miR-152-3p表达下调降低紫杉醇耐药人卵巢癌细胞A2780T对紫杉醇的耐药性

目的探讨miR-152-3p对紫杉醇耐药人卵巢癌细胞A2780T对紫杉醇耐药性的影响及机制。方法①紫杉醇(1.875,3.75,7.5,17和23μmol·L^(-1))与人卵巢癌A2780和A2780T细胞作用48 h,MTT法检测细胞存活率,计算抑制细胞存活半数抑制浓度(IC50)值和耐药指数(RI)。Western印迹法检测A2780和A2780T细胞耐药蛋白P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)和三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)蛋白表达。②实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测A2780和A2780T细胞miR-152-3p表达水平。脂质体瞬时转染技术转染miR-152-3p抑制物降低A2780T细胞中miR-152-3p表达(miR-152-3p抑制物组),同时设转染miR-152-3p阴性对照组,RT-qPCR检测转染效率,MTT法、划痕实验和流式细胞术分别检测转染miR-152-3p抑制物对A2780T细胞存活、迁移和凋亡的影响;Western印迹法检测转染miR-152-3p抑制物对A2780T细胞Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。③用miRDB,Targetscan,miRWalk和Starbase数据库预测miR-152-3p的靶基因,并用Western印迹法检测转染miR-152-3p抑制物后A2780T细胞磷酸酯酶张力蛋白同源物(PTEN)蛋白表达的变化及RT-qPCR检测A2780和A2780T细胞PTEN mRNA表达水平予以验证。随后,脂质体瞬时转染技术转染PTEN siRNA沉默A2780T细胞中PTEN表达,同时设转染siRNA阴性对照组,RT-qPCR检测转染效率,MTT法检测沉默PTEN表达后A2780T细胞存活率和IC50值,Western印迹法检测P-gp,MRP1和ABCG2蛋白表达。结果①紫杉醇处理后A2780和A2780T细胞存活率均降低(P<0.01),A2780T细胞RI为2.8。与A2780细胞相比,A2780T细胞P-gp,MRP1和ABCG2蛋白高表达(P<0.05,P<0.01)。②与A2780细胞相比,A2780T细胞miR-152-3p明显高表达(P<0.01)。与转染miR-152-3p阴性对照组比较,转染miR-152-3p抑制物后A2780T细胞存活率(P<0.05,P<0.01)和细胞迁移能力(P<0.05)明显降低,细胞凋亡率升高(P<0.01);Bax蛋白表达增加(P<0.01),Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05)。③生物信息学数据库分析结果提示,PTEN是miR-152-3p的一个靶基因;Western印迹法验证显示,转染miR-152-3p抑制物组A2780T细胞PTEN蛋白表达低于转染miR-152-3p阴性对照组(P<0.05);RT-qPCR结果显示,A2780T细胞PTEN mRNA表达水平高于A2780细胞(P<0.01)。转染PTEN siRNA沉默PTEN表达后,与转染siRNA阴性对照组相比,A2780T细胞存活率(P<0.05,P<0.01)和IC50值(P<0.01)显著降低,P-gp,MRP1和ABCG2蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。结论miR-152-3p在A2780T细胞中高表达,其表达下调可抑制A2780T细胞增殖和迁移,促进细胞凋亡,降低A2780T细胞对紫杉醇的耐药性,该作用可能是通过降低其靶基因PTEN表达发挥的。

人参皂苷 Rg3对人乳腺癌细胞紫杉醇化疗耐药的影响

目的:分析人参皂苷Rg3对人乳腺癌细胞紫杉醇化疗耐药的影响。方法:选择2021年1月至2022年12月为4研究时间段,经低浓度持续递增法建立乳腺癌紫杉醇(PTX)耐药细胞,稀释细胞浓度1×10^(4)个/mL,在96孔板中接种,在明确贴壁后,加入紫杉醇(150µM),分为5组,分别为空白对照组、PTX组、3组G-Rg3+PTX组,每组设3个平行样本。其中,3组G-Rg3+PTX组分别加入G-Rg3药物60µM、80µM、100µM,PTX组及G-Rg3+PTX组均加入PTX 150µM。待PTX组、加入不同浓度(60µM、80µM、100µM)的G-Rg3+PTX组,共4组人乳腺癌MCF-7细胞处理24 h后,检测4组吸光值(OD值),经Annexin-V/FITC和PI双染,流式细胞仪检测,利用GraphPad Prism 7.04计算半数抑制浓度(IC50)值和耐药指数(RI);其中,RI计算公式为RI=空白对照组耐药细胞IC50/亲本MCF-7细胞IC500。结果:经24 h处理后,空白对照组OD值(0.90±0.04),无IC50值、RI值;PTX组的OD值(0.40±0.06)、IC50值(725.60±5.85)µmol/L、RI值3.2;G-Rg3+PTX组60µM的OD值(0.21±0.06)、IC50值(686.68±5.36)µmol/L、RI值4.9;80µM的OD值(0.17±0.05)、IC50值(412.46±723)µmol/L、RI值6.7;100µM的OD值(0.14±0.04)、IC50值(235.87±5.93)µmol/L、RI值9.1。结论:人参皂苷Rg3能够影响人乳腺癌细胞紫杉醇的化疗耐药性,提升对癌症的抑制作用。

柴胡皂苷D对紫杉醇耐药乳腺癌细胞耐药性的逆转作用研究

目的:研究柴胡皂苷D对紫杉醇(paclitaxel,PTX)耐药的乳腺癌细胞(MCF-7/PTX)耐药性的逆转作用及其机制。方法:采用噻唑蓝溴化四唑法(MTT法)测定不同质量分数(0、12.5、25、50、100、200 mg/L)PTX处理MCF-7/PTX细胞和MCF-7细胞48 h的细胞存活率,确定MCF-7/PTX细胞对PTX的耐药程度。采用MTT法测定不同质量分数(0.125、0.25、0.50、1.00 mg/L)柴胡皂苷D处理MCF-7/PTX细胞48 h的细胞增殖抑制率,确定柴胡皂苷D对MCF-7/PTX细胞的安全性。采用MTT法测定确定0.125、0.25和0.5 mg/L柴胡皂苷D能否调节MCF-7/PTX细胞对PTX的敏感性。采用蛋白免疫印迹法(Western Blot)和流式细胞术分别检测不同质量分数的柴胡皂苷D对Yes相关蛋白(YAP)和P糖蛋白(P-gp)表达的影响。进行罗丹明123(Rh123)积累和外流测定。结果:与0 mg/L PTX对比,MCF-7和MCF-7/PTX细胞存活率随PTX质量分数增加而降低,且呈现依赖性(P<0.05);确立100 mg/L PTX作为MCF-7/PTX细胞的给药质量分数。0.125、0.25和0.50 mg/L柴胡皂苷D对MCF-7/PTX细胞无明显毒性,MCF-7/PTX细胞增殖抑制率随柴胡皂苷D质量分数增加而升高。与PTX组对比,0.125、0.25和0.50 mg/L柴胡皂苷D组MCF-7/PTX细胞IC 50、YAP和p-YAP蛋白、P-pg mRNA表达水平降低(P<0.05或P<0.01)。与PTX组对比,柴胡皂苷D处理的MCF-7/PTX细胞积累更多Rh123,降低Rh123外排速度(P<0.01)。结论:柴胡皂苷D可能通过下调Hippo/YAP通路逆转P-gp介导的乳腺癌耐药。

紫杉醇诱导的卵巢癌耐药细胞株的生物学特性及其保存

目的研究紫杉醇诱导的卵巢癌耐药细胞株的生物学特性,探索耐药细胞的长期保存条件,以建立稳定的体外实验模型。方法选用卵巢癌化疗敏感细胞株SKOV3,分别采用大剂量冲击和小剂量浓度递增诱导建立耐药的卵巢癌细胞株SKOV3/TAX300、SKOV3/TAX30。四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测耐药细胞对化疗药物紫杉醇的IC50;比较耐药细胞和敏感细胞的细胞平板克隆形成、生长曲线倍增时间的差异;荧光定量PCR检测敏感细胞和耐药细胞中耐药相关基因的表达;比较无药冻存和加药冻存的方式对耐药细胞的保存效果。结果耐药细胞SKOV3/TAX300,耐药指数为4.60,耐药细胞SKOV3/TAX30,耐药指数为51.31;与敏感细胞相比,耐药细胞体积增大,形态不规则,倍增时间延长。多药耐药基因1(MDR1)在两种耐药细胞中高表达,肺耐药相关蛋白(LRP)、蛋白激酶Cα(PRKCA)基因仅在SKOV3/TAX300中的表达增高,BCL-2样1基因(BCL2L1)在SKOV3/TAX30中低表达。耐药细胞冻存在含有药物的条件下,有利于耐药性的保持。结论大剂量冲击和小剂量浓度递增两种方法诱导的耐药细胞为研究紫杉醇耐药机制建立了良好的体外模型,两种耐药细胞SKOV3/TAX300和SKOV3/TAX30具有不同的生物学特性。

人肺腺癌紫杉醇耐药细胞株的建立及其生物学特性研究

目的建立耐紫杉醇的人肺腺癌细胞株模型SPC-A1/Taxol,并初步研究其生物学特性。方法应用浓度递增和短时作用法,从人肺腺癌细胞株SPC-A1中诱导分离出对紫杉醇耐药的细胞亚株(SPC-A1/Taxol)。采用MTT法检测耐药细胞的耐药指数及对抗癌药物的敏感性;光镜和透射电镜观察细胞形态;以流式细胞术检测该耐药细胞的细胞周期分布;以免疫细胞化学染色检测多药耐药基因(mdr1)的表达产物P-糖蛋白(P-gp)。结果经MTT法检测,SPC-A1/Taxol细胞的紫杉醇半数抑制浓度(IC50)是亲代SPC-A1细胞的759.46倍,对Taxotere、NVB、ADM呈高度耐药状态,对VP-16和HCPT有轻度的耐药,而对DDP、GEM以及中药榄香烯乳无交叉耐药现象。耐药细胞的群体倍增时间是亲代细胞的1.32倍;细胞形态未见明显改变;G0+G1细胞比例减少,S期细胞增多。SPC-A1细胞无P-gp表达,SPC-A1/Taxol则高表达P-gp。结论SPC-A1/Taxol肺腺癌细胞株是一个明确的多药耐药模型,具有耐药细胞的基本生物学特性,推测其多药耐药性与P-gp的高表达相关。

和厚朴酚逆转非小细胞肺癌紫杉醇耐药的作用及机制

目的探讨中药厚朴的有效单体成分和厚朴酚对非小细胞肺癌紫杉醇(paclitaxel,PTX)耐药性的逆转作用及可能机制。方法以非小细胞肺癌细胞株A549和PTX耐药细胞株A549T作为研究对象,分为空白对照组、和厚朴酚组、紫杉醇组、和厚朴酚+紫杉醇组,和厚朴酚组、紫杉醇组分别使用一定浓度的药物干预细胞,和厚朴酚+紫杉醇组使用两种药物联合干预细胞,空白对照组不干预。通过MTT实验、流式细胞术、细胞免疫荧光实验及Western Blot免疫印迹实验,观察和厚朴酚对A549T细胞株紫杉醇耐药性的影响。结果和厚朴酚联合紫杉醇干预体外培养的A549T细胞时,细胞存活率较对照组显著降低;和厚朴酚干预体外培养的A549T后,与对照组相比,G2/M期细胞数量增加,细胞P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达水平降低。结论和厚朴酚能逆转体外培养的A549T细胞的紫杉醇耐药性,其机制与抑制P-gp蛋白的表达,减少药物外排有关。

人乳腺癌多西紫杉醇耐药细胞株的建立及特性

目的建立人乳腺癌多西紫杉醇(Docetaxel,Doc)耐药细胞模型MCF-7/Doc,初步探讨其生物学特性。方法采用Doc低浓度逐步加量诱导法建立MCF-7/Doc耐药株;通过细胞形态学观察、生长曲线和群体倍增时间测定、MTT法药物敏感试验及流式细胞术评价其生物学特性;实时荧光定量PCR和Western blot分别检测多药耐药基因MDR1mRNA和蛋白的表达。结果经10个月的诱导成功建立MCF-7/Doc细胞株,可在100 ng/ml Doc培养液中稳定生长,耐药指数为亲代敏感细胞MCF-7/S的33.3倍,对其他多种化疗药物呈交叉耐药状态。光镜下,药物处理后细胞变圆变小、核分裂象减少;MCF-7/Doc倍增时间较MCF-7/S延长[(41.6±1.6)h vs(30.6±1.1)h;P<0.01]。与亲代相比,耐药细胞处于G1期和G2期的细胞增加、S期减少;MDR1基因表达水平增高90.7倍,蛋白表达转为阳性,而雌激素受体阳性表达丢失。结论 MCF-7/Doc细胞具有典型的多药耐药性,MDR1基因和蛋白过表达是其获得性耐药的主要机制之一。

苯丁酸钠对多烯紫杉醇耐药前列腺癌细胞株的增值抑制和凋亡诱导作用

目的研究苯丁酸钠对前列腺癌多烯紫杉醇耐药细胞株的增值抑制与凋亡诱导作用,并探讨其作用机制。方法构建多烯紫杉醇耐药前列腺癌PC3细胞株(PC3/DTX),采用0、1、2、4 mmol/L的苯丁酸钠处理PC3/DTX,MTT检测细胞增殖、细胞活力以及抑制率,计算不同浓度苯丁酸钠处理后各组多烯紫杉醇对PC3/DTX细胞的半致死浓度(IC50);流式细胞仪检测不同处理组细胞凋亡水平;Western blot检测p21、Cyclin D1与Survivin的表达水平。结果 0、1、2、4 mmol/L的苯丁酸钠处理PC3/DTX细胞48 h后,细胞存活率分别是(99.85±2.69)%,(84.68±3.87)%,(68.65±4.54)%和(43.54±5.69)%(P<0.05);抑制率分别是(10.69±3.65)%,(5.78±4.58)2%,(54.68±3.98)%和(69.84±6.54)%(P<0.05);多烯紫杉醇对各处理组细胞的IC50分别为135.98±2.69、109.65±3.87、87.65±3.84、64.62±2.98 nmol/L(P<0.05);细胞的凋亡率分别为(7.20±0.80)%,(10.20±0.90)%,(19.80±2.10)%和(27.40±2.50)%(P<0.05);Western blot显示苯丁酸钠促进p21蛋白的表达,抑制Cyclin D1与Survivin蛋白的表达。结论苯丁酸钠可以增加前列腺癌耐药细胞株对多烯紫杉醇的药敏性,并影响前列腺癌耐药细胞株p21、Cyclin D1与Survivin蛋白的表达量。

人乳腺癌细胞株MCF-7及其紫杉醇耐药株中紫杉醇结合的差异蛋白质分析

目的分析人乳腺癌细胞株MCF-7及其紫杉醇耐药株MCF-7/Taxol中的紫杉醇结合的差异蛋白质,探索抗肿瘤药物新靶点。方法合成生物素化紫杉醇,HPLC-MS联用法检测合成产物。SRB法检测生物素化紫杉醇的生物活性,免疫磁珠偶联后与MCF-7及其MCF-7/Taxol的全细胞蛋白液反应,获得紫杉醇结合蛋白,SDS-PAGE电泳获得差异蛋白条带,LC-MS/MS分析,Western blot鉴定差异结合蛋白。结果成功合成生物素化紫杉醇,生物素化紫杉醇的生物活性和紫杉醇相当。经过蛋白电泳分析,MCF-7/Taxol的紫杉醇结合蛋白较MCF-7多一差异条带,LC-MS/MS分析提示数个目标蛋白,经过Western blot验证差异条带中有Heat shock protein HSP90、Dermcidin Precursor、Actinin。结论成功获得了MCF-7和MCF-7/Taxol之间的紫杉醇细胞差异结合蛋白,对这些蛋白作用机制的的深入探索,可能为抗肿瘤药物的研究寻找到新的靶点蛋白,发现新的肿瘤耐药机制。

人鼻咽癌紫杉醇耐药细胞株CNE-1/Taxol的建立及其机制初探

目的建立耐紫杉醇的人鼻咽癌细胞株,并对其生物学特性及耐药机制进行初步探讨。方法采用大剂量冲击和逐步增加剂量相结合的方法,建立耐紫杉醇鼻咽癌细胞株。检测两种细胞的形态差异、生长曲线及倍增时间;用集落形成实验检测它们对紫杉醇、顺铂和长春新碱化疗药的敏感性;使用RT-PCR比较两种细胞β-微管蛋白Ⅲ,鸟苷酸结合蛋白1的表达差异。结果成功建立了耐药指数为8.43的CNE-1/Taxol耐药细胞株,其增殖速度减慢,倍增期延长,体积变小,且对长春新碱低度耐药,耐药指数为1.33;但与亲本细胞株比较,其对顺铂的敏感性明显增加(P<0.01);β-微管蛋白Ⅲ和鸟苷酸结合蛋白1的表达在耐药细胞株中均升高,并与耐药指数呈正相关(p<0.05)。结论CNE-1/Taxol是一株对紫杉醇耐药的细胞株,是研究紫杉醇耐药机制的重要实验模型;CNE-1/Taxol逆向增加了对顺铂的敏感性;β-微管蛋白Ⅲ和鸟苷酸结合蛋白1表达增强可能是鼻咽癌细胞产生获得性耐药的主要机制之一。

卵巢癌紫杉醇耐药细胞株OC_3/TAX_(300)建立及基因表达谱分析

目的：建立人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株,探讨其基因表达谱差异与紫杉醇耐药之间相关性。方法：采用反复大剂量紫杉醇冲击法,由亲本细胞OC_3建立卵巢癌紫杉醇耐药细胞株OC_3/TAX_(300)。运用比较基因组杂交(comparative genomic hy- bridization,CGH)及基因芯片技术分析耐药及敏感株细胞染色体DNA拷贝数和基因表达谱差异。结果：OC_3/TAX_(300)耐药株历时10个月建成,耐药性稳定,耐药指数为6.70。CGH结果显示OC_3/TAX_(300)细胞染色体2p22的高水平扩增。基因表达谱芯片共筛选出显著表达差异基因134条,其中117种基因表达水平下调,17种基因表达上调,有代表性的下调基因为KCNK2、COP9,上调的基因为JAK2。结论：建立卵巢癌紫杉醇耐药细胞株OC_3/TAX_(300),耐药性稳定,可以作为筛选耐药基因和耐药逆转剂的细胞模型。OC_3/TAX_(300)细胞染色体2p22的高度扩增、KCNK2、COP9基因下调和JAK2基因上调与卵巢癌化疗耐药有关。

人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株的建立和生物学特性评价

目的建立人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株(Skov-3/PTX),并对其生物学性状进行检测和鉴定。方法采用紫杉醇浓度梯度递增法,建立人卵巢癌紫杉醇耐药株。通过细胞形态学观察、生长曲线和群体倍增时间测定、药物敏感试验、细胞内Rh-123和紫杉醇含量研究及MDR1、MRP和GST-πmRNA水平的测定,评价Skov-3/PTX生物学特性。结果成功建立了Skov-3/PTX耐药株,耐药指数为45.90,对吉非替尼、9-硝基喜树碱和阿霉素产生明显的交叉耐药性。与Skov-3细胞相比,Skov-3/PTX耐药细胞异形明显;耐药细胞倍增时间显著延长(P<0.05);耐药细胞内Rh-123和紫杉醇量显著减少(P<0.05),环孢菌素可以增加细胞内Rh-123和紫杉醇含量;耐药细胞的MDR1、MRP和GST-πmRNA水平显著增高。结论Skov-3/PTX细胞具有典型多药耐药特性,为进一步研究耐药逆转途径提供了实验基础。

mTOR通路增强宫颈癌紫杉醇耐药细胞株HeLa/PTX对紫杉醇的敏感性

目的探讨mTOR在宫颈癌紫杉醇耐药中的作用及mTORC1/2双重抑制剂OSI-027联用紫杉醇后HeLa/PTX细胞对紫杉醇(paclitaxel,PTX)敏感性的变化并对相关机制进行研究。方法用sh-RNA-Raptor及sh-RNA-Rictor质粒转染HeLa/PTX细胞以下调Rictor及Raptor的表达,采用western blot法检测mTOR信号通路相关蛋白(Raptor、Rictor、p-Akt(ser473)、Akt和p-p70S6K)和凋亡相关蛋白(Bcl-2和Bax)的表达情况;采用平板克隆形成实验、CCK-8法及Western blot法检测单用mTORC1/2双重抑制剂(OSI-027)、PTX及联用OSI-027和PTX后细胞克隆形成能力、增殖活力的变化并计算药物联用指数(combination index,CI)及mTOR信号通路相关蛋白和凋亡相关蛋白的表达情况。结果与对照组相比,在HeLa/PTX细胞中下调Raptor后p-p70S6K表达显著降低(P<0.001),p-Akt(ser473)/Akt比率显著升高(P<0.001),Bcl-2/Bax比值无显著差异(P>0.05)。下调Rictor后p-p70S6K蛋白表达、p-Akt(ser473)/Akt及Bcl-2/Bax比值均显著降低(P<0.001);与单独使用OSI-027或PTX相比,联合用药组细胞的克隆形成能力及增殖活力均明显下降且两药联用具有协同作用;与空白对照组相比,单用PTX处理HeLa/PTX细胞后p-Akt(ser473)/Akt比率略降低(P<0.05),p-p70S6K表达无明显变化(P>0.05),而单用OSI-027处理HeLa/PTX细胞后p-Akt(ser473)/Akt比率及p-p70S6K表达均显著降低(P<0.001);与单用OSI-027及PTX相比,联合用药处理HeLa/PTX细胞后p-Akt(ser473)/Akt比值、Bcl-2/Bax比值及p-p70S6K蛋白表达均显著降低(P<0.001)。结论抑制mTORC2信号通路的活性可减弱mTORC1抑制引起的p-Akt(ser473)反馈激活可成为克服紫杉醇耐药的有效靶点;mTORC1/2双重抑制剂OSI-027与紫杉醇联用可产生协同抗肿瘤作用。

生存素下调多药耐药蛋白增强人鼻咽癌细胞株对紫杉醇敏感性的研究

目的研究生存素(Survivin)下调多药耐药蛋白(MRP)的表达与鼻咽癌紫杉醇(PTX)耐药性关系,探讨鼻咽癌PTX耐药的分子机制。方法采用免疫组化检测Survivin和MRP在42例鼻咽癌PTX耐药患者与24例PTX非耐药患者中的表达;采用浓度递增法持续诱导建立鼻咽癌化疗耐药细胞株5-8F-PTX(+),绘制细胞生长曲线,测定细胞生长的倍增时间,检测肿瘤细胞的周期分布;采用siRNA技术干扰5-8F-PTX(+)中Survivin的表达后,Western blot法检测Survivin和MRP表达变化,MTT检测不同抗肿瘤药物PTX、顺铂(cDDP)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、长春新碱(VCR)耐药敏感性的变化。结果 Survivin在鼻咽癌化疗耐药患者中阳性表达率为83.3%,明显高于非耐药患者(41.7%),差异有高度统计学意义(P<0.01);MRP在鼻咽癌PTX耐药患者中表达阳性率为88.1%,明显高于非耐药患者(37.5%),差异有高度统计学意义(P<0.01)。5-8F-PTX(+)较5-8F的细胞生长速度明显减慢,5-8F-PTX(+)细胞生长的倍增时间为21 h,亲本5-8F细胞生长的倍增时间为15 h;5-8F-PTX(+)的G2/M期细胞百分比[(23.1±1.3)%]显著高于亲本5-8F细胞[(13.5±0.9)%];Survivin和MRP在PTX耐药细胞株5-8F-PTX(+)细胞株中的表达水平明显高于非耐药的5-8F,siRNA干扰5-8F-PTX(+)中Survivin的表达后,Survivin和MRP表达明显下调,PTX、cDDP、5-FU、VCR耐在siRNA-5-8F-PTX(+)中的IC50值不同程度地下降。结论 Survivin可通过下调MRP的表达增强鼻咽癌细胞对PTX的敏感性。

人肺腺癌紫杉醇耐药细胞株的建立及其特性研究

目的建立耐紫杉醇的人肺腺癌A549(A549/Taxol)细胞株,并初步研究其生物学特性。方法应用抗肿瘤药紫杉醇以体外浓度递增和短时作用法筛选A549细胞株。用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞的耐药指数及对多种抗癌药物的敏感性;免疫细胞化学法检测P-糖蛋白(P170)、β-tubulin等耐药相关蛋白的表达情况。结果A549/Taxol细胞的紫杉醇半数抑制浓度(IC50)是亲代A549细胞的512.8倍,群体倍增时间是亲代细胞的1.28倍,对紫杉醇、丝裂霉素、长春新碱、诺维本的耐药指数依次为512.8、66.48、4.88和2.06;而对顺铂、健择无交叉耐药。A549/Taxol细胞高表达P170,β-tubulin表达水平高于其亲代细胞系。结论成功建立了一株耐紫杉醇的A549/Taxol,并呈多药耐药特性。

miR-21转染对卵巢癌细胞株A2780/Taxol紫杉醇耐药性的影响及机制探讨

目的探讨microRNA-21(miR-21)在卵巢癌化疗耐药中的作用及机制。方法荧光定量RT-PCR法检测miR-21在人卵巢癌细胞株A2780及A2780/Taxol的表达水平,合成miR-21的干扰序列,以脂质体为载体转染A2780/Taxol细胞;MTT法检测细胞转染前后对紫杉醇的耐药性;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;蛋白质印迹法检测磷酸酶基因(PTEN)、BAX及Bcl-2蛋白。结果 miR-21表达下调后,A2780/Taxol对紫杉醇的IC50值明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显增加(P<0.05),细胞内PTEN、BAX蛋白表达水平增加,Bcl-2表达降低。结论 miR-21在人卵巢癌耐药株中呈高表达,其可能是介导人卵巢癌耐药的主要因素之一,具体机制可能是降低PTEN、BAX及升高Bcl-2来介导肿瘤细胞耐药。

不同方法建立卵巢癌紫杉醇耐药细胞株对临床用药方案的启发

目的:用不同的诱导耐药方法培养紫杉醇耐药细胞株A2780/Taxol,A2780/(DDP+Taxol),A2780/Taxol-1,以进一步探讨卵巢癌耐药机理,为临床逆转耐药研究提供模型依据。方法:采用逐步增加药物浓度和大剂量冲击两种方法处理细胞,直至细胞能在2.5μg·ml^(-1)紫杉醇中稳定生长。用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定其耐药性及紫杉醇对各组细胞的抑制率,并在冻存3个月后再次检测耐药性。结果:MTT法检测A2780,A2780/DDP细胞对紫杉醇的药物半数抑制浓度(IC_(50))分别为(0.23±0.04)μg·ml^(-1)和(0.26±0.02)μg·ml^(-1),采用逐步增加药物浓度诱导法历经九个月时间建立A2780的紫杉醇耐药细胞株A2780/Taxol-1,对紫杉醇的IC_(50)为(6.63±0_31)μg·ml^(-1),耐药倍数为28.83。采用大剂量冲击法以A2780和A2780/DDP为对象建立各自的紫杉醇耐药细胞株A2780/Taxol、A2780/(DDP+Taxol),检测大剂量冲击法建立的A2780/Taxol,A2780/(DDP+Taxol)耐药性,发现它们对紫杉醇的耐药倍数分别为19.65,17.96,两者比较无统计学差异(P>0.05),而两种方法建立的紫杉醇耐药细胞株A2780/Taxol、A2780/ Taxol-1的耐药性有统计学差异(P<0.05)。同时检测A2780/DDP和A2780/(DDP+Taxol)对顺铂的IC50差异无统计学意义(P>0.05)。结论:通过逐步诱导法建立的耐药细胞株比通过大剂量冲击法建立的耐药细胞株耐药性稳定,耐药性显著增高,提示临床用药中应足剂量用药。紫杉醇与顺铂无交叉耐药。在A2780/DDP细胞基础上使用紫杉醇建立双耐药细胞株时,紫杉醇对细胞的顺铂耐药性无影响,不能逆转其顺铂耐药性,所以对顺铂耐药患者多药合用意义不大,单用紫杉醇可能为佳。

人肺腺癌紫杉醇耐药细胞株交叉耐药性实验研究

目的通过建立体外肺腺癌耐药细胞株,研究紫杉醇交叉耐药性,为临床治疗提供有益的实验依据。方法应用浓度递增和短时作用相结合,建立人肺腺癌紫杉醇耐药株SPC-A1/Taxol。通过MTT法检测加入不同药物后耐药细胞的半数抑制浓度,计算耐药指数。结果SPC-A1/Taxol耐药细胞株对多西紫杉醇、长春瑞滨、长春新碱和阿霉素显示高度耐药,对喜树碱类和鬼臼毒素类显示中度或低度耐药,对铂类药物、抗代谢药和中药榄香烯乳未见交叉耐药性。结论SPC-A1/Taxol耐药细胞株为一个较好的多药耐药体外模型,对其交叉耐药性的实验研究可以为临床用药提供有益依据。

用基因芯片技术筛选人子宫内膜癌细胞株中紫杉醇耐药相关基因

目的应用基因芯片技术筛选人子宫内膜癌细胞株中获得性紫杉醇(TAX)耐药相关基因。方法采用大剂量间歇诱导法,用TAX反复冲击诱导培养人子宫内膜癌Ishikawa细胞株,建成Ishikawa/TAX耐药株。应用Affymetrix Human Genome U133 Plus2.0表达谱芯片检测Ishikawa/TAX与Ishikawa细胞株基因。通过Gene Ontology(GO)聚类分析对差异表达的基因予以分类。采用qRT-PCR对部分差异表达的基因进行验证。结果与Ishikawa细胞相比,Ishikawa/TAX细胞中有110条基因表达有显著性差异(ratio比值>3),包括87个上调基因、23个下调基因,GO分类涉及细胞信号传导和调控、细胞黏附分子、细胞代谢及转录调控等;其中上调最明显的基因为S100A12,其次有CYP1B1、FUBP1、CEACAM6,下调基因有TNFAIP3、CD44、DKK1等。qRT-PCR检测S100A12、CYP1B1在耐药细胞中高表达,TNFAIP3、CD44在耐药细胞中低表达,与基因芯片结果一致。结论采用基因芯片技术筛选出的人子宫内膜癌获得性TAX耐药相关基因的上调基因有S100A12、CYP1B1、FUBP1、CEACAM6,下调基因有TNFAIP3、CD44、DKK1。

卵巢癌紫杉醇耐药细胞株OC_3/PIX_3及OC_3/PIX_5的比较基因组杂交研究

目的:了解两种卵巢癌紫杉醇耐药株(OC3/PIX3及OC3/PIX5)和其亲代细胞紫杉醇敏感株(OC3)染色体DNA拷贝数的差异变化,探讨耐药细胞的分子遗传学改变。方法:运用比较基因组杂交(comparative genom ic hybrid ization,CGH)技术,将OC3/PIX3及OC3/PIX5与其亲代细胞株OC3的染色体基因组进行比较分析。结果:3种细胞株的染色体2pter-p21、3q、5p、9均有遗传物质表达增加;10号染色体表达增加仅见于OC3。染色体1,4,6的遗传物质在3种细胞株的表达均有减少。3p的减少发生在OC3和OC3/PIX5。仅在OC3细胞中见到7q、8p减少。OC3和OC3/PIX5出现染色体10q22过度扩增。最有意义的变化是OC3/PIX3细胞染色体2p22的过度扩增。结论:2p22拷贝数过度扩增可能与卵巢癌紫杉醇耐药相关。