.22)分;6 h:(3.73±0.19)分;12 h:(3.92±0.22)分;24 h:(4.29±0.30)分〕和mRNA(3 h:0.806±0.020 7;6 h:0.370±0.015 8;12 h:0.502±0.019 2;24 h:0.562±0.030 3)表达明显下调(P<0.05);同时胰腺组织及回肠黏膜绒毛上皮坏死、血管破裂出血、炎性细胞浸润。结论大鼠回肠组织中ZO-1表达下调是SAP肠黏膜屏障损伤的重要原因之一,可能与炎性细胞因子TNF-α的过度释放及DAO活性降低有关。

紧密连接蛋白-1在蛛网膜下腔出血早期脑损伤中的作用及c-Jun氨基末端激酶对其的调节机制

目的 通过阐明紧密连接蛋白-1（ZO-1）在蛛网膜下腔出血（SAH）早期脑损伤（EBI）中的作用及c-Jun氨基末端激酶（JNK）对其的调节机制,探讨SAH后导致血脑屏障（BBB）结构和功能破坏的分子机制.方法 72只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为Sham组（枕大池注生理盐水）、SAH组（枕大池注血建立大鼠实验性SAH模型）、SAH＋SP600125组（SAH模型建立前枕大池注射JNK抑制剂SP600125）和SAH＋DMSO组（SAH模型建立前枕大池注射DMSO）.采用干湿重法测定各组大鼠脑组织含水量,通过伊文思蓝浓度测定评估各组BBB通透性,并用免疫组织化学染色比较各组ZO-1和JNK表达.结果 SAH组24 h后脑组织含水量明显增加,各脑区伊文思蓝明显外渗,尤其是在脑干和小脑,并出现脑组织结构破坏及神经元损伤,JNK表达的吸光度值明显升高,而ZO-1的表达则明显降低,与Sham组相比差异有统计学意义（P＜0.05）;而SP600125能明显降低脑组织含水量、减轻伊文思蓝外渗、抑制JNK并恢复ZO-1表达,SAH＋SP600125组与SAH组和SAH＋DMSO组之间比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）,与Sham组比较差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 SAH激活JNK信号转导通路,并通过负性调节ZO-1的表达,破坏BBB结构和功能的完整性,促使脑水肿的发生和发展,导致EBI,而SP600125则能逆转上述过程,改善EBI预后.

紧密连接蛋白-1、闭锁蛋白、白细胞介素-18在急性重症心肌炎心脏粘膜中的表达

目的 观察急性重症心肌炎大鼠心脏粘膜紧密连接蛋白（ZO-1）、闭锁蛋白（occludin）及白细胞介素（IL）-18的表达变化,探讨急性重症心肌炎时心脏屏障功能损伤的机制.方法 选择SD大鼠60只,随机分为三组,分别为对照组、假手术组、心肌炎组,每组各20只.心肌炎组制作急性重症心肌炎模型,假手术组大鼠麻醉后手术进腹,仅翻动心脏组织.对照组不进行腹部手术.术后24h处死各组大鼠,取心脏组织.光镜下观察心脏组织病理学改变,免疫组化检测各组心脏粘膜ZO-1、Occludin、IL-18蛋白的表达,实时荧光定量PCR检测各组心脏粘膜ZO-1、Occludin、IL-18 mRNA的表达.结果 光镜下可见心肌炎组心脏黏膜绒毛上皮坏死脱落,血管充血扩张,大量中性粒细胞浸润.对照组、假手术组、心肌炎组ZO-1阳性率分别为85％、70％、15％,心肌炎组ZO-1阳性率低于对照组及假手术组（P＜0.05）.对照组、假手术组、心肌炎组Occludin阳性率分别为75％、65％、20％,心肌炎组Occludin阳性率低于对照组及假手术组（P＜0.05）.对照组、假手术组、心肌炎组IL-18阳性率分别为15％、15％、80％,心肌炎组IL-18阳性率高于对照组及假手术组（P＜0.05）.心肌炎组ZO-1、Occludin mRNA表达水平均低于对照组及假手术组（P＜0.05）;,IL-18高于对照组及假手术组（P＜0.05）.结论 急性重症心肌炎时,紧密连接相关蛋白Z0-1、Occludin表达降低,IL-18表达增加,可能共同参与了急性心肌炎心脏粘膜屏障功能损伤的病理过程.

脾破裂大鼠血清及回肠黏膜组织中紧密连接蛋白Occludin和ZO-1的变化及意义

目的探讨紧密连接蛋白的闭合蛋白(Occludin)和紧密粘连蛋白-1(ZO-1)在不同程度脾破裂大鼠血清及回肠黏膜中的表达及意义。方法将48只健康大鼠随机分成脾破裂轻度组、中度组、重度组和假手术组(Sham组)4组,每组12只,前3组采用开腹手术方式制作不同程度脾破裂大鼠模型,Sham组仅接受开、关腹手术。观测大鼠腹腔内情况;ELISA法检测各组大鼠血清Occludin和ZO-1的含量;HE染色法观察回肠黏膜组织病理学改变;免疫组化染色法检测回肠黏膜组织中Occludin及ZO-1的表达情况[以光密度(OD值)表示]。结果 Sham组腹腔内无渗出及出血;轻度组腹腔内平均约1.6ml积血,脾脏创面少许渗出;中度组腹腔内平均约3.5ml积血,肠管颜色较苍白,脾脏创面渗出较明显;重度组腹腔内平均约4.3ml积血,肠管苍白明显,肠管间部分粘连,脾脏创面渗出明显。病理学检查显示中度组和重度组大鼠的回肠黏膜损伤较Sham组及轻度组明显为重。与Sham组相比,中、重度组血清中Occludin及ZO-1含量、回肠黏膜组织中Occludin及ZO-1的OD值均有所升高或降低(均P<0.05);与轻度组相比,中、重度组血清中Occludin及ZO-1含量、回肠黏膜组织中Occludin及ZO-1的OD值均有所升高或降低(均P<0.05)。结论血清中Occludin及ZO-1含量增高可作为临床上观测脾破裂及肠黏膜损伤程度的一个可靠指标。

HPV16 E6通过影响外泌体中β⁃联蛋白和紧密连接蛋白1表达促进宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭

为探讨人乳头瘤病毒16(human papillomavirus 16,HPV16)E6癌蛋白对宫颈癌细胞的生物学行为及外泌体中β-联蛋白(β-catenin)和紧密连接蛋白(claudin-1)表达的影响,本研究利用RNA干扰技术建立HPV16 E 6敲低细胞模型(shE6组),通过CCK8试剂盒、流式细胞仪、划痕实验和Transwell实验对细胞增殖、细胞周期、迁移和侵袭特征进行检测,发现shE6相对于对照组(NC组),细胞增殖速率减慢、细胞周期阻滞在G_(0)/G_(1)期向S期的过渡阶段,细胞迁移能力显著降低,侵袭能力下降。同时提取细胞上清液中外泌体,利用Western印迹对β-联蛋白和紧密连接蛋白-1表达量进行检测,发现相对于NC组,shE6组细胞内β-联蛋白表达量减少,但外泌体中β-联蛋白量增加,紧密连接蛋白-1在细胞内和外泌体中均增加。上述结果提示,HPV16 E6促进细胞恶性表型可能与E6蛋白能够抑制β-联蛋白以外泌体形式释放,从而增加其在细胞内的积累,以及抑制紧密连接蛋白-1在细胞内和外泌体中的积累有关。

慢性血吸虫病患者结肠腺咬合蛋白与紧密连接蛋白-1的表达变化

目的探讨慢性血吸虫病患者结肠腺咬合蛋白（occludin）与紧密连接蛋白-1（ZO—1）的表达及其临床意义。方法选取50例慢性血吸虫病患者及9例正常结肠黏膜标本，采用免疫组织化学（SABC）染色法，检测occludin与ZO-1在结肠腺上皮细胞的表达情况。结果与对照组比较，慢性血吸虫病组结肠腺结构不完整、腺体萎缩；慢性血吸虫病组结肠腺上皮细胞occludin与ZO-1阳性颗粒平均灰度值（159．26±6．57、166．07±5．44）明显高于对照组（155．53±5．90、162．16±5．14，P〈0．05），阳性单位值（37．27±2．63、34．69±2．19）明显低于对照组（38．85±2．42、36．37±2．11，P〈0．05）；慢性血吸虫病组结肠腺occludin与ZO-1表达量的减少与性别及年龄无关（P〉0．05）。结论血吸虫感染可以损伤结肠腺上皮细胞间的紧密连接蛋白，从而破坏患者结肠黏膜屏障的完整性。

中药清肠栓对溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜紧密连接蛋白ZO-1、occludin的影响

目的:探讨复方中药清肠栓对三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的UC大鼠结肠黏膜上皮紧密连接相关蛋白-1(ZO-1)、闭锁蛋白(occludin)的修复作用.方法:清洁级♂SD大鼠36只,随机分为正常组、模型组、SASP组、清肠栓高、中、低剂量组,每组6只.选用TNBS诱导的UC大鼠模型.采用免疫荧光的方法观察各组大鼠结肠黏膜上皮ZO-1、occludin和F-actin的表达,并运用图像分析软件进行平均光密度测定,考察了中药清肠栓对UC大鼠结肠黏膜上皮屏障的修复作用.结果:UC发病会对结肠紧密连接和细胞骨架系统造成严重的损害,模型组大鼠结肠黏膜上皮ZO-1、occludin几乎完全被破坏,不规则的分散在细胞外围,荧光染色暗淡.图像分析测其平均光密度较正常组明显降低(1.802±1.304vs3.145±0.110;0.568±0.063vs1.538±0.220,均P<0.01).清肠栓能不同程度减轻UC对紧密连接的破坏,使上述两种蛋白表达升高(P<0.01),从而保护肠道屏障功能,抑制结肠通透性的增加.结论:清肠栓能有效地调节肠黏膜屏障功能,有效抑制UC大鼠结肠通透性的升高,改善肠黏膜屏障功能,促进溃疡愈合.

黄连水煎液微粒体系对大鼠小肠上皮细胞紧密连接结构与紧密连接蛋白ZO-1表达的影响

目的观察黄连水煎液微粒体系对大鼠小肠上皮细胞紧密连接结构与紧密连接蛋白-1(zonula occludens-1,ZO-1)表达的影响。方法通过常规煎煮获得黄连水煎液,经高速离心得黄连水煎液微粒及去微粒水煎液。采用大鼠肠循环灌注模型,分别用空白Kreb-Ringers(K-R)液、黄连水煎液、微粒重悬液和去微粒水煎液对大鼠空肠段进行循环灌注。2h后取下肠段,以透射电子显微镜观察细胞紧密连接结构的变化,采用免疫组织化学法检测空肠黏膜中ZO-1的表达水平。结果空白K-R液组与去微粒水煎液组小肠上皮细胞间连接紧密无明显间隙,ZO-1蛋白呈蜂窝或点状聚集于上皮细胞周围;黄连水煎液组与微粒重悬液组小肠上皮细胞间隙增大,且ZO-1表达水平显著降低(P<0.05)。结论黄连汤剂中活性成分肠吸收与黄连水煎液微粒体系调节小肠紧密连接结构和ZO-1表达水平有关。

紧密连接蛋白－1咬合蛋白及白细胞介素－18在急性重症胰腺炎肠黏膜中的表达

目的：观察急性重症胰腺炎（ severe acute pancreatitis ， SAP）肠黏膜紧密连接蛋白－1（ZO－1）、肠上皮咬合蛋白（Occludin）及白细胞介素（IL）－18的表达变化，探讨急性重症胰腺炎时肠道屏障功能损伤的机制。方法选择2012－06-2012－12在我院消化科住院治疗的急性重症胰腺炎患者和急性轻型胰腺炎患者各30例为胰腺炎组。选取正常健康人30例作为对照组。在急性胰腺炎患者置鼻空肠营养管同时，采集距离十二指肠乳头5 cm以上对侧十二指肠黏膜组织。采用免疫组织化学SP法检测肠组织ZO－1、Occludin、IL－18蛋白表达，采用Western blotting法进行肠组织ZO－1、Occludin、IL－18蛋白半定量检测。结果对照组、轻型胰腺炎组、重症胰腺炎ZO－1阳性率分别为56．7％、50．0％、40．0％，轻、重胰腺炎组ZO－1阳性率低于对照组（P＜0．05）。重症胰腺炎组ZO－1阳性率低于轻型胰腺炎组（P＜0畅05）。对照组及轻、重症胰腺炎组Occludin阳性率分别为50．0％、40．0％、33．3％，轻、重症胰腺炎组Occludin阳性率低于对照组（P＜0．05），重症胰腺炎组Occludin阳性率低于轻型胰腺炎组（P＜0．05）。对照组、轻型胰腺炎组、重症胰腺炎组IL－18阳性率分别为10．0％、46．7％、86．7％，轻、重症胰腺炎组IL－18阳性率高于对照组（P＜0．05），重症胰腺炎组IL－18阳性率高于轻型胰腺炎组（P＜0畅05）。结论急性重症胰腺炎时，ZO－1、Occludin表达降低，IL－18表达增高，可能共同参与了急性胰腺炎肠黏膜屏障功能损伤的病理过程。

黄芪提取物对脑微血管内皮细胞咬合蛋白和紧密连接蛋白1的影响

目的观察β-淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)对脑微血管内皮细胞活力、咬合蛋白及紧密连接蛋白1表达的影响。方法将细胞分为对照组、Aβ诱导组及不同剂量黄芪提取物组。采用噻唑蓝法测定细胞活力;蛋白印迹法检测咬合蛋白和紧密连接蛋白1表达;逆转录-集合酶链式反应(RT-PCR)分析咬合蛋白和紧密连接蛋白1 mRNA的表达。结果与对照组比较,Aβ诱导组细胞活力随着孵育天数增加逐渐下降(P<0.05),咬合蛋白和紧密连接蛋白1表达降低(P<0.05),咬合蛋白mRNA和紧密连接蛋白1 mRNA表达降低(P<0.05);与Aβ诱导组比较,黄芪提取物组细胞活力随着孵育天数增加逐渐升高(P<0.05),咬合蛋白和紧密连接蛋白1蛋白表达增加(P<0.05),咬合蛋白mRNA和紧密连接蛋白1 mRNA表达升高(P<0.05)。结论黄芪提取物能改善Aβ1-40损伤的脑部微血管壁内皮细胞活力,升高咬合蛋白和紧密连接蛋白1蛋白及mRNA表达,达到保护血脑屏障的目的。

miR-155调节脓毒症诱导的炎症反应及肠道功能障碍的机制

目的探讨miR-155在脓毒症中的临床价值,以及其在脓毒症引起的炎症反应和肠道功能障碍中的作用。方法采用前瞻性观察性研究方法,收集2021年11月至2023年4月新疆医科大学第一附属医院129例脓毒症患者及129例同期健康体检者外周血样本,绘制受试者工作特征(ROC)曲线并计算曲线下面积(AUC),评价miR-155在脓毒症中的诊断价值。所有脓毒症患者进一步根据病情严重程度分为脓毒症组(n=83)和脓毒性休克组(n=46)。根据欧洲危重症医学会(ESICM)提出的诊断标准,进一步将脓毒症患者分为急性胃肠损伤(AGI)组(n=75)和非AGI组(n=54),比较两组循环miR-155及外周血清二胺氧化酶(DAO)的表达水平。采用盲肠结扎穿孔法(CLP)建立脓毒症大鼠模型,并按照随机数字法将32只大鼠分为假手术(Sham)组、CLP组、miR-155阴性对照组(CLP大鼠术前1个月腹腔注射250μL miR-155腺相关病毒空载体)和miR-155腺相关病毒抑制组(CLP大鼠术前1个月腹腔注射250μL miR-155腺相关敲低病毒),每组8只。于造模后24 h经腹主动脉采血并取大鼠小肠组织,采用苏木素-伊红(HE)染色观察小肠病理学改变并进行肠黏膜损伤评分(Chiu′s评分);采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-155表达水平;采用酶联免疫吸附法检测大鼠血清DAO、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-6(IL-6)水平;采用免疫组化法及蛋白质免疫印迹法检测肠道紧密连接蛋白[紧密连接蛋白-封闭蛋白1(Claudin-1)及闭合蛋白(Occludin)]的表达。结果脓毒症患者外周血miR-155表达量较健康体检者明显升高,且脓毒性休克患者外周血miR-155表达量亦高于脓毒症患者(P<0.05)。经ROC曲线分析,外周血miR-155表达量可区分脓毒症患者与健康体检者(AUC为0.932,敏感度为91.9%,特异度为90.5%),也可区分脓毒症与脓毒性休克患者(AUC为0.883,敏感度为79.2%,特异度为80.6%),也可区分脓毒症AGI和非AGI患者(AUC为0.933,敏感度为80.4%,特异度为93.4%)。此外,脓毒症组外周血miR-155表达量与C-反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)、乳酸、急性生理学与慢性健康状况评价Ⅱ(APACHEⅡ)评分、序贯器官衰竭评分(SOFA)、DAO、IL-6及TNF-α呈正相关(均P<0.05)。动物实验结果提示,与Sham组相比,CLP组大鼠小肠黏膜水肿、炎症细胞浸润,绒毛破坏塌陷、排列紊乱、部分腺体结构不完整,Chiu′s评分明显升高,血清TNF-α、IL-6、DAO水平明显升高,小肠黏膜组织紧密连接蛋白表达减少。与CLP组相比,miR-155抑制组大鼠肠道损伤得到明显缓解,表现为Chiu′s评分、IL-6、TNF-α、DAO水平下降,紧密连接蛋白表达增加。结论miR-155可能是诊断脓毒症的潜在生物标志物,降低其表达水平可减轻脓毒症诱导的炎症反应和肠道功能障碍。

实验性结肠炎小鼠结肠紧密连接蛋白的变化及意义

目的建立小鼠葡聚糖硫酸钠(DSS)结肠炎模型,观察其结肠黏膜炎症情况和紧密连接蛋白的表达变化及意义。方法 20只BALb/c小鼠随机分为DSS组及正常对照组,每组10只。DSS组小鼠每日自由饮用5%DSS溶液,连续7d,第8天后改为饮用正常水3 d;正常对照组饮用正常水10 d。每天进行体质量测量和疾病活动指数(DAI)评分。于第10天取结肠,检测小鼠髓过氧化物酶(MPO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、闭锁蛋白(occludin)和紧密连接相关蛋白-1(ZO-1)的表达并进行相关性分析。结果与正常对照组比较,DSS组小鼠体质量下降、DAI评分增高、结肠长度缩短;结肠MPO和TNF-α表达上调,occludin、ZO-1表达降低(均P<0.05)。DSS组小鼠结肠TNF-α表达与occludin、ZO-1表达均呈负相关(r值分别为-0.728和-0.718,P<0.05)。结论 DSS诱导结肠炎小鼠结肠紧密连接蛋白occludin和ZO-1表达下降,TNF-α可能通过下调occludin和ZO-1表达,使肠黏膜屏障功能受损,参与肠道炎症的发生发展。

Sirt1在正常人表皮中的表达及其对HaCaT细胞连接蛋白表达的影响

目的:研究Sirt1在正常人皮肤中的表达,明确Sirt1的表达与活化对皮肤角质形成细胞紧密连接蛋白、粘着连接蛋白的影响。方法:利用免疫组化技术检测人正常皮肤中Sirt1的表达与定位;以皮肤角质形成细胞系HaCaT细胞为研究对象,应用Sirt1的特异性激活剂及抑制剂诱导Sirt1的异常表达与活化,经RT-PCR技术检测Sirt1激活剂白藜芦醇、抑制剂烟酰胺对Sirt1基因表达水平的影响:采用Western blotting技术检测相同条件下Sirt1、紧密连接蛋白、粘着连接蛋白的蛋白表达水平。结果:Sirt1在人体正常皮肤组织中有显著表达,主要分布于表皮角质形成细胞的胞质中,在核内也有少量分布。与空白对照组相比,白藜芦醇可显著增加HaCaT细胞Sirt1的转录和翻译水平,Sirt1的表达与活化可明显降低HaCaT细胞紧密连接蛋白和粘着连接蛋白的表达水平。结论:Sirt1可影响HaCaT细胞间连接蛋白的表达。

肠易激综合征患者炎症因子与claudin-1的相关性

目的测定肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)患者血清及结肠黏膜中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-10(IL-10)和紧密连接蛋白-1(claudin-1)的表达水平及其相关性,进一步了解IBS的发病机制。方法对22例IBS腹泻型(D-IBS)、18例IBS便秘型患者(C-IBS)、20例健康对照者应用ELISA法检测血清中TNF-α、IL-10、claudin-1的含量,免疫组化法检测结肠黏膜TNF-α、IL-10、claudin-1的表达。结果 1血清中TNF-α水平及结肠黏膜表达率D-IBS组均高于正常对照组(P<0.05);C-IBS组与正常对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。2血清IL-10水平及结肠黏膜表达率D-IBS组均低于正常对照组(P<0.05);C-IBS组与正常对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。3血清claudin-1水平及结肠黏膜表达率D-IBS组均低于正常对照组(P<0.05);C-IBS组均高于正常对照组(P<0.05)。4D-IBS组血清TNF-α与claudin-1成负相关(r=-0.867,P<0.05),血清IL-10与claudin-1成正相关(r=0.868,P<0.05)。结论 IBS腹泻症状的产生可能与炎性因子失衡而导致claudin-1改变有关。