基于PI3K/Akt通路探讨芪灵方对慢性萎缩性胃炎伴肠化大鼠的保护作用

目的:探讨芪灵方干预慢性萎缩性伴肠上皮化生(GIM)的潜在作用机制。方法:将80只SPF级SD大鼠随机分为8组(每组10只):空白组、空白加芪灵方组、模型组、芪灵方高、中、低剂量组、叶酸组、摩罗丹组,除空白组、空白加芪灵方组外,其余各组大鼠使用0.02 mol·L-1的N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)溶液灌胃,并佐以饥饱失常法造模。造模成功后,空白组、模型组予蒸馏水,空白加芪灵方组、芪灵方高、中、低剂量组分别予7.60、15.21、7.60、3.80 g·kg-1芪灵方水煎剂,叶酸组予0.002 g·kg-1叶酸悬浊液,摩罗丹组予1.40 g·kg-1摩罗丹悬浊液灌胃,1次/d,给药8周,期间观察大鼠的一般情况与体质量。麻醉后取大鼠胃组织行苏木素-伊红(HE)染色;免疫组化法(IHC)检测胃组织黏蛋白2(MUC2)、尾部型同源框转录因子2(CDX2)水平;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测胃组织PI3K、Akt及磷酸化水平。结果:动物实验显示,与空白组比较,参与造模的大鼠体质量自16周起有下降趋势;与模型组比较,芪灵方高、中剂量对大鼠精神状态、体质量均有改善作用。病理结果显示,第24周造模成功,与空白组比较,参与造模的大鼠胃黏膜固有腺体减少,排列相对紊乱;与模型组比较,芪灵方高、中剂量组杯状细胞明显减少或消失,可改善大鼠胃黏膜病理。与空白组比较,模型组胃组织MUC2、CDX2水平升高(P<0.01);与模型组比较,芪灵方高、中剂量可明显降低胃组织MUC2、CDX2水平(P<0.05,P<0.01)。与空白组比较,模型组大鼠血清中IL-6、IL-1β、TNF-α、Caspase-3、PI3K、Akt水平均提高(P<0.05);与模型组比较,高剂量芪灵方可显著降低血清中IL-1β、Caspase-3、PI3K、Akt含量(P<0.01),中剂量可显著降低血清中IL-6、IL-1β、TNF-α、Caspase-3、PI3K、Akt含量(P<0.05)。与空白组比较,模型组大鼠胃组织中PI3K、Akt表达显著升高;与模型组比较,高剂量芪灵方显著抑制Akt蛋白表达(P<0.01)。结论:芪灵方可能通过抑制PI3K/Akt通路,抑制促炎因子释放,抑制胃黏膜上皮细胞凋亡,多成分、多靶点、多途径一定程度逆转肠化,延缓炎-癌转化。