紧密连接蛋白-6基因对结肠癌小鼠模型肿瘤生长影响及其表达水平

目的观察紧密连接蛋白(claudin)-6基因对结肠癌小鼠模型肿瘤生长的影响。方法将40只雄性C57BL/6小鼠(购自西安交通大学实验动物中心)分采用随机对照组原则分为对照组(10只)和模型组(30只),模型组通过腹腔注射氧化偶氮甲烷(AOM)的方式诱导结肠癌模型,将建模成功的小鼠随机分为两组,即模型组(10只)和claudin-6组(10只)。其中claudin-6尾静脉注射claudin-6过表达质粒,每周1次,连续4周。模型组注射等量的阴性对照(NC)质粒,对照组腹腔注射等剂量的生理盐水。干预后将小鼠拉颈处死取出结肠癌组织和正常结肠癌组织,分别检测瘤体的体积和质量。采用苏木精-伊红(HE)染色检测建立模型,采用免疫组织化学染色检测组织中claudin-6蛋白的表达,采用定量聚合酶链反应(qPCR)检测claudin-6 mRNA的水平,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测claudin-6蛋白表达水平,采用微血管密度(MVD)检测结肠癌组织为血管生成。采用单因素方差分析(ANOVA)以评估组间差异,两两分析采用t检验。结果干预后claudin-6组的肿瘤体积和质量分别为(0.63±0.18)cm3和(0.57±0.15)g,均显著降低并低于对照组的(1.61±0.29)cm3和(1.46±0.34)g(t=6.754、8.695,P<0.05),差异有统计学意义。干预后模型组结肠癌组织中mRNA(1.98±0.21)和claudin-6蛋白(1.27±0.17)水平显著低于对照组(5.68±0.46和3.95±0.31,t=12.357、15.674,P<0.05),claudin-6组的mRNA(3.58±0.32)和claudin-6蛋白(2.46±0.27)水平显著高于模型组(1.98±0.21和1.27±0.17,t=5.647、6.358,P<0.05)。模型组的MVD水平(27.64±5.32)显著高于对照组(7.43±1.74,t=4.847,P<0.05),claudin-6组MVD水平(16.99±4.14)显著高于对照组(7.43±1.74,t=8.472,P<0.05),差异均有统计学意义。结论过表达claudin-6具有抑制结肠癌生长和血管生成的作用,提示claudin-6在结肠癌中的抑癌作用。