基于代谢组学分析揭示白花前胡和紫花前胡的差异代谢物

为探究白花前胡和紫花前胡中代谢物的种类及相对含量,借助于广泛靶向代谢组学的方法,利用UPLC-MS技术对白花前胡和紫花前胡成分进行分析、鉴定,确定主要差异代谢产物,并对其进行相对定量分析;从整体角度出发,结合多元统计分析,对二者中主要差异性成分进行系统鉴定,并对差异代谢物进行KEGG通路富集分析。从白花前胡和紫花前胡中共鉴定出12类1556个代谢产物,主要差异代谢物12类共1085种,其中酚酸类、黄酮类、木脂素及香豆素类、生物碱类和脂类等化合物差异较大,分别占比为19.2%、15.9%、10.1%、9.4%和9.2%;其中421种成分上调,664种成分下调。差异代谢产物以biosynthesis of phenylpropanoids(ko01061)、linoleic acidmetabolism(ko00591)、pentose phosphate pathway(ko00030)、biosynthesis of secondarymetabolites(ko01110)、phosphotransferase system(ko02060)、phenylalanine和Tyrosine and tryptophan biosynthesis(ko00400)等6条通路富集显著,主要为酚酸类、脂肪酸类等成分的关键代谢通路。研究表明,白花前胡和紫花前胡化学成分差异较大,2020版《中国药典》将其单列为不同的药材,具有一定的先进性。本研究可为白花前胡和紫花前胡的标准修订及品质评价提供参考。

紫花前胡苷经通过PI3K/AKT通路对结直肠癌细胞生物学行为的影响

目的:探究紫花前胡苷(NK)经磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸/苏氨酸激酶(AKT)通路对结直肠癌(CRC)细胞生物学行为的影响。方法:将SW480细胞分为SW480组(SW480细胞未做任何处理)、NK低剂量组(L-NK组,40μmol/L NK)、NK中剂量组(M-NK组,60μmol/L NK)、NK高剂量组(H-NK组,80μmol/L NK)、H-NK+740Y-P组(80μmol/L NK+10μmol/L PI3K激活剂740Y-P处理SW480细胞)。平板克隆检测SW480细胞克隆能力;3-(4,5-二甲基噻唑-2)2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测细胞增殖能力;流式细胞术和Hoechst 33258染色检测SW480细胞凋亡能力;细胞侵袭实验(Transwell)检测SW480细胞侵袭能力;MTT法检测SW480细胞黏附情况;蛋白质印迹法(Western blotting)检测黏附、凋亡以及通路相关蛋白水平。结果:与SW480组相比,L-NK组、M-NK组、H-NK组细胞核出现缩小、破碎现象,克隆数、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、Twist相关蛋白1(Twist1)蛋白表达、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比例依次显著降低(P<0.05),细胞生长抑制率、细胞凋亡率以及Bcl-2关联X的蛋白(Bax)、活化的半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved-Caspase-3)、E-钙黏附蛋白(E-cadherin)蛋白表达以及细胞黏附抑制率依次显著升高(P<0.05);与H-NK组相比,H-NK+740Y-P组克隆数、Bcl-2、N-cadherin、Twist1蛋白表达、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比例显著升高(P<0.05),细胞生长抑制率、细胞凋亡率以及Bax、cleaved-Caspase-3、E-cadherin蛋白表达以及细胞黏附抑制率显著降低(P<0.05)。结论:NK可能通过下调PI3K/AKT通路抑制SW480细胞增殖和侵袭,促进其凋亡。

基于指纹图谱结合化学模式识别的前胡和紫花前胡分类模型的建立

目的基于前胡和紫花前胡指纹图谱结合化学模式识别技术,建立前胡和紫花前胡的分类识别模型。方法采用高效液相色谱法,以Venusil C_(18) Plus(250 mm×4.6 mm,5μm)为色谱柱;以乙腈(A)-水(B)为流动相梯度洗脱;检测波长334 nm;流速1.0 mL·min^(-1);柱温30℃;进样量10μL。采用聚类分析、主成分分析、样本判别分析等化学模式识别方法对数据进行分析。结果结合化学模式识别方法对同步建立的前胡和紫花前胡的HPLC指纹图谱数据分析表明,收集到的18批样本基本分为三类:前胡、紫花前胡以及其他。结论所建立的指纹图谱结合化学模式识别的方法可靠、简单易行,建立的分类识别模型可有效区分前胡和紫花前胡,并为两者各自的质量控制提供依据和参考。

紫花前胡化学成分的研究

目的 研究中药紫花前胡 [Peucedanumdecursivum (Miq .)Maxim]根的化学成分。 方法 用硅胶柱色谱和制备型高效液相色谱进行分离纯化 ,用光谱分析和化学方法鉴定其结构。结果 从紫花前胡根中分得 7个线型吡喃香豆素类化合物 ,其结构分别鉴定为 3′(S) hydroxy 4′(R) angeloyloxy 3′,4′ dihydroxanthyletin (1) ;3′(S) acetoxy 4′(R) hydroxy 3′,4′ dihydroxanthyletin (2 ) ;3′(S) acetoxy 4′(R) angeloyloxy 3′ ,4′ dihydroxanthyletin (3) ;Pd C IV (4 ) ;Pd C II (5 ) ;(+ ) 3′S Decursinol(6 ) ;(+ ) trans Decursidinol(7)。结论 化合物 1和 2为新化合物 ,分别命名为紫花前胡素D和紫花前胡素F ;6和

紫花前胡苷抑制哮喘小鼠气道炎性反应和NF-κB信号传导通路

目的观察紫花前胡苷抗过敏性哮喘鼠气道炎性反应作用。方法 BALB/c小鼠被随机分为对照、模型、紫花前胡苷和地塞米松4组。除对照组外,所有小鼠腹腔注射和雾化吸入卵清蛋白以致敏和诱导气道炎性反应。于每次雾化前1h,给紫花前胡苷组灌胃10 mg/kg紫花前胡苷;给地塞米松组腹腔注射1 mg/kg地塞米松。动物肺功能仪分析气道高反应性;细胞计数器和Diff-Quick染色计数支气管灌洗液中白细胞总数及分类;酶联免疫吸附法检测血清或BALF中炎性介质的水平;苏木精-伊红染色法观察气道病理改变;电泳迁移率和免疫印迹法检测肺组织NF-κВ信号通路中蛋白的活力和表达。结果与对照组比较,模型组呈现明显的气道炎性反应,气道反应性显著增高(P<0.05);血清或BALF中IgE、IL-4、IL-5和IL-13的水平显著增加(P<0.01);细胞系P65、p-P65的水平显著增加(P<0.05);细胞质P65和IκBα显著减少,NF-κB DNA-结合力显著增加(P<0.05)。与模型组比较,紫花前胡苷能够显著抑制气道炎性反应和气道高反应(P<0.05);降低血清或BALF中IgE、IL-4、IL-5和IL-13的水平(P<0.01);抑制细胞系P65、p-P65水平(P<0.05);增加细胞质P65、IκBα蛋白和减弱NF-κB DNA-结合力(P<0.05)。结论紫花前胡苷具有抗过敏性哮喘鼠气道炎性反应。

HPLC法测定白花前胡中白花前胡丙素和紫花前胡中紫花前胡苷的含量

目的 :建立高效液相色谱法测定白花前胡根中白花前胡丙素 (dl-praeruptorinA ,Pd -Ia)和紫花前胡根中紫花前胡苷 (nodakenin ,NDK)含量的方法。方法 :色谱柱Shim -PackCLC -ODS ,Pd -Ia的流动相为甲醇 -水 (79∶2 1)和NDK的流动相为乙腈 -甲醇 -水 (2 0∶5∶75 ) ,流速为 1 0mL·min- 1 ,紫外检测波长分别为 32 3和 334nm。结果 :Pd -Ia及NDK的线性范围分别为 0 0 8～ 0 8μg和 0 0 1～ 0 10 μg ,相关系数均为 0 9999,平均回收率分别为 98 5 3%～ 99 2 7%和 97 6 0 %～99 87% ,RSD小于 2 %。结论 :方法准确 ,简便 ,快速 ,灵敏度高 ,对常用中药前胡的质量控制有较重要意义。

高效液相色谱法测定前胡属植物中紫花前胡苷的含量

目的 :建立高效液相色谱法测定前胡药材中紫花前胡苷的含量。方法 :Shim PackCLC ODS柱 ,流动相乙腈 甲醇 水 (2 0∶5∶75 ) ,紫花前胡苷为对照品 ,外标法峰面积定量 ,紫外检测 (λ =334nm)。结果 :6个不同品种前胡中的紫花前胡苷含量为 0 .0 0 5 %～ 3.0 90 %。结论 :紫花前胡苷不能作为评价前胡属植物的药用指标 ,但可以作为紫花前胡的质量控制标准。

GC测定紫花前胡中紫花前胡苷元的含量

目的 建立GC测定紫花前胡根中紫花前胡苷元 (NDT)含量的方法。方法 采用SE - 30石英毛细柱(0 .2 2mm× 2 5m) ,液膜厚度 0 .2 5 μm ,FID检测器 ,以正二十五烷为内标物 ,并采用GC -MS联用技术 ,鉴定了样品中的NDT色谱峰和进行专属性考察。结果 NDT在 0 .0 89～ 1.0 6 2 μg之间有较好的线性关系 (r =0 .9999) ,NDT的加样回收率为 99.31%± 0 .33%。结论 该法简便、快速、准确。

毛细管气相色谱法测定紫花前胡中紫花前胡苷元的含量

目的 建立毛细管气相色谱法 (GC)测定紫花前胡根中紫花前胡苷元 (NDT)含量的方法。方法 采用SE - 30石英毛细柱 (0 .2 2mm× 2 5m) ,液膜厚度 0 .2 5 μm ,FID检测器 ,以正二十五烷为内标物。 结果 NDT的标准曲线在 0 .0 89～ 1.0 6 2 μg(r=0 .9999)有较好线性关系 ,NDT的加样回收率为 (98.75± 0 .72 ) %,并采用GC -MS联用技术 ,鉴定了样品中的NDT色谱峰和进行专属性考察。结论 本法简便、快速、准确、灵敏度高 ,对于前胡的质量检测有一定参考价值。

HPLC法测定紫花前胡中紫花前胡苷的含量

目的:建立HPLC法测定中药紫花前胡中紫花前胡苷含量的方法,为其质量控制提供依据。方法:采用反相高效液相色谱法,Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相为甲醇-水(40:60),流速为1mL·min-1,检测波长334nm,柱温40℃。结果:紫花前胡苷在此色谱条件下获得良好分离,线性范围为25.0～300.0ng(r2=0.9999),平均回收率为98.6%,RSD1.8%。结论:首次建立了两相系统HPLC法测定紫花前胡药材中紫花前胡苷含量的方法,该方法准确,可靠,对紫花前胡药材及其制剂的质量控制有较重要意义,已被2010版《中国药典》采纳。

白花前胡丙素和紫花前胡苷祛痰作用研究

目的观察白花前胡丙素和紫花前胡苷对小鼠的祛痰作用。方法利用酚红作为祛痰效果指示剂,观察白花前胡丙素和紫花前胡苷的祛痰作用。结果白花前胡丙素和紫花前胡苷能增强小鼠气管排泌酚红的作用。结论白花前胡丙素和紫花前胡苷具有祛痰作用。

基于ITS序列研究当归属、前胡属间的关系与紫花前胡的分类地位

采用PCR直接测序的方法,测定了当归属(Angelica)、前胡属(Peucedanum)等2属23种的核糖体DNA ITS(不含5.8S)序列,并结合GenBank中2属6种的ITS序列,以羌活属的羌活(Notopterygium incisum)作为外类群,根据ITS序列,应用遗传距离值与系统发生树分析法对当归属、前胡属之间的亲缘关系及紫花前胡(Angelica decursiva/Peucedanum decursivum)的系统地位进行了研究.结果表明:(1)当归属与前胡属的亲缘关系很近;(2)结合形态学与化学等其它学科证据支持将紫花前胡归属到当归属.

RP－HPLC法分析白花前胡中Pd－Ia和紫花前胡中Pd－C－I的含量

建立了ＲＰ－ＨＰＬＣ测定白花前胡根中３′（Ｒ）－ａｎｇｅｌｏｙｌｏｘｙ－４′（Ｒ）－ａｃｅｔｏｘｙ－３′，４′－ｄｉｈｙｄｒｏｓｅｓｅｌｉｎ（Ｐｄ－Ｉａ）和紫花前胡根中３′（Ｒ）－ｓｅｎｅｃｉｏｙｌｏｘｙ－４′（Ｓ）－ｈｙｄｒｏｘｙ－３′，４′－ｄｉｈｙｄｒｏｘａｎ－ｔｈｙｌｅｔｉｎ（Ｐｄ－Ｃ－Ｉ）含量的方法。色谱柱为ＯＤＳ，甲醇－水（７１２９ｖ／ｖ）为流动相，流速为０．４ｍｌ／ｍｉｎ，紫外检测波长３２０ｎｍ，线性范围分别为０．０２～０．０６μｇ和０．０１～０．０５μｇ，相关系数分别为ｒ＝０．９９９０和ｒ＝０．９９９６，平均回收率分别为９９．５３％和１００．９３％。本法结果准确，步骤简便，灵敏度高，分析速度快，重现性好，为常用中药前胡的质量检测提供了现代可靠手段。

高效液相色谱法测定不同产地羌活中紫花前胡苷的含量

目的 :测定不同产地羌活中紫花前胡苷含量。方法 :高效液相色谱法。结果 :紫花前胡苷回归方程为Y =- 95 0 9.1+1912 70 9.8X ,r =0 .9998,线性范围 0 .16～ 0 .6 4μg ,平均回收率 99.3% ,RSD 2 .6 4%。 结论 :方法简单、快速、重现性好。

前胡和紫花前胡在中国的潜在分布区预测

采用最大熵(MaxEnt)生态位模型,结合前胡和紫花前胡大量已有的地理分布数据,基于20个环境变量对其在中国的潜在分布区进行了预测.结果表明:最冷季度平均温度,最冷月最低温和最干季度平均温度为前胡分布限制性因子.而对紫花前胡影响最大的环境因子为最干月降水量,最冷季度平均温度和昼夜温差月均值.预测结果显示,前胡和紫花前胡的潜在分布区比现实分布区更广泛,其中中国秦岭地区、浙江省、湖南省等部分山区为其最佳适生区(适生指数>0.71).在台湾、甘肃和西藏等地区分布的差异能为在地域上分辨两者提供理论依据.随着野生资源减少和中药材前胡和紫花前胡需求量的增加,在该地区进行栽培是增加产量,保护野生资源多样性的可行途径.

紫花前胡茎叶化学成分的研究

目的 :研究我国传统中药紫花前胡的化学成分 ,为阐明其有效成分提供科学依据。方法 :溶剂提取和硅胶柱色谱法进行分离 ,理化性质和光谱数据鉴定其结构。结果 :从紫花前胡茎叶中分得 7个成分 ,鉴定为欧前胡素 ,石防风素 ,哥伦比亚内酯 ,β 谷甾醇 ,东莨菪内酯 ,(+) trans decursidinol和胡萝卜苷。 结论 :7个化合物均系首次从该植物中分离得到。

紫花前胡苷在大鼠体内的药代动力学研究

目的研究中药狭叶羌活和宽叶羌活主要化学成分之一的紫花前胡苷(ND)在大鼠体内的药代动力学。方法♂SD大鼠(200～220)g随机分组,每组5只,单次尾静脉注射,给药量为80mg.kg-1,从眼眶静脉丛分时取血、处理。采用反相高效液相色谱法、恒速洗脱,应用外标法测定ND在SD系大鼠血浆中的浓度,应用3P87软件计算主要药代动力学参数。结果在所建立的方法学下,ND的保留时间为6.7min;标准曲线为Y=2.0×10-4X+0.4(r=0.9999),在0.2～80mg.L-1的血浆浓度范围内呈良好的线性关系;血浆中最低检测浓度为0.01mg.L-1(S/N=3),最低定量浓度为0.1mg.L-1(S/N=10);在1.0、10.0和40.0mg.L-1低、中、高3个浓度下的提取回收率为76.23～83.72;日内和日间RSD均小于5.60%(n=3)。在室温和冷冻—解冻试验中,ND具有良好的稳定性。按80mg.kg-1单剂量单次静脉给药后,ND在大鼠体内的药代动力学过程符合开放二房室模型,主要药代动力学参数t1/2α、t1/2β、AUC、Vc、Vp、Vss和CL分别为7.02min、219.27min、1384.34mg.min.L-1、0.92L.kg-1、6.04L.kg-1、6.96L.kg-1和0.06L.kg-1.min-1。结论所建立的方法快速、准确、简便,能够满足ND药代动力学研究要求。按80mg.kg-1单剂量单次静脉给药后,ND在大鼠体内分布广泛,消除速度中等。

紫花前胡苷抗宫颈癌细胞作用研究

目的探究紫花前胡苷抗宫颈癌HeLa细胞的作用效果及相关信号通路。方法HeLa细胞在0、0.1、1和10 mmol/L浓度的紫花前胡苷作用24 h后,通过CCK-8法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡水平;通过蛋白免疫印迹法检测细胞内凋亡相关cleaved-caspase 3(cle-caspase 3)、Cytochrome C(Cyto C)、Bax、Bcl2蛋白水平变化,以及自噬相关p-mTOR、mTOR、P62、Beclin1、LC3蛋白水平变化;结合Ad-GFP-LC3B腺病毒转染检测细胞内LC3B聚集状态。结果对照组(0 mmol/L)、0.1mmol/L组、1 mmol/L组、10 mmol/L组的HeLa细胞凋亡率依次升高,分别为(14.93±2.95)%、(15.43±2.13)%、(21.63±3.19)%、(31.42±5.01)%,且在10 mmol/L浓度处理下升高最为明显(P<0.05)。10 mmol/L的紫花前胡苷作用24 h后,HeLa细胞内的促凋亡cle-caspase 3、Cyto C、Bax蛋白水平升高,抗凋亡蛋白Bcl2表达下降,自噬相关蛋白p-mTOR/mTOR水平下降,Beclin1以及LC3-Ⅱ累积增多,自噬流相关蛋白P62表达下降,LC3B在紫花前胡苷处理组中呈颗粒性聚集,均差异有统计学意义(P<0.05)。结论紫花前胡苷具有较好的抗宫颈癌细胞作用,其机制可能与自噬相关细胞凋亡有关。

紫花前胡分类位置修订的分子基础研究

目的:从核DNA ITS序列角度阐明紫花前胡分类位置修订的分子基础。方法:PCR扩增、DNA序列测定、分支分析法进行研究。结果:得到紫花前胡、白花前胡、白芷、泰山前胡、骨缘当归的ITS序列和系统发育树,其中紫花前胡和白芷、骨缘当归聚为一组,泰山前胡和白花前胡聚为另一组。结论:紫花前胡应为当归属植物,紫花前胡和白花前胡应分别入药。