紫芜菁乙醇提取物通过miR-223-3p调节过氧化氢诱导的肺上皮细胞中NF-κB信号通路介导IL-8表达

目的 研究紫芜菁乙醇提取物对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的肺上皮细胞增殖和凋亡的影响及潜在作用机制。方法 用150μmol/L H_(2)O_(2)诱导肺上皮细胞A549,用50、100和200μg/ml紫芜菁乙醇提取物处理H_(2)O_(2)诱导的A549细胞,将细胞分为NC组、H_(2)O_(2)组、50、100、200μg/ml紫芜菁乙醇提物+H_(2)O_(2)组、miR-NC+H_(2)O_(2)组、miR-223-3p+H_(2)O_(2)组、anti-miR-NC+H_(2)O_(2)组、anti-miR-223-3p+H_(2)O_(2)组、anti-miR-NC+紫芜菁乙醇提物+H_(2)O_(2)组、anti-miR-223-3p+紫芜菁乙醇提物+H_(2)O_(2)组;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法和流式细胞术检测A549细胞存活率和凋亡率,Western印迹检测细胞周期蛋白(Cyclin)D1、酶切含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)-3、白细胞介素(IL)-8和p-IκBα蛋白表达,实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中miR-223-3p含量。结果 H_(2)O_(2)组A549细胞中miR-223-3p水平显著低于NC组(P<0.05);200μg/ml紫芜菁乙醇提物+H_(2)O_(2)组的A549细胞中miR-223-3p含量显著高于H_(2)O_(2)组(P<0.05)。与miR-NC+H_(2)O_(2)组相比,miR-223-3p+H_(2)O_(2)组A549细胞存活率、miR-223-3p、CyclinD1水平均显著升高,细胞凋亡率、酶切caspase-3、IL-8和p-IκBα水平均显著降低(P<0.05)。与anti-miR-NC+H_(2)O_(2)组相比,anti-miR-223-3p+H_(2)O_(2)组A549细胞存活率、miR-223-3p、CyclinD1水平均显著降低,细胞凋亡率、酶切caspase-3、IL-8和p-IκBα水平均显著升高(P<0.05),与anti-miR-NC+紫芜菁乙醇提物+H_(2)O_(2)组相比,anti-miR-223-3p+紫芜菁乙醇提物+H_(2)O_(2)组A549细胞存活率、miR-223-3p、CyclinD1水平显著降低,细胞凋亡率、酶切caspase-3、IL-8和p-IκBα水平显著升高(P<0.05)。结论 紫芜菁乙醇提取物通过上调miR-223-3p,抑制核转录因子(NF)-κB信号通路介导的IL-8表达,促进H_(2)O_(2)诱导的A549细胞存活并抑制细胞凋亡。

紫芜菁乙醇提物对Caco-2细胞氧化损伤的保护作用

探讨紫芜菁乙醇提取物(BREE)的体外抗氧化能力及其对人肠上皮Caco-2细胞氧化损伤保护效果。二苯代苦味酰基自由基(DPPH)、羟基自由基(·OH)清除率与总还原力评估BREE的体外抗氧化力。过氧化氢(H_2O_2,150μmol/L)建立Caco-2细胞氧化损伤模型评估BREE的细胞保护效果。受损细胞生存率的影响以MTT法测定。细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)水平依说明用试剂盒测定。硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量。2’,7’-二氢二氯荧光黄双乙酸钠法测定细胞内活性氧(ROS)水平。酶联法测定白介素(Interlukin,IL)-1β和IL-8的水平。BREE具有较强的自由基(DPPH和·OH)清除力和总还原力。BREE能显著抑制H_2O_2造成的细胞死亡,提高受损细胞中抗氧化物酶(SOD、CAT和GSH-Px)活性,降低受损细胞内MDA与ROS的生成,并抑制IL-1β和IL-8的分泌。结果提示,BREE具有较强的体外抗氧化能力,能增强细胞内源性抗氧化酶的活力显著改善H_2O_2引发的Caco-2细胞氧化应激损伤并降低炎症反应。