CircWHSC1调节miR-212-3p/CD47轴对子宫内膜癌细胞免疫逃逸和紫杉醇耐药性的影响

目的:探讨环状链非编码RNA(Circ)WHSC1调节微小RNA(miR)-212-3p/整合素相关蛋白(CD47)轴对子宫内膜癌(EC)细胞免疫逃逸和紫杉醇(PTX)耐药性的影响。方法:qRT-PCR检测EC细胞系(Ishikawa、RL95-2、HEC-1-A、HEC-1B)及人子宫内膜基质细胞(ESC)系CL0453中CircWHSC1、miR-212-3p、CD47 mRNA表达水平;以Ishikawa细胞为研究对象,分为对照组、RNA干扰CircWHSC1载体(sh-CircWHSC1)组、阴性对照(sh-NC)组、sh-CircWHSC1+miR-212-3p抑制剂(miR-212-3p inhibitor)组、sh-CircWHSC1+抑制剂阴性对照(inhibitor NC)组;CCK-8分别检测各组Ishikawa细胞增殖及对PTX耐药性;流式细胞仪检测细胞凋亡状况;Western blot检测CD47及免疫逃逸蛋白(B7-H1、PD-L1)表达;双荧光素酶验证miR-212-3p分别与CircWHSC1、CD47靶向关系。结果:Ishikawa、RL95-2、HEC-1-A、HEC-1B细胞较CL0453细胞CircWHSC1、CD47 mRNA均显著增加,miR-212-3p表达显著下降(P<0.05);与对照组、sh-NC组相比,sh-CircWHSC1组CircWHSC1、CD47 mRNA、增殖率、IC 50、B7-H1、PD-L1表达均显著下降,凋亡率、miR-212-3p表达显著增加(P<0.05);与sh-CircWHSC1+inhibitor NC组相比,sh-CircWHSC1+miR-212-3p inhibitor组CD47 mRNA、增殖率、IC 50、B7-H1、PD-L1表达均显著增加,凋亡率、miR-212-3p表达显著下降(P<0.05)。miR-212-3p分别与CircWHSC1、CD47存在靶向关系。结论:干扰CircWHSC1表达可抑制Ishikawa细胞增殖,降低PTX耐药性,促进其凋亡,并可能抑制癌细胞免疫逃逸,其作用机制可能是通过调控miR-212-3p/CD47轴实现的。

阿帕替尼通过下调STC2表达抑制肝癌细胞的紫杉醇耐药性

目的探究阿帕替尼调节斯钙素2(STC2)表达对肝癌细胞紫杉醇耐药性的影响。方法通过逐步增加紫杉醇浓度持续诱导正常肝癌细胞BEL-7402以构建肝癌紫杉醇耐药细胞株BEL-7402/PTX;CCK-8法检测不同浓度的阿帕替尼(0,0.5,1,2,4,8,16μmol/L)干预BEL-7402/PTX细胞的存活率。将BEL-7402/PTX细胞分为对照组(正常培养)、8μmol/L阿帕替尼组、16μmol/L阿帕替尼组、pcDNA组和pcDNA-STC2组,对照组细胞正常培养,8μmol/L阿帕替尼组和16μmol/L阿帕替尼组细胞分别使用8μmol/L和16μmol/L阿帕替尼干预细胞48 h,pcDNA组和pcDNA-STC2组组细胞分别转染pcDNA和pcDNA-STC2后使用16μmol/L阿帕替尼干预细胞48 h。CCK-8法检测各组BEL-7402/PTX细胞存活率,qRT-PCR检测细胞STC2的表达,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Transwell检测细胞侵袭,Western blot检测P-糖蛋白(P-gp)、血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、波形蛋白(vimentin)和E-钙黏附素(E-cadherin)蛋白表达。结果在相同的紫杉醇浓度下,BEL-7402/PTX细胞存活率明显高于BEL-7402细胞(P<0.05),表明成功构建紫杉醇耐药BEL-7402细胞株。不同浓度的阿帕替尼处理BEL-7402/PTX细胞,细胞存活率均显著降低(P<0.05),IC_(50)为(10.76±0.88)μmol/L,因此后续使用8μmol/L和16μmol/L阿帕替尼浓度进行实验。与对照组相比,8μmol/L和16μmol/L阿帕替尼组BEL-7402/PTX细胞存活率、STC2表达、侵袭个数以及P-gp、VEGF-2、MRP1、Bcl-2、vimentin蛋白表达明显下降,凋亡率和E-cadherin表达明显上升(P<0.05)。与16μmol/L阿帕替尼组和pcDNA组相比,pcDNA-STC2组BEL-7402/PTX细胞存活率、STC2表达、侵袭个数以及P-gp、VEGFR-2、MRP1、Bcl-2、vimentin表达明显升高,凋亡率和E-cadherin表达明显下降(P<0.05)。结论阿帕替尼可通过抑制STC2表达减弱肝癌细胞紫杉醇耐药性。

lncRNA BLACAT1通过靶向miR-374b-5p对卵巢癌细胞紫杉醇耐药性的影响及其机制

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)膀胱癌相关转录本(BLACAT)1靶向miR-374b-5p对卵巢癌细胞紫杉醇(Taxol)耐药性的影响。方法实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测卵巢癌组织、与其对应的癌旁组织、卵巢癌细胞SKOV3及卵巢癌Taxol耐药细胞SKOV3/Taxol中BLACAT1和miR-374b-5p表达水平。采用不同浓度Taxol处理SKOV3和SKOV3/Taxol细胞,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,计算IC50。将si-BLACAT1和miR-374b-5p mimics分别转染SKOV3/Taxol细胞,经Taxol干预处理后,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹检测细胞周期蛋白(Cyclin)D1、p21、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2蛋白和Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达水平。双荧光素酶报告基因实验和qRT-PCR验证BLACAT1和miR-374b-5p的靶向关系。结果与癌旁组织比较,卵巢癌组织中BLACAT1的表达水平显著升高,miR-374b-5p的表达水平显著降低;与SKOV3细胞相比,SKOV3/Taxol细胞中BLACAT1的表达水平显著升高,miR-374b-5p的表达水平显著降低(P<0.05)。SKOV3/Taxol细胞的IC50显著高于SKOV3细胞(P<0.05)。沉默BLACAT1或过表达miR-374b-5p均可明显抑制SKOV3/Taxol细胞CyclinD1和Bcl-2表达,明显促进p21和Bax表达,明显促进细胞凋亡(P<0.05)。BLACAT1可靶向负性调控miR-374b-5p表达。干扰miR-374b-5p表达可逆转沉默BLACAT1对SKOV3/Taxol细胞Taxol耐药性的影响。结论沉默BLACAT1通过上调miR-374b-5p表达,抑制SKOV3/Taxol细胞增殖,促进细胞凋亡,从而提高卵巢癌耐药细胞SKOV3/Taxol细胞对Taxol敏感性。

奥沙利铂联合卡培他滨对蒽环类或紫杉醇耐药性晚期乳腺癌的治疗效果

目的探讨奥沙利铂联合卡培他滨治疗蒽环类或紫杉醇耐药性晚期乳腺癌的临床疗效以及不良反应。方法随机选取2014年1月—2015年12月收治在笔者所在医院的80例蒽环类或紫杉醇耐药性晚期乳腺癌患者,分为对照组、观察组各40例,采用奥沙利铂联合卡培他滨治疗观察组患者,单用卡培他滨治疗对照组。两组患者均2个疗程后进行疗效评估。结果观察组患者治疗有效率(40%);对照组患者治疗有效率(17.5%);观察组有效率大于对照组,有统计学意义(P<0.05)。观察组较对照组患者药物不良反应降低明显。结论奥沙利铂联合卡培他滨治疗蒽环类或紫杉醇耐药性晚期乳腺癌临床效果和生活质量明显好于卡培他滨单用治疗,而且患者的安全性更高、耐受性更好。

miR-127-3p靶向KIF3B缓解卵巢癌对紫杉醇的耐药性

目的 探究miR-127-3p通过调控KIF3B对卵巢癌SKOV3细胞和紫杉醇(paclitaxel, TAX)敏感性及SKOV3/TAX细胞对紫杉醇耐药性的影响。方法 采用qRT-PCR检测SKOV3和SKOV3/TAX细胞中miR-127-3p的表达水平;MTT法检测SKOV3和SKOV3/TAX细胞增殖活力;Transwell检测SKOV3和SKOV3/TAX细胞侵袭和迁移能力;Western blotting检测SKOV3和SKOV3/TAX细胞中KIF3B的表达水平;双荧光素酶报告基因系统检测miR-127-3p和KIF3B之间的靶向关系。结果 miR-127-3p SKOV3/TAX细胞中表达低于SKOV3细胞,TAX可上调SKOV3和SKOV3/TAX细胞中miR-127-3p的表达,降低SKOV3和SKOV3/TAX细胞中KIF3B的表达;过表达miR-127-3p能显著促进紫杉醇对SKOV3和SKOV3/TAX细胞增殖活力、侵袭和迁移能力的抑制作用;miR-127-3p靶向下调KIF3B表达。进一步研究发现,过表达miR-127-3p能通过下调KIF3B表达,促进紫杉醇对SKOV3和SKOV3/TAX细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用。结论 过表达miR-127-3p通过抑制KIF3B表达,促进SKOV3细胞对紫杉醇的敏感性,缓解卵巢癌细胞对紫杉醇的耐药性。

以护士为主导的健康促进干预计划在宫颈癌ARHI紫杉醇耐药性护理中的应用

目的探讨在宫颈癌患者护理中实施以护士为主导的健康促进干预计划, 对其母系印迹抑癌基因(ARHI)紫杉醇耐药性的改善效果。方法选取南京鼓楼医院集团宿迁医院300例宫颈癌患者, 在2017年1月至2021年12月于该院接受治疗, 采用随机数字法分为对照组和观察组, 各150例。对照组实施常规护理, 观察组实施以护士为主导的健康促进干预计划, 于出院前1 d对比两组不良反应发生率, 入院当日、出院前1 d使用疾病自我管理评分量表(CDSMS)和癌因性疲乏量表(CRF), 分别评估两组患者自我管理能力和癌因性疲乏。结果出院前1 d, 观察组CDSMS量表评分高于对照组, 且不良反应发生率及CRF量表评分均低于对照组, 差异有统计学意义(均P<0.05)。结论实施以护士为主导的健康促进干预计划能够减少ARHI紫杉醇宫颈癌患者不良反应的发生, 缓解其癌因性疲乏, 从而提升自我管理能力。

冬凌草甲素对卵巢癌细胞紫杉醇耐药性的拮抗作用及其机制研究

目的探讨冬凌草甲素体内外对卵巢癌细胞紫杉醇耐药性的拮抗作用及其机制。方法通过大剂量冲击法,诱导制备耐紫杉醇的人卵巢癌HO-8910PM细胞株(HO-8910PM/PIX),用不同浓度冬凌草甲素处理HO-8910PM/PIX细胞;或在冬凌草甲素作用HO-8910PM/PIX细胞前以NF-κB激活剂TPA进行预处理。给药后,细胞经DAPI染色,荧光显微镜下观察细胞形态变化;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;Western blotting检测卵巢癌细胞中NF-κB蛋白的表达。建立裸鼠卵巢癌皮下移植瘤模型。接种后8周,观察冬凌草甲素对裸鼠皮下移植瘤生长的影响;免疫组织化学法检测肿瘤组织中NF-κB的阳性表达。结果与对照组相比,冬凌草甲素呈浓度相关性抑制卵巢癌HO-8910PM/PIX细胞增殖,显著诱导细胞凋亡,而TPA可显著削弱冬凌草甲素诱导细胞凋亡的作用。与HO-8910PM细胞相比,NF-κB在HO-8910PM/PIX细胞中表达显著上调,冬凌草甲素可抑制HO-8910PM/PIX细胞中NF-κB的表达。冬凌草甲素可显著抑制裸鼠卵巢癌皮下移植瘤生长,明显减弱移植瘤组织中NF-κB的阳性表达。结论冬凌草甲素体内外对卵巢癌细胞紫杉醇耐药性具有拮抗作用,该作用可能通过抑制NF-κB的表达而实现。

LncRNA SNHG1靶向miR-497-5p调控乳腺癌细胞化疗耐药性的分子机制

目的探讨长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因1(LncRNA SNHG1)在紫杉醇(PTX)耐药乳腺癌(BC)细胞系MCF-7中的作用及相关的调控机制。方法选取2020年5月-2021年6月张家港市中医医院接受手术治疗的BC患者34例,分为PTX有反应者(PTX敏感)17例和PTX无反应者(PTX耐药)17例。正常人乳腺细胞株MCF-10A、人BC细胞株MCF-7、在不含PTX的完全培养基中培养MCF-7/PTX细胞系。将MCF-7/PTX细胞分为阴性对照(sh-NC)组、靶向LncRNA SNHG1的短发夹RNA(sh-LncRNA SNHG1)组、sh-LncRNA SNHG1+miR-497-5p抑制剂(in-miR-497-5p)组和sh-LncRNA SNHG1+过表达Wnt3a(oe-Wnt3a)组。RT-qPCR检测BC组织和细胞中LncRNA SNHG1、miR-497-5p和Wnt3a mRNA表达水平;根据线性公式计算50%抑制浓度(IC50);显微镜观察集落数量并计数;流式细胞仪分析细胞凋亡情况;Western blot检测Wnt3a、β-连环蛋白(β-catenin)、c-Myc蛋白水平;将miR-497-5p、miR-NC与LncRNA SNHG1-野生型(WT)、Wnt3a-WT或LncRNA SNHG1-突变型(MT)、Wnt3a-MT共同转染MCF-7/PTX细胞,酶标仪测量荧光素酶活性。将转染sh-LncRNA SNHG1或sh-NC的MCF-7/PTX细胞(5×10^(5)个/100μL)皮下移植到裸鼠中,检测敲低LncRNA SNHG1对PTX耐药MCF-7细胞生长的影响。结果与PTX敏感BC组织比较,PTX耐药BC组织中LncRNA SNHG1和Wnt3a m RNA表达增加[(3.28±0.57)vs.(1.05±0.24),(2.87±0.49)vs.(1.08±0.22)],miR-497-5p表达降低[(0.42±0.12)vs.(1.07±0.29)],差异均有统计学意义(t=14.867、13.741、8.540,P均<0.05)。与MCF-10A细胞比较,BC细胞系MCF-7中LncRNA SNHG1和Wnt3a mRNA表达增加,miR-497-5p表达降低,差异均有统计学意义(P均<0.05);与MCF-7细胞比较,MCF-7/PTX细胞中LncRNA SNHG1和Wnt3a mRNA表达水平进一步升高,miR-497-5p表达进一步降低,差异均有统计学意义(P均<0.05)。与sh-NC组比较,sh-LncRNA SNHG1组MCF-7/PTX细胞中LncRNA SNHG1和Wnt3a mRNA表达水平明显降低,miR-497-5p表达水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);与sh-LncRNA SNHG1组比较,sh-LncRNA SNHG1+in-miR-497-5p组MCF-7/PTX细胞中miR-497-5p表达水平明显降低,Wnt3a mRNA表达水平显著升高,差异均有统计学意义(P均<0.05);与sh-LncRNA SNHG1组比较,sh-LncRNA SNHG1+oe-Wnt3a组MCF-7/PTX细胞中Wnt3a m RNA表达水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。当PTX≥0.1μmol/L时,与sh-NC组比较,sh-LncRNA SNHG1组MCF-7/PTX细胞中细胞增殖活力显著降低,PTX的IC50降低(0.761μmol/L vs.2.220μmol/L),差异均有统计学意义(P均<0.05);与sh-LncRNA SNHG1组比较,sh-LncRNA SNHG1+in-miR-497-5p组或sh-LncRNA SNHG1+oe-Wnt3a组MCF-7/PTX细胞中细胞增殖活力显著升高,PTX的IC50升高(1.440或1.680μmol/L vs.0.761μmol/L),差异均有统计学意义(P均<0.05)。与sh-NC组比较,sh-LncRNA SNHG1组MCF-7/PTX细胞克隆形成数量、Wnt3a、β-catenin、c-Myc蛋白水平明显降低,细胞凋亡率显著升高,差异均有统计学意义(P均<0.05);与sh-LncRNA SNHG1组比较,sh-LncRNA SNHG1+in-miR-497-5p组或sh-LncRNA SNHG1+oe-Wnt3a组MCF-7/PTX细胞克隆形成数量、Wnt3a、β-catenin、c-Myc蛋白水平明显升高,细胞凋亡率显著降低,差异均有统计学意义(P均<0.05)。双荧光素酶报告显示,miR-497-5p可能与LncRNA SNHG1或Wnt3a的3’-UTR结合;与miR-NC转染细胞比较,miR-497-5p转染细胞中LncRNA SNHG1-WT或Wnt3a-WT的相对荧光素酶活性降低,差异均有统计学意义(t=18.124、22.170,P均<0.05)。体内实验证实,敲低LncRNA SNHG1可明显降低移植耐PTXMCF-7细胞裸鼠的肿瘤体积和重量(t=13.065、15.092,P均<0.05)。结论敲低LncRNA SNHG1可以抑制MCF-7细胞对PTX的耐药性,且此过程可能与抑制Wnt/β-catenin通路激活有关。

阿帕替尼通过ABCB1逆转非小细胞肺癌紫杉醇耐药的机制

目的探讨阿帕替尼通过调控ABCB1逆转非小细胞肺癌(NSCLC)紫杉醇(PTX)耐药性的相关机制。方法肺腺癌细胞株A549购自中国科学院生物化学与细胞生物学研究所。用PTX诱导NSCLC细胞株A549转化为PTX耐药细胞株A549/PTX,通过阿帕替尼培养将A549/PTX细胞株分为PTX组和阿帕替尼剂量组。MTT法测定药物对肺癌细胞抑制率,分析阿帕替尼逆转A549/PTX细胞的PTX耐药性。通过对PTX积累实验、Rh123蓄积实验、碘化丙锭染色法测定A549/PTX细胞周期以及AnnexinⅤ-FITC/PI双染法对A549/PTX细胞凋亡的分析。结果A549/PTX细胞中PTX的平均IC_(50)值为(1.40±0.15)nmol/L较A549细胞的(0.03±0.01)nmol/L增大,差异有统计学意义,t=22.302,P<0.05,证明成功建立NSCLC PTX耐药细胞株A549/PTX。MTT法证明阿帕替尼对A549/PTX抑制率较PTX提升,且呈阿帕替尼浓度依赖性,F=21.600,P<0.05。PTX在A549/PTX细胞中的积累(0.31±0.03)少于A549细胞(1.64±0.11),差异有统计学意义,t=29.416,P<0.05。PTX在细胞里蓄积量减少可能是A549/PTX细胞耐药的主要原因之一。随着阿帕替尼浓度的增加,细胞内Rh123蓄积量增加,证明阿帕替尼是通过对ABCB1蛋白的抑制来实现对PTX治疗NSCLC耐药性的逆转作用。当PTX联合阿帕替尼用药时,A549/PTX细胞的G_(2)/M期细胞受到阻滞,细胞凋亡率增加,2种药物存在拮抗作用,F=236.496,P<0.05。[^(125)I]-IAAP标记ABCB1底物,通过UV-Vis定量分析得出,阿帕替尼能有效抑制ABCB1的底物,并且呈浓度依赖性。结论阿帕替尼通过抑制ABCB1的表达逆转PTX治疗NSCLC的耐药性,抑制癌细胞增殖且促进癌细胞凋亡。