紫外交联免疫沉淀技术原理及其应用

紫外交联免疫沉淀(UV cross-linking immunoprecipitation,CLIP)技术最初建立于2003年。通过紫外交联、免疫沉淀、逆转录及后续的高通量测序等步骤,可在全转录组范围鉴定特定RNA结合蛋白(RNA-binding proteins,RBP)的靶标RNA序列和结合位点。在近20年的应用过程中,该技术被不断改进和完善,可操作性、实验结果的准确性都有所提升,技术的应用范围也有所拓展。本文对CLIP技术的基本原理、实验方法、实际应用进行介绍,着重比较几种主流CLIP技术的异同,并对如何选择具体的技术路线提出建议。

紫外交联高密度聚乙烯材料的制备及性能研究

选择高密度聚乙烯(PE⁃HD)作为基础树脂,筛选与之适配的光引发体系制备紫外交联高密度聚乙烯材料(PE⁃Xe),对配方进行优化并对工艺进行探究,对紫外光的穿透性做了系统的试验,并研究了光敏剂和交联剂添加量、紫外灯功率、线速度对PE⁃Xe材料交联度的影响。结果表明:紫外光的穿透能力可以达到9.5 mm,当光敏剂和交联剂的添加量为0.7%(质量分数,下同)时,紫外灯功率为500 W时,材料的交联度可以达到75%以上,制备的管材耐压性好、力学性能优,结晶度达到40%以上,200℃时的氧化诱导时间(OIT)大于20 min。

紫外交联UHMWPE纤维的耐热性能研究

超高分子质量聚乙烯(UHMWPE)纤维是已知比强度和比模量最高的纤维,但是其耐热性能较差,因而耐热改性是当前UHMWPE纤维的一个重要研究方向。对自制紫外交联UHMWPE纤维(CL)和2种线性市售UHMWPE纤维(A、B)的耐热性能进行了比较研究。在测定凝胶质量分数后,采用纤维强伸度仪、声速取向仪以及动态热机械分析仪等仪器,对CL及市售纤维的耐热性能进行了系统评价及讨论。CL的热断裂温度较市售纤维提高了近70℃,表明紫外交联改性后UHMWPE纤维的耐热性能有了显著提升。

表面紫外交联对淀粉塑料性能的影响

提出用表面紫外交联的方法来提高热塑性淀粉塑料(TPS)的力学和耐水性能。首先,将淀粉直接和甘油混合,通过挤出注塑工艺制备了TPS,再将溶于乙醇的光引发剂(XBPO)[苯基双(2,4,6-三甲基苯甲酰基)氧化膦]涂覆在TPS表面并进行紫外交联,测定了样条的力学性能和表面接触角的变化,研究了不同紫外光照射时间对TPS性能的影响。结果表明,当紫外光照射时间达到15 min时,TPS的拉伸强度、弯曲强度、冲击强度均达到最高,分别为4.01 MPa、12.5 MPa、312.92 k J/m^2;表面接触角由42.3°增加到95.77°,耐水性改善十分显著。

紫外交联实验筛选HCV RNA结合蛋白的应用

目的选择一种用于筛选与丙型肝炎病毒(HCV)RNA核心区结合的细胞蛋白质分子较佳方法。方法用体外转录的方法制备地高辛标记(DIG)-HCV RNA;从HepG2细胞中提取细胞蛋白质分子。分别用紫外交联实验(UV)和凝胶迁移实验(EMSA)筛选HepG2细胞中可与HCV RNA结合的蛋白质分子。结果2种实验方法均可检测到细胞蛋白质分子与HCV RNA结合,但凝胶迁移实验结果所见DIG-RNA信号比较弥散,而紫外交联实验的结果可见比较清晰的RNA-结合蛋白条带。结论紫外交联实验是用于筛选HCV-RNA结合蛋白的首选方案。

新型芳基硫醇的合成及在聚芳醚砜紫外交联中的应用

通过假高稀反应和芳香亲核取代反应成功制备了一种新型芳基三硫醇,其与烯丙基聚醚砜(c-PAES)的混合体系在光引发剂TPO的作用下能极大地增强聚醚砜体系的紫外交联速度.研究结果表明,按官能团摩尔比1∶1的比例添加芳基三硫醇的聚醚砜体系在紫外交联情况下,其最终双键转化率提高了1倍左右,而且体系的光反应速率有了极大的提高.交联后聚合物的玻璃化转变温度(Tg)升高了约20℃,并有较好的热稳定性,可作为耐高温材料使用.

低压聚乙烯电缆紫外交联热流场研究

紫外光交联辐照箱中,高压紫外汞灯作为辐射源,产生的辐射能使反射罩、灯管及聚乙烯电缆表面的温度升高,若温度过高会使电缆绝缘层表面发生热氧化,甚至导致表面焦糊,严重使反射罩等受热部件产生热变形。为了改善汞灯与电缆表面的过热问题,本文基于计算传热学和计算流体动力学(CFD)原理,首先对低压电缆紫外交联箱内部进行三维湍流流场建模,研究交联过程中电缆表面速度场,然后以电缆二维截面为研究对象,对电缆截面温度场进行数值模拟。结果表明,在低压电缆内,绝缘与导体之间的热传导对绝缘层内的温度分布起了主要作用,装置内绝缘层表面的对流换热直接影响电缆温度。

紫外交联合并串联亲和纯化高效鉴定蛋白复合物组分的RNA结合活性

RNA结合蛋白在RNA的生成与代谢中发挥着重要作用.我们在近年报道的PAR-CLIP(photoactivatableribonucleoside-enhanced crosslinking and immunoprecipitation)技术的基础上建立了一套快速、有效鉴定RNA结合蛋白的实验方法:以串联亲和纯化替代一步免疫沉淀获得高纯度蛋白-RNA复合物;将Sypro Ruby蛋白染色与RNA放射自显影相结合判断复合物中哪种或哪些组分为RNA结合蛋白,该方法命名为紫外交联合并的串联亲和纯化(cross-linkingand tandem affinity purification,CLiTAP).运用该方法对布氏锥虫的三种锌指蛋白ZC3H7、ZC3H34和ZC3H5进行分析,发现ZC3H7作为帽结合蛋白复合物的核心组分具有很强的RNA结合能力;ZC3H34结合RNA能力较弱,但其互作蛋白具有强的RNA结合活性;相比之下,ZC3H5及其复合物组分皆无RNA结合活性.这些结果表明,CLiTAP与蛋白质鉴定方法相结合,能够有效鉴定靶蛋白复合物中的RNA结合蛋白种类,也为进一步定位RNA结合位点、研究RNA结合蛋白的结构及作用机制奠定了基础.

紫外交联PP/PE复合材料的制备与力学性能研究

采用紫外交联技术制备聚丙烯(PP)/聚乙烯(PE)复合材料,利用XRD、SEM、DSC等手段对PP/PE复合材料进行表征,通过凝胶含量、熔体质量流动速率、力学性能的测定,分别研究了不同紫外辐照量对复合材料的性能影响。结果表明:加入光引发剂和助交联剂会引发PP交联,提高复合材料的力学性能;当紫外辐照量为2300mJ/cm^2时,复合材料拉伸强度与冲击强度达到极大值。

蛋白质─核酸紫外交联

蛋白质─核酸紫外交联徐晓石，张敏磊，赵以珏，方福德（中国医学科学院基础医学研究所，北京１００００５）一、基本原理ＤＮＡ结合蛋白与ＤＮＡ结合位点结合后经紫外照射可形成共价键，如果ＤＮＡ预先经过标记，则共价结合的复合物经电泳分离和制作放射自显影图谱，能够...

紫外交联改性丝素蛋白的制备及溶胀性能测试

本文采用紫外交联法制备丝素和2-(二甲氨基)丙烯酸乙酯(DMAEA)、丝素和2-羟基乙基丙烯酸酯(HEA)及丝素和季铵盐的改性丝素蛋白凝胶。通过溶胀率、红外光谱表征改性丝素蛋白凝胶的结构特性,通过热重分析研究改性丝素蛋白凝胶的热稳定性。实验结果表明DMAEA改性丝素蛋白凝胶的溶胀性能优于添加HEA和季铵盐的改性丝素蛋白凝胶;盐浓度的影响表明,DMAEA、HEA和季铵盐的改性丝素蛋白凝胶溶胀率均随盐浓度升高而下降。热重分析研究表明,三种紫外聚合的凝胶,在100℃附近开始分解,450℃左右分解完,热稳定较好。三种改性方法中,添加HEA的凝胶的热稳定较好,添加DMAEA的凝胶溶胀率最好。

紫外交联试验筛选结合于丙型肝炎病毒RNA核心区的细胞蛋白

目的从肝癌细胞系中筛选能够与丙型肝炎病毒(HCV)RNA核心区结合的细胞蛋白质分子。方法采用体外转录法得到HCV RNA核心区片断,从HepG2细胞中提取细胞蛋白质分子;通过核酸-蛋白紫外交联试验筛选HepG2细胞中可与HCV RNA核心区结合的蛋白分子,并用未标记核心区RNA 和载体RNA作为竞争物分析结合的特异性。结果HepG2细胞内有2个约为6.6×104和5.5×104的宿主蛋白分子与HCV RNA的核心区发生结合。未标记核心区RNA可以竞争性抑制地高辛标记的核心区RNA 与细胞蛋白的结合,而载体RNA对此结合无竞争性。结论HepG2细胞内存在着可以与HCV RNA核心区结合的蛋白分子。

运用紫外交联免疫沉淀技术构建RNA结合蛋白的靶基因文库

紫外交联免疫沉淀(crosslinking-immunoprecipitation,CLIP)是一种研究RNA结合蛋白的技术,它通过特异性抗体富集靶RNA片段,然后逆转录构建cDNA文库,最后进行高通量测序。它可以在基因组水平上全景式研究靶RNA的特点,为揭示该蛋白生物学功能与分子功能提供新的依据。本研究针对一个已知的RNA结合蛋白MOV10(moloney leukemia virus 10),通过CLIP技术构建cDNA文库,然后小规模克隆后测序,得到小部分靶RNA信息,并利用RNA免疫沉淀技术(RNA-immunoprecipitation,RIP)进行验证。测序提示MOV10结合mRNA,而其中有部分是其已知靶标。说明该文库可以用于后续深度测序,为研究该蛋白在精子发生领域内的功能和机制奠定基础。

低压电缆紫外光交联辐照箱通风冷却研究

为了解低压电缆紫外交联辐照箱内冷却空气速度、压力分布特点,建立该辐照箱三维实体模型.在一定假设条件和边界条件下,基于计算流体动力学(CFD)原理,对原始通风方案A和改进通风方案B进行内部湍流流场三维数值模拟.分析反射罩、分流板等结构变化对流场的影响,对比两种结构中电缆和高压汞灯的冷却情况.研究结果表明,采用集中气流先冷却电缆再冷却高压汞灯的改进结构,电缆周围空气流速提高,反射罩凹凸面间压差减少48%.通过增加紫外光汇聚光强和优化相应的通风结构可提高光交联生产效率,保证设备有效冷却.

紫外光交联辐照箱内高压电缆温度场研究

为研究高压电缆在通过紫外交联辐照箱交联过程中,在热辐射和表面对流换热条件下,非稳态传热过程温度变化特性,建立二维高压电缆物理模型,在一定限定条件下,基于FLUENT软件,对高压电缆温度场进行模拟计算。结果表明,热辐射、对流换热和热传导共同影响了电缆横截面的温度分布;在高压电缆中,绝缘层平均温度先保持不变,然后开始缓慢升高;在内屏蔽层上,在极短的时间内,平均温度先下降,之后以近似常数的速率上升。为紫外光交联设备设计及改进提供参考。

光交联PVA-SBQ/透明质酸纳米纤维的制备及性能

为了增强透明质酸的耐水溶性、实现药物缓释,本研究应用静电纺技术制备改性透明质酸(GMHA)与聚乙烯醇-苯乙烯吡啶(PVA-SBQ)的复合纳米纤维膜,进一步在紫外光照射下得到光交联复合纤维膜。系统研究了不同的紫外光照时间、温度和pH值下复合纳米纤维的溶胀比以及载药释放性能,结果表明复合纳米纤维膜的溶胀比随温度升高而减小,随pH值升高而增大。光交联之后的1.0%(质量分数,下同)载药复合纳米纤维膜在10 h内的累积释放率在40%左右,释放曲线比较平缓,达到药物缓释的目的。

光引发剂含量对热塑性淀粉塑料整体光交联的影响

将光引发剂二苯甲酮直接与淀粉和甘油共混,并通过挤出注塑工艺制备了热塑性淀粉(TPS)塑料。在最佳光照时间15 min的条件下,研究了不同光引发剂含量对其力学性能、动态热力学性能和耐水性能的影响。结果表明,当光引发剂含量为1%时,经紫外光照射后的TPS可形成最佳交联网状结构,力学性能与耐水性能显著提高。拉伸强度、弯曲强度及冲击强度达到最大值,分别为6.31 MPa、8.2 MPa及77.68 k J/m^2。与纯TPS的相比,拉伸强度、弯曲强度及冲击强度分别提高了4.15 MPa、4.59 MPa及58.91 k J/m^2;玻璃化转变温度达到最高值,T_β和T_α分别为-33.62℃和81.63℃;表面接触角由纯TPS的42.3°增加至80.3°,此时材料的吸水量最小,显著改善了材料的表面耐水性能和吸水性能。

聚丙烯膜表面磷脂自组装／交联改性及其表面性能

发展了一种基于分子自组装/交联的聚丙烯微孔膜(PPMM)表面改性方法,以含不饱和长烷基链的两亲性天然卵磷脂为改性剂,首先通过分子自组装在PPMM表面形成类磷脂组装层,再采用紫外线原位聚合交联方法在PPMM表面构建稳定的类磷脂仿生修饰层,进而赋予PPMM表面优异的亲水性和生物相容性。分别采用FTIR/ATR和XPS分析确证了改性前后膜表面基团及化学成分的变化。通过水接触角测定、荧光标记蛋白质吸附和酶联免疫吸附(ELISA)实验,考察了类磷脂仿生修饰前后膜表面亲水性和抗蛋白质吸附性能,发现类磷脂仿生修饰后PPMM表面水接触角由130°下降至30°,抗蛋白质吸附性能也得到明显改善;自组装/交联改性PPMM经多次水洗后仍能保持良好的亲水性和抗蛋白质吸附性能,表明膜表面所形成的类磷脂仿生修饰层具有良好的稳定性。

本体光交联对热塑性淀粉塑料性能的影响

将光引发剂二苯甲酮直接与淀粉和甘油共混,并通过挤出注塑工艺制备了热塑性淀粉(TPS)塑料,研究了不同紫外光照时长对其力学、动态热力学、热稳定和耐水性能的影响。结果表明,当紫外光照时长为15min时,TPS可形成最佳的交联网络结构,显著提高其性能,拉伸强度,弯曲强度,冲击强度分别可达4.57MPa、7.1MPa及69.39kJ/m2;储能模量有所提高,玻璃化转变温度达到最高,Tβ和Tα分别为-35.63℃和53.96℃;最大分解速率对应的峰值温度(Tp)由TPS的317.81℃提高到330.48℃;表面接触角由纯TPS的42.3°增加至77.2°,显著提高了耐水性能。

膜用聚酰亚胺交联研究进展

自1960年美国杜邦公司改进聚酰亚胺(PI)合成技术生产了膜材并首次应用于工业以来,PI在信息化时代大放异彩,其相关研究得到长足的发展。在气体分离工业及新能源等领域,交联改性是提高PI膜性能的有效方式。本文综述了近年来膜用PI交联改性研究的最新进展,主要包括热交联、紫外交联和化学交联3种方式,并对未来交联PI膜的研究方向进行了展望。