紧密连接蛋白Claudin-5表达在乳腺癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨人乳腺癌组织中紧密连接蛋白Claudin-5的表达及与临床病理特征的关系。方法应用半定量PCR和Western blotting检测88例乳腺癌组织和61例乳腺增生组织中Claudin-5 m RNA及Claudin-5蛋白的表达水平,分析乳腺癌组织中Claudin-5蛋白表达与临床病理特征(分化程度、淋巴结转移、年龄、组织学分级、肿瘤大小和临床分期)及预后的关系。结果乳腺癌组织中的Claudin-5 m RNA和Claudin-5蛋白相对表达水平分别为0.87±0.13和0.95±0.23,均高于乳腺增生组织的0.23±0.09和0.54±0.18,差异有统计学意义(P<0.01);Claudin-5蛋白表达与分化程度有关(P<0.05),与年龄、肿瘤大小、临床分期和组织学分级无关(P>0.05);Claudin-5蛋白低表达者的中位生存期为45.5个月,高于高表达者的29.5个月,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Claudin-5在乳腺癌组织中高表达,可能与乳腺癌发生和转移有着密切关系,并可作为判断乳腺癌淋巴结转移和预后评估的参考指标。

噪声对豚鼠耳蜗血管纹紧密连接蛋白claudin-5表达及血迷路屏障通透性的影响

目的研究噪声对豚鼠耳蜗血管纹紧密连接蛋白claudin-5表达及血迷路屏障功能的影响。方法40只豚鼠随机分为正常对照组(20只)和噪声暴露组(20只),噪声暴露组给予声强为115dB SPL白噪声暴露,每天6小时,连续两天,对照组不予噪声暴露。于实验前及噪声暴露后次日对两组豚鼠行ABR检测,第二次ABR检测后对两组豚鼠耳蜗基底膜行鬼笔环肽-异硫氰酸荧光素(Phalloidin-FITC)染色;用硝酸镧透射电镜和常规透射电镜观察两组豚鼠内耳血迷路屏障通透性和紧密连接的变化;Western blot和免疫组织化学染色观察两组豚鼠耳蜗血管纹和螺旋韧带处claudin-5的表达。结果噪声暴露组豚鼠ABR波Ⅲ反应阈较正常对照组阈移40dB以上,差异有统计学意义(P<0.05);基底膜铺片FITC染色示噪声暴露组底回基底膜毛细胞大量缺失,其余部分毛细胞纤毛排列紊乱并出现融合,而对照组毛细胞排列整齐,其纤毛呈V或W型,两组间外毛细胞计数比较差异有统计学意义(P<0.05);透射电镜下,可见噪声暴露组血管内皮细胞间和边缘细胞间的紧密连接均遭到破坏,细胞间隙增大;硝酸镧透射电镜下,大量镧颗粒从血管腔内渗漏到管腔外的组织间隙,而对照组镧颗粒仅局限于血管腔内;Western blot结果示,两组耳蜗外侧壁血管纹均有claudin-5表达,但噪声暴露组的表达量明显低于正常组;免疫组织化学染色也表明,两组豚鼠耳蜗外侧壁毛细血管内皮细胞、边缘细胞等处均有claudin-5阳性表达,但噪声组表达量显著低于正常组(P<0.05)。结论噪声通过下调紧密连接蛋白claudin-5的表达,破坏细胞间紧密连接,增加豚鼠血迷路屏障的通透性,从而导致内耳微环境的破坏,是噪声性聋可能的发病机制之一。

大鼠脊髓损伤后紧密连接蛋白claudin-5的表达

目的检测大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后血-脊髓屏障(blood spinal cord barrier,BSCB)紧密连接蛋白claudin-5表达变化。方法 120只成年雄性SD大鼠随机分为空白组(60只)和损伤组(60只),损伤组参照改良Allen’s法[2]建立脊髓损伤动物模型。建模后不同时间点(6h、12h、1d、3d、5d、7d)各组随机取5只大鼠检测BSCB通透性,取胸段脊髓损伤区组织经RT-PCR、Western blot方法检测claudin-5表达。结果损伤组制模成功率81.7%;损伤组EB含量随时间变化逐渐升高,在损伤后第3天达峰值(0.9435±0.0813)μg/g,此后逐渐降低(P均<0.05),各时间点损伤组EB含量较空白组显著增高(P均<0.05);损伤组claudin-5 mRNA表达随时间变化逐渐减少,在损伤后第3天表达最低(2.871±0.527),此后逐渐升高(P均<0.05),各时间点损伤组claudin-5mRNA表达均较空白组显著降低(P均<0.05);损伤组claudin-5表达随时间变化逐渐减少,第3天达最低(0.072±0.008),之后逐渐增加(P均<0.05),各时间点损伤组claudin-5表达均较空白组显著降低(P均<0.05)。结论大鼠SCI后可能通过影响claudin-5的表达改变BSCB通透性,影响脊髓继发损伤的病理生理过程。

TBI大鼠Claudin-5紧密连接蛋白表达变化及CBD干预研究

目的观察大鼠创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)后脑微血管内皮细胞间紧密连接蛋白Claudin-5表达的时序性规律,探讨大麻二酚(cannabidiol,CBD)的干预作用。方法采用改良Feeney自由落体撞击法建立SD大鼠TBI模型,随机分为对照组(Sham组)、模型组(TBI+vehicle组)和干预组(TBI+CBD组),每组分8 h、1 d、2 d、3 d、5 d和7 d 6个亚组(n=3)。运用RT-PCR、免疫组织化学染色和免疫荧光双标染色实验,观察CBD干预对TBI后Claudin-5阳性表达与星形胶质细胞(astrocyte,AST)激活的影响。结果PCR结果表明:TBI后不同时间段Claudin-5的mRNA表达下降,CBD干预后,其表达有明显回升。免疫组化及免疫荧光结果表明,Sham组Claudin-5蛋白表达于脑微血管内皮细胞连接处,呈点状、线条状,AST胞体较小、突起少呈细长状;TBI后Claudin-5阳性细胞线条断裂,其表达显著减弱且呈下降趋势,以2 d组表达最低(P<0.05),此外,AST被激活,胞体变大、突起增多肿胀;CBD干预后Claudin-5阳性表达显著升高,AST激活状态明显减弱,胞体有所回缩,足板肿胀减轻。胶质纤维酸性蛋白阳性表达的AST和Claudin-5蛋白不存在共表达,但是AST伸出的足板与微血管内皮细胞直接相贴附。结论TBI后AST激活并参与Claudin-5蛋白表达的调节;CBD可能通过调控AST的激活状态调节Claudin-5阳性表达,进而改善血脑屏障的通透性。

脑出血后血红蛋白对血脑屏障内皮细胞Rho激酶Ⅱ及紧密连接蛋白claudin-5的影响

目的探讨脑出血后血红蛋白对血脑屏障内皮细胞Rho激酶Ⅱ及紧密连接蛋白claudin-5的影响。方法将SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组（18只）和血红蛋白组（72只），血红蛋白组再按不同取材时间点分为24h、48h、3d、7d4个亚组（每个时间点18只）。血红蛋白组采用脑内注入血红蛋白法制作脑出血大鼠模型。免疫组化染色观察各组大鼠血脑屏障内皮细胞Rho激酶Ⅱ及磷酸化肌球蛋白轻链的蛋白表达，伊文思蓝浓度测定评估血脑屏障通透性，免疫荧光染色和实时荧光定量PCR检测claudin-5蛋白和mRNA表达。结果免疫组化染色结果显示：正常对照组血脑屏障内皮细胞Rho激酶Ⅱ及磷酸化肌球蛋白轻链表达较少，血红蛋白组血肿侧血脑屏障内皮细胞呈棕黄色及线条状表达；血红蛋白组48h、3d时血脑屏障内皮细胞Rho激酶Ⅱ及磷酸化肌球蛋白轻链平均吸光度值明显高于正常对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）。血红蛋白组各时间点脑内伊文思蓝含量均明显高于正常对照组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。免疫荧光染色结果显示：与正常对照组相比，血红蛋白组24h、48h及3d时claudin-5蛋白表达断续和减少。实时荧光定量PCR结果显示：血红蛋白组24h、48h、3d及7d时claudin．5mRNA表达水平明显低于正常对照组，差异有统计学意义（氏0．05）。结论脑出血后血红蛋白可以导致血脑屏障内皮细胞Rho激酶Ⅱ的表达增高，进而致磷酸化肌球蛋白轻链表达增加、紧密连接蛋白claudin-5表达降低，其可能是导致脑出血后血脑屏障破坏及脑水肿发生的重要机制之一。

角质细胞生长因子-2对ALI大鼠肺组织趋化因子FKN及紧密连接蛋白claudin-5表达的影响

目的探讨角质细胞生长因子-2(KGF-2)对急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织趋化因子FKN和紧密连接蛋白claudin-5表达的影响。方法以健康雄性SD大鼠为研究对象,按随机数字表法分为生理盐水(NS)对照组、ALI模型组和KGF-2预处理组,每组10只。经尾静脉注射0.01mL/kg油酸建立大鼠ALI模型;NS对照组注射等量NS。KGF-2预处理组于制模前72h经大鼠气道内滴注5mg/kg KGF-2;NS对照组及ALI模型组滴注等量NS。各组于制模后8h取大鼠腹主动脉血,处死大鼠后对左肺支气管肺泡进行灌洗,收集支气管肺泡灌洗液(BALF),测定血浆和BALF中蛋白水平,计算肺通透性指数(LPI)。取右肺组织,用苏木素-伊红(HE)染色,光镜下观察其病理学改变,并计算ALI病理学评分(LIS);测定肺湿/干重(W/D)比值;采用免疫组化法及蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)对肺组织中FKN和claudin-5的表达进行定性、定量分析。双变量相关性采用直线或曲线拟合相关分析。结果ALI模型组大鼠肺组织损伤严重,出现明显的病理学改变,表现为肺泡间隔增厚,炎性细胞浸润;LIS评分、肺W/D比值及LPI均较NS对照组明显升高[LIS(分):3.56±0.28比0.62±0.36,肺W/D比值:6.37±0.29比4.39±0.33,LPI:3.46±0.69比0.98±0.17,均P<0.01]。与NS对照组比较,ALI模型组肺组织FKN阳性表达明显增强,表达量明显升高(FKN/GAPDH:0.97±0.18比0.62±0.04,P<0.01);claudin-5阳性表达明显减弱,表达量明显降低(claudin-5/GAPDH:0.56±0.11比1.06±0.13,P<0.01);FKN与claudin-5蛋白表达量呈显著负相关(r=-0.817,P=0.025)。给予KGF-2预处理后,大鼠肺组织损伤程度明显减轻,病理学改变明显改善;LIS评分、肺W/D比值及LPI均较ALI模型组明显降低[LIS(分):2.41±0.17比3.56±0.28,肺W/D比值:5.45±0.55比6.37±0.29,LPI:2.42±0.19比3.46±0.69,均P<0.01]。与ALI模型组比较,KGF-2预处理组大鼠肺组织FKN阳性表达明显减弱,表达量明显下降(FKN/GAPDH:0.79±0.03比0.97±0.18,P<0.01);而claudin-5阳性表达明显增强,表达量明显升高(claudin-5/GAPDH:0.80±0.05比0.56±0.11,P<0.01);FKN与claudin-5蛋白表达量仍呈显著负相关(r=-0.847,P=0.012)。结论KGF-2可能通过下调趋化因子FKN的表达,恢复紧密连接蛋白claudin-5的表达,从而减轻ALI时气血屏障损伤。

大鼠脑缺血时紧密连接相关蛋白occludin和claudin-5表达的变化

目的研究脑缺血后血脑屏障通透性和紧密连接相关蛋白occludin和claudin-5的变化。方法线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血模型,采用伊文氏兰(EB)法检测缺血后血脑屏障通透性的变化。应用免疫组织化学的方法观察occludin和claudin-5在缺血脑组织中的分布,采用RT-PCR、Wesrern blot法检测大鼠缺血脑组织occludin和claudin-5的mRNA和蛋白的表达变化。结果脑缺血2h后血脑屏障通透性显著增加(P<0.01),紧密连接相关蛋白occludin和claudin-5在脑微血管内皮细胞上呈阳性表达,occludin和claudin-5的mRNA和蛋白均比正常对照组显著降低(P<0.01)。结论脑缺血时血脑屏障通透性的增加可能与紧密连接相关蛋白occludin和claudin-5的降低相关。

白藜芦醇联合5-氨基水杨酸对脂多糖诱导的HT-29细胞损伤模型紧密连接蛋白表达的影响

目的:探究白藜芦醇(RSV)联合5-氨基水杨酸(5-ASA)对脂多糖(LPS)诱导的HT-29细胞紧密连接蛋白损伤的影响及其机制。方法:用100μg/mL的LPS刺激人结肠腺癌细胞HT-29,分为LPS组、5-ASA组、RSV组和RSV+5-ASA组,同时设对照组。用CCK-8法检测细胞活力,western blotting法检测细胞occludin、claudin-1、ZO-1、Notch1、Hes1蛋白表达,透射电镜观察细胞的紧密连接结构。结果:与对照组比较,LPS组细胞紧密连接蛋白occludin、claudin-1、ZO-1表达水平降低,Notch1、Hes1蛋白表达水平升高(均P<0.05),且紧密连接结构模糊,呈连续性中断。与LPS组比较,5-ASA组、RSV组和RSV+5-ASA组细胞紧密连接蛋白occludin、claudin-1、ZO-1表达上调,Notch1、Hes1蛋白表达下调(均P<0.05),紧密连接结构致密,其中RSV+5-ASA组最为显著(P<0.05)。结论:RSV与5-ASA联用可上调HT-29细胞损伤模型紧密连接蛋白occludin、claudin-1、ZO-1的表达,该过程可能与抑制Notch1信号通路活性有关。

双相情感障碍患者血清紧密连接蛋白5连蛋白水平及其临床意义

目的探讨双相情感障碍患者血清紧密连接蛋白5、连蛋白水平及其临床意义。方法将96例双相情感障碍患者按疾病类型分为缓解组(49例)和发作组(47例),检测缓解组、发作组和对照组(96名健康志愿者)血清紧密连接蛋白5、连蛋白水平,采用蒙哥马利抑郁量表、杨氏躁狂状态评定量表评定抑郁、躁狂严重程度,并比较3组检测结果和量表评分。采用Pearson相关分析探讨血清紧密连接蛋白5、连蛋白水平与抑郁、躁狂严重程度的关系,绘制受试者工作特征曲线并计算曲线下面积,分析血清紧密连接蛋白5、连蛋白对双相情感障碍的诊断价值。结果缓解组及发作组血清紧密连接蛋白5、连蛋白水平显著高于对照组(P<0.05),缓解组与发作组血清紧密连接蛋白5、连蛋白水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。发作组蒙哥马利抑郁量表、杨氏躁狂状态评定量表评分显著高于缓解组、对照组(P<0.05),缓解组显著高于对照组(P<0.05)。双相情感障碍患者血清紧密连接蛋白5水平与蒙哥马利抑郁量表、杨氏躁狂状态评定量表评分呈显著正相关(P<0.05或0.01);血清连蛋白水平与杨氏躁狂状态评定量表评分呈显著负相关(P<0.05)。血清紧密连接蛋白5预测双相情感障碍的曲线下面积为0.714(95%CI为0.628~0.821,P<0.05),最佳截断值为1650.25 pg·ml^(-1),灵敏度为73.5%,特异度为71.3%;血清连蛋白预测双相情感障碍的曲线下面积为0.685(95%CI为0.563~0.845,P<0.05),最佳截断值为150.50 ng·ml^(-1),灵敏度为74.3%,特异度为65.1%;两者联合预测双相情感障碍的曲线下面积为0.857(95%CI为0.671~0.916,P<0.05),敏感度为86.4%,特异度为90.2%。结论双相情感障碍患者血清紧密连接蛋白5、连蛋白水平明显升高,二者可能是诊断双相情感障碍的有效生物标志物,二者联合诊断价值更高。

紧密连接蛋白claudin-10基因5′调控区序列的生物信息学分析

目的:研究紧密连接蛋白对claudin-10基因转录调控机制,并对潜在的转录因子结合位点进行分析。方法:利用BLAST比对分析TATA-box、GC-box和CAAT-box;利用在线分析软件Neural NetworkPromoter Prediction、PROMOTERSCAN和PROMOTER2.0分析claudin-10基因5′调控区序列中启动子;利用在线分析软件EMBOSS和CpGIsland Searcher分析claudin-10基因5′调控区序列中CpG岛位置;利用在线分析软件TFSEARCH分析claudin-10基因5′调控区序列中潜在的转录因子结合位点。结果:claudin-10基因5′调控区序列中存在1个CAAT-box和3个GC-box,没有TATA-box;claudin-10基因可能存在4个启动子位点;CpG岛为444bp区间(1700bp-2143bp)或834bp区间(1367bp-2200bp);评分在85分以上时,该区域具有159个潜在的转录因子结合位点;评分在90分以上时,该区域具有48个潜在的转录因子结合位点;评分在95分以上时,该区域具有9个潜在的转录因子结合位点。结论:通过生物信息学的方法对于claudin-10基因转录起始位点、启动子区域和潜在的转录因子结合位点进行预测,对于科研具有十分重要的指导意义,但最终的结论还需要实验来证实。

紧密连接蛋白Claudin-15基因5′调控区序列的生物信息学分析

目的:研究紧密连接蛋白Claudin-15基因转录调控机制,并对潜在的转录因子结合位点进行分析。方法:利用BLAST比对获得Claudin-15基因5′调控区序列;利用模序识别分析TATA-box、GC-box和CAAT-box;利用在线分析软件Neural Network Promoter Prediction和PROMOTER 2.0分析Claudin-15基因5′调控区序列中启动子;利用在线分析软件EMBOSS和CpG Island Searcher分析Claudin-15基因5′调控区序列中CpG岛位置;利用在线分析软件TFSEARCH分析Claudin-15基因5′调控区序列中潜在的转录因子结合位点。结果:Claudin-15基因5′调控区序列中存在1个CAAT-box和1个GC-box,没有TATA-box;Caudin-15基因可能存在4个启动子位点;CpG岛为70bp区间(51～120bp)、77bp区间(312～388bp)、72bp区间(2 029～2 100bp)、204bp区间(1 745～1 948bp);结果显示评分在85分以上(Score Threshold:85.0)时,该区域具有470个潜在的转录因子结合位点;评分在90分以上(Score Threshold:90.0)时,该区域具有162个潜在的转录因子结合位点;评分在95分以上(Score Threshold:95.0)时,该区域具有59个潜在的转录因子结合位点;评分在100分(ScoreThreshold:99.0)时,该区域具有14个潜在的转录因子结合位点。结论:通过生物信息学的方法对于Claudin-15基因转录起始位点、启动子区域和潜在的转录因子结合位点进行预测,对于科研具有十分重要的指导意义。

紧密连接蛋白claudin-8基因5'调控区序列的生物信息学分析

目的研究紧密连接蛋白claudin-8基因转录调控机制,并对潜在的转录因子结合位点进行分析。方法利用BLAST比对获得claudin-8基因5'调控区序列;利用模序识别分析TATA-box、GC-box和CAAT-box;利用在线分析软件NeuralNetwork Promoter Prediction和PROMOTER 2.0分析claudin-8基因5'调控区序列中启动子;利用在线分析软件EMBOSS和CpGIsland Searcher分析claudin-8基因5'调控区序列中CpG岛位置;利用在线分析软件TFSEARCH分析claudin-8基因5'调控区序列中潜在的转录因子结合位点。结果 claudin-8基因5'调控区序列中存在2个CAAT-box,无TATA-box和GC-box;clau-din-8基因可能存在6个启动子位点;CpG岛为148 bp(379 bp-526 bp)、64 bp(1662 bp-1725 bp)、319 bp(296 bp-614 bp)。结果显示评分在85分以上(Score Threshold:85.0)时,该区域具有498个潜在的转录因子结合位点;评分在90分以上(ScoreThreshold:90.0)时,该区域具有221个潜在的转录因子结合位点;评分在95分以上(Score Threshold:95.0)时,该区域具有98个潜在的转录因子结合位点;评分在100分(Score Threshold:99.0)时,该区域具有37个潜在的转录因子结合位点。结论通过生物信息学的方法对于claudin-8基因转录起始位点、启动子区域和潜在的转录因子结合位点进行预测,对于科研具有十分重要的指导意义。

紧密连接蛋白claudin-14基因5'调控区序列的生物信息学分析

目的研究紧密连接蛋白claudin-14基因转录调控机制,并对潜在的转录因子结合位点进行分析。方法利用局部序列比对基本检索工具(BLAST)比对获得claudin-14基因5'调控区序列;利用模序识别分析TATA-box、GC-box和CAAT-box;利用在线分析软件Neural Network Promoter Prediction和PROMOTER 2.0分析claudin-14基因5'调控区序列中启动子;利用在线分析软件EMBOSS和CpG Island Searcher分析claudin-14基因5'调控区序列中CpG岛位置;利用在线分析软件TFSEARCH分析claudin-14基因5'调控区序列中潜在的转录因子结合位点。结果 Claudin-14基因5'调控区序列中存在1个CAAT-box、1个TATA-box和1个GC-box;claudin-14基因可能存在5个启动子位点;CpG岛位于62 bp区间(229～290 bp)、99 bp区间(417～515 bp)、76 bp区间(523～598 bp)、89 bp区间(836～924 bp)、69 bp区间(1 216～1 284 bp)和194 bp区间(1 235～1 428 bp)。评分在85分以上时,该区域有432个潜在的转录因子结合位点;评分在90分以上时,该区域有156个潜在的转录因子结合位点;评分在95分以上时,该区域有66个潜在的转录因子结合位点;评分在100分时,该区域有24个潜在的转录因子结合位点。结论 Claudin-14基因可能存在不同的转录起始位点;claudin-14基因的转录受DNA甲基化和多种转录因子的调控。

紧密连接蛋白claudin-10基因5′调控区序列的生物信息学分析

目的:拟对claudin-10基因转录起始位点和启动子区域进行预测,并对潜在的转录因子结合位点进行分析。方法:利用BLAST比对分析TATA-box、GC-box和CAAT-box;利用在线分析软件Neural Network Promoter Prediction、PROMOTER SCAN和PROMOTER 2.0分析claudin-10基因5′调控区序列中启动子;利用在线分析软件EMBOSS和CpG Island Searcher分析claudin-10基因5′调控区序列中CpG岛位置;利用在线分析软件TFSEARCH分析claudin-10基因5′调控区序列中潜在的转录因子结合位点。结果:claudin-10基因5′调控区序列中存在1个CAAT-box和3个GC-box,没有TATA-box;claudin-10基因可能存在4个启动子位点;CpG岛为444bp区间(1 700～2 143bp)或834bp区间(1 367～2 200bp);评分在85分以上时,该区域具有159个潜在的转录因子结合位点;评分在90分以上时,该区域具有48个潜在的转录因子结合位点;评分在95分以上时,该区域具有9个潜在的转录因子结合位点。结论:通过生物信息学的方法对于claudin-10基因转录起始位点、启动子区域和潜在的转录因子结合位点进行预测,对于科研具有十分重要的指导意义,但最终的结论还需要实验来证实。

普通肝素对高迁移率族B1介导的内皮细胞紧密连接蛋白Claudin-5下调的保护作用

目的 研究高迁移率族蛋白B1（high mobility group box-1 protein, HMGB1） 对人脐静脉内皮细胞屏障通透性的影响，以及普通肝素对HMGB1 介导的内皮细胞紧密连接蛋白Claudin-5 下调的保护作用。方法 将经胰酶消化后的人脐静脉内皮细胞于培养瓶中传代培养，并分成4 组：空白对照组（加入等量PBS）、rhHMGB1 处理组（100 ng/mL）、普通肝素对照组（UFH10 U/mL）、rhHMGB1＋ 普通肝素处理组（100 ng/mL rhHMGB1 ＋ UFH 10 U/mL）。传代培养后的人脐静脉内皮细胞，通过MTT 法测定内皮细胞的存活率。Transwell 法测定内皮细胞通透性；免疫荧光法对Claudin-5 表达及分布进行测定；通过蛋白免疫印迹（Western blot） 法检测Claudin-5 蛋白表达。结果 用rhHMGB1（100 ng/mL） 处理内皮细胞后，与空白对照组比较细胞活力无明显变化（P〉0.05）；用rhHMGB1（100 ng/mL） 分别处理内皮细胞3 h、6 h 后，内皮细胞屏障通透性较空白对照组无明显变化（P〉0.05）；而经rhHMGB1 处理12 h、24 h 后，与空白对照组相比，内皮细胞屏障通透性显著升高，差异有统计学意义（P〈0.05）。而普通肝素和rhHMGB1 共同孵育内皮细胞12 h、24 h 后，其内皮细胞屏障通透性均低于rhHMGB1 处理组（P〈0.05）。免疫荧光和Westernblot研究表明，rhHMGB1 处理内皮细胞24 h 后，细胞紧密连接相关蛋白Claudin-5 分布和表达降低；而经普通肝素和rhHMGB1 共同孵育后，细胞紧密连接相关蛋白Claudin-5 的表达提高，Claudin-5的荧光强度增强。结论 HMGB1 可介导内皮细胞紧密连接相关蛋白Claudin-5 的分布异常和表达下降，以及增加内皮细胞屏障的通透性；普通肝素可改善HMGB 1 介导的内皮细胞紧密连接相关蛋白Claudin-5 的表达和分布及内皮细胞屏障通透性。

清肠化湿方对实验性大鼠结肠炎结肠黏膜上皮细胞紧密连接蛋白claudin-1的影响

目的观察清肠化湿方对实验性大鼠结肠炎结肠组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α),紧密连接跨膜蛋白claudin-1表达水平的影响,以探讨其治疗溃疡性结肠炎(UC)的可能机制。方法使用TNBS/无水乙醇造模成功后,分为空白组、模型组、清肠化湿方组12.8g/(kg·d)、美沙拉嗪组(0.67g/(kg·d)。一次性ig给药,连续10d后,处死大鼠,留取结肠组织;ELISA法检测结肠组织TNF-a水平,免疫组化法观察结肠上皮claudin-1蛋白的表达情况,实时荧光定量PCR法检测claudin-1 mRNA相对表达水平。结果清肠化湿方可以降低大鼠结肠炎模型结肠组织TNF-α水平[模型组,清肠化湿组分别为(99.40±32.37),(55.07±12.80)pg/mL],(P<0.01),提高claudin-1mRNA相对表达水平[模型组,清肠化湿组分别为(2.18±0.78),(3.94±0.91)](P<0.01),减轻对claudin-1蛋白的损伤(P<0.05),清肠化湿方组与美沙拉嗪组疗效无明显差异。结论清肠化湿方降低结肠组织TNF-α水平,保护紧密连接蛋白claudin-1,是其治疗UC的机制之一。

紧密连接蛋白claudin-1在肠易激综合征患者肠黏膜中的表达及意义

目的探讨肠易激综合征(IBS)患者肠黏膜紧密连接蛋白claudin-1表达在排便性状和习惯改变中的意义。方法用免疫组化方法检测对照组(痔疮10例、结肠息肉10例)和观察组(43例IBS患者,腹泻型23例、便秘型20例)小肠和结肠黏膜claudin-1表达。结果免疫组化定位显示两组肠黏膜claudin-1均分布于肠上皮紧密连接的细胞膜,胞核及核膜无表达;与对照组比较,观察组腹泻型患者小肠和结肠黏膜claudin-1表达明显下降(P<0.05),便秘型患者claudin-1表达明显上升高(P<0.05),腹泻型与便秘型比较有显著差异(P<0.05)。结论claudin-1表达异常在IBS患者排便性状和习惯改变形成中可能有重要作用。

紧密连接蛋白Claudin-6和PKCθ在非典型性脑膜瘤组织中的表达

非典型性脑膜瘤占成人脑膜瘤的5%～8%,其侵袭性行为导致手术后容易复发。作者前期研究表明Claudin-6表达下调可能在脑膜瘤发生和侵袭中起作用〔1〕。蛋白激酶C（PKC）作为细胞增殖、分化和凋亡过程信号转导中的磷脂依赖型蛋白激酶,在维持紧密连接（TJs）的功能中发挥重要作用。

紧密连接蛋白claudin-1及Z0-1在胰腺癌中的表达

目的:探讨紧密连接蛋白claudin-1及ZO-1在胰腺癌中的表达及在胰腺癌侵袭转移中的意义。方法:应用免疫组织化学方法检测claudin-1和ZO-1在胰腺癌不同侵袭位点(与非肿瘤胰腺组织相交界的胰腺癌侵袭前沿区、肿瘤中央区、与周围间质相交界的胰腺癌侵袭前沿区)及淋巴结转移灶和正常胰腺组织中的表达、结果:claudin-1与ZO-1蛋白正常定位于胰腺腺泡细胞和导管上皮细胞胞膜上,而在胰腺癌组织中,claudin-1与ZO-1蛋白定位从细胞膜异位至细胞浆或表达缺失,重度异位表达率分别为66.7%和69.2%。在与非肿瘤胰腺组织相交界处的胰腺癌组织中,低-未分化胰腺癌的claudin-1重度异位表达率(91.7%)明显高于高-中分化胰腺癌(55.6%,P<0.05);与周围间质相交界处的胰腺癌侵袭前沿区claudin-1重度异位表达率(89.7%)高于与非肿瘤胰腺组织相交界处的胰腺癌侵袭前沿区(66.7%,P<0.05);淋巴结转移灶重度异位表达率最高(92.3%,P<0.05)。同样与周围间质相交界处的胰腺癌侵袭前沿区ZO-1重度异位表达率(94.9%)也高于与非肿瘤胰腺组织相交界处的胰腺癌侵袭前沿区(64.2%,P<0.05),淋巴结转移灶最高(100%,P<0.05);原发胰腺癌组织各个位点中claudin-1与ZO-1表达呈正相关关系。结论:claudin-1和ZO-1异位表达对胰腺癌的发生起促进作用;clauclin-1异位表达与胰腺癌的分化有关;claudin-1和ZO-1异位表达率增加促进胰腺癌的侵袭与转移。

紧密连接蛋白Claudin-3与三阴性乳腺癌患者临床特征的相关性

目的:探讨紧密连接蛋白Claudin-3与三阴性乳腺癌患者临床特征的相关性。方法:自2012年3月至2017年3月,收集我院收治的三阴性乳腺癌患者108例,行乳腺癌根治术,术中取乳腺癌标本和癌旁标本,检测组织中紧密连接蛋白Claudin-3表达情况,分析紧密连接蛋白Claudin-3与患者临床病理参数的相关性。对患者随访1年,分析术后1年复发患者与不复发患者组织中紧密连接蛋白Claudin-3的差异。结果:乳腺癌组织和癌旁组织中紧密连接蛋白Claudin-3表达无统计学差异(P=0.331)。与紧密连接蛋白Claudin-3阴性的患者相比,紧密连接蛋白Claudin-3阳性的患者TNM分期为Ⅲ期的比例显著增高(52.46%vs 29.79%,P=0.018),淋巴结转移比例增高(55.74%vs 29.79%,P=0.007),术后复发率显著增高(26.23%vs 10.64%,P=0.042)。结论:紧密连接蛋白Claudin-3与淋巴结转移和TNM分期有关,对预测患者术后复发具有一定价值。