第三代紫杉烷靶向控释胶束的制备与性能

第三代紫杉烷结构中含有二氟乙烯基(DFV),该结构可显著降低紫杉烷分子和P-糖蛋白(P-gp)的结合能力,从而减少药物在肿瘤细胞内的外排。相比已上市的第一代和第二代紫杉烷药物(紫杉醇、多西他赛和卡巴他赛),第三代紫杉烷具有更强的抗多药耐药性,对肿瘤的抑制效果也更显著。为了实现第三代紫杉烷药物在肿瘤细胞内的靶向控释,合成了一种硫辛酸封端的两亲性嵌段共聚物,并利用固体分散-薄膜水化法制备了包载第三代紫杉烷的还原敏感性聚合物胶束。采用傅里叶红外光谱(FT-IR)和核磁共振氢谱(1H-NMR)验证了药物的包封情况,使用紫外光谱(UV)测定了胶束的载药量和包封率,考查了胶束的体外稳定性,并研究了载药胶束的体外释放规律、细胞毒性和体内抑瘤效果。结果表明:该胶束的粒径均一,具有良好的稳定性和还原敏感的药物控释特性,对A549肺腺癌的抑制效果显著强于紫杉醇制剂。

化学合成DFV-紫杉烷类化合物对未分化甲状腺癌细胞的抗肿瘤作用研究

目的探索化学合成DFV-紫杉烷类化合物对未分化甲状腺癌细胞的抗肿瘤作用及可能机制。方法噻唑蓝(MTT)实验测定DFV-紫杉烷类化合物对肿瘤细胞增殖及细胞活性的影响;紫外分光光度计测定新型紫杉烷类化合物处理后肿瘤细胞的存活情况;克隆形成实验评价新型紫杉烷类化合物对肿瘤细胞增殖能力的敏感性;结晶紫染色计数存活克隆数;流式细胞仪检测新型紫杉烷类化合物对肿瘤细胞周期分布的影响。结果甲状腺癌细胞系8505C和8305C经四种不同的DFV-紫杉烷类化合物处理后,IC_(50)在0.5~5.5 nmol·L^(-1)之间;不同药物处理后,甲状腺癌细胞的增殖能力显著降低(P<0.001);不同浓度的DFV-紫杉烷类化合物可不同程度地抑制甲状腺癌细胞的克隆形成能力(P<0.001);DFV-紫杉烷类化合物可诱导甲状腺癌细胞G_(2)/M期周期阻滞(P<0.001),从而抑制甲状腺癌细胞的生长。结论四种化学合成DFV-紫杉烷类化合物对未分化甲状腺癌细胞具有生长抑制和抗肿瘤作用。

红豆杉低温半致死温度和低温胁迫下紫杉烷含量

通过测定低温胁迫下红豆杉电阻抗参数和紫杉烷含量变化,确定适合红豆杉低温半致死温度测定的电阻抗参数,探讨低温对红豆杉紫杉烷生物合成的影响,为扩大红豆杉引种范围及利用低温条件提高红豆杉中紫杉醇含量奠定了理论基础。以云南红豆杉、南方红豆杉(山西长治)、中国红豆杉、曼地亚红豆杉和东北红豆杉为材料,分别采用电导率法和电阻抗法测定上述树种低温半致死温度,并利用LC-MS法测定低温胁迫下红豆杉叶片中紫杉烷含量和脱落酸(abscisic acid,ABA)含量。结果表明,5种红豆杉中,中国红豆杉、南方红豆杉(山西长治)、东北红豆杉和曼地亚红豆杉均能耐受-14.668--9.106℃低温;云南红豆杉能耐受-8.802--3.521℃低温,高于其他4种红豆杉。电阻抗τ_(m)参数与电导法测定的5种红豆杉一年生枝低温半致死温度显著相关,相关系数为0.912。低温胁迫下,红豆杉一年生叶片中紫杉醇含量高于当年生叶片。随着处理温度的下降,云南红豆杉和东北红豆杉一年生叶片中紫杉醇含量显著增加,中国红豆杉当年生叶片中巴卡亭Ⅲ含量和10-去乙酰基紫杉醇含量显著增加。此外,红豆杉叶片中ABA含量随温度的下降而增加,当年生叶片中ABA含量高于一年生叶片。与云南红豆杉相比,东北红豆杉、曼地亚红豆杉、南方红豆杉(山西长治)和中国红豆杉能耐受更低的温度。低温有利于云南红豆杉和东北红豆杉一年生叶片中紫杉醇的合成及中国红豆杉当年叶片中巴卡亭Ⅲ和10-去乙酰基紫杉醇的合成。

紫杉烷类药物相关心脏器官不良事件信号挖掘研究

目的对美国食品和药品管理局不良反应报告系统(FAERS)中紫杉烷类药物相关心脏不良事件(ADE)数据进行挖掘,为临床合理用药提供参考。方法自FAERS数据库提取2017年第一季度至2021年第四季度紫杉烷类药物ADE报告,从中筛选出累及心脏器官疾病报告,采用报告比值比法(ROR)和英国药品和保健品管理局综合标准法(MHRA)检测信号。结果高位组语(HLGT)层面,紫杉醇的信号有报告744份,分布于心律失常类疾病,心肌类疾病,各类心脏衰竭、心脏相关疾病,症状和体征,冠状动脉类疾病和心包类疾病;多西他赛的信号有报告74份,分布于心肌类疾病和各类心脏衰竭、心脏相关疾病;紫杉醇(白蛋白结合型)的信号有报告85份,分布于心律失常类疾病,心肌类疾病,各类心脏衰竭和心包类疾病。结论心脏器官相关ADE中,紫杉醇和紫杉醇(白蛋白结合型)多见心律失常、心脏传导阻滞和心肌缺血,多西他赛多见左心室功能障碍和心肌缺血,可供临床参考。

紫杉烷类药物相关周围神经损伤的康复研究进展

紫杉烷类化疗药物作为一种常见的肿瘤化学治疗药物,被广泛应用于乳腺癌等多种恶性肿瘤治疗中。紫杉烷类化疗药物虽然可提高肿瘤患者的生存率,但在治疗过程中也会出现一定不良反应,其中就包括化疗相关的周围神经损伤。紫杉烷类药物引起化疗药物相关周围神经病变(taxane-induced peri-pheral neuropathy,TIPN)属于化疗药物诱导的周围神经病变(chemotherapy-induced peripheral neuropathy,CIPN)中一种常见的不良反应,可持续存在从而影响患者的生存质量。目前国内有针对TIPN的规范化管理专家共识[1],以相关药物治疗为主,尚无明确系统的康复诊疗方案及规范,因此本文主要围绕TIPN的损伤机制、功能障碍、康复评定及康复治疗进展进行综述。

南方红豆杉内生菌及紫杉烷类产物的初步鉴定

从南方红豆杉（Ｔａｘｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓｖａｒｍａｉｒｅｉ）的主干和侧枝树皮及皮下部分，分离、筛选得到９１个纯化的微生物菌株．经过摇瓶培养和静止培养，再用二氯甲烷萃取抽提，抽提产物经以ｔａｘｏｌ、ｂａｃｃａｔｉｎⅢ和ｃｅｐｈａｌｏｍａｎｎｉｎｅ为标准对照的薄层层析分析，表明其中６个菌株能分泌紫杉烷类的化合物．分类鉴定的初步结果为头孢霉属。

中国红豆杉中主要紫杉烷类物质的分布研究

对中国红豆杉[Taxus chinensis(Pilg.)Rehd.]中的紫杉烷类化合物紫杉醇及两种重要前体巴卡亭III(B III)和10-脱乙酰巴卡亭III(10-DAB)的分布进行了研究.结果表明,紫杉醇的含量在同一棵树中的分布依主干皮、根皮、侧枝树皮、种子、须根、嫩枝、叶的次序递减,并发现侧枝茎中紫杉醇在横截面方向呈梯度分布,且紫杉醇含量最高部位是在次生木质层.10-DAB和B III在叶中含量最高,在须根中含量最低,叶子中10-DAB的含量达0.02%～0.03%,高于B III的含量.在2～3 a生的小树枝、叶中未检测到紫杉烷类物质,提示其合成可能与植株发育有关.紫杉醇在30 a 树龄的当年生嫩叶中春季高于秋季,而10-DAB在当年生和多年生的叶中积累都较多,且秋季比春季含量高.

光质对云南红豆杉生长及紫杉烷含量影响的研究

将2年生云南红豆杉置于用滤光膜营造白光、黄光、红光和蓝光4种光环境中栽培1 a。栽培期间,测定光合作用,试验期末取样测定植株大小、枝叶特性、生物量和紫杉醇含量等,以揭示不同光质对云南红豆杉形态、光合作用和紫杉烷类物质含量的影响。结果表明:红光能提高最大净光合速率(Pmax)、表光量子效率(AQY)、暗呼吸速率(Rd)、光饱和点(LSP)和光补偿点(LCP),抑制叶生长,增加第一级枝枝条总数,促进株高生长,提高茎和植株生物量;黄光使Pmax、AQY降低、使LCP和LSP提高,抑制叶生长,提高茎、叶和植株总生物量;蓝光降低Pmax、AQY,提高LSP、LCP、Rd,抑制叶和地径的生长,促进高的生长。不同光质处理下,根、茎、叶中紫杉烷的含量无显著差异,但是对叶中巴卡亭Ⅲ,根中紫杉醇、10-去乙酰巴卡亭Ⅲ和7-差向紫杉醇含量的影响差异显著。红光显著抑制叶中巴卡亭Ⅲ合成和积累,提高根中7-差向紫杉醇的含量;黄光显著提高了根中紫杉醇、10-去乙酰巴卡亭Ⅲ、7-差向紫杉醇的含量;蓝光显著提高根中紫杉醇的含量,但降低叶中巴卡亭Ⅲ的含量。

南方红豆杉枝叶中6种紫杉烷类化合物含量季节变化

紫杉醇(taxol)是主要来源于红豆杉属植物的一种天然抗肿瘤药物,紫杉烷(taxane)是紫杉醇的代谢前体或支路代谢产物,同样具有开发成为抗肿瘤新药的潜质。本文采用高效液相色谱法研究了紫杉醇(Taxol)、10-去乙酰巴卡亭Ⅲ(10-DAB)、7-木-10-去乙酰紫杉醇(7-xyl-10-DAT)、10-去乙酰紫杉醇(10-DAT)、三尖杉宁碱(CE)和7-表-10-去乙酰紫杉醇(7-epi-10-DAT)6种紫杉烷类化合物在南方红豆杉枝叶中含量的季节变化,结果显示Taxol和10-DAT在8、9月份含量最低,10-DAB和7-xyl-10-DAT在8、9月份含量相对最高,Taxol含量季节变化和10-DAB呈负相关,与CE呈显著正相关。7-xyl-10-DAT含量季节变化和10-DAB、10-DAT分别呈正相关。本文为研究南方红豆杉中紫杉醇及相关紫杉烷的代谢、积累规律提供了依据,不但有助于阐明紫杉醇的生物合成的关键步骤及调控的生理机制,而且对红豆杉资源的深度开发具有指导意义。

南方红豆杉枝叶与果实中6种紫杉烷类化合物含量分析

以南方红豆杉的枝、叶、果实为材料,建立了高效液相色谱法同时测定6种紫杉烷类化合物(紫杉醇、三尖杉宁碱、7–表–10–去乙酰紫杉醇、7–表–紫杉醇、巴卡亭III、10–去乙酰巴卡亭III)含量的方法。结果表明:以甲醇–乙腈–水(体积比为25∶36∶39)为流动相,等度洗脱,检测波长227 nm,6种紫杉烷类化合物在35 min内完全分离;南方红豆杉的枝、叶、果实中6种紫杉烷类化合物含量存在差异,其中,紫杉醇和7–表–10–去乙酰紫杉醇在种胚中含量最高,分别为866.47、722.50μg/g,10–去乙酰巴卡亭III、巴卡亭III和7–表–紫杉醇在叶中的含量最高,分别为301.20、234.08、11.74μg/g,三尖杉宁碱含量最高的部位是枝,为392.69μg/g。

不同生长类型云南红豆杉林木枝叶的紫杉烷含量测定

从云南红豆杉天然林在云南分布区的29个县中选择98株林木作样株,又从该树种主要种植地的云南红豆杉人工林和天然林无性系扦插苗中随机选出其林木51株,苗木54株,共计203株。以其小枝叶为样品,检测紫杉醇、10-DAB（10-去乙酰巴卡亭Ⅲ）等6种紫杉烷类化合物的含量。以此估计的云南红豆杉林木枝叶中的紫杉烷平均含量为0.051 40%,95%置信区间为0.045%-0.058%;其平均值的排序为人工林（0.087 0%）〉扦插苗（0.051 1%）〉天然林（0.033 0%）,3种类型云南红豆杉林木枝叶所含6种紫杉烷类的平均值排序为：10-DAB（0.026 3%）〉10-DAET（0.007 0%）〉紫杉醇（0.006 2%）〉巴卡亭Ⅲ（0.005 4%）〉三尖杉宁碱（0.005 0%）〉7-差向紫杉醇（0.001 6%）。检测中发现了10-DAB含量达0.205 9%和紫杉烷类合计值达0.344 8%的云南红豆杉单株,超过了巴卡亭Ⅲ含量0.2%的世界最高纪录。

生长调节物质对紫杉醇和紫杉烷类化合物合成的调控作用

植物生长调节物质不但控制细胞分裂 ,也影响着紫杉醇或紫杉烷类化合物的合成。 5mg/L NAA和 1mg/L BA有利于紫杉愈伤组织的生长。随着 BA浓度的提高 ,愈伤组织的增长率明显下降 ,但是 ,其紫杉醇含量却有所增加。 BA与 NAA的比例较大有利于 10 -去乙酰浆果赤霉素 的合成。添加高浓度 GA3和 CCC均抑制紫杉愈伤组织的生长 ,2 mg/L GA3或 1mg/L CCC有利于紫杉醇的合成。

东北红豆杉针叶中紫杉烷类化学成分的研究

目的 研究东北红豆杉Taxus cuspidata针叶中紫杉烷类化学成分。方法 用色谱法分离，用理化性质及波谱方法（IDNMR、2DNMR及FAB—MS）分析鉴定其化学结构。结果 从东北红豆杉针叶中分离得到6个化合物，分别鉴定为10β-羟基-2α，9α，13α-三乙酰氧基-5α-肉桂酰氧基紫杉-4（20），11-二烯（10β-hydroxy-2α，9α，13α—tri—acetoxy-5α—cinnamatetaxa-4（20），11-diene，Ⅰ）、7，13-二去乙酰基-9，10-去苯甲酰基taxchininC（7，13-dideacety1-9，10—debenzoyltaxchinin C，Ⅱ）、2-去乙酰基taxinB（2-deacetyltaxin B，Ⅲ）、7，9-二去乙酰基-5-去肉桂酰基紫杉宁J（713，9a—dideacety 1-5-decinnamoyltaxinine J，Ⅳ）、2α，13α-二羟基-9α；10β-二乙酰基-5α-肉桂酰基紫杉-4（20），11-二烯（2α，13α—dihydroxy-9α，10pdiacetoxy-5α—cinnamatetaxa-4（20），11-diene，Ⅴ）、5-去肉桂酰基taxuspine D（5-decin—namoyltaxuspineD，Ⅵ）。结论 化合物Ⅰ～Ⅲ，Ⅴ和Ⅵ均为首次从该植物中获得。

茉莉酸甲酯诱导下红豆杉细胞产生紫杉烷类物质群代谢轮廓分析

红豆杉细胞培养物经甲醇提取和固相萃取粗分离,进行反相高效液相色谱分析,获得了约含13个与紫杉醇极性相关的化合物色谱图,通过质谱联用和对照品参照,归属了这些化合物组成。进一步利用茉莉酸甲酯(MJ)诱导细胞,比较这些组分在诱导前后的相对色谱峰面积变化,结果表明,所有紫杉烷组分的浓度在诱导后都提高,其中以taxchinin M及其结构类似物提高最显著,紫杉醇,B-Ⅲ和B-Ⅵ等比C14位取代的taxuyunnanine C及其衍生物的浓度增加幅度要大,提示MJ对紫杉醇合成中非有效乙酰化旁路代谢有促进作用,而对C14位取代物生成的旁路促进作用不明显。本文为紫杉醇的生物合成研究提供了新的思路和方法。

无机元素对紫杉醇和紫杉烷类化合物生物合成的调控作用

利用细胞培养生产紫杉醇是重要的生产途径之一 ,但是 ,由于紫杉醇含量低 ,已经成为世界级研究难题。因此 ,紫杉醇的生物合成调控成为研究热点。Mg++,Cu++和Fe++是影响紫杉醇生物合成的重要金属元素。低浓度或高浓度的 Mg++有利于紫杉醇的合成 ,并促进 10 -去乙酰浆果赤霉素 和浆果赤霉素 向紫杉醇转化。 Cu++抑制紫杉醇及紫杉烷类化合物的合成。适量的 Fe++可以促进紫杉醇的合成 ,但较高或较低浓度的 Fe++均抑制 10 -去乙酰浆果赤霉素 和浆果赤霉素

超临界流体萃取红豆杉枝叶紫杉烷类萃余物中紫杉黄酮及单体组分的工艺优化

目的:采用响应面法优化红豆杉枝叶紫杉烷类萃余物(TREFT)中黄酮类物质的超临界流体萃取工艺。方法:根据Central Composite Design设计原理,采用四因素五水平的响应面分析法,分别考察萃取时间、萃取温度、萃取压力和夹带剂乙醇浓度对紫杉黄酮及单体组分阿曼托黄酮、槲皮素、银杏素提取率的影响。结果:优化工艺条件为:萃取时间2.2 h,萃取温度46.4℃,萃取压力22.6 MPa,夹带剂乙醇浓度80.7%,紫杉黄酮及单体组分提取率的综合评分为98.75。结论:优选的超临界流体萃取紫杉黄酮及单体组分工艺稳定可行,可为TREFT资源化利用提供技术支持。

UV-B辐射对南方红豆杉生活史型和紫杉烷类含量的影响

运用植物生活史型的理论与方法,研究了UV-B辐射增强对南方红豆杉Taxus chinensis var.mairei表型性状和紫杉烷类次生代谢产物的影响。结果表明,随UV-B辐射强度增加,南方红豆杉无性生殖表型性状(C)明显增强(z值由0.18增加到0.52),营养生长表型性状(V)相应降低(x值由0.82降低至0.48);3.25μW.cm-.2nm-1UV-B辐射处理较对照组和9.76μW.cm-.2nm-1UV-B辐射处理组生物量增量更高;增补UV-B辐射处理显著促进了南方红豆杉叶片中紫杉醇(Taxol)的积累,但对10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ(10-deacetylbaccatinⅢ,10-DAB)、7-木糖-10-去乙酰基紫杉醇(7-xylosyl-10-deacetyltaxol,7-xyl-10-DAT)有一定的抑制效应,其中3.25μW.cm-.2nm-1UV-B辐射处理对紫杉醇诱导效果最为明显。结果表明,在南方红豆杉田间栽培中应注意上层树种搭配、修剪,从而形成适当的UV-B辐射胁迫以诱导紫杉醇含量及生物量增量,达到高产、优质的生态培植目标。

不同海拔高度及植被类型的云南红豆杉林木枝叶紫杉烷含量分异性研究

对生长于海拔高度1480～3350m及相应的7个类型12个群系植被类型的98株云南红豆杉样木枝叶的紫杉烷含量进行了检测与分析，其结果表明，生长在不同海拔高度及相应植被群系中的云南红豆杉其林木枝叶紫杉烷含量具有显著的差异。方差分析表明，云南红豆杉所处的植被群系与其林木枝叶紫杉烷含量有极显著的相关性。含量最高的为生长于湿润常绿阔叶林的倒卵叶石栎林、木果石栎林中的云南红豆杉种群，其含量为最低者生长于冷杉林中的云南红豆杉种群的5．2倍。相关分析结果还表明，云南红豆杉所分布的海拔高度与其林木枝叶紫杉烷的含量高低具高度的相关性，其相关系数为-0．9851，在样木分布的最高海拔组与最低海拔组间其含量比为1：6．71。据此，以讨论的方式，表明利用云南红豆杉林木枝叶紫杉烷含量的分异性规律，可从“高含群系”、“回归预测值高含量奇点”、“单株最高值分布”等3条途径，将其应用于云南红豆杉的优良种源及高含优树选择。

云南红豆杉中四个新紫杉烷类二萜化合物的分离和结构鉴定

自云南红豆杉（ＴａｘｕｓｙｕｎｎａｎｅｎｓｉｓＣｈｅｎｇｅｔＬ．Ｋ．Ｆｕ）树皮的二氯甲烷提取部分又分离得到７个紫杉烷类二萜和生物碱，经光谱（ＩＲ，ＭＳ，１ＨＮＭＲ，１Ｈ－１Ｈ’ＣＯＳＹ，１３Ｃ－１ＨＣＯＳＹ）解析推定４个新的紫杉烷类二萜涨化合物的结构为５－ｄｅｃｉｎｎａｍｏｙｌ－１１－ａｃｅｔｙｌ－１９－ｈｙｄｒｏｘｙｌｔａｘａｇｉｆｉｎｅ（Ｉ），２－ｄｅａｃｅｔｏｘｙ－５．ｄｅｃｉｎｎａｍｏｙｌｔａｘｉｎｉｎｅＪ（ＩＩ），１－ｈｙｄｒｏｘｙ－２，７，９－ｔｒｉｄｅａｃｅｔｙｌｂａｃｃａｔｉｎＩ（ＩＶ）和７－ｘｙＩｏｓｙｌ－１０－ｄｅａｃｅｔｙｌｂａｃｃａｔｉｎＩＩＩ（ＶＩＩ），３个已知的紫杉烷类二苑和生物碱是５－ｄｅｃｉｎｎａｍｏｙＩｔａｘｉｎｉｎｅＪ（ＩＩＩ），７－ｘｙｌｏｓｙｌｔａｘｏｌ（Ｖ）和７－ｘｙｌｏｓｙｌｃｅｐｈａｌｏｍａｎｎｉｎｅ（ＶＩ），它们是首次从该植物中得到。

云南红豆杉枝叶的6种紫杉烷类物质含量及其相关性分析

对天然生长、人工栽培的云南红豆杉林木及云南红豆杉扦插苗203个小枝叶样的6种紫杉烷类物质含量进行了检测,进而对此6种紫杉烷类物质含量间的相关关系进行了分析。结果表明:云南红豆杉枝叶中的6种紫杉烷类物质总体含量较高,其合计含量达0.514 g.kg-1,其中以10-DAB的含量最高,占其总量的51.36%,而紫杉醇的含量排在第三,为总量的12.06%;云南红豆杉枝叶的6种紫杉烷类物质的含量间,均为正相关关系,多数相关系数都在α=0.01的水平上显著。据此,建立了云南红豆杉枝叶中10-DAB及紫杉醇的含量与其他5种紫杉烷类物质含量间的直线回归方程,用以预测其他5种紫杉烷类物质的含量。