双相情感障碍患者血清紧密连接蛋白5连蛋白水平及其临床意义

目的探讨双相情感障碍患者血清紧密连接蛋白5、连蛋白水平及其临床意义。方法将96例双相情感障碍患者按疾病类型分为缓解组(49例)和发作组(47例),检测缓解组、发作组和对照组(96名健康志愿者)血清紧密连接蛋白5、连蛋白水平,采用蒙哥马利抑郁量表、杨氏躁狂状态评定量表评定抑郁、躁狂严重程度,并比较3组检测结果和量表评分。采用Pearson相关分析探讨血清紧密连接蛋白5、连蛋白水平与抑郁、躁狂严重程度的关系,绘制受试者工作特征曲线并计算曲线下面积,分析血清紧密连接蛋白5、连蛋白对双相情感障碍的诊断价值。结果缓解组及发作组血清紧密连接蛋白5、连蛋白水平显著高于对照组(P<0.05),缓解组与发作组血清紧密连接蛋白5、连蛋白水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。发作组蒙哥马利抑郁量表、杨氏躁狂状态评定量表评分显著高于缓解组、对照组(P<0.05),缓解组显著高于对照组(P<0.05)。双相情感障碍患者血清紧密连接蛋白5水平与蒙哥马利抑郁量表、杨氏躁狂状态评定量表评分呈显著正相关(P<0.05或0.01);血清连蛋白水平与杨氏躁狂状态评定量表评分呈显著负相关(P<0.05)。血清紧密连接蛋白5预测双相情感障碍的曲线下面积为0.714(95%CI为0.628~0.821,P<0.05),最佳截断值为1650.25 pg·ml^(-1),灵敏度为73.5%,特异度为71.3%;血清连蛋白预测双相情感障碍的曲线下面积为0.685(95%CI为0.563~0.845,P<0.05),最佳截断值为150.50 ng·ml^(-1),灵敏度为74.3%,特异度为65.1%;两者联合预测双相情感障碍的曲线下面积为0.857(95%CI为0.671~0.916,P<0.05),敏感度为86.4%,特异度为90.2%。结论双相情感障碍患者血清紧密连接蛋白5、连蛋白水平明显升高,二者可能是诊断双相情感障碍的有效生物标志物,二者联合诊断价值更高。

血清胸苷磷酸化酶、紧密连接蛋白5水平与脓毒症相关性脑病的关系

目的探讨血清胸苷磷酸化酶(TP)、紧密连接蛋白5(claudin-5)水平与脓毒症相关性脑病(SAE)的关系。方法回顾性抽取2021年9月至2023年9月安康市中心医院诊治的78例脓毒症患者作为研究对象,根据是否合并SAE分为SAE组(34例)和非SAE组(44例)。收集两组患者的临床资料、急性生理学和慢性健康状况评价Ⅱ(APACHEⅡ)评分、28 d病死率、序贯性器官衰竭评估(SOFA)评分及血清TP、claudin-5水平,分析血清TP、claudin-5水平与APACHEⅡ评分、SOFA评分、28 d病死率的相关性;采用受试者工作特征曲线评价血清TP、claudin-5水平对SAE发生的预测价值;根据受试者工作特征曲线获取的最佳截断值为界分为低表达与高表达,进一步分析血清TP与claudin-5水平的交互作用。结果SAE组APACHEⅡ评分、28 d病死率、SOFA评分及血清TP、claudin-5水平均高于非SAE组(P均<0.05);血清TP、claudin-5水平与APACHEⅡ评分、SOFA评分、28 d病死率呈正相关(P<0.05)。未矫正前结果显示,APACHEⅡ评分、SOFA评分、28 d病死率、血清TP、claudin-5水平与SAE独立相关(P<0.05);校正后结果显示,血清TP、claudin-5水平仍与SAE独立相关(P<0.05)。血清TP、claudin-5水平联合预测SAE发生的曲线下面积为0.897(95%CI:0.869~0.924),大于各指标单独预测(P<0.05)。TP高表达与claudin-5高表达同时存在所致的SAE发病风险的RR为2.841(95%CI:1.337~6.037),交互作用系数γ=1.448(>1),提示TP高表达与claudin-5高表达同时存在所致的SAE发病风险中呈正向交互作用。结论SAE患者血清TP、claudin-5水平表达与病情程度、预后密切相关,二者联合预测SAE发生效能较高,高表达TP与高表达claudin-5同时暴露可共同促进SAE发病风险。

TBI大鼠Claudin-5紧密连接蛋白表达变化及CBD干预研究

目的观察大鼠创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)后脑微血管内皮细胞间紧密连接蛋白Claudin-5表达的时序性规律,探讨大麻二酚(cannabidiol,CBD)的干预作用。方法采用改良Feeney自由落体撞击法建立SD大鼠TBI模型,随机分为对照组(Sham组)、模型组(TBI+vehicle组)和干预组(TBI+CBD组),每组分8 h、1 d、2 d、3 d、5 d和7 d 6个亚组(n=3)。运用RT-PCR、免疫组织化学染色和免疫荧光双标染色实验,观察CBD干预对TBI后Claudin-5阳性表达与星形胶质细胞(astrocyte,AST)激活的影响。结果PCR结果表明:TBI后不同时间段Claudin-5的mRNA表达下降,CBD干预后,其表达有明显回升。免疫组化及免疫荧光结果表明,Sham组Claudin-5蛋白表达于脑微血管内皮细胞连接处,呈点状、线条状,AST胞体较小、突起少呈细长状;TBI后Claudin-5阳性细胞线条断裂,其表达显著减弱且呈下降趋势,以2 d组表达最低(P<0.05),此外,AST被激活,胞体变大、突起增多肿胀;CBD干预后Claudin-5阳性表达显著升高,AST激活状态明显减弱,胞体有所回缩,足板肿胀减轻。胶质纤维酸性蛋白阳性表达的AST和Claudin-5蛋白不存在共表达,但是AST伸出的足板与微血管内皮细胞直接相贴附。结论TBI后AST激活并参与Claudin-5蛋白表达的调节;CBD可能通过调控AST的激活状态调节Claudin-5阳性表达,进而改善血脑屏障的通透性。

局部亚低温对大鼠脑出血模型脑组织中紧密连接相关蛋白-5表达的影响

目的:探讨局部亚低温对大鼠脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)模型紧密连接相关蛋白-5(Claudin-5)表达的影响以及局部亚低温减轻ICH后水肿的可能机制。方法:选取雄性SD大鼠216只,采用自体血注入法制备ICH模型,并随机分为ICH组和ICH加局部亚低温(ICH+H)组。每组又分为假手术组以及ICH后6 h、12 h、24 h、3 d、7 d组共6个亚组。ICH+H组于注血后给予局部亚低温治疗。采用免疫组织化学法检测Claudin-5的表达,采用伊文思蓝法进行血脑屏障通透性的检测,采用干湿质量法进行脑组织含水量的检测。结果:ICH组大鼠血肿周围脑组织中Claudin-5表达在ICH后6 h开始减少,ICH后24 h下降最显著,ICH后7 d时仍低于假手术组(P<0.05);ICH组大鼠在ICH后6 h开始出现血脑屏障通透性及脑组织含水量增加(P<0.05),在ICH后3 d达到高峰,然后逐渐消退。ICH+H组大鼠ICH后各时间点Claudin-5表达均高于ICH组(P<0.05),而血脑屏障通透性、脑组织含水量则低于ICH组(P<0.05)。结论:局部亚低温可能通过提高Claudin-5的表达来抑制ICH后脑水肿的形成。

紧密连接蛋白Claudin-5表达在乳腺癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨人乳腺癌组织中紧密连接蛋白Claudin-5的表达及与临床病理特征的关系。方法应用半定量PCR和Western blotting检测88例乳腺癌组织和61例乳腺增生组织中Claudin-5 m RNA及Claudin-5蛋白的表达水平,分析乳腺癌组织中Claudin-5蛋白表达与临床病理特征(分化程度、淋巴结转移、年龄、组织学分级、肿瘤大小和临床分期)及预后的关系。结果乳腺癌组织中的Claudin-5 m RNA和Claudin-5蛋白相对表达水平分别为0.87±0.13和0.95±0.23,均高于乳腺增生组织的0.23±0.09和0.54±0.18,差异有统计学意义(P<0.01);Claudin-5蛋白表达与分化程度有关(P<0.05),与年龄、肿瘤大小、临床分期和组织学分级无关(P>0.05);Claudin-5蛋白低表达者的中位生存期为45.5个月,高于高表达者的29.5个月,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Claudin-5在乳腺癌组织中高表达,可能与乳腺癌发生和转移有着密切关系,并可作为判断乳腺癌淋巴结转移和预后评估的参考指标。

大鼠脑缺血模型中基质金属蛋白酶2/9活化增加及紧密连接蛋白逐渐降解

背景:在脑卒中后急性期脑损伤过程中,基质金属蛋白酶破坏血管基膜的完整性,促进中性粒细胞和炎性因子的迁移,引起继发性脑损伤。目的:观察大鼠局部脑缺血模型中不同缺血时间下基质金属蛋白酶2/9活性及紧密连接蛋白的降解规律。方法:将39只雄性SD大鼠随机均分为3组,采用改良线栓法建立大脑中动脉缺血(脑卒中)模型,即分离颈外动脉,采用经颈外动脉插入线栓进入颈内动脉最终到达大脑中动脉的方法,3组缺血时间分别为3,5,7 h,再灌注后2 h,测试各组Zea-Longa和Ludmila Belayev神经功能学评分,脑组织梗死面积、基质金属蛋白酶2/9活性及紧密连接蛋白5的降解。结果与结论:随着缺血时间的延长,脑梗死面积逐渐增大,组间两两比较差异有显著性意义(P<0.05);随着缺血时间的延长,中枢神经系统损伤逐渐加重,组间两两比较差异有显著性意义(P<0.05);随着缺血时间的延长,基质金属蛋白酶2/9的活性逐渐增强,组间两两比较差异有显著性意义(P<0.05);随着缺血时间的延长,紧密连接蛋白5的表达逐渐减少。说明长时间缺血后,脑组织的进行性损伤引起基质金属蛋白酶2/9活化的逐渐增加及紧密连接蛋白5的逐渐降解。

噪声对豚鼠耳蜗血管纹紧密连接蛋白claudin-5表达及血迷路屏障通透性的影响

目的研究噪声对豚鼠耳蜗血管纹紧密连接蛋白claudin-5表达及血迷路屏障功能的影响。方法40只豚鼠随机分为正常对照组(20只)和噪声暴露组(20只),噪声暴露组给予声强为115dB SPL白噪声暴露,每天6小时,连续两天,对照组不予噪声暴露。于实验前及噪声暴露后次日对两组豚鼠行ABR检测,第二次ABR检测后对两组豚鼠耳蜗基底膜行鬼笔环肽-异硫氰酸荧光素(Phalloidin-FITC)染色;用硝酸镧透射电镜和常规透射电镜观察两组豚鼠内耳血迷路屏障通透性和紧密连接的变化;Western blot和免疫组织化学染色观察两组豚鼠耳蜗血管纹和螺旋韧带处claudin-5的表达。结果噪声暴露组豚鼠ABR波Ⅲ反应阈较正常对照组阈移40dB以上,差异有统计学意义(P<0.05);基底膜铺片FITC染色示噪声暴露组底回基底膜毛细胞大量缺失,其余部分毛细胞纤毛排列紊乱并出现融合,而对照组毛细胞排列整齐,其纤毛呈V或W型,两组间外毛细胞计数比较差异有统计学意义(P<0.05);透射电镜下,可见噪声暴露组血管内皮细胞间和边缘细胞间的紧密连接均遭到破坏,细胞间隙增大;硝酸镧透射电镜下,大量镧颗粒从血管腔内渗漏到管腔外的组织间隙,而对照组镧颗粒仅局限于血管腔内;Western blot结果示,两组耳蜗外侧壁血管纹均有claudin-5表达,但噪声暴露组的表达量明显低于正常组;免疫组织化学染色也表明,两组豚鼠耳蜗外侧壁毛细血管内皮细胞、边缘细胞等处均有claudin-5阳性表达,但噪声组表达量显著低于正常组(P<0.05)。结论噪声通过下调紧密连接蛋白claudin-5的表达,破坏细胞间紧密连接,增加豚鼠血迷路屏障的通透性,从而导致内耳微环境的破坏,是噪声性聋可能的发病机制之一。

健脾补土方对脑缺血再灌注大鼠缺血侧皮质Claudin-5、Occludin、p-BAD、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达的影响

目的探讨健脾补土方减轻脑缺血再灌注大鼠神经元损伤的可能作用机制。方法将80只SD大鼠随机分为假手术组10只、手术组70只,手术组经模型制备后评价,剔除不成功的及死亡大鼠,二次分组,分为模型组、依达拉奉组、健脾补土方高、中、低剂量组,每组各13只。手术组采用大脑中动脉栓塞法制备脑缺血再灌注模型(middle cerebral artery occlusion,MCAO),干预7天,取材。取材前每组选取10只,采用国际公认的大鼠脑卒中后神经功能缺损评分法(mNss评分)进行神经功能缺损评分。取材部位为缺血侧脑皮质组织。每组随机选取3只采用苏木素—伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色法观察病理形态改变;每组随机选取其中5只采用Western blot法检测紧密连接蛋白-5(Claudin-5)、闭合蛋白(Occludin)表达量;剩余5只采用免疫组化法检测磷酸化相关死亡启动因子(phospho-Bcl-xL/Bcl-2 asociated death promoter,p-BAD)、B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和半胱天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达量。结果(1)造模后,与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损评分明显上升,经药物干预后,各组神经功能缺损评分均有所下降(P<0.05),其中以依达拉奉组与健脾补土方高剂量组下降最为明显;(2)造模后,模型组大鼠较假手术组病理改变严重,出现组织大片坏死,经药物干预后,各组病理改变均有所改善,依达拉奉组和健脾补土方高剂量组尤为明显;(3)与模型组比较,各药物干预组脑组织缺血皮质区Occludin、Claudin-5蛋白表达均有所上调,差异有统计学意义(P<0.05),其中以依达拉奉组和健脾补土方高剂量组最为显著;(4)与模型组比较,各药物干预组脑缺血皮质组织p-BAD、Bcl-2蛋白表达均明显增加,Caspase-3蛋白表达有所降低(P<0.05),其中依达拉奉组与健脾补土方高剂量组最为显著。结论健脾补土方可能通过上调p-BAD、Bcl-2、Claudin-5、Occludin蛋白表达,下调Caspase-3蛋白表达,从而改善脑缺血再灌注大鼠神经功能缺损症状及脑组织病理改变,进而促进缺血脑组织损伤修复。

不同时程电针预处理对脑缺血再灌注大鼠血脑屏障水通道蛋白-4及紧密连接蛋白-5的影响

目的观察不同时程电针（取穴百会、水沟）预处理对继发脑缺血再灌注大鼠血脑屏障水通道蛋白-4（AQP4）及紧密连接蛋白-5（CLN5）表达的影响。 方法采用随机数字表法将64只雄性SD大鼠分为模型组、假手术组、电针预处理7d组及电针预处理15d组，电针预处理7d组及电针预处理15d组分别给予持续7d、15d的电针（取穴百会、水沟）预处理。待上述预处理结束后，参照Longa改良线栓法将模型组、电针预处理7d组及电针预处理15d组大鼠制成单侧大脑中动脉栓塞（MCAO）模型，假手术组大鼠术中仅分离颈总动脉，不栓塞中动脉血流。各组大鼠于大脑中动脉栓塞90min后进行再灌注。于制模24h后采用免疫组化法、荧光定量PCR法检测各组大鼠血脑屏障AQP4、CLN5阳性细胞及其mRNA表达情况。 结果与假手术组比较，模型组及各电针预处理组大鼠血脑屏障AQP4阳性细胞及其mRNA表达均明显上调（P〈0.05），CLN5阳性细胞及其mRNA表达均明显下调（P〈0.05）；与模型组比较，电针预处理7d组及15d组AQP4阳性细胞及其mRNA表达均明显下调（P〈0.05），CLN5阳性细胞及其mRNA表达均明显上调（P〈0.05）；与电针预处理7d组比较，电针预处理15d组AQP4阳性细胞数［（25.15±0.55）个/每高倍镜视野］及其mRNA表达（1.16±0.04）下调幅度、CLN5阳性细胞数［（62.88±0.61）个/每高倍镜视野］及其mRNA表达（0.80±0.03）上调幅度均更显著（P〈0.05）。 结论不同时程电针（取穴百会、水沟）预处理可抑制脑缺血再灌注大鼠血脑屏障AQP4阳性细胞及其mRNA表达，促进CLN5阳性细胞及其mRNA表达；以电针预处理15d对脑缺血再灌注大鼠血脑屏障的保护作用相对较好；电针预处理诱导大鼠脑缺血耐受可能与调节脑缺血再灌后血脑屏障AQP4、CLN5及其mRNA表达有关。

实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠血脑屏障通透性与紧密连接蛋白-5的变化

目的观察实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠血脑屏障(BBB)通透性与紧密连接蛋白-5(claudin-5)表达的变化。方法 40只C57BL/6小鼠随机分为EAE组和正常对照组,应用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55诱导制作小鼠EAE模型,每日进行神经功能缺损评分。采用苏木精-伊红、髓鞘染色和免疫组化法观察炎症细胞浸润、髓鞘脱失及轴索损坏程度。伊文思蓝染色和Western blot法观察BBB通透性和claudin-5表达的变化。结果与正常对照组比较,EAE组小鼠神经功能缺损评分、炎症细胞浸润、髓鞘脱失、轴索损坏和BBB通透性均明显增加;而claudin-5表达显著降低(均P<0.01)。BBB通透性的变化与平均神经功能缺损评分、炎症细胞浸润和轴索损坏均呈正相关(P<0.01);而与claudin-5表达水平呈负相关(P<0.05)。结论 EAE发病过程中claudin-5表达减少,可能导致BBB通透性增加,使外周大量的炎症反应细胞向中枢迁移,继而进一步加重中枢的炎症反应。

脑出血后血红蛋白对血脑屏障内皮细胞Rho激酶Ⅱ及紧密连接蛋白claudin-5的影响

目的探讨脑出血后血红蛋白对血脑屏障内皮细胞Rho激酶Ⅱ及紧密连接蛋白claudin-5的影响。方法将SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组（18只）和血红蛋白组（72只），血红蛋白组再按不同取材时间点分为24h、48h、3d、7d4个亚组（每个时间点18只）。血红蛋白组采用脑内注入血红蛋白法制作脑出血大鼠模型。免疫组化染色观察各组大鼠血脑屏障内皮细胞Rho激酶Ⅱ及磷酸化肌球蛋白轻链的蛋白表达，伊文思蓝浓度测定评估血脑屏障通透性，免疫荧光染色和实时荧光定量PCR检测claudin-5蛋白和mRNA表达。结果免疫组化染色结果显示：正常对照组血脑屏障内皮细胞Rho激酶Ⅱ及磷酸化肌球蛋白轻链表达较少，血红蛋白组血肿侧血脑屏障内皮细胞呈棕黄色及线条状表达；血红蛋白组48h、3d时血脑屏障内皮细胞Rho激酶Ⅱ及磷酸化肌球蛋白轻链平均吸光度值明显高于正常对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）。血红蛋白组各时间点脑内伊文思蓝含量均明显高于正常对照组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。免疫荧光染色结果显示：与正常对照组相比，血红蛋白组24h、48h及3d时claudin-5蛋白表达断续和减少。实时荧光定量PCR结果显示：血红蛋白组24h、48h、3d及7d时claudin．5mRNA表达水平明显低于正常对照组，差异有统计学意义（氏0．05）。结论脑出血后血红蛋白可以导致血脑屏障内皮细胞Rho激酶Ⅱ的表达增高，进而致磷酸化肌球蛋白轻链表达增加、紧密连接蛋白claudin-5表达降低，其可能是导致脑出血后血脑屏障破坏及脑水肿发生的重要机制之一。

胰高血糖素样肽-1受体与紧密连接相关蛋白5在糖尿病大鼠脑微血管内皮的表达变化

目的研究糖尿病大鼠脑微血管内皮细胞胰高血糖素样肽-1受体(GLP-1R)与紧密连接相关蛋白5(Claudin-5)的表达变化,初步探讨GLP-1在糖尿病大鼠脑微血管病变中的可能机制。方法 (1)8周龄雄性SD大鼠60只,随机分为高脂组(模型组,30只)与普通饲料组(对照组,30只),分别予以高脂饲料和普通饲料喂养8周。(2)8周后高脂组予以腹腔注射链脲佐菌素(STZ)30 g/kg,建立2型糖尿病(T2DM)大鼠模型。(3)成模4周后测定大鼠体重及空腹血糖变化。(4)处死各组大鼠,免疫组化和Western blot检测各组大鼠脑微血管内皮细胞上GLP-1R及Claudin-5蛋白表达情况。采用SPSS 13.0统计软件,计量资料用均数±标准差(x珋±s)表示,数据经正态检验后采用完全随机设计t检验。结果 (1)对照组大鼠体重由基础值(163.00±10.10)g增加至(331.10±17.40)g;模型组大鼠体重由基础值(165.00±12.10)g增加至(421.30±18.82)g,两组组内前后比较差异有统计学意义(t值分别为-100.935、-104.124,均P<0.05)。(2)模型组大鼠空腹血糖由基础值(5.370±0.552)mmol/L升高为4周时的(22.100±3.069)mmol/L,显著高于相应时间点对照组(t=29.190,P<0.05)。(3)成模8周后模型组大鼠海马皮质微血管内皮细胞上,GLP-1R表达弱于对照组(t=-31.787,P<0.05),且Claudin-5表达呈弱阳性,对照组大鼠Claudin-5呈强阳性表达(t=-24.288,P<0.05)。结论高糖可同时下调脑微血管内皮细胞上GLP-1R与Claudin-5蛋白的表达水平。

角质细胞生长因子-2对ALI大鼠肺组织趋化因子FKN及紧密连接蛋白claudin-5表达的影响

目的探讨角质细胞生长因子-2(KGF-2)对急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织趋化因子FKN和紧密连接蛋白claudin-5表达的影响。方法以健康雄性SD大鼠为研究对象,按随机数字表法分为生理盐水(NS)对照组、ALI模型组和KGF-2预处理组,每组10只。经尾静脉注射0.01mL/kg油酸建立大鼠ALI模型;NS对照组注射等量NS。KGF-2预处理组于制模前72h经大鼠气道内滴注5mg/kg KGF-2;NS对照组及ALI模型组滴注等量NS。各组于制模后8h取大鼠腹主动脉血,处死大鼠后对左肺支气管肺泡进行灌洗,收集支气管肺泡灌洗液(BALF),测定血浆和BALF中蛋白水平,计算肺通透性指数(LPI)。取右肺组织,用苏木素-伊红(HE)染色,光镜下观察其病理学改变,并计算ALI病理学评分(LIS);测定肺湿/干重(W/D)比值;采用免疫组化法及蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)对肺组织中FKN和claudin-5的表达进行定性、定量分析。双变量相关性采用直线或曲线拟合相关分析。结果ALI模型组大鼠肺组织损伤严重,出现明显的病理学改变,表现为肺泡间隔增厚,炎性细胞浸润;LIS评分、肺W/D比值及LPI均较NS对照组明显升高[LIS(分):3.56±0.28比0.62±0.36,肺W/D比值:6.37±0.29比4.39±0.33,LPI:3.46±0.69比0.98±0.17,均P<0.01]。与NS对照组比较,ALI模型组肺组织FKN阳性表达明显增强,表达量明显升高(FKN/GAPDH:0.97±0.18比0.62±0.04,P<0.01);claudin-5阳性表达明显减弱,表达量明显降低(claudin-5/GAPDH:0.56±0.11比1.06±0.13,P<0.01);FKN与claudin-5蛋白表达量呈显著负相关(r=-0.817,P=0.025)。给予KGF-2预处理后,大鼠肺组织损伤程度明显减轻,病理学改变明显改善;LIS评分、肺W/D比值及LPI均较ALI模型组明显降低[LIS(分):2.41±0.17比3.56±0.28,肺W/D比值:5.45±0.55比6.37±0.29,LPI:2.42±0.19比3.46±0.69,均P<0.01]。与ALI模型组比较,KGF-2预处理组大鼠肺组织FKN阳性表达明显减弱,表达量明显下降(FKN/GAPDH:0.79±0.03比0.97±0.18,P<0.01);而claudin-5阳性表达明显增强,表达量明显升高(claudin-5/GAPDH:0.80±0.05比0.56±0.11,P<0.01);FKN与claudin-5蛋白表达量仍呈显著负相关(r=-0.847,P=0.012)。结论KGF-2可能通过下调趋化因子FKN的表达,恢复紧密连接蛋白claudin-5的表达,从而减轻ALI时气血屏障损伤。

Rab25、Claudin-5和Claudin-7在结直肠癌中的表达及临床意义

目的探讨Rab25、Claudin-5和Claudin-7在结直肠癌组织和癌旁正常组织中的表达差异及临床意义。方法免疫组化SABC法分别检测53例结直肠癌患者肿瘤组织和癌旁正常组织中Rab25、Claudin-5和Claudin-7蛋白的表达水平,并将各因子的表达情况与患者的临床资料进行相关性分析,进而比较各因子之间表达水平的相关性。结果结直肠癌肿瘤组织中Rab25、Claudin-5、Claudin-7的表达水平均显著低于癌旁正常组织(P<0.05)。Rab25低表达与结直肠癌分化程度和淋巴结转移有关(P<0.05); Claudin-5表达与年龄和淋巴结转移有关(P<0.05); Claudin-7表达与分化程度、浸润深度和淋巴转移有关(P<0.05)。Rab25与Claudin-5、Claudin-5与Claudin-7之间在结直肠癌的表达存在相关性(P<0.05)。结论 Rab25、Claudin-5、Claudin-7的低表达可能促进结直肠癌的发生,且其低表达与结直肠癌进展存在一定相关,Rab25与Claudin-5之间、Claudin-5与Claudin-7之间也存在相关。

血清血脑屏障标志物水平与创伤性脑损伤患儿病情严重程度及预后的相关性分析

目的 探讨并分析血清血脑屏障标志物水平与创伤性脑损伤(TBI)患儿病情程度及预后的相关性。方法 选取2019年5月至2022年8月徐州市儿童医院收治的TBI患儿92例,根据入院时格拉斯哥昏迷指数(GCS)评分将其分为轻度组(28例,13~15分)、中度组(39例,9~12分)和重度组(25例,3~8分)。另选取同期该院因诊断需要行腰椎穿刺检查而脑脊液结果正常的患儿46例作为对照组。比较各组血清S100钙化蛋白B(S100B)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、紧密连接蛋白(Occludin)、紧密连接蛋白(claudin)-5、水通道蛋白(AQP)-4、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、基质金属蛋白酶(MMP)-9表达水平。采用Spearman相关性分析上述指标与病情严重程度的关系。采用格拉斯哥预后量表(GOS)评分评估随访6个月后患儿预后情况,比较不同预后患儿的血清血脑屏障标志物水平,采用受试者工作特征(ROC)曲线评价上述指标对TBI患儿预后的预测价值。结果 轻度组、中度组和重度组血清NSE、AQP-4、GFAP、MMP-9和Occludin水平均高于对照组,血清claudin-5水平低于对照组(P<0.05);重度组血清NSE、AQP-4、GFAP、MMP-9和Occludin水平高于轻、中度组(P<0.05),血清claudin-5水平低于轻、中度组(P<0.05);中度组和重度组血清S100B水平高于对照组和轻度组(P<0.05),重度组血清S100B水平高于中度组(P<0.05),但轻度组和对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。Spearman等级相关性显示,疾病严重程度均与血清S100B、NSE、AQP-4、GFAP、MMP-9、Occludin水平呈正相关(r=0.221、0.215、0.328、0.335、0.344、0.222,均P<0.05),与claudin-5呈负相关(r=-0.371,P<0.05)。随访6个月,预后良好组血清S100B、NSE、AQP-4、GFAP、MMP-9、Occludin水平均低于预后不良组(P<0.05),claudin-5水平高于预后不良组(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清S100B、NSE、AQP-4、GFAP、MMP-9、claudin-5、Occludin及联合检测预测TBI患儿预后的曲线下面积(AUC)分别为0.798、0.756、0.779、0.781、0.765、0.785、0.777和0.923,均具有较高的诊断价值。结论 血清S100B、NSE、AQP-4、GFAP、MMP-9、claudin-5、Occludin可能参与了TBI患儿病情的发展,可为TBI患儿预后评估的辅助指标。

金黄色葡萄球菌和纤维连接蛋白结合蛋白A对血管内皮细胞紧密连接的破坏作用

目的观察金黄色葡萄球菌和纤维连接蛋白结合蛋白A基因(fnBA)敲除金黄色葡萄球菌菌株对人微血管内皮细胞(HMEC-1)紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-5的影响,并探讨金黄色葡萄球菌侵袭血管内皮细胞的机制。方法将野生金黄色葡萄球菌菌株NCTC8325与HMEC-1按100︰1比例共培养,实时定量RT-PCR检测共培养30 min、60 min和120 min时HMEC-1紧密连接成份ZO-1和Claudin-5 mRNA的表达,同时应用Western blot分析和免疫组织化学染色观察共培养不同时间紧密连接蛋白ZO-1和Claudin-5的表达。构建fnBA基因敲除突变菌株NCTC8325ΔfnbA,以野生金黄色葡萄球菌菌株NCTC8325为阳性对照,观察突变株NCTC8325ΔfnbA与HMEC-1共培养120 min后紧密连接蛋白ZO-1和Claudin-5的变化。结果金黄色葡萄球菌NCTC8325与HMEC-1共培养30 min、60 min和120 min后紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-5 mRNA的表达在30 min、120 min时较对照组显著下降[30 min时与对照组比较:ZO-1:t=4.104、P=0.015,Claudin-5 mRNA:t=2.802、P=0.049;120 min时与对照组比较:ZO-1:t=3.478、P=0.025,Claudin-5 mRNA:t=1.802、P=0.261],但60 min时ZO-1、Claudin-5 mRNA的表达有一过性升高。与金黄色葡萄球菌NCTC8325共培养后,免疫组织化学结果发现在30 min时ZO-1和Claudin-5两种紧密连接蛋白较对照组表达显著下降(t=33.6、59.03,P均<0.001),120 min时ZO-1和Claudin-5两种紧密连接蛋白较对照组表达亦显著下降(t=31.8、60.75,P均<0.001);Western blot与免疫组组织化学结果一致。与突变菌株NCTC8325ΔfnbA共培养30 min、60 min和120 min后,在30 min和60 min时ZO-1、Claudin-5蛋白的表达与NCTC8325组差异无统计学意义(P均>0.05),在120 min时ZO-1和Claudin-5蛋白的表达较NCTC8325组显著升高,差异均有统计学意义(ZO-1:t=14.89、P<0.001,Claudin-5:t=7.008、P=0.002)。结论金黄色葡萄球菌能通过下调紧密连接蛋白破坏HMEC-1紧密连接屏障,且其表面蛋白FnBPA发挥了重要作用。

荧光引导下脑脓肿切除术的临床应用研究

目的探讨荧光引导技术在脑脓肿切除术中的应用。方法回顾性分析陆军军医大学新桥医院神经外科2017年8月—2020年3月收治的6例脑脓肿患者,所有患者均在Pentero 900显微镜(Carl Zeiss,德国)下采用荧光素钠(SF)引导技术治疗。分析脑脓肿壁的紧密连接蛋白-5(claudin-5)免疫组化染色。结果术中所有脑脓肿黄荧光显影良好,脑脓肿中毛细血管内皮细胞上的claudin-5表达下调并呈非连续性表达。结论脑脓肿壁毛细血管内皮上claudin-5表达下调导致血脑屏障破坏,荧光引导技术可以应用于脑脓肿手术,提高治疗效果。

血清Claudin-5水平有利于早期预测重症急性胰腺炎:一项前瞻性观察性研究

目的探讨急性胰腺炎(AP)患者早期血清紧密连接蛋白Claudin-5水平在重症方面的预测价值。方法采用前瞻性观察性研究方法,纳入2021年12月1日至2022年11月30日在江苏省苏北人民医院确诊AP并收入院的患者,随机纳入同期符合条件的健康志愿者作为健康对照组。根据2012年亚特兰大分级标准将AP患者分为轻症急性胰腺炎(MAP)组、中度急性胰腺炎(MSAP)组和重症急性胰腺炎(SAP)组;再根据住院时间将SAP患者分为入院1、3、7 d亚组。收集所有入选者的基线资料,包括性别、年龄、基础疾病及可能病因;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组入选者血清Claudin-5水平;通过院内检验查询系统获得各组AP患者其他血清学指标数据〔血细胞比容(HCT)、白蛋白(Alb)、血清Ca^(2+)、C-反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)水平〕;记录各组AP患者改良Marshall评分(mMarshall)、改良CT严重程度指数(mCTSI)评分、急性胰腺炎床旁严重程度指数(BISAP)评分、急性生理学与慢性健康状况评分Ⅱ(APACHEⅡ)。分析并比较各组间上述指标的差异;采用Spearman相关法分析Claudin-5水平与各影响因素之间的相关性;绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析各影响因素对SAP的预测价值;采用多因素岭回归分析筛选SAP的独立危险因素。结果共纳入109例AP患者,其中MAP组66例,MSAP组15例,SAP组28例;同时有27例健康志愿者纳入健康对照组。各组入选者的性别和年龄比较差异均无统计学意义,3组AP患者在基础疾病和病因构成方面比较差异亦均无统计学意义。各组AP患者血清Claudin-5水平随病情加重呈明显升高趋势,且均显著高于健康对照组〔ng/L:888.58(574.52,1141.59)、3749.02(2784.93,5789.92)、4667.81(3935.21,7315.66)比291.13(250.19,314.75),均P<0.05〕。亚组分析显示,随病程延长,SAP组患者入院3 d的Claudin-5水平较入院1 d呈明显下降趋势〔ng/L:2052.59(1089.43,4006.47)比4667.81(3935.21,7315.66),P<0.05〕。Spearman相关性分析显示,AP患者血清Claudin-5水平与CRP、PCT、HCT及mMarshall、mCTSI、BISAP评分均呈显著正相关(r值分别为0.570、0.525、0.323、0.774、0.670、0.652,均P<0.001),与Alb呈显著负相关(r=-0.394,P<0.001)。而AP患者随病情加重HCT水平呈明显上升趋势,Alb水平呈明显下降趋势;SAP患者经治疗后上述现象有改善倾向,间接表明血清Claudin-5水平正向反映血管渗漏。ROC曲线分析显示,AP患者血清Claudin-5水平早期预测SAP的准确性最高,ROC曲线下面积(AUC)为0.948,当血清Claudin-5≥2997 ng/L时,早期筛查SAP的敏感度为100%,特异度为88.89%。多因素岭回归分析显示,血清Claudin-5、PCT水平和APACHEⅡ评分可作为早期预测SAP的独立危险因素(均P<0.05)。结论血清Claudin-5水平有利于早期预测SAP,并与炎症反应和血管渗漏密切相关。

甘草甜素对脑缺血大鼠的脑保护作用及机制探讨

目的观察梗死后高迁移率族蛋白B1(HMGB1);晚期糖基化终产物(RAGE);Toll样受体4(TLR4);核因子-κB(NF-κB);紧密连接蛋白5(claudin-5)的表达变化,并观察行为学评分、脑水肿及梗死体积,探讨甘草甜素(Gly)对脑缺血的保护机制。方法线栓法制备大鼠大脑中动脉永久性闭塞(pMCAO)模型。Gly进行干预,比较各组之间神经功能缺损评分、患侧脑水肿和脑梗死体积的变化。同时用免疫组化、实时定量PCR和Western blot方法,分别在梗死后24 h观察HMGB1、RAGE、TLR4、NF-κB和claudin-5蛋白表达变化,以及TLR4、NF-κB和claudin-5的基因表达变化。结果 Gly显著改善神经功能缺失,减轻梗死后患侧脑水肿,减小脑梗死体积(P<0.05);Gly能明显降低HMGB1、RAGE、TLR4和NF-κB的表达(P<0.05),升高claudin-5的表达(P<0.05)。结论 Gly对缺血性脑组织发挥保护作用可能是通过下调HMGB1、RAGE、TLR4、NF-κB的表达,升高claudin-5的表达实现的。

组织蛋白酶L切割补体C3介导三氯乙烯致敏小鼠肾小球内皮细胞损伤

目的观察组织蛋白酶L(CTSL)阻断前后三氯乙烯(TCE)致敏小鼠肾小球中补体片段3(C3)和内皮细胞损伤相关蛋白的表达情况,探讨CTSL在TCE致敏小鼠肾脏损伤中的作用。方法于2018年6月,将41只SPF级雌性BALB/c小鼠随机分为空白对照组(n=5)、溶剂对照组(n=5)、TCE组(n=15)和TCE+CTSLi组(n=16),建立TCE致敏小鼠模型,通过腹腔注射CTSL抑制剂(CTSLi)对小鼠进行预处理,采用TCE对小鼠进行初次激发和末次激发,根据皮肤致敏反应评分将小鼠分为致敏阳性组和致敏阴性组。于末次激发后72 h检测小鼠肾功能指标,观察小鼠肾脏组织病理学改变情况,并检测肾小球C3和内皮细胞损伤相关蛋白[血管细胞黏附分子1(VCAM-1)、紧密连接蛋白5(Claudin-5)和多配体蛋白聚糖1(Syndecan-1)]的表达水平。结果 TCE组和TCE+CTSLi组小鼠致敏率分别为53.3%(8/15)和50.0%(8/16),两组间差异无统计学意义(P>0.05)。TCE致敏阳性组小鼠血清肌酐(CRE)、尿素氮(BUN)水平明显高于溶剂对照组和TCE致敏阴性组(P<0.05),而TCE+CTSLi致敏阳性组小鼠血清CRE、BUN水平明显低于TCE致敏阳性组(P<0.05)。TCE致敏阳性组小鼠肾脏可见明显空泡变性及细胞水肿,TCE+CTSLi致敏阳性组小鼠上述病理损害程度明显改善。TCE致敏阳性组肾小球C3片段和VCAM-1表达明显高于溶剂对照组和TCE致敏阴性组(P<0.05),而TCE+CTSLi致敏阳性组C3片段和VCAM-1表达明显低于TCE致敏阳性组(P<0.05)。Western blot检测结果提示,TCE致敏阳性组小鼠肾小球Claudin-5、Syndecan-1蛋白相对表达水平较溶剂对照组和TCE致敏阴性组明显降低(P<0.05)。与TCE致敏阳性组比较,TCE+CTSLi致敏阳性组小鼠肾脏Syndecan-1蛋白相对表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);Claudin-5蛋白表达水平升高,但差异无统计学意义(P>0.05);结论 CTSL可能通过切割补体C3,激活补体系统,通过破坏内皮细胞结构蛋白Syndecan-1及过表达黏附分子VCAM-1,介导TCE致敏过程中小鼠的肾小球结构和功能损害,抑制CTSL的表达可能是保护小鼠肾小球结构和功能完整性的有效手段。