基于整合生物标志物法评价十溴联苯醚对紫红笛鲷肝脏的氧化胁迫效应

研究了不同浓度十溴联苯醚(decabromodiphenyl ether,BDE209)对紫红笛鲷肝脏抗氧化酶和药物代谢酶的影响,并采用整合生物标志物法综合评价BDE209对紫红笛鲷肝脏的氧化胁迫效应。结果表明:BDE209胁迫3—7 d,紫红笛鲷肝脏超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、过氧化物酶(peroxidase,POD)和谷胱甘肽硫转移酶(glutathione S-transferase,GST)活性显著升高,但并未呈现明显的剂量效应。胁迫30 d时,上述酶活性与对照组没有显著差异。BDE209胁迫下,紫红笛鲷肝脏细胞色素P450(cytochromeP450,P450)含量先降低后升高,而细胞色素b5(cytochromeb5,b5)含量则呈先升高后下降的趋势。上述结果表明BDE209可能引起了紫红笛鲷肝脏细胞发生氧化应激反应。BDE209胁迫第7 d时,IBR值最大。各实验组IBR均高于对照组,且随着BDE209浓度的升高,IBR值逐渐增大。与其他指标相比,POD活性、P450和b5含量可作为BDE209胁迫的潜在生物标志物,IBR方法可被应用于评价环境浓度BDE209对紫红笛鲷胁迫的毒性效应,对于综合评价BDE209对生物体的生态毒理效应具有重要意义。

紫红笛鲷幼鱼环境耐受能力研究

为研究紫红笛鲷(Lutjanus argentimaculatus)对水温、盐度、溶解氧、氨氮和亚硝酸盐等环境因子的耐受能力,选取平均体质量(9.7±1.5)g、体长(7.3±0.3)cm的紫红笛鲷幼鱼,采用渐变式方法探索紫红笛鲷对温度、盐度及低溶解氧的耐受能力,并设置不同浓度梯度,以探究紫红笛鲷对氨氮及亚硝酸盐的半致死浓度。结果显示,紫红笛鲷适宜的水温范围为16.0~35.0℃,临界下限水温为13.5℃、临界上限水温为40.6℃;当盐度在12.00~67.68时,紫红笛鲷活动正常,其极限耐受盐度为73.13±0.18;紫红笛鲷幼鱼的窒息临界点为(1.88±0.08)mg/L,DO_(50)为(0.60±0.03)mg/L,DO 100为(0.34±0.03)mg/L;在氨氮胁迫和亚硝酸盐胁迫下,紫红笛鲷幼鱼24、48、72、96 h的半致死浓度分别为170.30、126.62、95.05、64.90 mg/L和289.92、214.22、132.02、77.78 mg/L,氨氮安全浓度为6.49 mg/L,亚硝酸盐安全浓度为7.78 mg/L。

紫红笛鲷Lutjanus argentimaculatus (Forsskl)繁殖和池塘育苗研究

在海南陵水进行了紫红笛鲷繁殖和池塘育苗的试验,70尾雌性亲鱼、30尾雄性亲鱼,连续产卵6d,其中第3d产卵2.4kg,受精率83.7%,孵化率81.4%。所得仔鱼用于鱼种培育,14号池塘0.34hm2,放养仔鱼280万尾,经过50d培育,育成全长5cm鱼种52.4万尾,育苗成活率达到18.7%。对土池育苗的鱼苗生长、食性转变过程、饵料系列、饵料培养和育苗管理措施等做了较详细的研究分析。

红鳍笛鲷、紫红笛鲷和白斑笛鲷的核型研究

以红鳍笛鲷(Lutjanuserythopterus)、紫红笛鲷(Lutjanusargentimaculatus)、白斑笛鲷(Lutjanusbohar)为材料 ,胸腔注射PHA及秋水仙素溶液 ,取头肾细胞经空气干燥法制片 ,姬姆萨染液染色 ,观察分析获得染色体核型 :染色体数目2N=48 ,染色体总臂数为48。

紫红笛鲷遗传多样性的AFLP分析

针对广东、海南省4个不同地方(阳江、湛江、榆林、琼海)网箱养殖的紫红笛鲷(Lutjanusargentimaculatus)群体和在三亚采集的野生紫红笛鲷群体,利用AFLP分子标记技术分析我国南方养殖的紫红笛鲷的遗传多态性。最适合的AFLP引物组合是E+AGC/M+CAA,扩增出的AFLP特征位点为107,养殖样品扩增出的AFLP的带数在54—74之间,野生样品扩增出的AFLP的带数为63,4个养殖点紫红笛鲷的多态性标记百分率都超过了40.00%,呈现一定程度的遗传多样性。总的来讲,4个养殖地的紫红笛鲷群体之间的遗传距离差异较小,但与野生群体的遗传距离相对较大,UPGMA聚类分析明显将养殖群体与野生群体分开,表明紫红笛鲷养殖群体已经与野生群体存在一定程度的遗传隔阂。

试验水槽中多种人工鱼礁模型组合对紫红笛鲷幼鱼的诱集效果

摸清多种人工鱼礁模型组合对紫红笛鲷幼鱼的诱集效果,可为人工鱼礁礁体组合设计和礁区布局设计等方面提供科学依据.本研究参照深圳杨梅坑人工鱼礁区的实际建礁情况,制作并模拟4组三种模型礁体组合、4组四种模型礁体组合,在方形试验水槽中以鱼类行为学的方法研究了这8组模型礁体组合对紫红笛鲷的诱集效果.4组三礁组合礁体模型试验结果表明,FHJ三礁组合对紫红笛鲷的集鱼效果非常明显,BFH、BCG、CHJ三礁组合对紫红笛鲷的集鱼效果较为明显.其诱集效果排序为:FHJ组合礁(53.84%)>BFH组合礁(44.85%)>BCG组合礁(38.11%)>CHJ组合礁(36.01%).4组四礁组合礁体的试验结果表明,4组四礁组合礁体模型对紫红笛鲷均具有较强的诱集效果,其诱集效果排序为:BGHJ组合礁(52.27%)>CFHJ组合礁(51.26%)>BCGJ组合礁(50.01%)>BCGH组合礁(45.05%).总体上,四礁组合的诱集效果优于三礁组合,人工鱼礁建设的礁群配置以多礁组合为佳.

紫红笛鲷幼鱼对集群密度和投饵定额的摄食反应

研究了紫红笛鲷(Lutjanus argentimaculatus)幼鱼在不同集群密度和投饵定额下的摄食反应。实验设7个不同的集群组(1、2、3、4、8、12、16尾/组),每个集群组又分成7个不同的投饵定额组(18.4×10-2、27.6×10-2、36.8×10-2、46.0×10-2、55.2×10-2、64.4×10-2、73.6×10-2g/组),通过测定摄食量观测幼鱼的摄食反应。在定额投饵的情况下,紫红笛鲷每尾幼鱼的一次平均摄食量随群体密度的增大呈先增加、超过一定密度后下降的趋势。1尾组与其他组差异极显著(P<0.01),其组平均一次摄食量最低。当集群密度不变时,紫红笛鲷幼鱼一次平均摄食量随投饵定额的增大而增加,然后减小。随着集群密度增大,不同密度群体的最大摄食量向投饵定额增加的方向移动;而随着投饵定额增加,不同定额组的最大摄食量相对集中在2～8尾的群体中。结果表明,集群密度、投饵定额以及两者的交互作用对紫红笛鲷幼鱼的一次摄食量有极显著影响,群居的互利性和竞争性作用效果明显。

紫红笛鲷繁殖特性及诱导产卵的初步研究

描述紫红笛鲷Lutjanusargentimaculatus繁殖特性及人工诱导产卵的试验结果。紫红笛鲷养殖群体具有不完全的先雄后雌的性转化现象。1、2龄鱼全部为雄鱼,性腺成熟系数(GSI)为2.07%—4.85%;3龄亲鱼80%为雄鱼,20%转化为雌雄同体;4龄亲鱼性别转化基本确定,多数亲鱼为纯粹具有生殖机能的雄鱼,而在雌雄同体的亲鱼性腺中具有明显雌性第一性征的雌鱼仅占30%左右;雌雄同体的亲鱼性腺GSI为4.12%—8.09%,其中的卵巢GSI小于2%,4龄雌鱼怀卵量约70—100万粒;紫红笛鲷卵母细胞属非同步性发育,一个生殖季节能多次产卵。试验结果表明:低剂量的LHRH A2(3μg·kg-1)多次注射能有效地促进性腺发育、逐步成熟,并最终产卵,但对卵径小于300μm的亲鱼卵巢没有明显的诱导效果。在5μgLHRH A2+1000I UHCG·kg-1或5μgLHRH A2+500IUHCG·kg-1两种不同剂量的混合激素作用下,亲鱼的性腺都能迅速发育成熟,并能在小型循环式产卵池中自然产卵和受精。在水温为26.0—29.5℃的产卵池中,激素效应时间为35—43h。LHRH A2和HCG混合激素对卵母细胞直径达到400μm以上的紫红笛鲷亲鱼具有良好的促熟和催产效果,催产率达100%。如何减轻亲鱼之间相互残杀是改善雄鱼生理状况、保证雄鱼质量和提高卵子受精率必需解决的重要问题。

汞、镉离子急性污染对紫红笛鲷肝脏金属硫蛋白的胁迫效应

为分析水体中Hg2+、Cd2+急性污染对鱼体肝脏金属硫蛋白(MT)的胁迫效应,筛选其适宜的生物标志物,通过Hg2+(0.5、1、10μg·L-1)、Cd2+(5、10、100μg·L-1)单一、混合暴露96 h半静水实验,采用生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法测定了3、12、24、48、96 h时紫红笛鲷肝组织MT的含量。结果表明,96 h内紫红笛鲷肝脏中MT含量变化为:(1)单一暴露下,汞浓度组(0.5、1、10μg·L-1Hg2+)受诱导率分别为17.9%、43.7%、51.8%;镉浓度组(5、10、100μg·L-1Cd2+)受诱导率分别为4.3%、54.7%、84.9%。(2)Hg2+-Cd2+混合暴露下,Hg1Cd(0.5μg·L-1Hg2++10μg·L-1Cd2+)、Hg2Cd(1μg·L-1Hg2++10μg·L-1Cd2+)、Hg3Cd(10μg·L-1Hg2++10μg·L-1Cd2+)三个浓度组对鱼肝脏MT的诱导率均值依次为22.8%、26.3%、51.7%;Cd1Hg(5μg·L-1 Cd2++1μg·L-1 Hg2+)、Cd2Hg(10μg·L-1 Cd2++1μg·L-1Hg2+)、Cd3Hg(100μg·L-1Cd2++1μg·L-1Hg2+)的平均诱导率分别为30.1%、26.4%、58.3%。单一、混合暴露下皆具有明显的时间-效应关系和剂量-效应关系,汞、镉离子污染物浓度的升高和暴露时间的延长,都导致鱼体肝脏MT含量显著增加;混合暴露浓度组的诱导率总体上低于单一暴露下的诱导率,反映出Hg2+-Cd2+混合状态下的拮抗作用。

紫红笛鲷过敏原小清蛋白基因克隆及序列分析

目的克隆紫红笛鲷(Lutianus argentimaculatus)过敏原小清蛋白(parvalbumin)基因。方法采用生物信息学方法对多种鱼的小清蛋白基因进行序列性比对,根据序列保守区域设计并合成简并性引物,通过实时(RT)-PCR和3′cDNA末端快速扩增RACE技术克隆紫红笛鲷小清蛋白的全长基因,并进行序列分析。结果获得紫红笛鲷全长608 bp的新基因,开放阅读框为330个碱基,编码109个氨基酸,经分析该蛋白分子量约为11.5kD,等电点为4.35。序列分析结果显示所克隆的基因与其他鱼类过敏原小清蛋白基因有很高的同源性。结论成功克隆出紫红笛鲷过敏原小清蛋白基因(登录号为:EF591789)。

十溴联苯醚(BDE-209)对紫红笛鲷鳃抗氧化酶活性的影响

十溴联苯醚(BDE-209)是目前唯一仍在全球范围内广泛使用的多溴联苯醚阻燃剂,其环境行为及生物效应逐渐成为环境污染领域研究的热点。选用2(LD组)、10(MLD组)、50(MHD组)及250μg.L-1(HD组)4个浓度的BDE-209作用于紫红笛鲷,探讨BDE-209对紫红笛鲷鳃抗氧化酶(SOD、CAT及POD)活性和MDA含量的影响。结果显示:BDE-209可以显著促进SOD和CAT活性,且随着暴露时间延长CAT活性呈现逐渐增加的趋势。暴露7d后,MLD组SOD活性达到最高68.31U.mg-1,是对照组(CK)的5.50倍,HD组CAT活性达到6.31U.mL-1,其次为MHD组的5.96U.mL-1。BDE-209对鳃POD活性呈现先促进后抑制的作用,暴露3d时各浓度POD活性均显著高于CK组(P<0.05);7d时各浓度POD活性则受到显著抑制(P<0.05),清水恢复15d后各浓度组与CK组没有显著差异(P>0.05)。暴露期间各浓度组MDA含量均显著高于CK组(P<,并且随暴露时间延长呈现先增加后减少的趋势,7d后HD组MDA含量达到最高,为6.99nmol.mg-1,清水恢复15d后,LD和MLD组MDA含量与CK组没有显著性差异(P>0.05)。以上结果表明:BDE-209可以诱导紫红笛鲷产生氧化应激效应,CAT和SOD则在氧自由基清除中发挥作用。

不同食物对紫红笛鲷幼鱼的生长和氮排泄的影响

以紫红笛鲷Lutjanusargentimaculatus幼鱼为研究对象,进行了摄食水平和食物种类对其生长和氮排泄影响的实验。结果表明,投喂鳗鱼饲料的紫红笛鲷幼鱼的特定生长率(SGR)为4.19%·d-1,投喂斑节对虾Penaeusmonodon肉和蓝圆Decapterusmaruadsi肉组的特定生长率分别为3.83%·d-1和3.90%·d-1;不同食物组的紫红笛鲷幼鱼的氮排泄率存在差异,以投喂鳗鱼饲料组的幼鱼最高,个体氮排泄率为4.080mg·尾-1·d-1,而投喂斑节对虾肉和蓝圆肉组的幼鱼个体氮排泄率分别为3.759和3.869mg·尾-1·d-1,摄取3种食物的紫红笛鲷幼鱼的氮排泄率(NE)和氮摄取率(NI)均为直线关系,直线方程分别为NE1=2.107+0.310NI1,NE2=1.749+0.316NI2,NE3=1.879+0.348NI3。

抗紫红笛鲷血清免疫球蛋白单克隆抗体的制备

采用蛋白A sephrose亲和层析法,分离提纯了紫红笛鲷Lutjanusargentimaculatus的血清免疫球蛋白(Ig),并制备了抗紫红笛鲷血清Ig分子的单克隆抗体。经间接ELISA、免疫印迹(westernblotting)的检测和鉴定,得到抗紫红笛鲷Ig分子重链的单抗6株,分别为IgG11株、IgG23株、IgG2a1株、IgG31株。这6株抗紫红笛鲷Ig的单抗各有1株与同为鲈形目的青石斑鱼Epinephelusawoara和尖吻鲈Latescalcarifer的Ig分子有很弱的交叉反应,而同鲽形目的牙鲆Paralichthysolivaceus的Ig分子没有交叉反应,具有较强的种间特异性;同时揭示,同目不同属的鱼类血清Ig之间的相似度较低,不同目之间的相似度极低。

三种甾体激素在湛江海域的紫红笛鲷体内的残留调查

本文采用放射免疫分析法测定了湛江海域养殖紫红笛鲷与野生紫红笛鲷肌肉中雌二醇、孕酮、睾酮三种甾体激素的残留量。结果表明,在养殖紫红笛鲷与野生紫红笛鲷肌肉中均检出三种激素,养殖紫红笛鲷肌肉中三种甾体激素的残留量分别是野生紫红笛鲷的4.50、1.57、5.00倍;野生紫红笛鲷中的甾体激素残留量较低,但仍能被检出,可能与环境激素有关。实验研究提示,放射免疫分析法可作为水产品中激素残留量的有效检测手段。

斜带髭鲷和紫红笛鲷早期发育阶段的行为选择

采用实验生态学方法研究斜带髭鲷(Hapaologenys nitens)和紫红笛鲷(Lutianus argentimaculatus)幼鱼早期发育阶段的行为选择,旨在从行为学角度为优化种苗生产管理提供科学依据。结果显示,斜带髭鲷回避红色底质,对黑色底质的选择则是随着生长而逐渐增加,1 cm体长组的隐匿习性最强,为50.67%;2 cm和3 cm组的隐匿率分别为40.67%和35.33%;4 cm组仅25.00%。1 cm组的顶流率为3.35%,4 cm达71.65%。1 cm和2 cm组在1 760~2 210 lx照度下的分布率分别为41.67%和35.00%,在39~59 lx为8.33%和16.67%,4 cm组在38~53 lx的分布率达41.67%,在2 780~2 980 lx仅为8.33%。体长1 cm的紫红笛鲷喜栖息于白色底质,约占总群体的61.00%,随着生长,对黑色底质的喜好明显增强;4 cm组对白色底质无选择,而对黑色底质的选择达到63.67%。1 cm组的隐匿百分率为55.67%,4 cm组仅为25.00%。在流速1 cm/s的情况下,趋流率比较低,为50.00%左右,1 cm组在流速3 cm/s时的趋流率最高,达到98.67%;1 cm组的顶流率为96.65%,3 cm和4 cm组的顶流率仅为6.65%和3.35%。研究表明,斜带髭鲷和紫红笛鲷行为特征随着个体的发育而变化。

大亚湾紫红笛鲷野生群体遗传多样性的RAPD分析

紫红笛鲷野生群体样品取自广东大亚湾海区,取背部肌肉,提取DNA,用RAPD技术检测遗传多样性。40个随机引物当中,有11个引物得到了条带清晰、位点较多且重复性好的电泳图谱。11个引物共得到76个条带,其中48个多态位点,多态位点比例为63.16%。平均遗传距离为0.2144。遗传多样性指数为0.1876。结果显示,大亚湾海区的紫红笛鲷具有较丰富的遗传多样性,工程建设以及人为捕捞等对紫红笛鲷的遗传结构影响不明显。在该海区进行紫红笛鲷的养殖,可以选择野生紫红笛鲷作为亲本培育种苗,但应该注意合理的保护,防止遗传多样性的丧失。

斜带髭鲷和紫红笛鲷早期发育阶段游泳能力的研究

研究斜带髭鲷和紫红笛鲷在早期发育过程中游泳能力,以及盐度、光照、昼夜时间、饥饿和再投喂对游泳能力的影响,旨在为优化其苗种培育工艺提供技术支撑。结果显示,斜带髭鲷游泳能力指数为：1 cm：48.60;2 cm：122.40;3 cm：242.40;4 cm：397.20。最大巡游速度出现在25-35的盐度区间,盐度越高,影响越显著;不同体长组紫红笛鲷幼鱼的游泳能力指数分别为：1 cm：111.90;2 cm：258.00;3 cm：285.00;4 cm：318.00;且随着游泳时间延长,巡游速度线形下降。在15-35的盐度范围内,紫红笛鲷巡游速度最大,且随着生长,盐度越低对巡游速度的影响越显著;在0-2 460 lx的光照范围中,1,2,3 cm规格的斜带髭鲷巡游速度随着光照度的增加而增加;最大巡游速度出现在清晨,最低巡游速度出现在午夜,且差异显著;而光照对巡游速度的影响随紫红笛鲷生长而减弱;紫红笛鲷的最大巡游速度出现在清晨,其次为傍晚,最低巡游速度出现在午夜。2种鱼在饥饿的前2 d里巡游速度相对对照组有所上升,但随即下降明显。再投喂组的巡游速度随补偿生长的出现相对对照组略有上升。

紫红笛鲷过敏原的提取、分离及其免疫学特性鉴定

目的对紫红笛鲷过敏原进行提取、分离及免疫学特性鉴定。方法新鲜紫红笛鲷经预处理后用PBS缓冲液制备总蛋白粗浸液,SDS-PAGE分析紫红笛鲷总蛋白的组成,免疫印迹(Western-blotting)分析紫红笛鲷过敏原,通过离子交换层析对总蛋白粗浸液进行分离并鉴定不同组份的免疫学特性。结果紫红笛鲷可溶性蛋白粗提液SDS-PAGE显示有20条蛋白条带,对鱼过敏病人的阳性混合血清能与其中7个条带反应,分子量分别是42000,36000,30000,27000,25000,17000和12000Mr。离子交换层析后分子量为42000、36000、12000Mr的阳性过敏原蛋白具有免疫学活性。结论本实验对紫红笛鲷过敏原进行了提取、分离和免疫学特性鉴定,离子交换层析技术可以用于紫红笛鲷过敏原蛋白的分离纯化,为紫红笛鲷过敏原的进一步研究和鱼类食品过敏的防治奠定了理论基础。