非小细胞肺癌患者紧密连接蛋白-1基因启动子甲基化分析及其临床意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者中紧密连接蛋白-1(ZO-1)基因甲基化检测的临床意义。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应MS-PCR检测101例NSCLC患者癌组织及癌旁组织ZO-1基因启动子甲基化状态,以61例肺部良性病变患者作为对照,并用实时荧光定量PCR和Western blotting分别检测63例甲基化阳性组和200例阴性组中的mRNA和蛋白表达。结果 ZO-1 mRNA和蛋白在启动子甲基化阳性和阴性组中的差异有显著统计学意义(t=-26.028,P<0.01;t=-37.216,P<0.01)。ZO-1启动子甲基化在癌组织(32.7%,33/101)和正常组织中(11.5%,7/61)的差异有显著统计学意义(χ2=9.190,P<0.01)。癌旁组织ZO-1启动子甲基化在淋巴结转移组(35.5%,11/31)和未转移组中(17.1%,12/70)中的差异有显著统计学意义(χ2=4.110,P<0.05),癌组织ZO-1启动子甲基化在2年生存组(27.5%,14/51)和2年死亡组(43.2%,19/44)中的显著差异有统计学意义(χ2=4.150,P<0.05)。结论 ZO-1启动子甲基化影响了其mRNA转录和蛋白的表达,癌旁组织和癌组织ZO-1启动子甲基化分别可能作为NSCLC患者淋巴结转移和2年内生存的预测因子。

胰高血糖素样肽-2对断奶仔猪肠上皮紧密连接蛋白相关基因表达的影响

本文旨在研究胰高血糖素样肽-2(GLP-2)对离体培养的断奶仔猪空肠上皮紧密连接蛋白相关基因表达的影响,探讨GLP-2调节肠道黏膜屏障的可能机制。将断奶仔猪空肠组织块置于含0、1×10-8、1×10-7mol/L的GLP-2的细胞培养液中进行培养,考察不同GLP-2添加水平对断奶仔猪空肠上皮丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路细胞外调节蛋白激酶丝裂原活化蛋白激酶激酶1/2(MEK1/2)、p90核糖体S6蛋白激酶(p90RSK)以及紧密连接蛋白ZO-1、Oc-cludin、Claudin-1基因表达的影响,待确定出GLP-2能有效促进紧密连接蛋白相关基因表达的剂量后,再向培养液中添加MEK1/2的特异性阻断剂U0126,考察阻断MAPK经典通路后紧密连接蛋白ZO-1、Occludin、Claudin-1的基因表达的变化。结果表明,与对照组相比,将空肠组织块置于含1×10-7和1×10-8mol/L GLP-2的培养液中培养72 h均能显著促进MEK1/2、p90RSK以及紧密连接蛋白ZO-1、Occludin、Claudin-1的基因mRNA相对表达量(P<0.05),除ZO-1的基因之外,上述各蛋白的基因mRNA相对表达量还随着GLP-2浓度的增高而升高(P<0.05);向1×10-7mol/L的GLP-2组添加U0126阻断p90RSK、ERK1/2的基因表达后,紧密连接蛋白ZO-1、Occludin、Claudin-1的基因mRNA相对表达量也显著下降(P<0.05)。由此可知,GLP-2能够促进断奶仔猪空肠上皮紧密连接蛋白ZO-1、Occludin、Claudin-1的基因表达,而MAPK通路可能是GLP-2调控肠道紧密连接蛋白基因表达的重要信号通路之一。

紧密连接蛋白-1、3、4在乳腺癌患者中的表达及其临床意义

目的探讨紧密连接蛋白(claudin)-1、3、4在乳腺癌患者中的表达及其临床意义。方法收集2013年5月—2014年4月首都医科大学附属北京潞河医院病理科标本,其中乳腺癌组织和对应的癌旁正常乳腺组织均81例,分析claudin-1、3、4与乳腺癌患者年龄、部位、大小、激素受体状态、Ki67增殖活性、淋巴结转移、脉管侵犯及临床分期的关系。结果 claudin-1、3、4在癌组织中的阳性表达均低于癌旁正常组织,claudin-1在癌组织的表达(79.0%)与癌旁组织的表达(84.0%)比较差异无统计学意义(χ~2=0.655,P>0.05)。claudin-3、4在癌组织中的表达(54.3%、77.8%)与癌旁组织中的表达(85.2%、92.6%)比较差异均有统计学意义(χ~2=18.290、7.043,P<0.01);claudin-3、4在淋巴结转移组的表达(82.8%、93.1%)高于淋巴结无转移组的表达(42.3%、61.5%),二者比较差异有统计学意义(χ~2=0.365、0.322,P<0.05);claudin-3在临床分期亚组的表达(16.7%)与Ⅱ/Ⅲ亚组中的表达(44.4%)比较差异有统计学意义(χ~2=0.284,P<0.05);claudin-1的表达在不同临床病理因素间差异无统计学意义。结论 claudin-3、4蛋白在乳腺癌的发生、浸润、转移过程中发挥重要作用,可以作为癌瘤发生、发展及评估预后的生物学标记物。

中药清肠栓对溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜紧密连接蛋白ZO-1、occludin的影响

目的:探讨复方中药清肠栓对三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的UC大鼠结肠黏膜上皮紧密连接相关蛋白-1(ZO-1)、闭锁蛋白(occludin)的修复作用.方法:清洁级♂SD大鼠36只,随机分为正常组、模型组、SASP组、清肠栓高、中、低剂量组,每组6只.选用TNBS诱导的UC大鼠模型.采用免疫荧光的方法观察各组大鼠结肠黏膜上皮ZO-1、occludin和F-actin的表达,并运用图像分析软件进行平均光密度测定,考察了中药清肠栓对UC大鼠结肠黏膜上皮屏障的修复作用.结果:UC发病会对结肠紧密连接和细胞骨架系统造成严重的损害,模型组大鼠结肠黏膜上皮ZO-1、occludin几乎完全被破坏,不规则的分散在细胞外围,荧光染色暗淡.图像分析测其平均光密度较正常组明显降低(1.802±1.304vs3.145±0.110;0.568±0.063vs1.538±0.220,均P<0.01).清肠栓能不同程度减轻UC对紧密连接的破坏,使上述两种蛋白表达升高(P<0.01),从而保护肠道屏障功能,抑制结肠通透性的增加.结论:清肠栓能有效地调节肠黏膜屏障功能,有效抑制UC大鼠结肠通透性的升高,改善肠黏膜屏障功能,促进溃疡愈合.

淫羊藿苷对阿尔茨海默病大鼠模型金属蛋白酶及紧密连接蛋白ZO-1表达的影响

目的探讨淫羊藿苷对阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)大鼠学习记忆、海马区基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、MMP-2及血脑屏障紧密连接蛋白ZO-1表达的影响。方法采用Aβ1-42海马注射建立AD大鼠模型,使用淫羊藿苷进行干预。以Morris水迷宫检测大鼠的空间学习记忆能力,采用Western-blot法分析紧密连接蛋白ZO-1的表达,用免疫组织化学法检测大鼠海马区MMP-9、MMP-2表达。结果与对照组相比,AD模型组大鼠学习记忆能力明显减退,ZO-1表达明显减少(P<0.05),MMP-9、MMP-2蛋白明显增加;淫羊藿苷干预后,大鼠学习记忆能力均明显提高,海马区MMP-9/MMP-2表达减少(P<0.05),ZO-1表达明显增加(P<0.05),以淫羊藿苷高剂量干予后明显。结论淫羊藿苷能通过抑制MMP-9/MMP-2表达,减轻血脑屏障破坏,从而改善AD症状。

脾破裂大鼠血清及回肠黏膜组织中紧密连接蛋白Occludin和ZO-1的变化及意义

目的探讨紧密连接蛋白的闭合蛋白(Occludin)和紧密粘连蛋白-1(ZO-1)在不同程度脾破裂大鼠血清及回肠黏膜中的表达及意义。方法将48只健康大鼠随机分成脾破裂轻度组、中度组、重度组和假手术组(Sham组)4组,每组12只,前3组采用开腹手术方式制作不同程度脾破裂大鼠模型,Sham组仅接受开、关腹手术。观测大鼠腹腔内情况;ELISA法检测各组大鼠血清Occludin和ZO-1的含量;HE染色法观察回肠黏膜组织病理学改变;免疫组化染色法检测回肠黏膜组织中Occludin及ZO-1的表达情况[以光密度(OD值)表示]。结果 Sham组腹腔内无渗出及出血;轻度组腹腔内平均约1.6ml积血,脾脏创面少许渗出;中度组腹腔内平均约3.5ml积血,肠管颜色较苍白,脾脏创面渗出较明显;重度组腹腔内平均约4.3ml积血,肠管苍白明显,肠管间部分粘连,脾脏创面渗出明显。病理学检查显示中度组和重度组大鼠的回肠黏膜损伤较Sham组及轻度组明显为重。与Sham组相比,中、重度组血清中Occludin及ZO-1含量、回肠黏膜组织中Occludin及ZO-1的OD值均有所升高或降低(均P<0.05);与轻度组相比,中、重度组血清中Occludin及ZO-1含量、回肠黏膜组织中Occludin及ZO-1的OD值均有所升高或降低(均P<0.05)。结论血清中Occludin及ZO-1含量增高可作为临床上观测脾破裂及肠黏膜损伤程度的一个可靠指标。

猪胰高血糖素样肽-2通过细胞外信号调节激酶1/2调节仔猪空肠上皮细胞紧密连接蛋白表达

本试验以体外培养的仔猪空肠上皮细胞(IPEC-J2)为研究对象,研究了猪胰高血糖素样肽-2(p GLP-2)对紧密连接蛋白表达的调节及其信号传导机制。培养液中分别添加10-9mol/L p GLP-2(p GLP-2组)和10-9mol/L p GLP-2、10μmol/L U0126(p GLP-2+U0126组),对照组不添加以上试剂,每组3个重复,每个重复1个培养孔。测定IPEC-J2胞质紧密黏连蛋白-1(ZO-1)、occludin、claudin-1以及细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)蛋白表达量。结果表明:与对照组相比,IPEC-J2细胞培养液中添加p GLP-2显著增加了ZO-1、occludin、claudin-1以及p42-ERK1/2、p44-ERK1/2的蛋白表达量(P<0.05);与p GLP-2组相比,在IPEC-J2细胞培养液中加入ERK1/2的抑制剂U0126,显著降低了ZO-1、occludin、claudin-1以及p42-ERK1/2、p44-ERK1/2的蛋白表达量(P<0.05)。综合得出,ERK1/2通路是p GLP-2调控肠道上皮细胞紧密连接蛋白表达的一条重要信号通路。

紧密连接蛋白-1介导E-cadherin促进前列腺癌发生进展机制研究

目的:探讨紧密连接蛋白(Claudin)-1和E-钙黏蛋白(E-cadherin)在前列腺癌组织中的表达及其在前列腺癌中的作用机制。方法:应用免疫组织化学SP法检测72例前列腺癌组织和42例前列腺增生组织中Claudin-1和E-cadherin的表达状况,研究二者的表达状况与前列腺癌临床病理特征之间的关系,分析二者在前列腺癌中表达的相关性。结果:Claudin-1在前列腺癌组织中表达阳性率为63.89%(46/72),显著高于前列腺增生组织的33.33%(14/42),E-cadherin在前列腺癌中表达率为13.89%(10/72),低于在前列腺增生中E-cadherin的表达率90.48%(38/42),差异有统计学意义(均P<0.01)。Claudin-1和E-cadherin蛋白表达与前列腺癌Gleason评分、临床分期有关(P<0.05),与PSA增高无关(P>0.05)。Spearman相关分析显示Claudin-1和E-cadherin表达呈负相关(r=–0.68)。结论:Claudin-1和E-cadherin在前列腺癌中异常表达,它们的异常表达可能共同参与了前列腺癌的发生、进展,联合检测它们有望提高对前列腺癌预后的评估。

甲状腺乳头状癌中紧密连接蛋白-1的表达与临床意义

目的探讨甲状腺乳头状癌(PTC)组织中紧密连接蛋白-1(Claudin-1)的表达与临床意义。方法收集2017年1月至2019年10月平顶山市第一人民医院和中国人民解放军联勤保障部队第九八九医院平顶山医疗区甲状腺手术存档标本共计271例。采用免疫组化EliVision两步法检测116例PTC、145例甲状腺良性病变(BTL)和10例甲状腺滤泡癌中Claudin-1的表达状况,并分析其表达与PTC病人临床病理特征之间的关系。结果在116例PTC中Claudin-1高表达率为97.4%;在145例BTL中高表达率为11.7%;在10例滤泡癌中高表达率为10.0%。此外,Claudin-1在16例有PTC转移的淋巴结中全部高表达(100%),并且与甲状腺内原发癌灶的表达一致;在40例肿瘤周围的正常甲状腺组织中全部不表达。Claudin-1表达在PTC与BTL(χ^(2)=189.282)、PTC与滤泡癌的比较(χ^(2)=71.810),均差异有统计学意义(均P<0.001)。Claudin-1的表达与病人性别、年龄、癌结节长径与数目、淋巴结转移及TNM分期无关(P>0.05)。Claudin-1诊断PTC的灵敏度为97.4%,Claudin-1在PTC分别与BTL和滤泡癌的鉴别诊断中的特异度为88.3%和90.0%。结论Claudin-1有助于PTC分别与BTL和滤泡癌的鉴别诊断;Claudin-1的高表达可能是PTC肿瘤细胞黏附性强的关键因素。

乙醇对Caco-2细胞紧密连接蛋白-1诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目前关于乙醇致肠道通透性改变的病理机制很多,均认为肠道通透性改变的根本原因在于肠道黏膜屏障功能的损伤[1-4]。完整的肠黏膜是防止细菌移位的基础及主要屏障。实验发现在给予添加乙醇饮食的大鼠中有肠道上皮细胞紧密连接的破坏,提示在乙醇诱导的肠道通透性改变中,肠黏膜上皮屏障遭到的破坏是可能的机制之一。但其具体对紧密连接相关蛋白影响的作用机制尚不清楚。

饲料营养素对鱼类肠道紧密连接蛋白闭锁小带蛋白-1影响的研究进展

鱼类肠道紧密连接结构是肠道黏膜屏障的重要组成。紧密连接在相邻的上皮细胞之间形成了由跨膜蛋白[如闭合蛋白(Claudin)和闭锁蛋白(Occludin)]和胞质蛋白[如闭锁小带蛋白-1(ZO-1)]所维持的复杂蛋白质结构,其中胞质紧密连接蛋白ZO-1属于膜相关鸟苷酸激酶(MAGUK)家族,是紧密连接的重要组成蛋白质之一。ZO-1在维持细胞极性和紧密连接屏障功能上发挥着重要作用,也与肠道疾病的发生有着密切联系。众所周知,ZO-1的表达在相当程度上受饲料营养素的影响和调节。因此,本文综述了饲料中蛋白质、脂肪、糖类、维生素和矿物质五大营养素对鱼类肠道紧密连接蛋白ZO-1的影响及作用机制的研究进展,这对于保持鱼类肠道屏障的功能稳定和提高饲料的利用效率有重要意义。

血清半乳糖血凝素-1、紧密连接蛋白-1对甲状腺癌病情评估的价值

目的探讨甲状腺癌患者血清中半乳糖血凝素-1(Gal-1)、紧密连接蛋白-1(Cla-1)水平测定对甲状腺肿瘤病情评估的价值。方法收集该院收治的甲状腺肿瘤患者104例,其中甲状腺乳头癌32例,甲状腺滤泡癌18例,甲状腺腺瘤54例;另选取20例甲状腺功能各指标、甲状腺彩超均正常的志愿者作为对照组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清Gal-1、Cla-1水平,采用qRT-PCR和Westernbolt检测组织Gal-1、Cla-1mRNA和蛋白表达情况,qRT-PCR检测肿瘤组织细胞增殖促进基因、肿瘤侵袭基因mRNA的表达量。采用Pearson相关分析甲状腺癌患者血清Gal-1和Cla-1与细胞增殖、肿瘤侵袭基因mRNA表达的相关关系。结果4组研究对象性别差异有统计学意义(P<0.05),4组血清Gal-1、Cla-1水平差异均有统计学意义(P<0.05),其中甲状腺乳头癌组血清Gal-1和Cla-1水平均高于其余3组;甲状腺滤泡癌组血清Gal-1和Cla-1水平均高于甲状腺腺瘤组和对照组,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,甲状腺腺瘤组Gal-1水平显著升高(P<0.05)。与对照组相比,甲状腺乳头癌组、甲状腺滤泡癌组、甲状腺腺瘤组的组织中Gal-1、Cla-1mRNA和蛋白表达量均显著降低(P<0.05)。甲状腺癌患者肿瘤组织细胞增殖促进基因EDAG-1和SurvivinmRNA表达量均高于对照组,CCNG2mRNA表达量均低于对照组(P<0.05);肿瘤侵袭基因STAT3和FAKmRNA表达量高于对照组,Beclin-1mRNA表达量均低于对照组(P<0.05)。血清Gal-1与EDAG-1、Survivin、FAK呈明显正相关关系,血清Cla-1与Survivin、STAT3、FAK呈明显正相关关系;两者均与CCNG2、Beclin-1呈负相关关系。结论Gal-1、Cla-1有望成为血清标志物,为甲状腺癌早期诊断和筛查提供依据。

紧密连接蛋白-1在下咽鳞状细胞癌组织中的表达及临床意义

目的研究紧密连接蛋白-1(zonulaoccluden-1,ZO-1)在下咽鳞状细胞癌(hypopharyngeal squamous cell carcinoma,HSCC)组织中的表达及临床意义。方法取HSCC组织标本52例,采用组织芯片免疫组织化学SP法检测其组织芯片中ZO-1蛋白的表达水平,结合随访资料,分析ZO-1表达与临床病理特征及患者预后的关系。结果 ZO-1蛋白在HSCC组织中的表达低于癌旁组织,且其表达水平与肿瘤的分化程度、T分级、肿瘤位置及淋巴转移密切相关。Log-rank单因素分析结果显示肿瘤分化程度、T分级、淋巴结转移、肿瘤位置与HSCC患者的生存预后相关,ZO-1表达水平低的患者生存率低于ZO-1表达水平高的患者。Cox风险回归模型的多因素分析显示肿瘤的分化程度、淋巴结转移、ZO-1表达水平及T分级均是HSCC患者预后不良的独立预后影响因素。结论 ZO-1可能成为HSCC预后的一个独立影响因素,其低表达与HSCC的发生发展密切相关。

菱形结构域蛋白1、肝癌缺失基因1、β-连环蛋白在结直肠癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨菱形结构域蛋白1(RHBDD1)、肝癌缺失基因(1DLC1)、β-连环蛋白在结直肠癌(CRC)与癌旁组织中表达水平的差异,分析三者在CRC组织中表达的相关性及与临床病理特征的关系。方法 以2021—2022年内蒙古包钢医院经外科手术切除且病理类型为腺癌的结直肠癌患者30例为研究对象,采用定量反转录聚合酶链式反应及蛋白质印迹法测定RHBDD1、DLC1和β-连环蛋白在CRC和癌旁组织中的表达情况,并分析三者在CRC中表达的相关性及与临床病理特征的关系。结果 RHBDD1、β-连环蛋白在癌组织中的表达高于癌旁组织,DLC1在癌组织中的表达低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。在CRC中,RHBDD1和β-连环蛋白的表达呈正相关。RHBDD1、β-连环蛋白均与DLC1的表达呈负相关,差异有统计学意义(P<0.05);RHBDD1、β-连环蛋白的表达量与组织分化程度呈负相关,与TNM分期、淋巴结转移呈正相关;DLC1与组织分化程度呈正相关,与TNM分期、淋巴结转移呈负相关,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 RHBDD1和β-连环蛋白在CRC中高表达,DLC1在CRC中低表达;RHBDD1、β-连环蛋白、DLC1与组织分化程度、TNM分期、淋巴结转移有关,且三者之间具有相关性,提示三者联合检测可能为CRC的诊断提供理论依据。

黄连水煎液微粒体系对大鼠小肠上皮细胞紧密连接结构与紧密连接蛋白ZO-1表达的影响

目的观察黄连水煎液微粒体系对大鼠小肠上皮细胞紧密连接结构与紧密连接蛋白-1(zonula occludens-1,ZO-1)表达的影响。方法通过常规煎煮获得黄连水煎液,经高速离心得黄连水煎液微粒及去微粒水煎液。采用大鼠肠循环灌注模型,分别用空白Kreb-Ringers(K-R)液、黄连水煎液、微粒重悬液和去微粒水煎液对大鼠空肠段进行循环灌注。2h后取下肠段,以透射电子显微镜观察细胞紧密连接结构的变化,采用免疫组织化学法检测空肠黏膜中ZO-1的表达水平。结果空白K-R液组与去微粒水煎液组小肠上皮细胞间连接紧密无明显间隙,ZO-1蛋白呈蜂窝或点状聚集于上皮细胞周围;黄连水煎液组与微粒重悬液组小肠上皮细胞间隙增大,且ZO-1表达水平显著降低(P<0.05)。结论黄连汤剂中活性成分肠吸收与黄连水煎液微粒体系调节小肠紧密连接结构和ZO-1表达水平有关。

紧密连接蛋白－1咬合蛋白及白细胞介素－18在急性重症胰腺炎肠黏膜中的表达

目的：观察急性重症胰腺炎（ severe acute pancreatitis ， SAP）肠黏膜紧密连接蛋白－1（ZO－1）、肠上皮咬合蛋白（Occludin）及白细胞介素（IL）－18的表达变化，探讨急性重症胰腺炎时肠道屏障功能损伤的机制。方法选择2012－06-2012－12在我院消化科住院治疗的急性重症胰腺炎患者和急性轻型胰腺炎患者各30例为胰腺炎组。选取正常健康人30例作为对照组。在急性胰腺炎患者置鼻空肠营养管同时，采集距离十二指肠乳头5 cm以上对侧十二指肠黏膜组织。采用免疫组织化学SP法检测肠组织ZO－1、Occludin、IL－18蛋白表达，采用Western blotting法进行肠组织ZO－1、Occludin、IL－18蛋白半定量检测。结果对照组、轻型胰腺炎组、重症胰腺炎ZO－1阳性率分别为56．7％、50．0％、40．0％，轻、重胰腺炎组ZO－1阳性率低于对照组（P＜0．05）。重症胰腺炎组ZO－1阳性率低于轻型胰腺炎组（P＜0畅05）。对照组及轻、重症胰腺炎组Occludin阳性率分别为50．0％、40．0％、33．3％，轻、重症胰腺炎组Occludin阳性率低于对照组（P＜0．05），重症胰腺炎组Occludin阳性率低于轻型胰腺炎组（P＜0．05）。对照组、轻型胰腺炎组、重症胰腺炎组IL－18阳性率分别为10．0％、46．7％、86．7％，轻、重症胰腺炎组IL－18阳性率高于对照组（P＜0．05），重症胰腺炎组IL－18阳性率高于轻型胰腺炎组（P＜0畅05）。结论急性重症胰腺炎时，ZO－1、Occludin表达降低，IL－18表达增高，可能共同参与了急性胰腺炎肠黏膜屏障功能损伤的病理过程。

TNF-α对肠上皮细胞紧密连接蛋白表达的作用

目的:研究肿瘤坏死因子α(TNF-α)对肠上皮细胞紧密连接蛋白claudin-1定位和表达的影响,探讨TNF-α增加肠上皮细胞屏障通透性的作用机制.方法:Caco-2细胞(20-30代)应用含有2 mmol/ L谷氨酰胺、20%胎牛血清的DMEM培养液培养7d,细胞生长达到融合后加入不同浓度的TNF-α(0,10,100μg/L)继续培养24h,提取细胞蛋白制备NP-40可溶性及不溶性蛋白框架,Western blot检测磷酸化和非磷酸化的claudin-1蛋白含量,并应用间接免疫荧光法检测claudin-1的定位,实时定量PCR技术检测claudin-1 mRNA的表达.结果:免疫荧光染色可见对照组claudin-1沿细胞膜分布,呈蜂巢状线性荧光,10μg/L TNF-α引起claudin-1荧光信号减弱,并呈锯齿状异常分布;Western blot分析显示claudin-1蛋白有两种表达形式,一种为20 kDa(非磷酸化claudin-1),主要存在于NP-40可溶性蛋白样品中;另一种为25 kDa(磷酸化claudin-1),只存在于NP-40不溶性蛋白样品中.TNF-α不影响20 kDa claudin-1蛋白的表达,但可使25 kDa claudin-1蛋白表达下降且具有浓度依赖性(10,100μg/L:0.31±0.02.0.24±0.05 vs 0.43±0.09 P>0.05,P<0.05);实时定量PCR结果显示不同浓度的TNF-α(10,100μg/L)作用24h或100μg/L TNF-α作用不同时间(4,8和24h)与正常对照组相比均不能引起claudin-1 mRNA的改变.结论:TNF-α对Caco-2细胞紧密连接蛋白claudin-1 mRNA的表达没有影响,但可以引起有功能的磷酸化claudin-1蛋白表达减少.

β-胡萝卜素对小鼠肠黏膜上皮紧密连接蛋白的保护作用

本试验旨在探讨β-胡萝卜素对小鼠肠黏膜上皮紧密连接蛋白的保护作用。将40只体重在22～25 g的雄性健康昆明小鼠,随机分为4组,分别为对照组、β-胡萝卜素处理组、脂多糖（LPS）组、保护组,每组10只,对照组饲喂正常鼠粮,β-胡萝卜素组饲喂含有50 mg/kgβ-胡萝卜素的鼠粮,LPS组饲喂正常鼠粮并每天注射10 mg/kg LPS,保护组饲喂含有50 mg/kgβ-胡萝卜素的鼠粮并每天注射10 mg/kg LPS。结果表明：与对照组相比,LPS的注射能显著降低小鼠血液中IL-2、IL-4含量（P〈0.05）,显著提高小鼠血液中NO含量（P〈0.05）,影响小鼠结肠结构并显著降低结肠紧密连接蛋白ZO-1的蛋白表达（P〈0.05）;而与LPS组相比,保护组的小鼠血液中IL-2、IL-4含量以及结肠紧密连接蛋白ZO-1的蛋白表达显著升高（P〈0.05）,NO含量显著降低（P〈0.05）。结果显示,β-胡萝卜素可对由LPS应激造成的小鼠肠黏膜损伤具有明显的保护作用,该结果对保护肠屏障功能具有重要意义。

单核细胞趋化蛋白-1对系膜细胞增殖及纤维连接蛋白和Ⅰ型胶原基因表达的影响

目的观察单核细胞趋化蛋白1(MCP1)对体外培养的大鼠系膜细胞增殖及纤维连接蛋白(FN)和Ⅰ型胶原(COLⅠ)基因表达的影响。方法采用不同浓度的MCP1刺激体外培养的系膜细胞,于不同的时间应用MTT法测定系膜细胞增殖活性,半定量RTPCR的方法测定细胞FN和COLⅠmRNA的相对表达量。结果随着MCP1浓度的增高,刺激时间的延长,MCP1明显促进系膜细胞的增殖、上调细胞FN和COLⅠmRNA的表达(Ρ<0.01),表现为剂量和时间依赖性。结论MCP1能促进大鼠系膜细胞的增殖及上调细胞FN和COLⅠmRNA的表达。MCP1可能在系膜增生性肾小球肾炎的发病过程中起一定的作用。

黄芪提取物对脑微血管内皮细胞咬合蛋白和紧密连接蛋白1的影响

目的观察β-淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)对脑微血管内皮细胞活力、咬合蛋白及紧密连接蛋白1表达的影响。方法将细胞分为对照组、Aβ诱导组及不同剂量黄芪提取物组。采用噻唑蓝法测定细胞活力;蛋白印迹法检测咬合蛋白和紧密连接蛋白1表达;逆转录-集合酶链式反应(RT-PCR)分析咬合蛋白和紧密连接蛋白1 mRNA的表达。结果与对照组比较,Aβ诱导组细胞活力随着孵育天数增加逐渐下降(P<0.05),咬合蛋白和紧密连接蛋白1表达降低(P<0.05),咬合蛋白mRNA和紧密连接蛋白1 mRNA表达降低(P<0.05);与Aβ诱导组比较,黄芪提取物组细胞活力随着孵育天数增加逐渐升高(P<0.05),咬合蛋白和紧密连接蛋白1蛋白表达增加(P<0.05),咬合蛋白mRNA和紧密连接蛋白1 mRNA表达升高(P<0.05)。结论黄芪提取物能改善Aβ1-40损伤的脑部微血管壁内皮细胞活力,升高咬合蛋白和紧密连接蛋白1蛋白及mRNA表达,达到保护血脑屏障的目的。