六味地黄丸介导RAGE抑制MMP-2/MMP-9对Aβ_(1-40)损伤bEnd.3细胞紧密连接蛋白的影响

目的探讨六味地黄丸对β淀粉样蛋白1-40(Aβ_(1-40))损伤的小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3)的保护作用及其机制。方法采用CCK8法检测Aβ_(1-40)和六味地黄丸含药血清(MSLDP)对细胞活性的影响,筛选合适的作用浓度。将bEnd.3细胞分为对照组、Aβ_(1-40)组、MSLDP+Aβ_(1-40)组和MSLDP组,采用Western blot检测低密度脂蛋白相关蛋白1(LRP1)、晚期糖基化终末产物受体(RAGE)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白表达,免疫荧光检测LRP1、RAGE、ZO-1表达;再将bEnd.3细胞分为对照组、Aβ_(1-40)组、FPS-ZM1(RAGE抑制剂)+Aβ_(1-40)组和FPS-ZM1+Aβ_(1-40)+MSLDP组,Western blot检测RAGE、MMP-9、MMP-2、ZO-1蛋白表达。结果Aβ_(1-40)呈剂量依赖性降低bEnd.3细胞活性(P<0.01),MSLDP对Aβ_(1-40)损伤的细胞活性具有保护作用(P<0.05,P<0.01),因此选择10μmol/L Aβ_(1-40)和10%MSLDP进行后续实验。与对照组比较,Aβ_(1-40)组RAGE、MMP-2、MMP-9蛋白表达升高(P<0.01),LRP1、ZO-1、BDNF蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),并且LRP1、ZO-1荧光强度降低(P<0.01),RAGE荧光增强(P<0.01);与Aβ_(1-40)组比较,MSLDP组RAGE、MMP-2、MMP-9蛋白表达和RAGE荧光强度降低(P<0.05,P<0.01),而LRP1、ZO-1、BDNF蛋白表达和LRP1、ZO-1荧光强度升高(P<0.05,P<0.01)。与Aβ_(1-40)组比较,Aβ_(1-40)+FPS-ZM1组MMP-2、MMP9、RAGE蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),ZO-1蛋白表达升高(P<0.05);Aβ_(1-40)+FPS-ZM1+MSLDP组MMP-2、MMP9、RAGE蛋白表达降低(P<0.01),ZO-1蛋白表达升高(P<0.01),FPS-ZM1和MSLDP联合使用的效果更佳。结论六味地黄丸能够保护Aβ_(1-40)损伤的脑微血管内皮的细胞紧密连接,减轻血脑屏障障碍,保护神经血管单元防治阿尔茨海默病,可能通过调节RAGE途径抑制MMP-2/MMP-9途径实现。

紧密连接蛋白ZO-1、occludin和actin参与缺氧缺血诱导的血脑屏障通透性增加

目的探讨血脑屏障紧密连接(blood-brain barrier-tight junction,BBB-TJ)蛋白ZO-1、occludin和ac-tin在缺氧缺血诱导的血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)通透性增加中的变化及其机制。方法利用人脐静脉内皮细胞系ECV304与星形胶质细胞(astrocytes,AS)共培养建立体外BBB模型,模型随机分为正常对照组和缺氧缺血两组。透射电镜观察两组间BBB-TJ的变化,直接免疫荧光观察细胞骨架蛋白actin分布的改变。γ计数仪检测大分子物质125I-牛血清白蛋白(125I-BSA)通透曲线观察BBB通透性的改变,Western blot检测细胞骨架蛋白actin,胞浆附着蛋白ZO-1,跨膜蛋白occludin的表达量的改变。结果透射电镜观察培养第10天的体外BBB模型,可见内皮细胞连接紧密,细胞间形成光滑、连续、较高密度的紧密连接。缺氧缺血后5 h,内皮细胞间连接开放,形成裂隙。直接免疫荧光下检测可见周边Actin丝带模糊,部分断裂,形成细胞间裂隙。缺氧缺血组125I-BSA的通透量增加,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。同时ZO-1的表达量显著减少,而occludin和actin的表达量无明显改变。结论缺氧缺血诱导occludin的位置分布改变和ZO-1的表达量减少进而促使actin蛋白发生重排,是导致缺氧缺血后BBB通透性增加的可能机制之一。

紧密连接蛋白ZO-1研究概述

紧密连接(tight junction,TJ)是维持粘膜上皮机械屏障和通透性的重要结构。紧密连接蛋白ZO-1是其重要组成蛋白之一,不但参与调节细胞物质转运和维持上皮极性,而且还与细胞增殖分化、肿瘤细胞转移、基因转录等过程的信息传递和调控有关。本文就ZO-1蛋白分子的结构及主要功能作一综述,旨在对其在各种功能中的具体作用有所了解。

Nogo-A、Adropin、ZO-1、ANGPTL4在急性脑出血患者血清中的 蛋白表达水平及对预后的预测价值

目的探究血清轴突生长抑制因子A(Nogo-A)、能量平衡相关蛋白(Adropin)、紧密连接蛋白1(ZO-1)、血管生成素样蛋白4(ANGPTL4)在急性脑出血患者中的蛋白表达水平及其对预后的预测效能。方法选取2020年4月至2022年5月于该院接受治疗的148例急性脑出血患者作为研究组,另选取同时期来该院行一般体检的150例健康者作为对照组,进行回顾性分析,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测两组受试者血清Nogo-A、Adropin、ZO-1、ANGPTL4的蛋白表达水平并对比;采用Spearman相关系数分析血清Nogo-A、Adropin、ZO-1、ANGPTL4的蛋白表达水平与急性脑出血发生的相关性;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析以上4项指标联合检测对急性脑出血的诊断效能;另外对研究组患者进行为期6个月的随访,并按照预后情况分为良好组(91例)与不良组(57例),对比两组患者血清Nogo-A、Adropin、ZO-1、ANGPTL4的蛋白表达水平;采用ROC曲线验证联合检测对该类患者预后的预测效能。结果相比于对照组,研究组血清Nogo-A、ZO-1、ANGPTL4蛋白表达水平明显升高,而Adropin蛋白表达水平明显降低(P均<0.05);经Spearman相关系数分析显示,血清Nogo-A、ZO-1、ANGPTL4蛋白表达水平与急性脑出血的发生率呈正相关(P<0.05),而Adropin蛋白表达水平则与急性脑出血的发生率呈负相关(P均<0.05);RO C曲线验证显示,Nogo-A、Adropin、ZO-1、ANGPTL4蛋白表达水平联合检测对评估急性脑出血具有较高的诊断效能,灵敏度、特异度分别为92.57%、90.67%;相比于良好组,不良组血清Nogo-A、ZO-1、ANGPTL4蛋白表达水平明显升高,而Adropin蛋白表达水平明显降低(P均<0.05);ROC曲线结果显示,相比于单一检测,Nogo-A、Adropin、ZO-1、ANGPTL4蛋白表达水平联合检测的曲线下面积更大(P<0.05),灵敏度为84.21%、特异度为89.01%。结论Nogo-A、Adropin、ZO-1、ANGPTL4蛋白在急性脑出血患者中均异常表达,并且Nogo-A、Adropin、ZO-1、ANGPTL4蛋白表达水平均与急性脑出血的发生存在密切联系。联合4项指标检测不仅能够辅助临床准确判断是否存在急性脑出血,同时对预测患者预后也具有重要临床价值。

食管鳞状细胞癌中紧密连接蛋白occludin、ZO-1的表达及其临床意义

目的探讨紧密连接蛋白occludin及ZO-1在食管鳞状细胞癌及手术切缘正常食管黏膜组织中的表达及其临床意义。方法采用组织芯片和免疫组化法检测49例食管鳞状细胞癌患者的癌组织及手术切缘正常食管黏膜组织(距肿瘤组织>5 cm)中occludin和ZO-1的表达,分析食管鳞状细胞癌癌组织中occludin、ZO-1表达与肿瘤的增殖、侵袭和转移之间的关系。结果食管鳞状细胞癌组织中occludin及ZO-1的阳性表达明显低于手术切缘正常食管粘膜组织(P<0.01),且癌组织中occludin、ZO-1的表达与其分化程度及淋巴结转移有关(P<0.05)。结论食管鳞状细胞癌的occludin和ZO-1的表达下调或缺失与肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移有关,在食管癌的进展中起重要作用。

缺血后处理对大鼠脑缺血再灌注后紧密连接的保护作用及ZO-1蛋白表达的影响

目的观察缺血后处理对脑缺血再灌注后紧密连接的保护作用及相关蛋白ZO-1表达的影响。方法 45只Wistar雄性大鼠随机分为假手术(Sham)组、缺血再灌注(I/R)组、缺血后处理(IP)组。采用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血模型,脑缺血2 h后,I/R组予再灌注,IP组给予缺血后处理之后予再灌注。于脑缺血再灌注后24 h行TTC染色观察脑梗死体积,应用电镜观察紧密连接蛋白结构改变,Western blot观察ZO-1蛋白表达的变化。结果 IP组脑梗死体积明显小于I/R组,与Sham组相比,I/R组血脑屏障紧密连接开放,ZO-1蛋白表达明显减少;与I/R组比较,IP组紧密连接开放程度减轻及ZO-1表达增加。结论缺血后处理减小脑梗死体积;缺血后处理能够减轻紧密连接破坏,其保护机制可能与ZO-1蛋白表达增加有关。

淫羊藿苷对阿尔茨海默病大鼠模型金属蛋白酶及紧密连接蛋白ZO-1表达的影响

目的探讨淫羊藿苷对阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)大鼠学习记忆、海马区基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、MMP-2及血脑屏障紧密连接蛋白ZO-1表达的影响。方法采用Aβ1-42海马注射建立AD大鼠模型,使用淫羊藿苷进行干预。以Morris水迷宫检测大鼠的空间学习记忆能力,采用Western-blot法分析紧密连接蛋白ZO-1的表达,用免疫组织化学法检测大鼠海马区MMP-9、MMP-2表达。结果与对照组相比,AD模型组大鼠学习记忆能力明显减退,ZO-1表达明显减少(P<0.05),MMP-9、MMP-2蛋白明显增加;淫羊藿苷干预后,大鼠学习记忆能力均明显提高,海马区MMP-9/MMP-2表达减少(P<0.05),ZO-1表达明显增加(P<0.05),以淫羊藿苷高剂量干予后明显。结论淫羊藿苷能通过抑制MMP-9/MMP-2表达,减轻血脑屏障破坏,从而改善AD症状。

中药清肠栓对溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜紧密连接蛋白ZO-1、occludin的影响

目的:探讨复方中药清肠栓对三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的UC大鼠结肠黏膜上皮紧密连接相关蛋白-1(ZO-1)、闭锁蛋白(occludin)的修复作用.方法:清洁级♂SD大鼠36只,随机分为正常组、模型组、SASP组、清肠栓高、中、低剂量组,每组6只.选用TNBS诱导的UC大鼠模型.采用免疫荧光的方法观察各组大鼠结肠黏膜上皮ZO-1、occludin和F-actin的表达,并运用图像分析软件进行平均光密度测定,考察了中药清肠栓对UC大鼠结肠黏膜上皮屏障的修复作用.结果:UC发病会对结肠紧密连接和细胞骨架系统造成严重的损害,模型组大鼠结肠黏膜上皮ZO-1、occludin几乎完全被破坏,不规则的分散在细胞外围,荧光染色暗淡.图像分析测其平均光密度较正常组明显降低(1.802±1.304vs3.145±0.110;0.568±0.063vs1.538±0.220,均P<0.01).清肠栓能不同程度减轻UC对紧密连接的破坏,使上述两种蛋白表达升高(P<0.01),从而保护肠道屏障功能,抑制结肠通透性的增加.结论:清肠栓能有效地调节肠黏膜屏障功能,有效抑制UC大鼠结肠通透性的升高,改善肠黏膜屏障功能,促进溃疡愈合.

正肝汤对肝硬化大鼠肠道紧密连接蛋白OCLN和ZO-1表达的影响

目的:探讨正肝汤对肝硬化大鼠肠道紧密连接蛋白OCLN和ZO-1表达的影响。方法:30只SD大鼠随机分为正常组、模型组和正肝汤组,每组各30只。制备四氯化碳肝硬化大鼠模型,正肝汤组大鼠予正肝汤(1.5 g/100 g·d)灌胃干预。对肝组织进行苏木素-伊红染色,透射电镜观察小肠组织的超微结构,免疫印迹法检测小肠组织中OCLN和ZO-1的蛋白表达。结果:与正常组相比较,模型组大鼠的肝组织中胶原纤维广泛增生,纤维间隔相互连接,徦小叶形成,电镜见小肠黏膜上皮细胞表面微绒毛稀疏,减少、变短,排列不规则,部分断裂扭曲,脱落明显。正肝汤组大鼠的肠黏膜损伤较模型组明显减轻。正常组大鼠小肠组织中OCLN和ZO-1的表达量分别是模型组2.94和3.91倍,均P<0.01,差异显著。正肝汤组的小肠组织中OCLN和ZO-1的表达量分别是模型组1.74和1.91倍,与模型组相比均P<0.05,有统计学差异。结论:正肝汤能显著减轻肝硬化大鼠的肠黏膜损伤,并上调小肠组织中OCLN和ZO-1的蛋白表达。

孕妇宫颈分泌物中胎盘α1-微球蛋白、胎儿纤维连接蛋白水平预测自发性早产价值

目的:探究宫颈分泌物中胎盘α1-微球蛋白(PAMG-1)和胎儿纤维连接蛋白(fFN)水平对自发性早产的预测价值。方法:收集2021年4月-2023年4月本院收治的128例发生自发性早产患者临床资料纳入早产组,同期产前检查并足月分娩的正常孕妇128例临床资料纳入正常组。比较两组临床资料,宫颈分泌物PAMG-1、fFN水平;采用受试者工作曲线(ROC)分析PAMG-1、fFN对孕妇发生自发性早产的预测价值。结果:PAMG-1、fFN对孕妇发生自发性早产的预测准确性分别为68.0%和67.6%、阳性预测值分别为76.1%和73.2%、阴性预测值分别为63.7%和64.2%,2项联合预测的准确性(69.9%)和阳性预测值(79.3%)提高(P<0.05);经ROC曲线分析,PAMG-1、fFN预测孕妇发生自发性早产的曲线下面积分别为0.680和0.679,灵敏度分别为52.3%、55.5%,特异度分别为83.6%、79.7%,2项联合预测的曲线下面积为0.699,灵敏度53.9%、特异度85.9%。结论:PAMG-1、fFN可作为孕妇发生自发生性早产的预测指标,且2项联合可提高预测效能。

紧密连接ZO-1蛋白在缺血性脑卒中肠黏膜改变的意义

目的研究缺血性脑卒中时是否存在肠黏膜屏障改变以及紧密连接蛋白Zonula Occluden-1(ZO-1)在其中的可能机制。方法杂犬20只,随机分为实验组和对照组,每组10只。实验组用双硅柱法制作缺血性脑卒中模型。实验前、实验后0.5、3、6、12、24h行血浆二胺氧化酶(DAO)活性和D-乳酸(D-lac)浓度检测;光镜下对肠黏膜病理形态进行观察;免疫组化法分析肠黏膜ZO-1蛋白的表达。结果和对照组比较,实验组24hDAO、12h和24hD-lac明显增高(24h DAO:0.5512±0.1057比0.3822±0.0789;12hD-lac:6.2249±1.2683比4.3342±0.7900;24hD-lac:8.4581±1.7416比4.4766±0.9486;P<0.01);实验组ZO-1蛋白平均光密度(OD)明显降低(0.1989±0.0118比0.2224±0.0150;P<0.01)。相关和回归分析显示,血浆24hDAO与24h、12h、6hD-lac呈正相关关系(γ分别为0.787、0.8117、0.862,P<0.01);ZO-1蛋白OD与24hDAO、24hD-Lac呈负相关(γ分别为-0.8385、-0.7088,P=0.002、0.022),光镜下观察,实验组存在小肠病理损伤,对照组小肠结构正常。结论血浆DAO活性和D-lac能有效反映缺血性脑卒中时肠屏障损伤。肠黏膜紧密连接蛋白ZO-1在缺血性脑卒中时表达降低,这是肠屏障功能障碍的重要分子机制之一。

乙醇对肠上皮细胞紧密连接蛋白ZO-1表达的影响

目的探讨乙醇引起肠黏膜屏障的破坏以及这种破坏机制是否与紧密连接蛋白ZO-1相关。方法培养人结肠腺癌细胞株Caco-2,分别设正常对照组:不加刺激物及干预因素;实验组:加入不同体积分数(1%、2.5%、5%、7.5%、10%)乙醇分别刺激不同时间(0～3h),四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞生存率;测定跨上皮电阻(TEER)和荧光黄的透过量反映肠上皮细胞单层通透性;选定体积分数5%乙醇作为实验浓度,应用蛋白印迹法检测紧密连接蛋白ZO-1表达的动态变化。结果体积分数为5%的乙醇未影响到细胞的生存率。不同浓度乙醇作用20min后,细胞单层通透性增加,60min达高峰,TEER下降,荧光黄透过增加,以体积分数5%乙醇最明显。蛋白印迹法检测体积分数5%乙醇在1h内致Caco-2细胞表达ZO-1减少。结论乙醇可引起肠上皮黏膜屏障破坏,其机制可能和紧密连接蛋白ZO-1的破坏相关。

EMAP-Ⅱ对紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1相互作用的调节和机制

目的研究内皮—单核细胞激活多肽Ⅱ(EMAP-Ⅱ)对血肿瘤屏障(BTB)紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1分布和相互作用的影响,以及蛋白激酶C(PKC)活性的变化,探讨PKC在EMAP-Ⅱ开放紧密连接中的作用。方法提取和培养大鼠脑微血管内皮细胞,建立体外BTB模型;实验分为7组,即模型组、EMAP-Ⅱ0.5 h组、EMAP-Ⅱ1 h组、EMAP-Ⅱ2 h组、EMAP-Ⅱ3h组、EMAP-Ⅱ6 h组和EMAP-Ⅱ12 h组。应用Milicell-ERS系统检测体外BTB模型跨内皮细胞阻抗值的变化;双重免疫荧光检测内皮细胞中紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1的分布和定位;免疫共沉淀检测内皮细胞中occludin和ZO-1的结合水平;PKC活性检测试剂盒检测体外BTB模型内皮细胞中总PKC的活性。结果与模型组相比,EMAP-Ⅱ显著降低了体外BTB模型的跨内皮细胞阻抗值,增加了BTB通透性;在模型组,紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1在内皮细胞边缘呈连续分布,并且二者存在共定位,EMAP-Ⅱ能够使occludin和ZO-1在内皮细胞边缘的分布减少,二者的共定位减弱;免疫共沉淀结果也显示EMAP-Ⅱ能够减弱occludin和ZO-1的结合;上述作用在EMAP-Ⅱ作用1 h时效果最显著(P<0.01);同时发现EMAP-Ⅱ作用后,BTB模型内皮细胞中PKC的活性显著升高,在EMAP-Ⅱ作用1 h时达峰值(P<0.01)。结论 EMAP-Ⅱ能够调节紧密连接相关蛋白occludin和ZO-1在内皮细胞的相互作用,开放紧密连接;PKC可能是EMAP-Ⅱ影响occludin和ZO-1相互作用、调节紧密连接的机制之一。

异丙酚在血脑屏障氧糖剥夺体外模型中对紧密连接蛋白ZO-1表达的影响

目的探讨异丙酚在血脑屏障氧糖剥夺(OGD)体外模型中对紧密连接蛋白ZO-1表达的影响及其机制。方法分离纯化Bal b/c小鼠的脑微血管内皮细胞进行体外培养,构建血脑屏障体外模型,并通过OGD处理模拟体内缺氧、缺血状态将细胞分为对照组、OGD损伤组、不同浓度(5、10、20、40μmol/L)异丙酚处理组及蛋白激酶C(PKC)激活剂佛波酯(TPA)处理组。四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测内皮细胞存活力,电阻仪检测内皮细胞阻抗(TEER)值,聚合酶链反应(PCR)和Western blot分别检测异丙酚对ZO-1 mRNA和蛋白表达的影响,PKC活性检测试剂盒测定PKC活性;通过加入PKC激活剂检测PKC在异丙酚调节ZO-1表达过程中的作用。结果 10、20、40μmol/L异丙酚可显著抑制OGD诱导的内皮细胞活力,TEER值降低和ZO-1表达水平下降(P<0.05);此外,10、20、40μmol/L异丙酚还可抑制OGD诱导的PKC激活(0.856±0.124、1.017±0.104、0.930±0.149 vs 0.595±0.112)。在PKC激活剂的作用下,异丙酚对ZO-1 mRNA和蛋白表达的上调作用均无显著影响(0.361±0.441 vs 0.344±0.023,P=0.403;0.169±0.011 vs 0.161±0.019,P=0.489)。结论异丙酚可通过抑制PKC信号通路上调血脑屏障OGD体外模型紧密连接蛋白ZO-1的表达。

脾破裂大鼠血清及回肠黏膜组织中紧密连接蛋白Occludin和ZO-1的变化及意义

目的探讨紧密连接蛋白的闭合蛋白(Occludin)和紧密粘连蛋白-1(ZO-1)在不同程度脾破裂大鼠血清及回肠黏膜中的表达及意义。方法将48只健康大鼠随机分成脾破裂轻度组、中度组、重度组和假手术组(Sham组)4组,每组12只,前3组采用开腹手术方式制作不同程度脾破裂大鼠模型,Sham组仅接受开、关腹手术。观测大鼠腹腔内情况;ELISA法检测各组大鼠血清Occludin和ZO-1的含量;HE染色法观察回肠黏膜组织病理学改变;免疫组化染色法检测回肠黏膜组织中Occludin及ZO-1的表达情况[以光密度(OD值)表示]。结果 Sham组腹腔内无渗出及出血;轻度组腹腔内平均约1.6ml积血,脾脏创面少许渗出;中度组腹腔内平均约3.5ml积血,肠管颜色较苍白,脾脏创面渗出较明显;重度组腹腔内平均约4.3ml积血,肠管苍白明显,肠管间部分粘连,脾脏创面渗出明显。病理学检查显示中度组和重度组大鼠的回肠黏膜损伤较Sham组及轻度组明显为重。与Sham组相比,中、重度组血清中Occludin及ZO-1含量、回肠黏膜组织中Occludin及ZO-1的OD值均有所升高或降低(均P<0.05);与轻度组相比,中、重度组血清中Occludin及ZO-1含量、回肠黏膜组织中Occludin及ZO-1的OD值均有所升高或降低(均P<0.05)。结论血清中Occludin及ZO-1含量增高可作为临床上观测脾破裂及肠黏膜损伤程度的一个可靠指标。

糖尿病大鼠血-脊髓屏障紧密连接蛋白claudin-1、claudin-5、ZO-1表达变化

目的动态观察糖尿病大鼠血-脊髓屏障紧密连接蛋白claudin-1、claudin-5、ZO1表达。方法雄性SD大鼠60只,随机分为糖尿病模型组和正常对照组2组,每组30只,以链脲佐菌素(STZ)腹腔注射建立糖尿病大鼠模型,分别于造模后第15天、30天、90天(各时间点均设对照)取脊髓组织(每次各取6只鼠)以Westernblot和实时荧光定量PCR法检测claudin-1、claudin-5、ZO-1蛋白和mRNA表达。结果 (1)claudin 1、claudin-5蛋白相对表达在糖尿病模型组第30天[分别为(0.324±0.01 5)、(0.289±0.032)]、第90天[分别为(0.220±0.029)、(0.242±0.034)]均较对照组[第30天分别为(0.464±0.009)、(0.475±0.035),第90天分别为(0.468±0.031)、(0.489±0.018)]降低(P<0.01),且糖尿病模型组第15天、30天、90天三时间点claudin-1、claudin-5蛋白表达逐渐降低,差异有统计学意义(P<0.05)。各组均未检出ZO-1表达。(2)claudin-1、claudin-5 mRNA相对表达在糖尿病模型组第30天[分别为(2.67±0.71)×10^(-4) 、(2.87±0.74)×10^(-4)]、第90天[分别为(0.081 4±0.034)×10^(-1)、(0.122±0.027)×10^(-1))]均较对照组[第30天分别为(13.13±3.09)×10^(-1)、(14.81±2.24)×10^(-4),第90天分别为(13.21±1.98)×10 、(1 4.50±2.72)×10^(-4)]降低(P<0.01),且糖尿病模型组第15天、第30天、第90天三时间点mRNA相对表达水平逐渐降低,三时间点差异有统计学意义(P<0.05)。ZO-1 mRNA表达在糖尿病模型组第15天、第30天及第90天[分别为(4.40±1.94)×10^(-1)、(2.33±0.64)×10^(-1)、(2.32±0.45)×10^(-1)]亦均较对照组[分别为(29.89±6.27)×10^(-1)、(30.68±1 7.64)×10^(-1)、(29.27 ±7.55)×10^(-1)]降低(P<0.01)。结论糖尿病可能导致血-脊髓屏障紧密连接蛋白claudin-1、claudin-5、ZO-1表达降低,而且随病程延长claudin-l、claudin-5表达呈逐渐降低趋势。

清肝活血方对肠黏膜上皮细胞紧密连接相关蛋白ZO-1的影响

目的:探讨清肝活血方对肠黏膜上皮细胞紧密连接蛋白ZO-1的影响,明确清肝活血方干预肠源性内毒素移位的作用位点。方法:应用Caco-2细胞株,建立肠上皮细胞模型,筛选酒精作用的剂量、时间,以Western方法检测该方药物对Caco-2表达ZO-1蛋白的影响。结果:低浓度酒精即可明显增加Caco-2细胞模型的通透性,减少ZO-1蛋白的表达;清肝活血方药物可以提高ZO-1蛋白的表达,且呈一定的量效关系。结论:清肝活血方可以通过调控ZO-1蛋白的表达改善酒精引起的Caco-2细胞的通透性。

紧密连接蛋白occludin和ZO-1在豚鼠耳蜗外侧壁血管纹中的表达

目的:研究紧密连接蛋白occludin,ZO-1在豚鼠耳蜗外侧壁血管纹中的表达.方法:成年健康杂色豚鼠,耳廓反射灵敏,分别取耳蜗、脑、肺三组组织,免疫组织化学法及Western Blot研究紧密连接蛋白occludin,ZO-1在耳蜗外侧壁血管纹中的表达,以脑组、肺组为阳性对照.结果:光镜下可见豚鼠耳蜗外侧壁血管纹毛细血管内皮细胞等边缘细胞中均强阳性颗粒表达,脑组、肺组毛细血管内皮细胞内壁也均有明显阳性表达;Western Blot下occludin,ZO-1在耳蜗组中高表达,并且明显高于脑组与肺组.结论:occludin,ZO-1在豚鼠耳蜗外侧壁血管纹紧密连接中的高浓度表达,与维持血迷路屏障结构、功能密切相关.

紧密连接蛋白ZO-1 PDZ结构域的研究进展

自然界的生物过程常常需要特定的蛋白质间相互作用来实现,而这些相互作用大多数是通过结构域来实现的。结构域是蛋白质的基本结构和功能单位,是蛋白质中具有特异结构和独立功能的区域,

血清缺氧诱导因子-1α、内皮素-1及基质金属蛋白酶-9联合检测对颅内动脉瘤破裂出血142例手术预后的价值

目的探讨血清缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、内皮素-1(ET-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)联合预测颅内动脉瘤破裂出血术后预后不良的价值。方法选取2020年1月至2022年1月东台市人民医院收治的颅内动脉瘤破裂出血病人142例作为研究组,另选取同期健康体检者140例作为对照组,检测病人术前、入院1周(均为术后)、术后6个月血清HIF-1α、ET-1、MMP-9水平并进行比较。另依据病人出院6个月后预后情况,将其分为预后良好组(101例)和预后不良组(41例),对比预后良好组和预后不良组术前、入院1周、术后6个月血清HIF-1α、ET-1、MMP-9水平,分析颅内动脉瘤破裂出血病人预后不良的影响因素及血清HIF-1α、ET-1、MMP-9单项及联合检测对颅内动脉瘤破裂出血病人预后不良的预测价值。结果研究组术前血清HIF-1α、ET-1、MMP-9水平均高于对照组(P<0.05);研究组随访6个月预后不良发生率为28.87%(41/142),血清HIF-1α、ET-1、MMP-9水平经重复测量方差分析差异有统计学意义(P<0.05),预后不良组入院1周、术后6个月血清HIF-1α(42.43±3.05)μg/L和(41.53±4.52)μg/L、ET-1(14.27±1.24)ng/L和(13.96±2.04)ng/L、MMP-9(15.57±1.81)μg/L和(14.68±2.65)μg/L均低于术前(51.19±4.38)μg/L、(16.50±1.45)ng/L、(18.26±2.29)μg/L;预后良好组入院1周、术后6个月血清HIF-1α(40.78±1.53)μg/L和(34.87±4.68)μg/L、ET-1(13.12±2.16)ng/L和(10.05±1.96)ng/L、MMP-9(14.87±1.20)μg/L和(12.21±2.87)μg/L均低于术前(47.82±4.13)μg/L、(14.89±2.75)ng/L、(17.41±1.21)μg/L;预后良好组术后6个月血清HIF-1α、ET-1、MMP-9水平均低于入院1周(P<0.05)。预后不良组术前、入院1周、术后6个月血清HIF-1α、ET-1、MMP-9水平均高于预后良好组(P<0.05)。预后不良组多发动脉瘤、脑积水、Hunt-Hess分级Ⅳ~Ⅴ级、CT Fisher分级3~4级、手术时机为≥72 h、并发脑血管痉挛、并发脑梗死病人占比均高于预后良好组(P<0.05);Hunt-Hess分级Ⅳ~Ⅴ级、手术时机为≥72 h、术前及入院1周血清HIF-1α、ET-1、MMP-9高水平均是颅内动脉瘤破裂出血预后不良的危险因素(P<0.05);受试者操作特征曲线显示,术前及入院1周血清HIF-1α、ET-1、MMP-9三者联合预测颅内动脉瘤破裂出血病人预后不良的灵敏度(97.56%、95.12%)和曲线下面积(0.93、0.91)高于单独预测(P<0.05),特异度与单独评估比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论颅内动脉瘤破裂出血病人术前血清HIF-1α、ET-1、MMP-9水平均高于健康人群,术前和入院1周血清HIF-1α、ET-1、MMP-9高水平均是术后预后不良的独立危险因素,且对颅内动脉瘤破裂出血术后预后不良具有一定预测价值,但三者联合预测价值更高。