紫杉醇关键酶基因TwDBAT在平菇中的遗传转化及表达

通过构建含平菇内源gpd启动子、红豆杉中Tw DBAT基因的真核表达载体pg Fvs-Tw DBAT,建立高效的平菇原生质体制备与再生体系;采用PEG介导法,将真核表达载体pg Fvs-Tw DBAT、pg Fvs-hph共转化高温型平菇菌株F7E原生质体,获得可以异源表达Tw DBAT基因的平菇菌株。PCR和Southern杂交鉴定结果表明,Tw DBAT基因整合进平菇基因组中;经继代培养,Tw DBAT基因在转化子中可稳定遗传。RT-PCR结果表明,转化子在mRNA水平上转录了Tw DBAT基因。HPLC结果显示,Tw DBAT酶可以催化底物10-去乙酰巴卡亭Ⅲ(10-DAB)。