烟酸羟基化酶产生菌的快速筛选及催化条件

建立了一种基于紫外显影法快速筛选烟酸羟基化酶产生菌的方法,用96孔板培养菌后,将菌液点样到滤纸上,利用6-羟基烟酸在紫外光照射(300nm)下显影的特性,可以快速、方便地筛选出烟酸羟基化酶产生菌.对筛选出的最高酶活菌株BKC4进行了研究,菌株为杆状,革兰氏染色呈阴性,通过16SrRNA序列分析鉴定为恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida).利用BKC4菌株催化烟酸合成6-羟基烟酸,结果表明,BKC4菌株烟酸羟基化酶的最适催化条件为:底物浓度10g/L,温度37℃,pH6.5,摇床转速200r/min,酶在低于30℃及pH6.0～6.5范围内较稳定.